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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE ODONTOLOGÍA

CARRERA DE ODONTOLOGÍA

Efecto inhibitorio de la infusión de Anís Estrellado (Illicium

verum) sobre la Porphyromonas gingivalis. Estudio in vitro

Proyecto final de investigación presentado como requisito previo a la obtención del título

de: Odontóloga

AUTORA: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez

TUTORA: Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra

Quito, Febrero 2020

ii

DERECHO DE AUTOR

Yo, Karina Estefanía Verdezoto Sánchez, en calidad de autora y titular de los derechos

morales y patrimoniales del trabajo de titulación “EFECTO INHIBITORIO DE LA

INFUSIÓN DE ANÍS ESTRELLADO (ILLICIUM VERUM) SOBRE LA

PORPHYROMONAS GINGIVALIS. ESTUDIO IN VITRO”, modalidad Proyecto de

Investigación, de conformidad con el Art.114 del CÓDIGO ORGÁNICO DE LA

ECONOMÍA SOCIAL DE LOS CONOCIMIENTOS, CREATIVIDAD E INNOVACIÓN,

concedo a favor de la Universidad Central del Ecuador una licencia gratuita, intransferible y

no exclusiva para el uso no comercial de la obra, con fines estrictamente académicos.

Conservo a mi favor todos los derechos de autor sobre la obra, establecidos en la normativa

citada.

Así mismo, autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la digitalización

y publicación de este trabajo de titulación en el repositorio virtual, de conformidad a lo

dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.

El autor declara que la obra objeto de la presente autorización es original en su forma de

expresión y no infringe el derecho de autor de terceros, asumiendo la responsabilidad por

cualquier reclamación que pudiera presentarse por esta causa y liberando a la Universidad

de toda responsabilidad.

Firma: ________________________

Karina Estefanía Verdezoto Sánchez

CC. 0202511929

Dirección electrónica: [email protected]

iii

APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE GRADO

Yo, Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra, en mi calidad de tutora del trabajo de titulación,

modalidad de Proyecto de Investigación, elaborado por Karina Estefanía Verdezoto

Sánchez; cuyo título es “EFECTO INHIBITORIO DE LA INFUSIÓN DE ANÍS

ESTRELLADO (ILLICIUM VERUM) SOBRE LA PORPHYROMONAS GINGIVALIS.

ESTUDIO IN VITRO”, previo a la obtención de grado en Odontología, considero que el

mismo reúne los requisitos y méritos en el campo metodológico y epistemológico, para ser

sometido a la evaluación por parte del tribunal examinador que se designe, por lo que

APRUEBO, a fin de que el trabajo sea habilitado para continuar con el proceso de titulación

determinado por la Universidad Central del Ecuador.

En la ciudad de Quito a los 20 días del mes de diciembre del 2019

Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra

DOCENTE-TUTOR

CI. 1713718664

iv

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL

El Tribunal constituido por: (Presidente del tribunal), (Vocal de tribunal), Dra. (Vocal del

tribunal). Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la

obtención del título (o grado académico) de Odontóloga presentado por la señorita Karina

Estefanía Verdezoto Sánchez. Con el título: EFECTO INHIBITORIO DE LA INFUSIÓN

DE ANÍS ESTRELLADO (ILLICIUM VERUM) SOBRE LA PORPHYROMONAS

GINGIVALIS. ESTUDIO IN VITRO

.

Emite el siguiente veredicto: ………………………………………..

Fecha:

Para constancia de lo actuado firman:

Nombre y Apellido Calificación Firma

Presidente Dr. …………………… ………………..

Vocal 1 Dr. …………………… ………………...

Vocal 2 Dra. …………………… …………………

v

DEDICATORIA

Este logro primero lo dedico a Dios, que siempre me dio sabiduría para seguir adelante y siempre

estuvo a mi lado.

A mi Madre Gricelda que me apoyo incondionalmente con su esfuerzo y sacrificio me ayudo a cumplir

mi sueño a ella le debo todo en esta vida.

A mi Padre Pedro, siempre me guio por el camino correcto, él es mi mayor ejemplo de lucha diaria.

Mis adoradas hijas Victoria y Fiorella que son mi motor para seguir adelante y nunca rendirme, a

ellas les dedico cada uno de mis triunfos.

A mi suegra Sary que siempre me apoyo y nunca me dejo sola siempre fue como una segunda madre

sin su ayuda esto no hubiese sido posible

Mis queridos cinco hermanos German, Walter, Rolando, Jimmy, Fernando que creyeron en mí.

Gracias Familia! Son mi más grande bendición

Karina Estefanía Verdezoto Sánchez

vi

AGRADECIMIENTOS

Le agradezco a Dios por haberme permitido culminar mi carrera, a mis padres y hermanos

por haberme acompañado durante esta larga trayectoria y estar junto a mí apoyándome a

cumplir este gran sueño.

A la familia Suarez Vera que me acompañaron a lo largo de este camino sin dejarme sola

ningún instante, los quiero infinitamente.

A mi hermosa Universidad Central del Ecuador donde obtuve grandes conocimientos de mi

hermosa profesión, a cada uno de mis maestros que me guiaron para llegar a ser una gran

profesional.

A mi tutora Dra. Mariela Balseca por brindarme sus conocimientos y guiarme para realizar

esta investigación.

Mis amigos que siempre estuvieron ahí apoyándome para nunca rendirme y cumplir mi

anhelado sueño.

vii

ÍNDICE DE CONTENIDOS

DERECHO DE AUTOR ....................................................................................................... ii

APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE GRADO ............................................ iii

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL ....................................... iv

DEDICATORIA .................................................................................................................... v

AGRADECIMIENTOS ........................................................................................................ vi

ÍNDICE DE CONTENIDOS ............................................................................................... vii

LISTA DE TABLAS ............................................................................................................. x

LISTA DE FIGURAS .......................................................................................................... xi

LISTA DE GRÁFICOS ....................................................................................................... xii

LISTA DE ANEXOS ......................................................................................................... xiii

RESUMEN ......................................................................................................................... xiv

ABSTRACT ........................................................................................................................ xv

INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 1

CAPITULO I ......................................................................................................................... 3

1. EL PROBLEMA ............................................................................................................ 3

1.1. Planteamiento del problema .................................................................................... 3

1.2. Objetivos ................................................................................................................. 4

1.2.1. Objetivo general .............................................................................................. 4

1.2.2. Objetivos específicos ....................................................................................... 4

1.3. Justificación ............................................................................................................ 5

1.4. Hipótesis ................................................................................................................. 6

1.4.1. Hipótesis de investigación (H1) ...................................................................... 6

1.4.2. Hipótesis nula (H0) .......................................................................................... 6

CAPÍTULO II ........................................................................................................................ 7

2. MARCO TEÓRICO ....................................................................................................... 7

viii

2.1. Enfermedad periodontal .......................................................................................... 7

2.1.1. Manifestación clínica ....................................................................................... 7

2.2. Porphyromonas gingivalis ...................................................................................... 8

2.2.1. Taxonomía ....................................................................................................... 8

2.2.2. Morfología ....................................................................................................... 9

2.2.3. Factores de virulencia ...................................................................................... 9

2.3. Anís Estrellado (Illicium verum) ........................................................................... 10

2.3.1. Descripción .................................................................................................... 10

2.3.2. Componentes ................................................................................................. 10

2.3.3. Usos ............................................................................................................... 11

2.3.4. Efectos adversos y contraindicaciones .......................................................... 12

2.4. Clorhexidina .......................................................................................................... 12

1.2.1. Composición .................................................................................................. 12

1.2.2. Mecanismo de acción .................................................................................... 13

1.2.3. Reacciones adversas ...................................................................................... 13

CAPÍTULO III .................................................................................................................... 14

3. METODOLOGÍA ........................................................................................................ 14

2.1. Diseño de la investigación .................................................................................... 14

2.2. Población de estudio ............................................................................................. 14

2.3. Selección y tamaño de la muestra ......................................................................... 14

2.4. Criterios de inclusión y exclusión ......................................................................... 14

2.5. Conceptualización de variables............................................................................. 15

2.5.1. Variable dependiente ..................................................................................... 15

2.5.2. Variables independientes ............................................................................... 15

2.6. Operacionalización de variables ........................................................................... 16

2.7. Estandarización ..................................................................................................... 17

2.8. Manejo y métodos de recolección de datos .......................................................... 17

ix

2.9. Prueba piloto ......................................................................................................... 25

2.10. Análisis estadístico ............................................................................................ 25

2.11. Aspectos bioéticos, metodológicos y jurídicos ................................................. 26

CAPÍTULO IV .................................................................................................................... 28

3. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ............................................ 28

3.1. Resultados descriptivos ......................................................................................... 28

3.2. Resultados estadísticos ......................................................................................... 30

3.3. Discusión .............................................................................................................. 34

CAPÍTULO V ..................................................................................................................... 37

4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ........................................................... 37

4.1. Conclusiones ......................................................................................................... 37

4.2. Recomendaciones ................................................................................................. 38

BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................. 39

ANEXOS ............................................................................................................................. 42

x

LISTA DE TABLAS

Tabla 1. Datos descriptivos del halo de inhibición (mm) .................................................... 28

Tabla 2. Efecto inhibitorio de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a

los diferentes tiempos de inoculación. ................................................................................. 29

Tabla 3. Prueba de normalidad de Shapiro-Wilk ................................................................ 30

