VibrioVibrio choleraecholerae : diagnóstico: diagnósticoy caracterizacióny caracterización

María Rosa ViñasInstituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS “Carlos G.

Malbrán”Servicio Enterobacterias

INEI – ANLIS “Carlos G. Malbrán”

setiembre 2014, Buenos Aires setiembre 2014, Buenos Aires Especialización en Bacteriología Clínica – UNNE11-12 de Junio 2015

� Bacilos Gram-negativos, 0,5 a 0,8 x 1,4 a 2,6 µm

� Anaerobios facultativos

Flia. Vibrionaceae(gen. Aeromonas ,Plesiomonas y Vibrio )

Características del género Características del género VibrioVibrio

� Móviles

� Oxidasa positivos, excepto V. metschnikovii

� Su crecimiento es estimulado por ClNa

(V. cholerae crece en ausencia de NaCl)

� Su metabolismo es fermentativo, pueden fermentar glucosa entre otros sustratos

�� VibrioVibrio choleraecholerae es el agente causal del cólera, enfermedad infecciosa

conocida desde la antigüedad, asociados a los serogrupos

O1 y O139O1 y O139

� El Reglamento Sanitario Internacional exige la declaración de los casos de cólera a la OMS.Las cifras se publican en el Weekly Epidemiological Record ( mortalidad 2,5% )

http://www.who.int/topics/cholera/surveillance/es/

VibrioVibrio choleraecholeraeClasificación por Clasificación por serogruposserogrupos

� Vibrio cholerae O1asociado a

cólera epidémico(toxina de cólera)

• Serotipos: Ogawa, Inaba ,

raramente, Hikojima

�Vibrio choleare O139

� Vibrio cholerae no-O1 no-O139;asociado a gastroenteritis, diarrea moderada hasta cuadros severos ó con sangre, sepsis en inmunocomprometidos y asociado a patología hepática.

(toxina de cólera) o Biotipos: Clásico y El Tor

Manifestaciones Clínicas Manifestaciones Clínicas V. V. choleraecholerae O1 y O139O1 y O139

• La infección puede ser asintomática ó presentar distinta gravedad, hasta la forma más severa, cólera: diarrea acuosa (deposiciones como “agua de arroz”), vómitos y deshidratación con perdida de electrolitos.

• Aproximadamente 1 / 20 personas infectadas • Aproximadamente 1 / 20 personas infectadas puede tener la enfermedad grave.

• La pérdida rápida de líquidos corporales lleva a la deshidratación y a la postración. Sin tratamiento adecuado, puede ocurrir la muerte en horas

• Dosis infectiva: 103 a 106 microorganismos

• Período de incubación: 1 a 3 días

� Habitualmente se aísla de casos esporádicos de diarrea y de infecciones extra-intestinales (j contacto con el ambiente acuático): infección de heridas, oídos, celulitis, apendicitis)

� Menos frecuente contagio de persona a persona

Manifestaciones Clínicas Manifestaciones Clínicas V. V. choleraecholerae nono--O1, noO1, no--O139O139

� Se han descripto casos de bacteriemia especialmente en pacientes con patología hepática (cirrosis) y/ó inmunosuprimidos (HIV, leucemia, desnutridos)

� Las infecciones por V. cholerae no-O1, no-O139 se presentan a lo largo de todo el año, aunque son más frecuentes en los meses más cálidos.

� Se han reportado brotes de diarrea causados por este microorganismo en diferentes regiones del mundo, incluyendo Argentina

Epidemiología Epidemiología V. V. choleraecholerae• V. cholerae es un habitante autóctono de

ecosistemas acuáticos

• Sensible a las temperaturas y nutrientes

• Patrón cíclico de brotes: florecimiento de copépodos-plancton

• Las personas pueden infectarse por la ingesta de • Las personas pueden infectarse por la ingesta de agua o alimentos contaminados: mariscos, ostras, mejillones crudos ó tratamiento calor mínimo, concentran hasta 300 veces / 24 hs las bacterias.

