U.M.S.N.H.FACULTAD DE QUÍMICO FARMACOBIOLOGÍA

METODOS DE AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

DIÁLISIS

ALEJANDRE CASTAÑEDA VIRIDIANATELLEZ MONDRAGON SAMUELZAMUDIO VILLASANA CRISTINA

SECCIÓN: 10 6TO SEMESTRE

BIOQUÍMICA I

M.C. LUZ ELENA ARÉVALO LEÓN

DiálisisLa Diálisis es un proceso de soporte vital que limpia los productos residuales del metabolismo proteico sin alterar el equilibrio hidroelectrolítico y restableciendo el equilibrio ácido-básico, elimina el exceso de líquidos y controla la química del cuerpo cuando los riñones de una persona fallan.

¿En qué principios se basa la diálisis?

Los tres principios químicos que rigen la diálisis son:

DIFUSIÓN La difusión es el proceso por el cual dos soluciones de diferente concentración, cuando se pone en contacto, llegan a formar una mezcla uniforme, a causa del movimiento constante de las partículas de las dos soluciones, que tienden a distribuirse uniformemente por todo el volumen de la solución.

OSMOSIS La osmosis, consiste en el desplazamiento de liquido a través de una membrana semipermeable desde el lado de menor concentración al de mayor concentración. Este fenómeno se utiliza en la diálisis peritoneal

ULTRAFILTRACIÓN

Eses el paso de agua y solutos producido por una diferencia de presiones a los dos lados de la membrana. De esta forma se favorece el paso de agua y las moléculas que la acompañan en una u otra dirección.

¿Cuándo se utiliza la diálisis?

También hay que recurrir a la diálisis inmediatamente, para controlar el edema pulmonar, hiperpotasemia u otras peligrosas secuelas de la insuficiencia renal.

Cuando :•El tratamiento conservador no basta para controlar los síntomas urémicos de los pacientes con IRC .•Se requiera una actuación inmediata, como sucede en la IRA o en la sobredosis como sistema para eliminar los fármacos o las toxinas del organismo.•La TFG (Tasa de Filtración Glomerular) es muy baja.•El BUM (Nitrógeno Urémico Sanguíneo) urea y la creatinina están muy elevados.

¿Existen diferentes tipos de diálisis? Existen diversos métodos de

diálisis. Actualmente los más utilizados son: A. Hemodiálisis B. Diálisis peritoneal C. Hemofiltración

QUÉ ES LA HEMODIÁLISIS?

Es la extracción de sangre del cuerpo y se envía a través de un filtro especial con soluciones. El filtro ayuda a eliminar sustancias dañinas. La sangre luego se devuelve al cuerpo. Pretende librar al organismo temporalmente de desechos nocivos (urea, creatinina etc), de sal y de agua en exceso. La hemodiálisis ayuda a controlar la tensión arterial y ayuda al organismo a mantener un balance adecuado de electrolitos (potasio, sodio, calcio) y bicarbonato.

¿Qué técnica se utiliza en la hemodiálisis?

Para poder realizar esta técnica es necesario :

extraer sangre del organismo del paciente y hacerla circular por medio de un catéter estéril hacia el filtro de diálisis que es un componente de la máquina o riñón artificial.

Este filtro está dividido en dos espacios por medio de una membrana semipermeable: por un lado pasa la sangre y por el otro el líquido de diálisis (dializado).

Esta membrana es muy delgada y contiene poros que permiten el paso de las sustancias de desecho o tóxicas y del agua desde la sangre hacia el líquido de diálisis no permitiendo el paso de glóbulos rojos, blancos, proteínas de tamaño grande, hormonas, etc. Todo ello se realiza mediante difusión.

En la diálisis la sangre está cargada de sustancias tóxicas y el líquido de diálisis no las contiene, por lo tanto, esta diferencia de concentración de un lado al otro es lo que determina el pasaje de sustancias desde la sangre al dializado. Todo ello se realiza mediante osmosis.Todo este proceso es dinámico ya que la sangre circula constantemente por el filtro: sale sangre limpia que retorna al paciente por el acceso venoso y entra sangre con toxinas por el acceso arterial.

