dr. juan carlos hormazábal o. sección bacteriología ... · absceso abdomen herida herida herida...

SAMR de la Comunidad

Staphylococcus aureus adquirido en la comunidad.

Confirmación de los casos y tipificación molecular

Dr. Juan Carlos Hormazábal O.

Subdepartamento de Microbiología ClínicaSección Bacteriología

Laboratorio Referencia Cocáceas Gram PositivasLaboratorio de Microbiología Molecular

Sección de Genética Molecular

Instituto de Salud Pública de Chile

SAMR de la ComunidadHISTORIA

1934 Panton y Valentine describen “Leucotoxina” PVL

1940s S. aureus resistente a penicilina

1959 Registro de la Meticilina

1961 Primer Reporte de SAMR (Inglaterra)

1968 Primer Reporte de Brote por SAMR (EEUU)

1980s SAMR es Endémico en Hospitales

1997 Reporte de 4 Muertes por SAMR en la Comunidad

2002 Reporte de VRSA

2003 Diseminación del SAMR en la Comunidad

2006 Reporte de Primeros Casos en Chile

CID 2003;36:131-9

Dra. L Jofré, ISP.

SAMR de la ComunidadHISTORIA

SAMR-com en el mundo:

SAMR de la ComunidadAmérica Latina

Reporte de Casos y Brotes

Kowalski: Mayo Clin Proc, Volume 80(9).September 2005.1201-1208

SAMR-com: Presentaciones Clínicas

SAMR-com: Presentaciones ClínicasInfección de Partes Blandas

SAMR-com: Presentaciones ClínicasInfecciones Invasoras

SAMR-com: Diagnóstico

SAMR de la ComunidadDefiniciones

SAMR de la ComunidadFactores de Riesgo de la Infección

SAMR de la ComunidadColonización

Búsqueda de portación Nasal de S. aureus Meticilino resistente comunitario en población sana de la ciudad de Santi ago de Chile. Carolina Aranís, PUC, XXV Congreso SOCHINF 2008.

Búsqueda de portacion Nasal de S. aureus Meticilino re sistente comunitario en población penal, R.M. de Santiago. M ónica Lafourcade, XXVI Congreso SOCHINF, 2009.

SAMR de la ComunidadColonización - Chile

Estudios locales no han logrado detectar colonización en población sana


Laboratorio Local SOSPECHA

Perfil Suscept

Antec. Clínicos

Antec. Epidemiológicos

Lab. Referencia:

Diagnóstico Confirmatorio MOLE CULAR

SAMR-com: Tratamiento Antimicrobiano

SAMR-com: Tratamiento

Dra. L Jofré, ISP

SAMR-com: Tratamiento Antimicrobiano

SAMR-com: Tratamiento

SAMR de la ComunidadEstudio de Susceptibilidad

SAMR de la ComunidadErradicación

SAMR

SAMR-com

Marcadores Moleculares:

Genes PVL LukF-PV LukS-PV

SCCmec

Determinación de líneas genéticas involucradas:

PFGE (Electroforesis de Campo Pulsado)

MLST (Multilocus Sequence Typing)

Laboratorio de Microbiología Molecular, Sección Bac teriología, Lab. Genética Molecular ISP

SAMR-com: Marcadores Moleculares

SAMR de la ComunidadLeucocidina de Panton Valentine (PVL)

PVL y SAMR-com

� PVL no se encuentra en SAMR de origen hospitalario con SCCmec I, II y III ???.

� Más del 90% de SAMR-com causantes de casos presentan PVL

� PVL está presente en todos los casos de sepsis severa, fasceítisnecrosante o neumonía, independiente del ST (tipo genético) o presencia de gen mecA.

� Fuerte asociación entre PVL y SCCmecIV - SCCmecV


Modelo de la Emergencia del SAMR-com Productor de Leucocidina de Panton Valentine Boyle-Brava, R. Daum. Lab. Invest.(2007) 87,3-9

Amplificación genes PVL

Productos de amplificación

SecuenciamientoAutomático

ABI 310Gene Bank

Reconocimiento Secuencias PVLLaboratorio de Microbiología Molecular, Sección Bac teriología, Lab. Genética Molecular ISP


Amplificación de los genes mecA, nuc y pvl (panton-valentineleukocidine)

1 y 14. 100 pb DNA Ladder; 2- 6. Amplificación genes nuc y mecA; 7.control negativo; 8-12. Amplificación gen pvl

mecA

nuc

pvl

C(+) 1 1 2 3

Casos

C(+) 1 1 2 3

Casos

Lina et al. CID, 1999;29:1128-32

Olmos et al. J Clin Microbiol 1998;36:1128-1134

SAMR de la ComunidadDetección Molecular

SAMR de la ComunidadGENOMA

S. Highlander et al. BMC Microbiology 2007, 7:99

SAMR-comTipificación Genética.