• Durante una epidemia de cólera, la enfermedad puede diseminarse rápidamente en áreas con tratamientos inadecuados de agua potable y pobres condiciones sanitarias..

Océano Atlantico Sur

San Miguel de Tucumán

Río Lules

Río Salí

Banda del Río Salí

Canal Norte

A

Vigilancia de V. cholerae de origen ambiental de plataforma bonaerense y ríos de Tucumán

Figure 1. Mapa de Argentina y los sitios de muestreo: Estación marina , agua de la costa del Atlántico y del area

V. cholerae no O1 y V. cholerae O1 (CT -)

Uruguay

Argentina

Estación marina

A

A

BC

Río de La Plata

Atlántico y del area Estuarial del Río de la Plata y agua frescade los ríos de Tucumán.(SG Fraga, 2007)

� Toxina de cólera (cholera toxin, CT)

Factores de virulencia asociados al Factores de virulencia asociados al cólera cólera V. V. choleraecholerae O1 y O139O1 y O139

� Factor de colonización

(toxin-coregulated pilus, TCP)

Toxina de cólera Toxina de cólera ––mecanismo de acciónmecanismo de acción

� Los genes que codifican la toxina CT (ctxAB) se encuentran dentro del genoma de un bacteriófago lisogénico filamentoso conocido

Toxina de cólera Toxina de cólera ––codificación genéticacodificación genética

lisogénico filamentoso conocido como CTXΦ.

� Este fago se encuentra integrado en el genoma de V. cholerae

en uno (El Tor) o dos loci (Clásico)

APA: 6 - 8 hs 37º C

Agar TCBS / TSA: 18hs 37ºC

Muestra de materia fecal en Cary Blair

Aplicación de PCR en el Flujograma de aislamiento de Aplicación de PCR en el Flujograma de aislamiento de V. V. choleraecholerae a partir de materia fecal a partir de materia fecal

PCR V. cholerae/ctxA/tcpA El Tor

Tamizaje por PCR

Extracción de ADN, 10´100ºC

bioq. mínimas

Diagnóstico presuntivo

V. cholerae O1, O139 ó no-O1 no-O139

Kligler-LIA-Indol de Triptofano-Estría TSA

Oxidasa, Pruebas bioquímicas complementariasSerotipificación O1 y O139

PCR O1 y O139

ctxA, tcpA El Tor (PCR)

24-48 hs

48-72 hs ctxA (+) y/ó tcpI (+)

PCR stn/tcpI

PCR tcpA clásicoPCR ctxB, PCR-MAMA

Subtipificación molecular PFGE, MLST, ATB, Secuenciación genómica

bioq. mínimas

+ 4hs

Diagnóstico confirmado

�Identifica si en la muestra hay V. cholerae

�Identifica si hay aislamientos que poseen ctxA, gen de la toxina de coléra (CT)

PCR Múltiple PCR Múltiple V. V. choleraecholerae//ctxActxA//tcpAtcpA

�Identifica si hay aislamientos que codifican para la proteína estructural de la fimbria TCP codificada por tcpA. Solamente reconoce el alelo El Tor

�Detecta los serogrupos O1 y O139 que son los que están asociados, por lo gral, a las cepas causales de cólera (productores de CT)

PCR Múltiple O1/O139PCR Múltiple O1/O139

CT)

�Permite asignar el serogrupo a los aislamientos autoaglutinables

�Atención: hay cepas O1 y O139 que no son productoras de CT, y pueden aparecer cepas de otros serogrupos que si lo son.

Caracterización de aislamientos por Caracterización de aislamientos por PCRPCR

Detección de factores de virulencia

* Hay diferentes factores de virulencia que pueden explicar la patogenicidad de cepas CT negativas de V. cholerae .

