Beta HCG dan Progesterondisusun oleh :Linda Ayu(32)Widia Utami(33)Dian Lisnawati (34)Meisya Trinita (35)Salisa Husnul(36)

HCG (Human Chorionic Gonadotropin)

- Hormon glikoprotein yang biasanya dihasilkan oleh plasenta selama kehamilan- HCG disekresi syncytiotrophoblast kedalam sirkulasi darah ibu pertama kali saat implantasi hari keenam sampai ketujuh setelah fertilisasi- HCG mendukung korpus luteum menghasilkan hormon progesteron untuk

mempertahankan kehamilan- HCG juga diproduksi oleh cancer pada GIT, UGT, bronchial dan mammae juga limfoma

Sub unit HCG

ALFA HCg => tidak spesifik karena hampir identik dengan subunit alpha hormon glikoprotein lainnya, seperti Thyroid

Stimulating Hormone (TSH), Luteinizing Hormone (LH), dan Follicle Stimulating

Hormone (FSH):

Beta HCg=> SpesifikSehingga beta-hCG memungkinkan

deteksi dini kehamilan

Pemeriksaan dilakukan untuk :

Evaluasi mola hidatidosa

KehamilanChorio-carsinoma

Bahan pemeriksaan: Serum. Jangan gunakan hemolitik, ikterik atau spesimen lipaemic.Harap dicatat: Sampel yang mengandung natrium azida karena tidak boleh digunakan dalam pengujian tersebut. Nilai rujukan : < 5 mIU/ml

Meningkat Pada : Menurun Pada :

1. Kehamilan2. Mola hidatidosa3. Chorio-carcinoma4. Teratoma ovarium atau teratoma testis5. Kehamilan ganda6. Seminoma, kanker kolon, kanker

gaster,kanker paru, kanker payudara7. Kehamilan topic8. Eritroblastis feotalis

1. Absortus mengancam2. Kematian janin3. Gestosis4. Kehamilan ektopik5. IUFD

Prinsip Pemeriksaan Beta HCG dengan Elisa metode Sandwich

Antibody Capture

Wells dilapisi dengan antibodi anti-β-HCG dari tikus (monoclonal)

Sampel

pasien yang mengandung endogen β-HCG dan / atau HCG

Antibody terkonjugasi enzim

Enzim HRP (horseradish peroksidase)

Jumlah peroksidase terikat sebanding dengan konsentrasi β-HCG / HCG dalam sampel.

Tambahkan TMB sebagai substrat, intensitas warna

sebanding dengan

a. Prosedur kerja

1. Diberi penomeran pada mikrowell

2. Dipipet 25 ul standar, control, dan sampel dengan menggunakan tip disposible kedasar well.

3. Tambahkan 100 ul enzym konjugat.

4. Campurkan selama 10 detik.

5. Inkubasi selama 60 menit disuhu ruang.

6. Keluarkan kelebihan reagen dari mikrowell, beeri 400 ul aquadest kedalam well selama 5 menit.

7. Tambah 100 ul substrat .

8. Inkubasi 15 menit pada suhu ruang.

9. Beri stopsolution 50 ul.

10. Dibaca OD pada panjang gelombang 450 ± 10 nm.

b. Perhitungan Hasil (kuantitatif)1. Hitung nilai absorbansi rata-rata untuk setiap set standar, kontrol dan sampel pasien.2. Buatlah sebuah kurva standar dengan memplot absorbansi rata yang diperoleh dari masing-masing standar

terhadap konsentrasi dengan nilai absorbansi pada vertikal (Y) axis dan konsentrasi pada horisontal (X) axis.

3. Menggunakan nilai absorbansi rata-rata untuk masing-masing sampel menentukan sesuai konsentrasi dari kurva standar.4. Metode Otomatis: Hasil di IFU telah dihitung secara otomatis menggunakan 4 PL (4 Parameter Logistik) kurva fit. Parameter Logistik adalah metode yang disukai. fungsi reduksi data lainnya dapat memberikan hasil yang sedikit berbeda.5. Konsentrasi sampel dapat dibaca langsung dari kurva standar ini. Sampel dengan konsentrasi lebih tinggi dari standar tertinggi harus lebih diencerkan atau dilaporkan sebagai> 200 mIU / ml. Perhitungan Hasil (kualitatif)

C. Perhitungan Hasil (kualitatif)Untuk analisis kualitatif tingkat β-hCG pengembangan warna spesimen dibandingkan dengan warna 0 mIU / mL dan 50 standar mIU / mL.- Jika warna biru kurang intens dibandingkan warna 50 mIU / mL standar, sampel dianggap sebagai negatif.- Jika warna biru lebih intens dari atau sama dengan warna 50 mIU / mL standar sampel dianggap sebagai positif.

Progesteron

disekresi oleh korpus luteum dan plasenta . kegunaan : a. biosintesis steroid pada semua jaringan yang mengeluarkan hormon steroid .

b. Progesteron bertanggung jawab untuk perubahan progestasional di endometrium dan perubahan siklik dalam leher rahim dan vagina .

– Tujuan pemeriksaan : Tingkat progesteron plasma berguna dalam menyelidiki fungsi luteal dan pemantauan ovulasi .

Meningkat Pada : Menurun Pada :

1. Kehamilan2. Ovulasi3. Kista ovarium4. Tumor adrenal5. Tumor ovarium6. Mola hydatidosa7. Congenital adrenal hiperplasia

1. Amenorrhoe2. Absorbsi mengancam3. Kematian janin4. Eklamsi

Prinsip pemeriksaan progesteron metode kompetitif

Tambahkan 1μL enzim konjugat ke 50 uL volume total dari EIA penyangga untuk setiap sumur diuji.

Untuk setiap well tambahkan 110 uL konjugat enzim menjadi 5,5 mL volume total dari EIA penyangga.Lalu campurkan keduanya.

.Progesteron enzim konjugat yang ada direagen

Tambahkan 50 uL konjugasi enzim yang telah diencerkan ke masing-masing well

Tambahkan 50 uL standar (S)

Tutup plate dan inkubasi pada suhu kamar 1 jam

Cuci 3kali selama 5 menit (dirotator 5 menit dan cuci lagi sebanyak 3 kali)

Tambahkan300 uL blocking buffer

Tutup plate dan inkubasi pada suhu kamar 1 jam

Remove bufferTambah sampel

Tutup plate dan inkubasi pada suhu kamar 1 jam

Cuci 3kali selama 5 menit (dirotator 5 menit dan cuci lagi sebanyak 3 kali)

150 uL substrat untuk masing-masing

dibaca dalam microplate reader pada 650 nm. Jika panjang gelombang ganda digunakan, ditetapkan W pada 650 nm dan W pada 490 nm.