MLST PFGE

Tiempo evolutivo medido en cambios.

MLST: Gold Standard para relaciones evolutivasPFGE: Gold Standard para análisis de brotes


arcC

yqiL

pta

tpiA

gmkglpF

aroE

E. aureusGENOMA

� House Keeping Genes (7)

� Amplificación por PCR de fragmentos internos

� Secuenciar

� Identificación de Polimorfismos

� Remitir a sitio WEB MLST

� Determinación de ST (sequence Type)

SAMR de la ComunidadMulti Locus Sequence Typing MLST

MLST, Universo genético S. aureus

Agrupación STs

SAMR-com, Tipos genéticos circulantes en el mundo:

Ann Acad Med Sing. 2006;35:479-89 J. Clin Microbiol. 2005;43:3356-63EID.2006;12:2000-01 J. Clin Microbiol. 2005;43:1985-88

PositivoIV30,8Chile

PositivoIV?Colombia

PositivoIV30Japón

PositivoIV30Nueva Zelanda

PositivoV-Australia

Pos / NegIV93,1Australia

PositivoIV30China

PositivoV┬59Taiwán

PositivoIV59 – 508Taiwán

PositivoIV80Reino Unido

PositivoIV80Suiza

PositivoIV30Suecia

PositivoIV8Noruega

PositivoIV30Latvia

PositivoIV80Holanda

PositivoIV80Grecia

PositivoIV80Alemania

PositivoIV80Francia

PositivoIV80Dinamarca

PositivoIV80Bélgica

PositivoIV30Uruguay

PositivoIV30Brasil

PositivoIV1 – 8Canadá

PositivoIV1 – 8EEUU

PVLSCCmecTIPO MLSTPAÍS

ST30

ST80ST1

USA300ST8

ST30

ST59

ST30

ST30

ST80

ST80

ST30ST59

SAMR-com en el mundo:

USA300ST8

ST5

USA300ST8

ST1

ST80

ST93

USA300ST8

USA300ST8

SAMR de la ComunidadDifusión STs en el Mundo

SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR SCCmec

� La resistencia a Meticilina es codificada por el gen mecA

� Este gen se encuentra en el elemento genético móvil Cassette CromosomalStafilocócico mec (SCCmec)

� Se describen 6 tipos de SCCmec

� Los SCCmec mas pequeños se relacionan con SAMR-com

� El pequeño tamaño de SCCmec disminuiría los costos para la adaptación del S. aureus, facilitando de esta forma su adquisición y permanencia.

SCCmecI 34.3Kb Hospitalario

SCCmecII 53.0 Kb Hospitalario

SCCmecIII 66.9 Kb Hospitalario

SCCmecIV 20.9-24.6 Kb Comunidad

SCCmecV/VT 28.0 Kb Comunidad

Wallin T., Emerg Med Clin N Am, 2008;26:431-455, Susan Boyle Brava, JCM, Sept. 2005 Vol43,p. 4719-4730Daum R. JID, 2002;186:1344-1347, Ito et al. Antimicrob Agents Chemother. 2004 Jul;48(7):2637-51

Okuma et al. J Clin Microb 2002, 40:4289-4294

SAMR-com Estructura de SCC mec

1. 1 kb DNA Ladder, 2-6. gen IS1272 Clase B, 7. control negativo, 8-12. gen complejoccr tipo 2; 13. control negativo, 14-18. gen SCCmec subtipo IVa, 19. control negativo, 20. 100pb DNA Ladder

Protocolo PCR Okuma et al, J. Clin Microbiol. 2002, 4 0:4289-4294

ccrA 2

Class B mec

ccrA Región J1 SCC mec

Amplificación de los genes estructurales de SCCmec Tipo IVa

SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR SCCmec

Amplificación de los genes estructurales de SCCmec Tipo IVa1. 1 kb DNA Ladder 2-19. Casos estudiados; 20. control positivo; 21. control negativo; 22. 100pb DNA Ladder.

Gen complejo ccrA2Gen IS1272

Gen Región J1 SCC mec subtipo IVa

SAMR de la ComunidadCA-MRSA Chile: SCC mec Type IVa

ST5 ST1 ST8 ST30SCCmec II SCCmec IV

SIEMPREPVL(-)

PVL(+) PVL(-) PVL(+) PVL(+)

SCCmec IV SCCmec IV SCCmec IV

SAMR de la ComunidadMarcadores Genéticos PVL y SCC mec IV en DiferentesLineas Genéticas.

Susan Boyle Brava, JCM, Sept. 2005 Vol43,p. 4719-4730

8

SmaI

+

Campo Pulsado PFGE

MLST PVL

SAMR, Genotipificación cepas chilenas .