Tabla 4. Prueba Wilcoxon del halo de inhibición de las infusiones de Illicium verum....... 31

Tabla 5. Prueba Mann Whitney para muestras independientes ........................................... 32

Tabla 6. Prueba Wilcoxon del efecto inhibitorio de las de la infusión de anís estrellado

(Illicium verum) a concentración del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas

gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación. ..................................................................... 32

Tabla 7. Prueba Mann Whitney del efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado con

respecto a la clorhexidina y suero fisiológico ..................................................................... 33

Tabla 8. Comparación del halo de inhibición de las sustancias entre 24 y 48 horas de

inoculación .......................................................................................................................... 33

Tabla 9. Comparación del efecto inhibitoria de las sustancias entre 24 y 48 horas de

inoculación .......................................................................................................................... 34

xi

LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Proceso degenerativo de las encías ........................................................................ 7

Figura 2. Porphyromonas gingivalis y su relación con periodontitis .................................... 8

Figura 3. Representación de la estructura de Porphyromonas gingivalis ............................. 9

Figura 4. Representación de Porphyromonas gingivalis y liberación de vesículas secretoras

y productos ............................................................................................................................ 9

Figura 5. Anís estrellado (Illicium verum) .......................................................................... 10

Figura 6. Balanza analítica .................................................................................................. 19

Figura 7. Pesado del anís estrellado .................................................................................... 19

Figura 8. Infusión del anís estrellado (Illicium verum) ....................................................... 19

Figura 9. Cepa de Porphyromonas gingivalis ..................................................................... 20

Figura 10. Siembra en el medio de cultivo .......................................................................... 21

Figura 11. Jarra Gaspack ..................................................................................................... 21

Figura 12. Identificando cada caja Petri de forma alfanumérica ......................................... 22

Figura 13. Discos de papel impregnándolos con las diluciones de la infusión de Illicium

verum al 25%, 50% y 75% .................................................................................................. 22

Figura 14. Clorhexidina (control positivo) y suero fisiológico (control negativo) ............. 23

Figura 15. Colocación de discos en las cajas Petri .............................................................. 23

Figura 16. Cajas Petri en campana de anaerobios ............................................................... 23

Figura 17. Jarras de anaerobiosis con cultivos bacterianos Porphyromonas gingivalis ...... 24

Figura 18. Discos de papel con halos de inhibición ............................................................ 24

xii

LISTA DE GRÁFICOS

Gráfico 1. Halo de inhibición (mm) de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas

gingivalis a los diferentes tiempos de inoculación. ............................................................. 29

Gráfico 2. Efecto inhibitorio de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a

los diferentes tiempos de inoculación. ................................................................................. 30

Gráfico 3. Prueba Kruskal-Wallis para los halos de inhibición de las sustancias de estudio

en grupos de 24 y 48 horas .................................................................................................. 31

xiii

LISTA DE ANEXOS

Anexo A. Constancia aceptación de la tutoría ..................................................................... 42

Anexo B. Aceptación del tema ............................................................................................ 43

Anexo C. Certificado de la biblioteca de no reflejar coincidencia ...................................... 45

Anexo D. Carta de idoneidad ética y experticia del tutor .................................................... 46

Anexo E. Carta de idoneidad ética y experticia del investigador ........................................ 47

Anexo F. Declaración de conflictos de intereses del tutor .................................................. 48

Anexo G. Declaración de conflictos de intereses del investigador ..................................... 49

Anexo H. Carta de confidencialidad.................................................................................... 50

xiv

TEMA: Efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) sobre la

Porphyromonas gingivalis. Estudio in vitro

Autora: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez

Tutora: Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra

RESUMEN

Objetivo: Comprobar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) al 25%, 50% y 75% sobre la Porphyromonas gingivalis. Metodología: Estudio experimental, in vitro, aplicado sobre una muestra no probabilística conformada por 15 cajas Petri con cultivos de Porphyromonas gingivalis, que se analizaron a las 24 y 48 horas después de la inoculación, colocando 5 discos de papel impregnados con infusión de Illicium

verum al 25%, 50%, 75% de concentración, gluconato de clorhexidina (control positivo) y suero fisiológico (control negativo), respectivamente, que se llevaron a incubación en campana de anaerobiosis a 37ºC, para finalmente determinar el efecto inhibitorio mediante la medición de los halos de inhibición usando una regla milimetrada. Los datos obtenidos fueron analizados estadísticamente por medio del programa SPSS, aplicando la prueba de ANOVA y Kruskall Wallis, con un nivel de confiabilidad de 95% y una significancia del 5%. Resultados: Se evidenció efecto inhibitorio alto de Illicium verum sobre cepas de Porphyromonas gingivalis, encontrando que para las 24 horas reportó halos de inhibición de 14,8 mm al 25%, 16,96 mm al 50% y 18,56 mm al 75%, mientras que a las 48 horas arrojó una medición de 15,18% mm a una concentración de 25%, 17,62 mm al 50% y 19,18 mm al 75%, igual nivel de efectividad alto se obtuvo con el gluconato de clorhexidina al 0,12%, usado como control positivo, mientras que con el suero fisiológico (control negativo) se reportó un efecto leve. Conclusiones: La infusión de anís estrellado (Illicium verum) a diferentes concentraciones posee igual efecto inhibitorio que la clorhexidina al 0,12% y mayor acción inhibitoria que el suero fisiológico frente a las cepas de Porphyromonas

gingivalis, tanto a las 24 como a las 48 horas de inoculación.

PALABRAS CLAVES: INFUSIÓN / ILLICIUM VERUM / PORPHYROMONAS

GINGIVALIS / EFECTO INHIBITORIO / HALOS DE INHIBICIÓN

xv

ABSTRACT

TITTLE: Inhibitory effect of infusion of star anise (Illicium verum) on Porphyromonas

gingivalis. In vitro study

Author: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez

Tutor: Dr. Mariela Cumandá Balseca Ibarra

ABSTRACT

Objective: To verify the inhibitory effect of infusion of star anise (Illicium verum) at 25%, 50% and 75% on Porphyromonas gingivalis. Methodology: Experimental study, in vitro, applied on a non-probabilistic sample consisting of 15 Petri dishes with Porphyromonas gingivalis cultures, which were analyzed 24 and 48 hours after inoculation, placing 5 paper discs impregnated with Illicium verum infusion at 25%, 50%, 75% concentration, chlorhexidine gluconate (positive control) and physiological serum (negative control), respectively, which were incubated in anaerobiosis hood at 37 ° C, to finally determine the inhibitory effect by measuring of inhibition halos using a millimeter ruler. The data obtained were statistically analyzed through the SPSS program, applying the ANOVA and Kruskall Wallis test, with a 95% reliability level and a 5% significance. Results: High inhibitory effect of Illicium verum on strains of Porphyromonas gingivalis was found, finding that for 24 hours reported halos of inhibition of 14.8 mm at 25%, 16.96 mm at 50% and 18.56 mm at 75% , while at 48 hours it showed a measurement of 15.18% mm at a concentration of 25%, 17.62 mm at 50% and 19.18 mm at 75%, the same high level of effectiveness was obtained with gluconate 0.12% chlorhexidine, used as a positive control, while with the physiological serum (negative control) a mild effect was reported. Conclusion: The infusion of star anise (Illicium verum) at different concentrations has the same inhibitory effect as 0.12% chlorhexidine and greater inhibitory action than the physiological serum against the strains of Porphyromonas gingivalis, both at 24 and 48 hours of inoculation.

KEYWORDS: INFUSION / ILLICIUM VERUM / PORPHYROMONAS GINGIVALIS /

INHIBITORY EFFECT / INHIBITION HALES

1

INTRODUCCIÓN

La periodontitis se encuentra dentro de las enfermedades crónicas multifactoriales, donde la

capacidad reducida del huésped trae como resultado la aparición de alteraciones en el

periodonto, que puede ser desde una discreta inflamación gingival hasta la pérdida de hueso

de la cresta alveolar (1), formando una biopelícula de origen bacteriano altamente organizada

en un nicho ecológico favorable para el crecimiento y desarrollo (2).

Las principales manifestaciones clínicas de la contaminación y destrucción de los tejidos de

soporte del diente (epitelios, tejido conectivo, ligamento periodontal, hueso alveolar,

cemento radicular), incluyen sangrado, movilidad dental, recesión gingival, formación de

bolsa periodontal, disfunción masticatoria y pérdida del diente (2).

La periodontitis es significante debido a que puede causar la pérdida de dientes, sin embargo,

toda periodontitis inicia con la presencia de una gingivitis y esta puede ser reversible con las

medidas de prevención (3). Se produce por bacterias anaerobias Gram negativas que crecen

dentro del surco gingival (4), encontrando que dentro de la microflora detectable en este tipo

de enfermedad periodontales, las bacterias anaerobias Gram negativas más importantes y

prevalentes en el área subgingival son: Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa),

Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella intermedia (Pi) y Bacteroides forsythus (Bf),

(4).

Estas bacterias tiene un importante papel en el desarrollo de la periodontitis participando en

la formación de la bolsa periodontal, destrucción del tejido conectivo y reabsorción del hueso

alveolar a través de un mecanismo inmunopatogénico (5), con bacterias habituales a nivel

de la zona gingival del diente, con claro predominio de estreptococos orales de hasta un 82%,

que se encuentran en equilibrio con los tejidos de la encía, cuando se rompe el tejido

conectivo surgen el tipo de enfermedades gingivales ligadas a la placa (4).