También se necesita extraer el agua que se ha acumulado en el cuerpo ya que esta sobrecarga de líquido provoca presión alta y un aumento en el trabajo del corazón.

La manera de realizarlo es generar mecánicamente un aumento en la presión del compartimento de la sangre dentro del filtro que empuja al líquido contra la membrana forzándolo a atravesarla hacia el compartimiento del dializado por donde es eliminado. Este proceso se denomina ultrafiltración.

Qué es la Diálisis Peritoneal

En este tipo de diálisis, el líquido de diálisis se introduce en la cavidad abdominal por medio de un cateter y el peritoneo se comporta como una membrana semipermeable y selectiva a determinadas sustancias, ya que igual que las membranas utilizadas en hemodiálisis no permite el paso de los elementos formes aunque sí de las toxinas. Todo ello lo realiza mediante difusión y osmosis

La diálisis peritoneal es otra técnica de depuración extrarenal que puede utilizarse para tratar la insuficiencia renal aguda y crónica.

Hay dos tipos de PDDPCA (Diálisis peritoneal contínua Ambulatoria)

•La DPCA Es una técnica manual en la que la sangre se limpia dentro del organismo, utilizando para ello la propia membrana peritoneal a través de un cateter en el espacio peritoneal implantado previamente en el abdomen En los pacientes con una enfermedad aguda y en aquellos que requieren diálisis esporádicas, se introduce un cateter estéril para cada procedimiento.

TÉCNICAINFUSIÓN Se infunden uno o dos litros de solución

estéril de diálisis (dializado) en la cavidad abdominal mediante el catéter donde fluye por gravedad y después se pinza el tubo

PERMANENCIA

Periodo que permanece el líquido en la cavidad abdominal antes de drenarlo

DRENAJE Se despinza el tubo y se permite salir el líquido del abdomen por acción de la gravedad

NUEVO CICLO

Una vez el líquido ha drenado del abdomen. La mayoría de los pacientes cambian la solución 4 veces/dia

Diálisis peritoneal automatizada (DPA)

La DPA funciona igual que la DPCA con la única diferencia de que es un proceso automatizado. La máquina cicladora es programada por el enfermero/a según prescripción médica. Se programa: nº de ciclos (tiempo de infusión, tiempo de permanencia, tiempo de drenaje), líquido a infundir, drenaje de cada ciclo, drenaje total. Normalmente funciona durante la noche y el paciente una vez terminada la sesión solo debe preocuparse de desconectarse de la cicladora. Normalmente el paciente debe llevar durante el día el último intercambio en el abdomen.

•Tiempos de infusión, drenaje y tiempo de permanencia de líquido en la cavidad peritoneal. •Cálculos del balance hídrico •Aspecto del líquido drenado que puede reflejar la aparición de complicaciones (hemorragia, peritonitis......) •Medicación añadida y anomalías que pueden presentarse Todo ello se deberá anotar en una gráfica.Independientemente de estos controles, es importante realizar determinaciones bioquímicas y hematológicas ( hematocrito, recuento y fórmula leucocitaria, urea, creatinina, ionograma etc)

Hemofiltración contínua

La hemofiltración (HF) es una terapia de sustitución renal continua, para el tratamiento de la insuficiencia renal aguda (IRA). Introducido por Kramer en 1977Posteriormente se han desarrollado variaciones sobre estas técnicas. La mayor ventaja de estas nuevas formas de diálisis es la eliminación, lenta pero continua, de líquidos y solutos. Generalmente son mejor toleradas por el paciente crítico que las técnicas convencionales.

Modalidades

Hemofiltración arterio-venosa continua (HAVC )

Utiliza un acceso arterial y otro venoso. La diferencia de presión entre la arteria y la vena es suficiente para la circulación de la sangre por el circuito extracorpóreo. Los líquidos y solutos se eliminan por convección

Hemofiltración veno-venosa continua (HVVC)

Parecida a la HAVC pero con acceso venoso, en general, mediante catéter único de doble vía. Se precisa de una bomba de sangre.