ToxR

HlyA/VCC

RTX

Neuraminidasa

Sistema de secreción de tipo III (vcs)

NAG-ST (codificada por el gen stn/sto)

tcpI (regulador del factor de colonización TCP)

Ampliamente distribuídos en V. cholerae

Rol patogénico aún

no establecido?

Colonias características de Colonias características de

VibrioVibrio choleraecholerae en en agaragar TCBSTCBS

Caracteres bioquímicos de Caracteres bioquímicos de VibrioVibrio

choleraecholeraeOxidasa 100 %Kligler K/A, no gas, no SH2 TSI A/A, no gas, no SH2 Glucosa (prod. de ácido) 100 %Sacarosa (prod. de ácido) 100 %

Lisina 99% Arginina 0 %Arginina 0 %Ornitina 99 %

Crec. en caldo al 0% NaCI 100 % Crec. en caldo al 1% NaCl 100 %Crec. en caldo al 6% NaCl 53 %Crec. en caldo al 8% NaCl 1 %Crec. en caldo al 10% NaCl 0 %

Roja de Metilo (1% Na CI) 99 %Voges-Proskauer (1% Na CI) 75 %

V.

cholerae

V.

Alginoly

ticus

V.

fluvialis

V.

furnisii

V.

hollisae

V.

Metschni

kovii

V.

mimicus

V.para-

haemoly-

ticus

V.

vulnificus

Aeromonas

hydrophila

Plesiomonas

shigelloides

Agar TCBS Col.amar. Col.amar Col.amar Col.amar No crece Col.amar Col.verde Col.verde Col.verde Col.amar Col.verde

Oxidasa + + + + + - + + + + +

Arginina dehidrolasa

(1%NaCl)

- - + + - + - - - + +

Ornitina decarboxilasa

(1%NaCl)

+ + - - - - + + 55% - +

Lisina decarboxilasa

(1%NaCl)

+ 50% - - - 35% + + + + +

Caracteres bioquímicos de miembros de la Caracteres bioquímicos de miembros de la FamiliaFamiliaVibrionaceaeVibrionaceae y géneros relacionadosy géneros relacionados, ,

patógenos para el hombrepatógenos para el hombre

(1%NaCl)

Crecimiento

en:

0% + - - - - - + - - + +

1% + + + + + + + + + + +

6% 53% + + + 83% 78% 49% + 55% + -

8% - + 71% 78% - 44% - 80% - - -

10% - + - - - - - - - - -

Acidificac.

a partir de:

sacarosa + + + + - + - - - + -

Celobiosa - - 39% - - - - - + - -

Lactosa - - - - - 50% - - 85% - -

Arabinosa - - + + + - - + - 84% -

Manosa 78% + + + + + + + + + -

Manitol + + + + - + + + 45% + -

Voges-

Proskauer75% + - - - + - - - + -

Col. amar.: colonia amarilla / Col. Verde: colonia verde. TCBS: agar Tiosulfato Citrato sales Biliares Sacarosa

Pruebas

bioquímicas

V. cholerae Aeromonas Plesiomonas

Sacarosa + + -

Inosita - + +

Manita + + -

Diferenciación entre Diferenciación entre VibrioVibrio choleraecholerae y otros y otros

géneros géneros GramGram--negativos, oxidasa positivosnegativos, oxidasa positivos

Manita + + -

Arginina

dehidrolasa- + (excep. A.veronii biovar

veronii (-)

+

Lisina

decarboxilasa+ + (excep. A.caviae (-) +

Ornitina

decarboxilasa+ - (excep. A.veronii biovar

veronii (+)

+

V. V. choleraecholerae O1O1Epidemiología en América LatinaEpidemiología en América Latina

� Epidemia (séptima pandemia) causada por Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor, los aislamientos fueron CT+ (ctxA, tcpA El Tor )

� Los casos de cólera se presentan asociados a brotes epidémicos y no se considera a la región

.brotes epidémicos y no se considera a la región endémica para esta enfermedad.