La Porphyromonas gingivalis es un bacilo Gram negativo, anaerobio, no-móvil y

asacarolítico, que produce colonias con pigmentaciones marrones en medio de cultivo agar-

sangre. Los niños/as y adolescentes sanos no suelen presentarlo en su microbiota subgingival

(6), para un tratamiento con resultados de la enfermedad periodontal debemos educar en

cuidados de higiene oral y motivar a los pacientes mediante el control preventivo, previo al

2

inicio del tratamiento periodontal (7). El periodoncista o higienista dental quita la placa por

medio de un método de limpieza profunda utilizando ultrasonido posterior a este se realiza

un procedimiento llamado raspado y alisado radicular (8).

Es necesario realizar estudios a largo plazo, para evidenciar si el tratamiento con los

medicamentos disminuye la necesidad de cirugía y se logra resultados eficaces durante

períodos prolongados (8). La periodontitis se considera como una patología crónica, siendo

un desafío la búsqueda de nuevas alternativas de antibioterapia frente a la creciente aparición

de cepas resistentes a los antibióticos comúnmente usados, previniendo reacciones adversas

y contraindicaciones que causan ciertos antibióticos, siendo el reino vegetal el que ofrece

mayor variedad de sustancias potencialmente útiles aplicables a las enfermedades humanas,

en concreto a aquellas producidas por microorganismos (9), que colaboran para el

tratamiento eficaz de la periodontitis.

3

CAPITULO I

1. EL PROBLEMA

1.1. Planteamiento del problema

Porphyromonas gingivalis es una bacteria anaerobia que convive en el área subgingival, la

anatomía, fisiología del surco y las bolsas periodontales, son sitios vigorosos al efecto de

limpieza de la saliva, transformándose en un lugar propicio de estancamiento de bacterias,

las mismas se alimentan de líquido gingival, el cual comprende minerales, carbohidratos,

minerales y vitaminas que promueven el crecimiento de la microbiota del surco (10).

En la actualidad, los agentes antisépticos orales son valorados como un complemento

indispensable en el tratamiento de las enfermedades periodontales y control de la placa

dental, siendo la clorhexidina, la más recomendada por su alta efectividad comprobada, no

obstante, a pesar de proporcionar una eficacia superior a otros elementos, este compuesto

posee efectos adversos como la coloración de los dientes, el dorso de la lengua y alteración

del sentido del gusto (11).

Por esta situación surge la necesidad de recurrir a la fitoterapia, reconocida por la

Organización Mundial de la Salud (OMS) (12) como una ciencia que se ocupa del estudio

de productos vegetales para su uso en la terapia de estados patológicos, debido a su

accesibilidad, su bajo costo y a las experiencias ancestrales acumuladas en el tiempo,

convierten a la fitoterapia mediante el uso de la medicina herbaria, en la principal alternativa

para la atención de la salud (13). La planta de anís estrellado por los efectos

antiespasmódicos, eupépticos, antisépticos y antimicrobianos, resultaría ser un componente

alternativo y efectivo contra bacterias, hongos y levaduras, debido al anetol que es el

principal componente (14).

Sivakumar y cols. (2016) (15) efectuaron un estudio sobre el extracto etanólico y acuoso de

anís estrellado sobre las cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus

subtilis y Escherichia coli, determinando actividad antibacteriana en las bacterias estudiadas,

excepto Pseudomonas aeruginosa, la bacteria con máxima zona de inhibición fue Bacillus

subtilis (12,3 mm), por el contrario el extracto acuoso mostró actividad antibacteriana en

4

todas las cepas, menos en Staphylococcus aureus, la zona de mayor inhibición fue en

Escherichia coli (23,3 mm), seguido de Bacillus subtilis (13,3 mm) y Pseudomonas

aeruginosa (8.0 mm), en el estudio concluyeron que los extractos acuosos denotaron mejor

actividad contra los patógenos en comparación al extracto etanólico.

De esta manera surge la siguiente pregunta de investigación:

¿Cuál es el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) en

concentraciones de 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis?

¿Cuál es el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a diversas

concentraciones sobre cepas de Porphyromonas Gingivalis a las 24 y 48 horas de

inoculación?

¿Cuál es el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a diferentes

concentraciones, en comparación al control positivo (clorhexidina al 0,12%) y control

negativo (suero fisiológico) sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de

inoculación?

1.2. Objetivos

1.2.1. Objetivo general

Comprobar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) al 25%,

50% y 75% sobre la Porphyromonas gingivalis.

1.2.2. Objetivos específicos

i. Evaluar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a

concentración del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24

horas de inoculación.

5

ii. Identificar la actividad inhibitoria de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a

concentración de 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 48

horas de inoculación.

iii. Comparar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a

concentración de 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24 y

48 horas de inoculación.

iv. Comparar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a

diferentes concentraciones, con respecto al control positivo (gluconato de clorhexidina

al 0,12%) y control negativo (suero fisiológico) sobre cepas de Porphyromonas

gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación.

1.3. Justificación

Las enfermedades periodontales son consideradas patologías que ocasionan cuadros clínicos

que perjudican a las estructuras de soporte dental, siendo de origen multifactorial, se

encuentran clasificadas en gingivitis y periodontitis (16). Según la Organización Mundial de

la Salud (OMS) estas afecciones a quejan de un 15% a 20% de la población adulta de edad

media, la ausencia de higiene bucodental es la principal causa del padecimiento (17).

La bacteria Porphyromonas gingivalis tiene una serie de factores de virulencia relevantes

para persistir dentro de los tejidos y resistir a los tratamientos, comienza el proceso

infeccioso con la colonización, luego la invasión y replicación dentro de las células

epiteliales, después evade el sistema inmune del huésped hasta llegar a la destrucción de los

tejidos. Conocer estos factores de virulencia ayuda a comprender la importancia del control

microbiológico para alcanzar el éxito en la terapia periodontal (18).

Por otra parte, la Fitoterapia es definida como una ciencia que se encarga del estudio del

empleo de productos de origen vegetal con propiedades medicinales para prevenir, mitigar

o curar determinado estado patológico (19). De esta manera existen estudios donde se han

empleado una diversidad de especias y plantas, determinando las propiedades

antimicrobianas sobre determinadas bacterias o microorganismos, entre estas especias, se

encuentra el ajo, jengibre, cúrcuma o el anís estrellado, entre otras (20).

6

El anís estrellado (Illicium Verum), es una especia con efectos antimicrobianos, antifúngicos,

analgésicos y antioxidantes, debido al componente principal conocido como anetol (20),

quien, además, le otorga el sabor característico. Un estudio ejecutado por Maofari y cols.

(21) Marruecos y Yemén, determinaron actividad antibacteriana del aceite esencial de

semillas de anís contra diferentes cepas bacterianas patógenas, algunas de ellas,

Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae y Staphylococcus aureus, sin embargo,

no existen estudios donde se conozcan los efectos de la infusión de esta especia sobre

bacterias orales patógenas comunes y a diferentes concentraciones, siendo una de ellas,

Porphyromonas gingivalis.

Por lo descrito anteriormente se realizará el presente estudio con la finalidad de determinar

el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium Verum) a concentraciones de

25%, 50% y 75% sobre las cepas de Porphyromonas gingivalis, a las 24 y 48 horas de

inoculación, la clorhexidina al 0.12% como control positivo y el suero fisiológico como

control negativo, siendo ejecutado en el laboratorio BMI Laboratorios. Comprobar la

existencia de dicho efecto resultaría en información relevante para tratar la periodontitis a

través de métodos alternativos con la utilización de la infusión de anís estrellado, de igual

forma, los resultados obtenidos brindarán información para posteriores investigaciones en la

inhibición de la bacteria.

1.4. Hipótesis

1.4.1. Hipótesis de investigación (H1)

La infusión de anís estrellado a las concentraciones de 25%, 50% y 75% posee mayor efecto

inhibitorio que la clorhexidina al 0.12% y el suero fisiológico frente a las cepas de

Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación.

1.4.2. Hipótesis nula (H0)

La infusión de anís estrellado a las concentraciones de 25%, 50% y 75% posee igual o menor

efecto inhibitorio que la clorhexidina al 0.12% y el suero fisiológico frente a las cepas de

Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación.

7

CAPÍTULO II

2. MARCO TEÓRICO

2.1. Enfermedad periodontal

La enfermedad periodontal es estimada como una patología crónica e inflamatoria de causas

multifactoriales, posee como factor etiológico primario, una biopelícula de origen bacteriano

estructurada en un nicho ecológico factible para su desarrollo y multiplicación, sumado a

otros elementos de origen sistémico y local, generan la infección y deterioro de los tejidos

de soporte del diente como el tejido conectivo, ligamento periodontal, hueso alveolar,

epitelios y cemento radicular (2).

Figura 1. Proceso degenerativo de las encías

Fuente: Clínica Dental Felipe (22)

2.1.1. Manifestación clínica

Las manifestaciones clínicas que revela la enfermedad periodontal, se observan mediante la

movilidad dental, sangrado, desarrollo de bolsa periodontal, disfunción masticatoria,

recesión gingival y pérdida dental. Actualmente existen estudios donde se relaciona dicha

enfermedad con otras afecciones crónicas, como diabetes, enfermedad cardiovascular,

enfermedad pulmonar crónica, cáncer y otras (2).

