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1Graduandos pelo Curso de Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais UnilesteMG;2Farmacutica mestre; Docente do Curso de Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais UnilesteMG 3Farmacutica mestre; Docente do Curso de Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais UnilesteMG;4Farmacutica doutora pela Universidade Federal de Minas gerais; Docente do Curso de Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais UnilesteMG
INVESTIGAO DE MUTAO NOS GENES DO FATOR V, DA
PROTROMBINA E DA METILENOTETRAHIDROFOLATO REDUTASE (MTHFR)
EM PACIENTES COM HISTRIA DE TROMBOSE
INVESTIGATION OF MUTATION IN GENE FACTOR V, PROTHROMBIN AND METHYLENETETRAHYDROFOLATE REDUCTASE (MTHFR) IN PATIENTS
WITH HISTORY OF THROMBOSIS
Bonfim, Ariane da Silva1; Favoreto, Nbia Mara de Sousa1; Silva, Rvia Mara
Morais2; Brum, Carla de Aredes3; Valado, Analina Furtado4
RESUMO A trombose reconhecidamente uma doena de carter multifatorial e sua ocorrncia est intimamente relacionada com a presena de fatores genticos e/ou adquiridos. Os fatores genticos envolvidos no estudo consistem em mutaes em diferentes genes, podendo ocorrer isolados ou combinados entre si. O presente estudo investigou mutaes no gene do Fator V de Leiden, Fator II (Protrombina) e Metilenotetrahidrofolato Redutase (MTHFR), em seis indivduos que apresentaram evento trombtico sem causa diagnosticada. Os participantes do estudo eram do sexo feminino, faziam uso de anticoncepcional oral ou reposio hormonal. Para a deteco da mutao no Fator V de Leiden e MTHFR foi utilizada a tcnica de PCR RFLP, j para o Protrombina PCR ASO. Neste estudo houve uma prevalncia de mutao no gene do Fator V de Leiden, sendo que dos seis casos analisados, quatro apresentaram mutao em heterozigose para o mesmo. Dois apresentaram mutao em heterozigose para MTHFR. Para Protrombina no foi identificada mutao. Vale ressaltar que a populao analisada neste estudo foi relativamente pequena. Este estudo demonstrou a influncia de mutaes, mas como destacado na literatura foi visto que, alm dos fatores genticos, a soma dos fatores adquiridos potencializa ainda mais o risco para ocorrncia do evento, bem como o fato de que a ausncia das principais mutaes descritas na literatura no exclui a possibilidade de ocorrncia de trombose. Palavras Chave: Trombofilia, Fatores de risco, Reao em Cadeia Polimerase (PCR). ABSTRACT
Thrombosis is recognized as a multifactorial disease and its occurrence is closely related to the presence of genetic factors and / or acquired. Genetic factors involved in the study consist of mutations in different genes, may occur alone or in combination with each other. The present study investigated mutations in Factor V Leiden, Factor II (Prothrombin) and methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) in six subjects who had diagnosed thrombotic event without a cause. The study participants were female, were using oral contraceptives or hormone replacement.
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Farmcia & Cincia, v.2, p.23-38, ago./nov. 2011.
To detect the mutation in Factor V Leiden and MTHFR was used the PCR - RFLP, PCR has to Prothrombin - ASO. In this study there was a prevalence of mutation in the gene for Factor V Leiden, and the six cases examined, four had heterozygous mutation for the same. Two were heterozygous for MTHFR mutation. For Prothrombin mutation was not identified. It is noteworthy that the population analyzed in this study was relatively small. This study demonstrated the influence of mutations, but as noted in the literature was seen that in addition to genetic factors, the sum of acquired factors further enhances the risk for the event, and the fact that the absence of major mutations described in literature does not exclude the possibility of thrombosis. Keywords: Thrombophilia, Risk factors, Polymerase Chain Reaction (PCR).
INTRODUO
A trombose reconhecidamente uma doena de carter multifatorial,
atingindo em mdia 1/1000 indivduos adultos por ano. Essa incidncia varia de
acordo com a idade, sendo dez vezes menor em indivduos com idade entre 20 a 40
anos em comparao a faixas etrias mais avanadas (KONOPKA et al., 2010).
Trata-se de um processo patolgico relacionado ativao inadequada dos
mecanismos hemostticos nos vasos no lesados. Sua ocorrncia est intimamente
relacionada presena de fatores genticos e adquiridos (utilizao de
anticoncepcional oral, gravidez, imobilizao aps cirurgias, traumatismo ou
doenas malignas) que concorrem isoladamente ou em associao para o seu
desencadeamento (GUIMARES et al., 2009).