� En los últimos años sólo se han reportado casos de cólera asociados a:

� Brote epidémico Paraguay 2009;

� Brote epidémico Haití 2010; República Dominicana; Cuba; México. Reporte OPS-OMS, 2014.

.

� 1991.Creación de Red de Laboratorios de Diarreas y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria.

� LRN: caracterización fenogenotípica de aisl de V. cholerae derivados en el marco de la RND:

� Pruebas bioquímicas, ELISA para detección de CT � PCR ctxA tcpA alelo El Tor, PCR O1/O139� Subtipificación molecular: RAPD, PFGE: creación BDN de V. cholerae en el marco de la Red PulseNet de AL y C.V. cholerae en el marco de la Red PulseNet de AL y C.

� Desde 1991, programa activo de vigilancia:� V. cholerae O1 CT asociados a casos de cólera� V. cholerae O1 VNC del ambiente (ríos , estuarios)� V. cholerae no-O1no-O139 asociados a casos de

gastroenteritis, sepsis en pacientes con patología hepática y/ó oncológica, infecciones de heridas y reservorios ambientales.

SubtipificaciónSubtipificación de de V. V. choleraecholerae O1 por O1 por Electroforesis en Campo Pulsado (PFGE)Electroforesis en Campo Pulsado (PFGE)

V. choleraeO1 CT+

Clon epidémico 90´(1992-1998)

Dice (Opt :1.50%) (Tol 1. 5%-1.5%) (H>0.0% S>0. 0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-SfiI

10

0

95

90

85

80

75

PFGE-SfiI

58H/93 ST29161

CH1502

CH2507

J18/W

ST10568

T227/W

SF336

Chaco 2005

V. choleraeO1 CT-

SF336

CH2283/05

F99H

SF1902

SF366

RB-1

SJ179/W

T717

T12550

T13074

T2220

T522

T5957

T610

T612/W

T777

T1437

Variante Tucumán

90’ (1994-1998)

• 2010, Haití, brote de cólera; al 2014: 55.736 casos, 431 muertes relacionada con var V. ch El Tor O1 de Asia ( Ali; 2011 ).

• * Vibrio cholerae O1 Ogawa, híbrido:

• Biotipo El Tor, CT alelo Clásico, perfil de R: S a tetraciclina, ciprofloxacina y kanamicina, R a trimetoprima-sulfametoxazol, furazolidona, ácido nalidíxico, sulfisoxazol y estreptomicina

SITUACION A NIVEL REGIONAL Cólera en HaitíCólera en HaitíFuente: CDC, USA

* 2010-2014 Diseminación a Rep. Dominicana, Florida en USA, Venezuela, Cuba y

México(OPS, 2014)

� El ecosistema de la Región de América C y El Caribe reservorios de genes diferentes a los de cólera epidémicode los 90´; CT biotipo Clásico, elementos genéticos

integrativos STX.

*Incorporar MAMA -PCR en el flujograma diagnóstico; Morita et al.,2008.

Cólera en Haití: comparación con aislamientos de Cólera en Haití: comparación con aislamientos de América Latina (brotes epidémicos 1993América Latina (brotes epidémicos 1993--1998)1998)SfiSfiII--PFGE en marco PFGE en marco PulseNetPulseNet Internacional Internacional

.

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-SfiI

100

90

80

PFGE-SfiI

SF336

ST29161

CH1502

CH2507

ST10568

CDC__2010EL-1788

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

.

.

.

.

.

1999-12-17

1993-02-02

1994-02-15

1997-07-25

1995-03-08

Nº Aislamiento País Fecha de

aislamiento

.CDC__2010EL-1788

450

CH2283

SF1902

SF366

T12550

T13074

T2220

T522

T5957

T610

T777

T1437

T717

Paraguay

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

2009-03-10

2005-10-01

1998-02-23

1999-12-17

1995-01-03

1994-12-30

1994-02-25

1998-01-20

1993-12-03

1994-01-22

1994-01-28

1997-02-10

1998-01-30

.