Según la Organización Mundial de la Salud esta patología es considerada como una de las

dos primordiales problemáticas de salud bucal a nivel global, de igual manera, existe una

fuerte relación entre las desigualdades sociales y la afección, ya que los grupos poblacionales

8

con desventaja económica y social, son quienes evidencian mayor proporción de afectación

(2).

2.2. Porphyromonas gingivalis

Es considerado un bacilo Gram negativo, siendo uno de los predominantes en la enfermedad

periodontal, es altamente agresivo debido a sus factores de virulencia, se sitúa en el surco

gingival, convirtiéndose en un ambiente adecuado para su desarrollo, su mecanismo de

acción se basa en destruir lenta y progresivamente los tejidos. Esta bacteria es factible de ser

tratada con antimicrobianos, previo a la remoción mecánica (23).

Figura 2. Porphyromonas gingivalis y su relación con periodontitis

Fuente: Periodontitis (24)

2.2.1. Taxonomía

La clasificación primaria del género bacteroides estuvo conformada por un conjunto de

bacterias heterogéneas, con características de anaerobios estrictos, no espulados, Gram

negativos y de forma bacilar, 2en la actualidad se los denomina como Porphyromonas. Se

pudo identificar tres especies en las primeras investigaciones, siendo P. gingivalis, P.

asaccharolyticus y P. endodontales, estas bacterias poseen la característica de ser no

fermentadores, además para obtener energía mediante la triptasa y peptona, usaban el

sustrato nitrógeno. Después de varios estudios ejecutados, se ha demostrado su lejanía del

género bacteroide, por lo que en la actualidad de conocen más de 12 especies, existiendo una

P. catoniae que es sacarolítica (23).

9

2.2.2. Morfología

Es considerado como un bacilo corto o coco bacilo Gram negativo, anaerobio estricto que

mide de 0.05 a 0.8 um x 1 – 3.5 um, detenta una membrana externa con endotoxinas, no

esporuladas, son encapsuladas, tienen diversas clases de abundantes fimbrias, no poseen

flagelos, a nivel externo evidencia vesículas enzimáticas que son importantes para su

virulencia, de igual manera posee variadas enzimas con la capacidad de disminuir

compuestos proteicos (23).

Figura 3. Representación de la estructura de Porphyromonas gingivalis

Fuente: Porphyromonas gingivalis y enfermedades sistémicas (10)

2.2.3. Factores de virulencia

Los factores de virulencia que comprenden la Porphyromonas gingivalis son fimbrias,

cápsula, proteinasas, lipopolisacáridos y cisteína proteinasas denominadas gingipainas, así

como la presencia de vesículas de membrana externa, como son hemaglutininas, proteínasas

no cisteinproteasas e inductores de metaloproteinasas de la matriz (25).

Figura 4. Representación de Porphyromonas gingivalis y liberación de vesículas secretoras y productos

Fuente: Porphyromonas gingivalis y enfermedades sistémicas (10)

10

2.3. Anís Estrellado (Illicium verum)

2.3.1. Descripción

Planta de origen asiático, perteneciente a la familia de las magnoliáceas (Magnoliacea),

posee características distintivas, como ser un árbol perenne, con tiempo de vida de más de 2

años, posee hojas lanceoladas, de corteza blanca, con ciertos aspectos similares al laurel,

llegando a alcanzar los 5 metros de altura (26).

2.3.2. Componentes

Los principales componentes son: entre 80% y 90% de estragol y anetol, flavonoides,

taninos, ácidos orgánicos (quínico, siquímico), carburos terpénicos (felandreno, dipenteno,

limoneno), cumarinas y lactonas sesquiterpénicas, también reconocidas como A, B y C (26).

Figura 5. Anís estrellado (Illicium verum)

Fuente: Infusión de Anís Estrellado (Illicium verum) (27)

11

2.3.3. Usos

Según la literatura de medicina natural menciona que la planta posee acción carminativa,

eupéptica, antiséptica-antimicrobiana y antiespasmódica, se utiliza como tratamiento del

cólico y tranquilizante en recién nacidos y lactantes, de igual forma se emplea para aumentar

la producción de leche (26). Es antimicrobiano, resultando efectivo contra bacterias, hongos

y levaduras, esta propiedad es debida al principal componente el anetol (14).

Maofari y cols. (2013) (21) efectuaron un estudio con la finalidad de establecer la

composición química y actividad antibacteriana de los aceites esenciales de semilla de anís

estrellado a 30% de concentración, sobre 7 bacterias Gram-positivas, entre ellas

(Staphylococcus aureus Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes) y 10 bacterias

Gram-negativas, entre las cuales estuvieron (Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas

fluorescens, Acinetobacter baumannii), determinando que las bacterias Gram-positivas

fueron más sensibles en comparación a las Gram-negativas, Acenitobacter baumannii fue la

cepa más sensible de todas.

Melendez y cols. (2016) (18), desarrollaron una investigacion con el objetivo de determinar

la actividad biológica del extracto metanólico de I. verum sobre Porphyromonas gingivalis,

a cuatro concentraciones, 0.1, 1, 7 y 10mg/mL por 24 horas, estableciendo que a la

concentración de 7 mg/mL, se mostró inhibición sobre P. gingivalis.

Sivakumar y cols. (2016) (15) ejecutaron un estudio sobre el extracto etanólico y acuoso de

anís estrellado sobre las cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus

subtilis y Escherichia coli, determinando actividad antibacteriana en las bacterias estudiadas,

excepto Pseudomonas aeruginosa, la bacteria con máxima zona de inhibición fue Bacillus

subtilis (12,3 mm), por el contrario el extracto acuoso mostró actividad antibacteriana en

todas las cepas, menos en Staphylococcus aureus, la zona de mayor inhibición fue en

Escherichia coli (23,3 mm), seguido de Bacillus subtilis (13,3 mm) y Pseudomonas

aeruginosa (8.0 mm), en el estudio concluyeron que los extractos acuosos denotaron mejor

actividad contra los patógenos en comparación al extracto etanólico.

12

2.3.4 Efectos adversos y contraindicaciones

El aceite esencial de anís de estrellado en dosis elevadas puede ser tóxico sobre el sistema

nervioso central, ocasionando reacciones epileptoides delirios y convulsiones. También

posee ligera acción estrogénica, por este motivo, las mujeres con una situación hormonal

alterada deben evitarlo, así como aquellas mujeres con afecciones de cáncer de mama,

ovario, útero y endometriosis (14).

2.4. Clorhexidina

Fue descubierto a finales de los años 40, aunque en odontología, este antiséptico se lo

empezó a aprovechar desde los años 70, con el propósito de tratar y controlar infecciones

bucales, en general se lo emplea para antisepsia de la piel y mucosas, antes de una cirugía

bucal (28). Posee la capacidad de retraer el crecimiento bacteriano y el desarrollo de la

gingivitis, en casos donde no existe una higiene oral adecuada, actualmente se lo considera

el agente antiplaca más eficaz, con acción prolongada en la cavidad oral, debido a su

sustantividad por más de 12 horas y a sus propiedades, es empleado en 12 casos de

periodontitis, perdiendo la efectividad al estar en contacto con dentífricos, sugiriendo su uso

alejado de estos productos (29).

1.1.1. Composición

Este antiséptico proviene de una bisguanida de carga positiva catiónica, es decir, posee una

superficie positiva que se une a superficies negativas, como son tejidos blandos, dientes y

bacterias, es poco soluble en agua en su forma base, aunque es bastante soluble en su forma

de sal, donde se escapa su componente activo, con el nombre de Digluconato de clorhexidina

(30). Está compuesto por dos anillos simétricos de 4 clorofenil y dos grupos bisguanida,

unidos por una cadena central de hexametileno (31).

13

1.1.2. Mecanismo de acción

Según Trigoso y Trigoso (32), este antiséptico tópico, ingresa a la membrana celular

microbiana y penetra el citoplasma interfiriendo con su función, también impide la

utilización de oxígeno, lo cual reduce los niveles de ATP hasta su deceso celular.

Mientras que Wang y Siguas (33), adujeron que a bajas concentraciones ocasiona un

incremento de la permeabilidad con filtración de los componentes intracelulares, conocido

como efecto bacteriostático, por su parte en concentraciones elevadas genera la precipitación

del citoplasma bacteriano y muerte celular, denominado efecto bactericida.

1.1.3. Reacciones adversas

La clorhexidina ocasiona ciertos efectos secundarios tras un tiempo prolongado de uso, como

el teñido rojizo o marrón de las piezas dentarias, también de algunos materiales de

restauración y del dorso de la lengua, además de modificar la sensación del gusto, por cuatro

horas luego del enjuague, en ciertos casos el uso ha estado relacionado al incremento de

cálculos supragingivales (31).

14

CAPÍTULO III

3. METODOLOGÍA

2.1. Diseño de la investigación

El estudio planteado fue de tipo experimental, in vitro.

Experimental: Se determinó el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium

verum) al 25%, 50% y 75%, luego de inocularlos sobre cepas de Porphyromonas gingivalis

a las 24 y 48 horas.

In vitro: Porque corresponde a un modelo experimental que involucra infusión de anís

estrellado (Illicium verum), cepas de Porphyromonas gingivalis, cajas Petri, discos de

inoculación y material de laboratorio, el cual se desarrolló bajo un ambiente controlado,

siguiendo las normas de bioseguridad establecidas para minimizar el riesgo de

contaminación.