Las diferentes modalidades se clasifican de acuerdo a los accesos vasculares utilizados y los diferentes métodos de eliminación de líquidos y/o solutos.

Hemodiafiltración arterio-venosa continua (HDAVC)

Parecida a la HAVC pero además se hace circular, en dirección contraria al flujo sanguíneo, un liquido de dializado por el compartimento de ultrafiltrado. Utiliza la eliminación por convección y por difusión.

Hemodiafiltración veno-venosa continua (HDVVC)

Parecida a la HDAVC pero utilizando, en general un acceso venoso único de doble vía. Para realizar los balances de volumen se reinfunde líquido, con una composición equilibrada, en la cantidad suficiente para conseguir el balance deseado. Existen soluciones comercializadas tanto de líquidos de diálisis como de líquidos de reinfusión

Hemofiltración lenta continua (HLC )

En situaciones en que solo se precisa la extracción de volumen, pueden realizarse la técnica sin reposición de pérdidas.

1. ACCESOS VASCULARES: Arteria y vena o vena de doble vía. La vía arterial de elección es la femoral y la venosa puede ser yugular interna, subclavia o femoral. Se pueden utilizar catéteres de doble luz para la técnica veno-venosa. 2. CIRCUITO EXTRACORPÓREO: Debe ser lo más corto posible, sobre todo en las técnicas arterio-venosas, para evitar caídas de presión en el circuito. Consta de dos partes: •Línea arterial: desde el acceso vascular al hemofiltro. •Línea venosa: desde el hemofiltro al acceso vascular aunque se trate de técnicas vena-vena. 3. FILTROS: Deben ser biocompatibles.

Técnica

4. ANTICOAGULACIÓN: La más utilizada es la perfusión continua en el sistema de hemofiltración de heparina sódica a dosis bajas (5-10 unidades/Kg/hora). Puede no ser necesaria si existen trastornos de la coagulación importantes. 5. LÍQUIDOS DE REINFUSIÓN: Pueden utilizarse soluciones comerciales o preparadas en el momento de su utilización

6. LÍQUIDO DE REPERFUSIÓN: es el líquido de diálisis utilizado para realizar la hemodiafiltracion. 7. BOMBAS: En las técnicas veno-venosas es imprescindible la utilización de bombas de sangre. Es conveniente que los aparatos utilizados, dispongan además de otras bombas para la infusión de líquidos (reinfusión y reperfusión) y de heparina, todas ellas con flujo regulable.

Separación de proteínas por diálisis

La diálisis suele utilizarse como técnica para separar las proteínas de las moléculas de bajo peso molecular que proceden de un extracto de un tejido o de un extracto celular.

Procedimiento

Una vez obtenido un homogeneizado de células o tejidos, este se retiene en un saco construido con un material cuyos poros son ultramicroscópicos, como, por ejemplo, el celofán. Posteriormente, el saco se suspende en agua destilada, las moléculas pequeñas que hay en el extracto, tales como las sales minerales, atravesarán los poros, pero las proteínas quedarán retenidas.

Tras la separación de las moléculas pequeñas, en el interior del saco queda una mezcla de proteínas que pueden separarse según su tamaño. Para ello, se utilizan dos técnicas: la cromatografía y la electroforesis.

De esta forma, se dispone de la suficiente cantidad de proteína pura de la que se puede determinar su composición aminoácida y su secuencia.

La Diálisis

La diálisis es un fenómeno que permite que las moléculas grandes (como las proteínas o el almidón) y las moléculas pequeñas (como los aminoácidos, la glucosa o las sales minerales) de una disolución puedan separarse por difusión selectiva a través de una membrana semipermeable. Esta membrana, llamada dializadora, presenta un tamaño de poro que permite el paso de las sustancias pequeñas, pero no el de las moléculas grandes.

REFERENCIAS

•http://www.ice.udl.es/udv/demo/52135/recursos/fitxers/modul2/modul2.pdf

• http://www.ultracare-dialysis.com/es ES/Treatment/WhatIsDialysis.aspx

•http://www.slideshare.net/drojitos/dialisis