Dice (Opt:1.00%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]SmaI

100

90807060

SmaI

ST 161-07/#1

ST 20-07/#1

ST 160-07/#1

ST 45-07/#1

ST 128-07/#1

ST 183-07/#1

ST 47-07/#1

ST31-07/#1

ST 21-07/#1

ST 93-06/#1

ST 143-07/#1

ST 75-07/#1

+++++++++++

?2088888888859

USA1100

USA300

SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR PFGE – MLST 2007

SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR PFGE – MLST, Octubre 2009

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]SmaI

100

90807060

SmaI

st 147-08ST 20-07USA 1100USA 200ST 82-09st 161-07st 17-08st 75-07ST 66-09USA 1000USA 100USA 800USA 400st 160-07st 45-07st 93-06st 94-06st 95-06st 176-07st 93-09st 152-08ST 17-09st 178-08st 31-08ST 77-09ST 78-09st 95-09USA 300st 7-08st 73-08st 25-08st 8-08st 128-07ST 13-09st 132-09st 183-07ST 21-07st 31-07ST 34-09st 45-08st 47-07ST 65-09st 55-08st 131-08st 177-08ST 37-09st 143-07USA 500USA 600ST 85-09USA 700

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nuevo tiponuevo tipo

nuevo tiponuevo tipo59598

88888888888888

88888888888888888728

121

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abscesoherida

heridaabscesoLesion facialherida operatoriasecrecion nasal

heridaheridaaspirado traquealTejidolabiosecrecion piernaabscesoabscesoherida piernaabscesoheridaHerida musloherida abdomenabsceso

Abdomenheridaheridaheridaheridaheridaheridaabsceso perirenalherida tobilloherida operatoriaHerida Rodillaheridapostulasecrecion nasalheridaabscesoheridaHerida Rodillaherida

secrecion cara

CL-Sau-Com-Sma-002CL-Sau-Com-Sma-002

CL-Sau-Com-Sma-014CL-Sau-Com-Sma-004CL-Sau-Com-Sma-009CL-Sau-Com-Sma-005CL-Sau-Com-Sma-015

CL-Sau-Com-Sma-006CL-Sau-Com-Sma-008CL-Sau-Com-Sma-001CL-Sau-Com-Sma-001CL-Sau-Com-Sma-001CL-Sau-Com-Sma-018CL-Sau-Com-Sma-018CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010

CL-Sau-Com-Sma-011CL-Sau-Com-Sma-012CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-013CL-Sau-Com-Sma-019CL-Sau-Com-Sma-019CL-Sau-Com-Sma-016CL-Sau-Com-Sma-007

CL-Sau-Com-Sma-017

20082007

20092007200820072009

20072007200620062006200720092008200920082008200920092009

2008200820082008200720092009200720072007200920082007200920082008200820092007

2009

SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR PFGE – MLST, 1 DE MAYO DE 2010

GrupoClonalChile

Emergence of multiresistant variants of thecommunity-acquired methicillin-resistant

Staphylococcus aureus lineage ST1-SCCmecIVin 2 hospitals in Rio de Janeiro, Brazil

Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, Volume 65, Issue 3, Pages 300-305M. Silva-Carvalho, R. Bonelli, R. Souza, S. Moreira, L. dos Santos, M. de Souza

Conceição, S. de Mello Junior, J. Carballido, P. Rito, V. Vieira

SAMR de la Comunidady el Hospital…

SAMR-com, Casos en Chile:

SAMR-comCHILE

Marcadores Moleculares:

Genes PVL (+)

SCCmec IVa

Determinación de principales líneas genéticas involucradas:

PFGE USA300

MLST ST8


SAMR-com, Confirmación ISP

Comunicación Dr. George Golding, Health Canada 2009

SAMR de la ComunidadEL DESAFÍO del DIAGNÓSTICO

�La presencia del gen pvl no es marcador único para SAMR-com

�La ausencia de multirresistencia y determinación de SCCmecIV es de gran utilidad pero no siempre presentes en todos los SAMR-com

�Se requieren mayores estudios para la determinación un marcador o grupo de marcadores estables y confiables para MRSA-com

Rossney et al. J Clin Microbiol, 2007;45:2554-2563

Prevención

SAMR de la ComunidadDiagnóstico complejo, Fundamental la prevención

SAMR-com

I Taller Regional deVigilancia Molecular del S. aureus Meticilino Resistente de la Comunidad, SAMR-com

Organización Panamericana de la Salud,

OPS/OMS

•National Microbiology Laboratory, Public

Health Agency of Canada

•Instituto de Salud Pública de Chile

Santiago de Chile, 26 al 30 de Octubre de 2009.

Instituto de Salud Pública de Chile

dr. juan carlos hormazábal o. sección bacteriología ... · absceso abdomen herida herida herida...

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