2.2. Población de estudio

La población de la presente investigación corresponde a la cantidad de cajas Petri con

cultivos de Porphyromonas gingivalis necesarias para desarrollar el estudio.

2.3. Selección y tamaño de la muestra

La muestra fue seleccionada de manera no probabilística por conveniencia, siguiendo la

metodología empleada en el estudio de Meléndez et al. (2016) (18), considerando 15 cajas

Petri con cultivos de Porphyromonas gingivalis.

2.4. Criterios de inclusión y exclusión

Criterios de inclusión

i. Semillas de anís estrellado (Illicium verum) en buen estado.

15

ii. Infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentraciones de 25%, 50% y 75%.

iii. Cajas Petri con cultivo de Porphyromonas gingivalis no contaminadas.

Criterios de exclusión

i. Semillas de anís estrellado (Illicium verum) con presencia de alguna plaga.

ii. Infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentraciones distintas a las requeridas

para la investigación.

iii. Cajas Petri defectuosas o con defectos de fabricación.

iv. Cajas Petri con cultivo de Porphyromonas gingivalis que se contaminen durante el

proceso de experimentación.

2.5. Conceptualización de variables

2.5.1. Variable dependiente

i. Efecto inhibitorio sobre Porphyromonas gingivalis: Capacidad que detentan ciertas

sustancias o elementos para impedir el desarrollo y crecimiento de Porphyromonas

gingivalis (34).

2.5.2. Variables independientes

i. Infusión de anís estrellado (Illicium verum): Sustancia que se obtiene de la planta de

Illicium verum, extrayendo los componentes químicos a partir de agua caliente (35).

ii. Tiempo de inoculación: Período entre la introducción de una bacteria o virus en un

cultivo y el desarrollo esperado (36).

iii. Gluconato de clorhexidina al 0.12%: Sustancia desinfectante perteneciente al grupo

de las biguanidas con efecto bactericida y bacteriostático (37).

iv. Suero fisiológico: Solución salina compuesta por cloruro de sodio al 0,9% (p/v) en agua

hipertónica, utilizada en quemaduras y cortaduras de la piel (38).

16

2.6. Operacionalización de variables

VARIABLE DEFINICIÓN OPERACIONAL TIPO CLASIFICACIÓN INDICADOR

CATEGÓRICO

ESCALA DE

MEDICIÓN

Efecto

inhibitorio

sobre

Porphyromonas

gingivalis

Capacidad que poseen ciertas sustancias para impedir el desarrollo y crecimiento de Porphyromonas gingivalis (34).

Dependiente Cuantitativa Continua

Halo de inhibición de

acuerdo a la Escala de

Mariani et al. (39) Leve ≤ 6 mm

Moderada = 7 mm - 8 mm Alta ˃ 8 mm

1 2 3

Infusión de

anís estrellado

(Illicium

verum)

Sustancia que se obtiene de la planta de Illicium verum,

extrayendo los componentes químicos a partir de agua caliente (35).

Independiente Cualitativa Ordinal

Concentración

25% 50% 75%

1 2 3

Tiempo de

inoculación

Período entre la introducción de Porphyromonas gingivalis en el cultivo y el desarrollo esperado (36).

Independiente Cuantitativa Discreta

Horas

24 48

1 2

Gluconato de

clorhexidina

Agente desinfectante perteneciente al grupo de las biguanidas con efecto bactericida y bacteriostático ampliamente usado en odontología (37).

Independiente Cualitativa Nominal

Concentración

0,12% 1

Suero

fisiológico

Solución salina compuesta por cloruro de sodio al 0,9% (p/v) en

agua hipertónica, utilizada en el tratamiento de lesiones de la mucosa oral (38).

Independiente Cuantitativa Discreta

Cantidad de ml empleados en la investigación 1

17

2.7. Estandarización

Con el fin de estandarizar las mediciones y garantizar la validez de los resultados obtenidos

en la investigación planteada, se realizó la determinación del diámetro de los halos de

inhibición empleando una regla milimetrada con calibración de fábrica. Esta medición la

realizó exclusivamente la investigadora, previo entrenamiento del asesor metodológico.

La cepa de Porphyromonas gingivalis se adquirirá en MEDIBAC, empresa importadora de

microorganismos e insumos para investigación, localizada en la ciudad de Quito, las cuales

serán inoculadas en cajas Petri e incubadas a 37ºC por 48 horas, ajustando la turbidez al

estándar Mc Farland 0,5 para hacer una dilución de 1,5 x 108 UFC/ml, siguiendo el

procedimiento establecido por el Manual de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana

(40).

Para la obtención de la infusión de anís estrellado se adquirió las semillas de Illicium verum

en un mercado mayorista de la ciudad de Quito, de tal manera que se garantice el buen estado

de las mismas, sin presencia de partes dañadas o evidencias de poseer algún tipo de plaga.

Todo el proceso de experimentación fue supervisado por el encargado del Laboratorio BMI

Laboratorios para garantizar la validez de los resultados alcanzados.

2.8. Manejo y métodos de recolección de datos

El desarrollo del procedimiento experimental se realizó siguiendo la metodología que se

describe a continuación:

1. Solicitud de permisos

Previo al inicio de la investigación fue redactada una solicitud dirigida al director de la

Unidad de Graduación, Titulación e Investigación de la Facultad de Odontología de la UCE

(Anexo K), con el objetivo de obtener la aprobación para el desarrollo de la misma. Luego

de obtener la aprobación será solicitado el permiso para usar las instalaciones del Laboratorio

de Microbiología BMI Laboratorios (Anexos J).

18

2. Selección de los materiales y equipos necesarios para la investigación

Para el desarrollo del estudio fue necesario el empleo de los siguientes materiales y equipos:

a) Infusión de anís estrellado al 25%, 50% y 75%.

b) Artículos de bioseguridad: Mascarilla, gorro desechable, guantes, gafas protectoras.

c) Autoclave.

d) Balanza de precisión.

e) Cajas Petri.

f) Cámara de flujo laminar.

g) Cepa liofilizada de Porphyromonas gingivalis.

h) Discos de papel filtro de celulosa.

i) Gradilla.

j) Hisopos estériles.

k) Incubadora.

l) Jarra GasPak (anaerobiosis).

m) Mechero.

n) Micropipeta.

o) Puntas para pipeta.

p) Solución de McFarland 0,5.

q) Tubos de ensayo.

3. Obtención de la Infusión de Illicium verum

Las semillas de Illicium verum, fue adquiridos en un mercado de la ciudad de Quito, llevando

al laboratorio BMI donde fueron lavadas con agua corriente y agua destilada, colocándolas

en toallas de papel para el secado, para posteriormente pesar el producto en balanza analítica.

19

Figura 6. Balanza analítica

Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez

Figura 7. Pesado del anís estrellado


Para preparar la infusión de anís estrellado se hierven 300 ml de agua a una temperatura de

100ºC, se colocan 6 gramos de semillas de Illicium verum en un recipiente estéril y cuando

el agua alcance la temperatura deseada se vierte en el recipiente y se tapa, dejando reposar

la infusión entre 3 y 5 minutos.

Figura 8. Infusión del anís estrellado (Illicium verum)

Fuente: Lic Jefferson Cisnero

20

Posteriormente la infusión resultante se filtró con papel de nitrocelulosa para extraer los

sólidos de la preparación, obteniendo las concentraciones empleadas en el estudio (25%,

50% y 75%) de acuerdo al siguiente esquema:

Dilución infusión (%) Infusión (µl) Agua (H20) (µl)

75 75 25 50 50 50 25 25 75

Finalmente, las muestras obtenidas fueron almacenadas en frasco sellado color ámbar

debidamente identificados por un tiempo que no supere las 12 horas para garantizar las

propiedades de la preparación.

4. Activación de la cepa de Porphyromonas gingivalis

La cepa de Porphyromonas gingivalis fue adquirida en la empresa MEDIBAC, importadora

de microorganismos e insumos propios de investigación, localizada en la ciudad de Quito y

se activó siguiendo las instrucciones del fabricante apoyado con la asesoría del personal

encargado en el Laboratorio de Microbiología BMI Laboratorios.

Figura 9. Cepa de Porphyromonas gingivalis

Fuente: MEDIBAC

21

Para la siembra en el medio de cultivo se utilizó un asa desechable, realizando este

procedimiento en la cámara de flujo laminar para mantener el control de los riesgos de

contaminación, colocando posteriormente el medio con la cepa sembrada en jarra Gaspack

y llevando a incubadora a 37ºC por 24 horas.

Figura 10. Siembra en el medio de cultivo


Figura 11. Jarra Gaspack


5. Inoculación cajas Petri con cepas de Porphyromonas gingivalis

Se prepararon 15 cajas Petri con Agar Muller Hinton suplementado con 5% de sangre, donde

se hizo la siembra de la cepa de Porphyromonas gingivalis, empleando un hisopo estéril que

22

se frotará sobre la superficie del agar y rotando la posición de 60º de ida y vuelta, repitiendo

este paso tres veces, con el objetivo de garantizar la distribución homogénea del inóculo,

identificando cada caja Petri de forma alfanumérica.