Na maioria das doenas tromboemblicas, a principal anormalidade no est
na coagulabilidade, mas sim no stio onde ela ativada. Tanto para executar a
hemostasia quanto para formar o trombo, o mecanismo de coagulao segue os
mesmos passos, cujo conhecimento permite reconhecer anormalidades geradoras
de tromboses (FUCHS et al., 2004).
Os fatores de risco para trombose incluem a hipertenso arterial, o tabagismo,
dislipidemias e o diabetes mellitus. Entre os fatores adquiridos clssicos que
contribuem para a trombose podemos citar a idade, o uso de certos medicamentos
como os anticoncepcionais orais e a terapia de reposio hormonal, gravidez e
puerprio, imobilizao de membros ou de parte do corpo, traumas locais, cncer,
presena de anticorpos antifosfolpides, cirurgias de grande porte, infeces e
sndrome nefrtica (GUIMARES et al., 2009).
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Farmcia & Cincia, v.2, p.23-38, ago./nov. 2011.
Trombofilias hereditrias so condies genticas que aumentam o risco de
doena tromboemblica e podem ser causadas por inibio insuficiente da cascata
de coagulao, por mutaes com perda funcional ou por atividade coagulante
aumentada atravs de mutaes com ganho de funo (ALMEIDA, 2010).
Os fatores genticos envolvidos no estudo consistem em mutaes em
diferentes genes que codificam fatores hemostticos, podendo ocorrer isolados ou
combinados entre si. As principais desordens genticas incluem: resistncia ao
da protena C ativada (Fator V de Leiden), mutao do gene do Fator II
(Protrombina), mutao na enzima MTHFR entre outras (ORRA, 2002).
O Fator V de Leiden o mais importante fator de risco gentico da trombose.
Trata-se de uma alterao hereditria, autossmica dominante, que interfere na
atuao da protena C, na sua forma ativada, que um dos fatores reguladores do
sistema de coagulao e que atua na inativao proteoltica do fator V e do fator VIII.
Esta alterao decorrente de uma transio G->A na posio 1691 do gene,
resultando na substituio de Arginina (R) por Glutamina (Q) na posio 506 na
protena (que constitui stio de clivagem da PC ativada na molcula do fator V),
induzindo resistncia da protena C ativada, na qual a clivagem e inativao do
fator V so feitas de forma insatisfatria, levando-o ao acmulo e conseqentemente
aumentando o risco de trombose (GODOY, 2005).
O Fator II (Protrombina), sintetizada no fgado na presena de vitamina K, a
precursora da trombina, que ao final da cascata de coagulao induz a formao da
fibrina. A trombina participa da cascata de coagulao e ao se ligar
trombomodulina ativa o sistema da protena C, tendo papel crucial no equilbrio pr
coagulante ou anticoagulante (BARROS et al., s.d). O gene do fator II esta
localizado no cromossomo 11 prximo ao centrmero, contem aproximadamente
21.000 pares de bases (pb) e composto de 14 exons e 13 introns. Em 1996 foi
descrita a variante allica protrombina G20210A, uma mutao na regio 3 no
traduzida do gene da protrombina, que consiste na substituio de guanina por
adenina no nucleotdeo 20210 localizada prximo ao sitio de clivagem do precursor
do RNA mensageiro (RNAm) em que a cauda poli-A e adicionada. Essa mutao se
associa a aumento da estabilidade do seu RNAm e concentrao plasmtica da
protrombina, o que parece ser o mecanismo pelo qual predispe a ocorrncia de
trombose (RAMOS et al., 2008)
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Farmcia & Cincia, v.2, p.23-38, ago./nov. 2011.
A Metilenotetrahidrofolato Redutase (MTHFR) uma enzima envolvida na
remetilao de homocistena em metionina. Nesta enzima ocorre a substituio de
uma Alanina por Valina (transio C->T no nucleotdeo 677). Uma deficincia na
enzima MTHFR acarreta aumento da concentrao plasmtica de homocistena,
conhecida como hiper-homocisteinemia, que alm de favorecer a instalao de
placas de ateroma nas artrias elsticas e musculares, tambm pode acometer
vasos de todos os calibres com tromboses tanto arteriais quanto venosas (BONINI-
DOMINGOS et al., 2005).
A deteco de mutao em pacientes portadores de eventos trombticos
recomendada para esclarecimento das causas e para efetuar o rastreamento em
membros de sua famlia, ainda sem o aparecimento de eventos trombticos, de
forma a avaliar os riscos associados e assim determinar um acompanhamento
mdico preventivo.
Dada a importncia de polimorfismos genticos, este estudo teve como
objetivo investigar a presena da mutao G1691A no gene do Fator V (Fator V
Leiden), G20210A no gene do Fator II (Protrombina) e C677T no gene
Metilenotetrahidrofolato Redutase (MTHFR) em pacientes com histria de trombose
pregressa.
METODOLOGIA 1. Seleo dos pacientes e Coleta do material biolgico
A capacit