Figura 12. Identificando cada caja Petri de forma alfanumérica


6. Colocación de discos en cajas Petri

Posterior al proceso de siembra se procedió a embeber discos de papel con una micropipeta

1 gota (20 µl = 20 microlitros), impregnándolos con las diluciones de la infusión de Illicium

verum al 25%, 50% y 75%.

Figura 13. Discos de papel impregnándolos con las diluciones de la infusión de Illicium verum al 25%,

50% y 75%


Clorhexidina que fue el control positivo y suero fisiológico como control negativo, para ser

colocadas una muestra de cada disco en las cajas Petri previamente rotuladas y numeradas,

con la ayuda de una pinza estéril, distribuyéndolos de forma constante a no menos de 15 mm

de distancia entre ellos y 1,5 cm del borde de la placa.

23

Figura 14. Clorhexidina (control positivo) y suero fisiológico (control negativo)


Figura 15. Colocación de discos en las cajas Petri


Luego de colocar los discos en las 15 cajas Petri fueron llevadas a incubación en campana

de anaerobios a una temperatura de 37ºC por 24 y 48 horas.

Figura 16. Cajas Petri en campana de anaerobios


24

Figura 17. Jarras de anaerobiosis con cultivos bacterianos Porphyromonas gingivalis


7. Medición de los halos de inhibición

Con el fin de identificar el efecto inhibitorio de la infusión de Illicium verum sobre la cepa

de Porphyromonas gingivalis se midió el halo formado alrededor del disco con una regla

milimetrada, empleando como referencia la escala establecida en la clasificación de Mariani

et al. (39):

Leve ≤ 6 mm

Moderada = 7 mm - 8 mm

Alta ˃ 8 mm

Figura 18. Discos de papel con halos de inhibición


25

Los resultados obtenidos de las mediciones fueron registrados en una hoja de recolección de

datos especialmente diseñada para el presente estudio (Anexo L).

8. Manejo y eliminación desechos infecciosos y contaminantes

Al finalizar el procedimiento experimental se eliminará el material contaminante siguiendo

las normas establecidas en el Laboratorio de Microbiología BMI Laboratorios, que es el

siguiente:

1. Los cultivos de agentes infecciosos, cajas Petri y los instrumentos para manipular,

mezclar o inocular microorganismos se recolectaron en recipientes específicos rotulados

y llevados al área de generación del Laboratorio BMI Laboratorios.

2. Las cajas Petri, tubos de ensayo e hisopos contaminados se colocaron en una autoclave

a 134°C, 1,1 atmósferas por 30 minutos, dejando enfriar por un tiempo aproximado de

30 minutos.

3. Todo material de desecho que se genere fue colocado en una funda roja rotulado con la

siguiente información: contenido, peso, fecha y persona responsable.

4. El manejo externo de desechos biológicos será efectuado por la empresa EMGIRS-EP

(Empresa Pública Metropolitana Integral de Residuos Sólidos) quienes trabajan

conjuntamente con el laboratorio BMI Laboratorios y son los encargados de retirar del

área de depósito de desechos infecciosos, biológicos y especiales.

2.9. Prueba piloto

No es necesario realizar prueba piloto para la presente investigación.

2.10. Análisis estadístico

Con los resultados obtenidos se realizó un análisis estadístico, empleando el programa SPSS

versión 25, aplicando la prueba de Shapiro-Wilk para determinar la normalidad de los datos,

se utilizaron las pruebas no paramétricas Kruskall Wallis, Mann Whitney, Wilcoxon con un

nivel de confiabilidad de 95% y una significancia del 5%.

26

2.11. Aspectos bioéticos, metodológicos y jurídicos

Aspectos bioéticos

A. Respetar a la persona y comunidad que participa en el estudio: No aplica.

B. Valorar el beneficio que generará el estudio para la persona, la comunidad y el país: El

presente estudio permitirá aumentar el grado de conocimientos del investigador y de la

comunidad en lo que referente a las alternativas naturales de desinfección sobre los

agentes patógenos que habitan en la cavidad bucal, optimizando de esta manera los

tratamientos aplicados durante la práctica clínica.

C. Confidencialidad: Señalado en los anexos H, I y J.

D. Riesgos potenciales del estudio: El estudio propuesto posee características que no

representan riesgo a la salud o integridad del investigador.

E. Beneficios potenciales del estudio: Beneficio directo: La Facultad de Odontología de la

Universidad Central del Ecuador, los docentes y la comunidad odontológica del país,

debido que podrá contar con una investigación que servirá de fundamento para futuras

investigaciones en lo concerniente al efecto inhibitorio de la infusión de Illicium verum

sobre la cepa de Porphyromonas gingivalis, bacteria patógena oral causante de

enfermedades periodontales. Beneficio indirecto: Específicamente los pacientes que

contarán con un tratamiento alternativo para minimizar el efecto de estos

microorganismos en el desarrollo de diversas patologías periodontales.

F. Selección equitativa de la muestra y protección de población vulnerable: No aplica.

G. Conflicto de intereses: Señalado en los anexos F y G.

H. Idoneidad ética y experticia del estudio: Señalado en los anexos D y E.

Aspectos metodológicos

A. Pertinencia o relevancia clínica de la investigación: La investigación planteada permitirá

diseñar y aplicar tratamientos novedosos contra patologías periodontales fundamentada

en infusión de Illicium verum, así como motivar futuras investigaciones sobre la acción

inhibitoria de este agente desinfectante natural sobre otros tipos de microorganismos

presentes en la cavidad bucal, causantes de diversas patologías periodontales,

optimizando de esta manera la atención odontológica durante la práctica clínica con el

apoyo de sustancias alternativas.

B. Validez interna del diseño del estudio para producir resultados fiables: Para garantizar la

validez de los resultados obtenidos la medición de los halos de inhibición será realizada

27

por el investigador, utilizando una regla milimetrada que estará calibrada de fábrica,

previo entrenamiento del asesor metodológico Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra.

C. Validez externa del diseño del estudio para ser extrapolado al conjunto de la población:

No aplica.

Aspectos jurídicos

No aplican para la presente investigación.

28

CAPÍTULO IV

3. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Los datos descriptivos obtenidos (media, desviación estándar, mínimos y máximos) respecto

al halo de inhibición de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) sobre Porphyromonas

gingivalis se obtuvo a través de pruebas estadísticas de normalidad Shapiro-Wilk, y pruebas

no paramétricas Kruskall Wallis, Mann Whitney, Wilcoxon con un nivel de confiabilidad de

95% y una significancia del 5%. Los datos obtenidos se tabularon en el programa Microsoft

Excel, para el análisis estadístico se utilizó el programa SPSS versión 25.

3.1. Resultados descriptivos

En la tabla 1 se evidencia que la infusión de Illicium verum en una concentración de 75%

presenta el mayor halo de inhibición sobre Porphyromonas gingivalis con un promedio de

18,56 mm a las 24 horas y 19,18 mm a las 48 horas, sin embargo la compararlos con los

controles, se demuestra que la clorhexidina 0,12% (control positivo) reporta un mayor halo

de inhibición tanto a 24 y 48 horas, mientras que para el control negativo son menores los

halos respecto de las infusiones de Illicium verum sobre el microorganismo a diferentes

concentraciones y tiempo de inoculación. (Gráfico 1)

Tabla 1. Datos descriptivos del halo de inhibición (mm)

Sustancias

24 horas 48 horas

X 95% IC

DE X 95% IC

DE Mín Máx Mín Máx

Infusión Illicium verum 25% 14,80 14,56 15,04 0,81 15,18 14,88 15,47 0,98 Infusión Illicium verum 50% 16,96 16,63 17,28 1,09 17,62 17,26 17,99 1,21 Infusión Illicium verum 75% 18,56 18,26 18,85 0,99 19,18 18,84 19,52 1,13 Clorhexidina 0,12% horas 31,53 30,77 32,30 2,55 32,36 31,74 32,97 2,06 Suero Fisiológico 6,00 6,00 6,00 0,00 6,00 6,00 6,00 0,00

X: media

DE: Desviación estándar Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez

En el gráfico 1 se demuestra que a medida que aumenta la concentración de la infusión de

Illicium verum es mayor la media del halo de inhibición sobre Porphyromonas gingivalis a

las 24 y 48 horas, además a las 48 horas se reporta el mayor valor de la media del halo de

inhibición de las infusiones de anís estrellado y clorhexidina.

29

Gráfico 1. Halo de inhibición (mm) de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a los

diferentes tiempos de inoculación.

Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez

Con respecto al efecto inhibitorio de las sustancias se estableció en base a la escala sugerida

por el artículo de Mariani et al., evidenciando que la infusión de Illicium verum a las

diferentes concentraciones sobre Porphyromonas gingivalis y la clorhexidina al 0,12%

presentan un alto efecto inhibitorio (halo de inhibición Alta ˃ 8 mm), en cambio el suero

fisiológico el efecto es leve (Leve ≤ 6 mm). (Tabla y gráfico 2)

Tabla 2. Efecto inhibitorio de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a los diferentes

tiempos de inoculación. Tiempo de

inoculación Sustancias Concentración Leve Moderada Alta

24 horas

Infusión Illicium verum 25% 0% 0% 100% 50% 0% 0% 100% 75% 0% 0% 100%

Suero Fisiológico 100,00% 0% 0% Clorhexidina 0,12% 0% 0% 100%

48 horas

Infusión Illicium verum 25% 0% 0% 100% 50% 0% 0% 100% 75% 0% 0% 100%

Suero Fisiológico 100,00% 0% 0% Clorhexidina 0,12% 0% 0% 100%


14,8

0 16,9

6

18,5

6

31,5

3

6,00

15,1

8 17,6

2

19,1

8

32,3

6

6,00

0,00

5,00

10,00

15,00

20,00

25,00

30,00

35,00

Infusión lliciumVerum 25%

Infusión IlliciumVerum 50%

Infusión IlliciumVerum

Clorhexidina 0,12% Suero Fosiológico

24 Horas

48 Horas

30

Gráfico 2. Efecto inhibitorio de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a los

diferentes tiempos de inoculación.


3.2. Resultados estadísticos

Se aplicó la prueba estadística Shapiro-Wilk para identificar si los datos proceden de una

distribución normal, evidenciando que los p valores<0,05, por lo tanto los datos del halo de

inhibición de las infusiones de Illicium verum a las diferentes concentraciones y tiempo de

inoculación y los controles sobre Porphyromonas gingivalis, provienen de una distribución

no paramétrica.

Tabla 3. Prueba de normalidad de Shapiro-Wilk

Sustancias

Shapiro-Wilk

Estadístico gl Sig.

Infusión Illicium verum 25% -24 horas 0,87 45,00 0,00 Infusión Illicium verum 50% -24 horas 0,91 45,00 0,00 Infusión Illicium verum 75% -24 horas 0,92 45,00 0,00 Clorhexidina 0,12% - 24 horas 0,86 45,00 0,00 Suero Fisiológico - 24 horas 0,64 45,00 0,00 Infusión Illicium verum 25% -48 horas 0,90 45,00 0,00 Infusión Illicium verum 50% -48 horas 0,93 45,00 0,01 Infusión Illicium verum 75% -48 horas 0,92 45,00 0,01 Clorhexidina 0,12% - 48 horas 0,87 45,00 0,00 Suero Fisiológico - 48 horas 45,00


En la tabla 4, mediante el test Wilcoxon se evidencia que existe diferencias significativas en

los halos de inhibición entre las distintas concentraciones de las infusiones de Illicium verum

- - -

100,

00%

- - - -

100,

00%

-

100%

100%

100%

-

100%

100%

100%

100%

-

100%

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

25% 50% 75% . . 25% 50% 75% . .

Infusión Illicium verum SueroFisiológico

Clorhexidina0,12%

Infusión Illicium verum SueroFisiológico

Clorhexidina0,12%

24 horas 48 horas

Alta

Moderada

Leve

31

(anís estrellado) sobre Porphyromonas gingivalis (25%-50%), (50%-75%) y (25%-75%)

tanto a las 24 y 48 horas de inoculación (p< 0,05).

Tabla 4. Prueba Wilcoxon del halo de inhibición de las infusiones de Illicium verum

Tiempo de

inoculación Concentraciones Z Sig. asintótica(bilateral)

24 horas Infusión Illicium verum 50% - 25% -5,859 0,000 Infusión Illicium verum 75% - 25% -5,896 0,000 Infusión Illicium verum 75% - 50% -5,605 0,000

48 horas Infusión Illicium verum 50% - 25% -5,768 0,000 Infusión Illicium verum 75%- 25% -5,917 0,000 Infusión Illicium verum 50%-75% -5,457 0,000


Al realizar la prueba Kruskal- Wallis, se evidencia que existe diferencia significativa entre

la media del halo de inhibición de las sustancias de estudio a las 24 y 48 horas de inoculación

del Porphyromonas gingivalis (p< 0,05). (Gráfico 3)

Gráfico 3. Prueba Kruskal-Wallis para los halos de inhibición de las sustancias de estudio en grupos de

24 y 48 horas


En la tabla 5, a través de la prueba Mann Whitney se demuestra que existe diferencia

significativa de la media del halo de inhibición de la infusión de anís estrellado (Illicium

verum) a concentración del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis con

respecto a la media del halo de inhibición del control positivo (clorhexidina) y control

negativo (suero fisiológico) a las 24 y 48 horas de inoculación (p<0,00).

32

Tabla 5. Prueba Mann Whitney para muestras independientes

Tiempo Sustancia U de Mann - Whitney

Z Valor p

24 horas

Infusión Illicium verum (25%) – Suero Fisiológico 0,000 -8,821 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,796 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,798 ,000 Infusión Illicium verum (25%) – Clorhexidina 0,12% 0,000 -8,255 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Clorhexidina 0,12% 0,000 -8,235 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Clorhexidina 0,12% ,500 -8,233 ,000

48 horas

Infusión Illicium verum (25%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,796 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,779 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,792 ,000 Infusión Illicium verum (25%) - Clorhexidina 0,12% 0,000 -8,235 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Clorhexidina 0,12%) 0,000 -8,221 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Clorhexidina 0,12% 2,500 -8,211 ,000


En la tabla 6 se evidencia la comparación del efecto inhibitorio de las infusiones de Illicium

verum sobre Porphyromonas gingivalis entre las concentraciones, demostrando que no

existe diferencia significativa entre el efecto de las infusiones de anís estrellado al comparar

25%-50%, 50%-75% y 25%-75% tanto a las 24 y 48 horas de inoculación (p>0,05), por lo

tanto se puede indicar estadísticamente que presentan igual efecto inhibitorio.

Tabla 6. Prueba Wilcoxon del efecto inhibitorio de las de la infusión de anís estrellado (Illicium verum)

a concentración del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de

inoculación.

Tiempo de

inoculación Concentraciones Z Sig. asintótica(bilateral)

24 horas Infusión Illicium verum 50% - 25% ,000b 1,000 Infusión Illicium verum 75% - 25% ,000b 1,000 Infusión Illicium verum 75% 50% ,000b 1,000

48 horas Infusión Illicium verum 50% - 25% ,000b 1,000 Infusión Illicium verum 75%.25% ,000b 1,000 Infusión Illicium verum 75%-50% ,000b 1,000


Con la prueba estadística Mann Whitney se estableció que no existe diferencia significativa

entre el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentración

del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis y el efecto de la clorhexidina

(p>0,05), este comportamiento es igual a las 24 y 48 horas de inoculación. Sin embargo, al

contrastar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado con el control negativo, se

identifica diferencia significativa entre los efectos inhibitorio de ambas sustancias a los

diferentes tiempos de inoculación (p<0,05). (Tabla 7)

33

Tabla 7. Prueba Mann Whitney del efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado con respecto a la

clorhexidina y suero fisiológico

Tiempo Sustancia U de Mann -

Whitney Z Valor p

24 horas

Infusión Illicium verum (25%) – Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (25%) – Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000 Infusión Illicium verum (50%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000 Infusión Illicium verum (75%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000

48 horas

Infusión Illicium verum (25%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (25%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000 Infusión Illicium verum (50%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000 Infusión Illicium verum (75%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000


Mediante la prueba Kruskal Wallis, se realizó la comparación del halo de inhibición infusión

de anís estrellado (Illicium verum) por el tiempo de inoculación, determinando que existió

diferencia significativa de la media del halo de inhibición de las concentraciones 50% y 75%

sobre cepas de Porphyromonas gingivalis entre el tiempo de inoculación 24 y 48 horas (p<

0,05), mientras que la media del halo de inhibición de la infusión de anís estrellado a 25%

comparando a las 24 y 48 horas de inoculación no existió diferencia significativa (p>0,05),

similar comportamiento se presentó en los controles. (Tabla 8)

Tabla 8. Comparación del halo de inhibición de las sustancias entre 24 y 48 horas de inoculación

Sustancias H de Kruskal-Wallis gl Sig. asintótica

Infusión Illicium verum 25%, 24-48 horas 3,503 1 0,061 Infusión Illicium verum 50%, 24-48 horas 8,035 1 0,005 Infusión Illicium verum 75%, 24-48 horas 8,205 1 0,004

Clorhexidina 0,12%, 24-48 horas 2,607 1 0,106 Suero Fisiológico, 24-48 horas 0,000 1 1,000


Con respecto al efecto inhibitorio de las sustancias de estudio no existió diferencia

significativa entre el tiempo de inoculación de las cepas de Porphyromonas gingivalis a 24

y 48 horas (p> 0,05), es decir no existe variación estadística entre el efecto inhibitorio de las

sustancias a las 24 y 48 horas. (Tabla 9)

34

Tabla 9. Comparación del efecto inhibitoria de las sustancias entre 24 y 48 horas de inoculación

Sustancias H de Kruskal-Wallis gl Sig. asintótica

Infusión Illicium verum 25%, 24-48 horas 0,000 1 1,000 Infusión Illicium verum 50%, 24-48 horas 0,000 1 1,000 Infusión Illicium verum 75%, 24-48 horas 0,000 1 1,000

Clorhexidina 0,12% 24-48 horas 0,000 1 1,000 Suero Fisiológico 24-48 horas 0,000 1 1,000


3.3. Discusión

Los resultados del presente estudio desarrollado con el objetivo de comprobar el efecto

inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) al 25%, 50% y 75% sobre la

Porphyromonas gingivalis, demuestran un efecto inhibitorio alto de la planta sobre las cepas

bacterianas con incremento gradual a mayor tiempo de exposición y mayor concentración,

encontrando que para las 24 horas reportó halos de inhibición de 14,8 mm al 25%, 16,96

mm al 50% y 18,56 mm al 75%, mientras que a las 48 horas arrojó una medición de 15,18%

mm a una concentración de 25%, 17,62 mm al 50% y 19,18 mm al 75%, existiendo

diferencias significativas en los halos de inhibición (p<0,05) entre las distintas

concentraciones de las infusiones de Illicium verum sobre Porphyromonas gingivalis, tanto

a las 24 como a las 48 horas de inoculación, destacando que de acuerdo a De y cols. (2002)

(41) la actividad antimicrobiana del anís estrellado (Illicium verum) se debe principalmente

al anetol, así como otros compuestos que forman parte de la composición en menor

proporción.

Estos resultados coinciden con el estudio de Melendez y cols. (2016) (18) al señalar que el

extracto de Illicium verum inhibe el crecimiento in vitro de Porphyromonas gingivalis a

concentraciones elevadas luego de 24 horas de incubación, encontrando similitud también

con la investigación de Singh y cols. (2007) (42) al concluir que el extracto de plantas como

el Illicium verum, aunque son menos efectivos a una concentración más baja, dan lugar a

una inhibición completa del crecimiento bacteriano cuando la concentración aumenta. Por

otra parte, Valladares (2011) (43) desarrolló una investigación con el objetivo de determinar

el efecto inhibitorio de la infusión del anís estrellado sobre el crecimiento de Streptococcus

mutans, empleando cinco diversas concentraciones (5%, 25%, 50%, 75% y 100%),

demostrando que el efecto inhibitorio aparece a partir de la concentración del 25%,

alcanzando el mayor nivel a una concentración del 75%.

35

Igualmente, existe coincidencia con el estudio de Ruíz (2011) (44) que analizó el efecto

inhibitorio de la infusión de anís estrellado a concentraciones del 5%, 25%, 50%, 75% y

100% sobre la placa bacteriana bucal demostrando variación en el promedio del diámetro de

halo de inhibición, especialmente a partir del 50%, aumentando el efecto inhibitorio a

medida que se incrementaba la concentración, similar coincidencia se observa en la

investigación de Alhajj y cols. (2019) (45) donde se evaluaron tres extractos obtenidos del

anís estrellado, correspondientes a dos extractos metanólicos (metanol absoluto y metanol al

50%) y un extracto acuoso, obtuvo como resultado que los extractos de la planta exhibieron

efectos inhibitorios contra bacterias Gram negativas (Escherichia coli y Salmonella

entérica), mismo grupo al que pertenece Porphyromonas gingivalis, variando las zona de

inhibición entre 7 y 15 mm, siendo importante destacar que el extracto acuoso exhibió la

actividad antibacteriana más baja entre los extractos, con zonas de inhibición que

presentaron un máximo de 9 mm, sin embargo, se mantiene en un rango alto.

Por el contrario los resultados obtenidos en la presente investigación no coinciden con el

estudio de Iauk y cols. (2003) (46) desarrollado con el objetivo de determinar la actividad

antibacteriana de extractos de plantas medicinales contra bacterias periodontopáticas y

tampoco coinciden con Shan y cols. (2007) (47) donde se determinó la actividad

antibacteriana in vitro de un total de 46 extractos de especias dietéticas y hierbas

medicinales, resultando en ambas investigaciones que el Illicium verum fue la planta

medicinal que mostró ninguna o menor actividad antibacteriana contra las cepas Gram

negativas analizadas, entre las cuales se encontraba la Porphyromonas gingivalis, aunque

este resultado podría explicarse por el mecanismo particular de acción de algunos

componentes activos presentes en la planta que causan menor interferencia con el

metabolismo de estas bacterias en comparación con otros extractos vegetales.

Con respecto al efecto inhibitorio del gluconato de clorhexidina al 0,12%, usado como

control positivo sobre Porphyromonas gingivalis, el presente estudió determinó un efecto

alto, presentando halos de inhibición superiores, tanto a las 24 horas (31,53 mm) como a las

48 horas (31,74 mm), en relación a la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a diferentes

concentraciones, mientras que con respecto al suero fisiológico usado como control negativo

este mostró un efecto leve con iguales halos de inhibición, tanto a las 24 como a las 48 horas

(6 mm), evidenciando para ambos controles diferencias estadísticamente significativas en la

medición de halos de inhibición con respecto al Illicium verum en las diversas

concentraciones y tiempos, resultados que coinciden con la investigación de Singh y cols.

36

(2005) (48), Aunque señala que el extracto de Illicium verum a pesar que registró dentro del

rango un efecto inhibitorio alto mostró una mayor actividad con respecto a los bactericidas

comerciales, como la ampicilina y la clorhexidina, encontrando alta efectividad sobre

bacterias Gram negativas, diferencia que se puede considerar porque la actividad de los

componentes del anís estrellado puede verse afectada con la duración del periodo de

almacenamiento.

Estos resultados no coinciden con los alcanzados en el estudio de Ruíz (2011) quien al

realizar la comparación general del promedio del diámetro de halo de inhibición encontró

que la clorhexidina presentó una mayor actividad inhibitoria con respecto a la infusión de

Illicium verum, aunque se puede explicar aduciendo que el estudio se fundamentó en la

escala de Duraffourd, la cual presenta 4 niveles de efectividad con rangos más amplios que

van de < 8 mm a ≥ 20 mm.

Finalmente, los hallazgos reflejados en el estudio de Yang y cols. (2010) (49), realizado con

el objetivo de identificar compuestos antimicrobianos en Illicium verum y evaluar la eficacia

antibacteriana de estos contra patógenos resistentes a antibióticos, obteniendo zonas de

inhibición entre 15 y 21 mm sobre las bacterias analizadas, sugieren la posibilidad de utilizar

los extractos de la planta como antimicrobianos naturales debido a la comprobada actividad

antibacteriana.

Entre las limitaciones encontradas al realizar la revisión bibliográfica para el desarrollo de

la presente investigación son las escasas investigaciones previas que relacionen directamente

el efecto del extracto de anís estrellado (Illicium verum) con cepas de Porphyromonas

gingivalis, por lo que se realizó la comparación de los resultados alcanzados con

publicaciones que considerarán esta planta con algunas otras bacterias, especialmente del

grupo Gram negativas.

37

CAPÍTULO V

4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

4.1. Conclusiones

El efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) sobre la

Porphyromonas gingivalis se incrementa en la medida que aumentan los niveles de

concentración del extracto de la planta.

La infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentración del 25%, 50% y 75%

reportan un alto efecto inhibitorio (halo de inhibición >8 mm) sobre cepas de

Porphyromonas gingivalis a las 24 horas de inoculación, a la concentración de 75%

se reporta el mayor valor de la media del halo de inhibición (18,26 mm).

La infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentración de 25%, 50% y 75%

exhibe una alta actividad inhibitoria sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las

48 horas de inoculación, el mayor valor de la media se evidencia en la sustancia al

75% con 18,84 mm.

Al comparar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a

concentración de 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las

24 y 48 horas de inoculación, se demuestra que en ambos tiempos de inoculación

tienen un alto efecto inhibitorio en el 100% de las muestras estudiadas, sin embargo,

existe diferencia significativa entre los halos de inhibición a las concentraciones de

50% y 75%.

Mediante los resultados se evidenció que la infusión de anís estrellado (Illicium

verum) a diferentes concentraciones posee igual efecto inhibitorio que la

clorhexidina al 0.12% y mayor acción inhibitoria que el suero fisiológico frente a las

cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación.

38

4.2. Recomendaciones

Desarrollar investigaciones con extracto de Illicium verum a una concentración del 100%

con el fin de determinar si maximiza el efecto inhibitorio sobre Porphyromonas

gingivalis.

Realizar más estudios sobre el efecto antimicrobiano del anís estrellado sobre

Porphyromonas gingivalis considerando otros métodos de extracción como puede ser el

extracto metanólico o el aceite esencial.

Investigar el efecto inhibitorio del anís estrellado sobre otros tipos de microorganismos

patógenos residentes en la cavidad bucal.

Diseñar tratamientos preventivos de patologías infecciosas bucales con base en el uso

del extracto de anís estrellado (Illicium verum), que permitan disminuir costos y efectos

secundarios en los pacientes.

39

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42

ANEXOS

Anexo A. Constancia aceptación de la tutoría

43

Anexo B. Aceptación del tema

45

Anexo C. Certificado de la biblioteca de no reflejar coincidencia

46

Anexo D. Carta de idoneidad ética y experticia del tutor

47

Anexo E. Carta de idoneidad ética y experticia del investigador

48

Anexo F. Declaración de conflictos de intereses del tutor

49

Anexo G. Declaración de conflictos de intereses del investigador

50

Anexo H. Carta de confidencialidad

53

Anexo I. Oficio de la autorización de la institución donde se realiza el estudio

55

Anexo J. Hoja de recolección de datos

57

Anexo K Certificado de MEDIBAC de la cepa de Porphyromona gingivalis.

60

Anexo L Certificado de protocolo manejo de desechos

61

Anexo M. Certificado de la elaboración de la infusión de Illicium verum.

62

Anexo N. Certificado de viabilidad ética

63

Anexo O. Certificación del Urkund.

65

Anexo P. Certificación de renuncia a la autoría del estadístico.

66

Anexo Q. Certificado renuncia a la autoría del laboratorio.

67

Anexo R. Certificado del abstract.

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