V. V. choleraecholerae O1O1Epidemiología en América LatinaEpidemiología en América LatinaParaguay 2009Paraguay 2009� 2009: brote de cólera en Paraguay, afectó integrantes de comunidad indígena en zona de Chaco Paraguayo

..

Fuente: Dra. Natalie Weiler Gustafson. Laboratorio Central de Salud Pública de Paraguay

V. V. choleraecholerae O1O1Brote de cólera en Paraguay 2009 (ISP)Brote de cólera en Paraguay 2009 (ISP)� Las comunidades indígenas carecen de agua potable, la fuente

de abastecimiento de agua es a través de un reservorio ( tajamar) y

se distribuye a través de drenajes subterráneos a otros reservorios

mas pequeños (pozo o aljibes).

� No cuentan con desagües ni letrinas en las comunidades

Fuente: Dra. Natalie Weiler Gustafson. Laboratorio Central de Salud Pública de Paraguay

V. V. choleraecholerae O1O1Brote de cólera en Paraguay 2009Brote de cólera en Paraguay 2009� V. cholerae O1 Ogawa de un paciente y de agua de tajamar.

Se compararon entre sí y con aislamientos Vc no-O1, no-O139 de agua de tajamar

� Los dos aislamientos de Vibrio cholerae O1 (caso índice y de agua) mostraron perfiles similares, con dos bandas claras de diferencia con la primera enzima SfiI.

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-SfiI

10

0

80

PFGE-SfiI

789

861

797

869

870

868

450

862

796

867

920

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Filadelfia

Filadelfia

Filadelfia

Filadelfia

Filadelfia

Estancia Loma Plata

Loma Plata

Parque de los recuerd

Tagua

Parque de los recuerd

Dos lagunas

Estancia San Ramón

Ebetogue

Loma plata

Caraya de los Ayoreo

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Human

Environment

Environment

Environment

Environment

Water

Water

Water

Water

Water

Water

Water

Water

Water

Water

2009-04-20

2009-04-30

2009-04-21

2009-05-03

2009-05-03

2009-05-02

2009-03-10

2009-04-30

2009-04-21

2009-05-02

2009-05-10

PYKZGS12.0003

PYKZGS12.0004

PYKZGS12.0005

PYKZGS12.0006

PYKZGS12.0006

PYKZGS12.0008

PYKZGS12.0001

PYKZGS12.0002

PYKZGS12.0009

PYKZGS12.0010

PYKZGS12.0011

Cepa Nº País Estado Ciudad Origen Muestra Fecha Patrón de PFGE

Cuadro Rojo: Aislamientos de Vibrio cholerae O1

Normativa para la Notificación a través del Sistema Nacional de Vigilancia de la Salud

(SNVS), Módulo SIVILA, Diarreas bacterianas

En qué casos investigar Vibrio cholerae?

1. Todo caso clínicamente 2. Uno de cada 5 coprocultivo sospechoso de cólera. (nodo de SIVILA)

NOTIFICACION INMEDIATA EN FICHA INDIVIDUALDE CÓLERA AL SNVS- SIVILA

Notificación en Evento Diarreas Bacterianas

Derivación al LNR, Flujograma para identificación y caracterización de

V. cholerae, análisis y notificación de resultados

� En el año 2014 el porcentaje acumulado de muestras estudiadas para cólera fue del 30,72% , requisito de estudiar para V. cholerae 1 cada 5 coprocultivos .( Plan de abordaje integral de la enfermedad diarreica aguda y plan de contingencia de cólera por V. cholerae) .

� Sin embargo, si bien se cumple con la meta a nivel nacional, a � Sin embargo, si bien se cumple con la meta a nivel nacional, a nivel provincial solamente siete provincias cumplen con el requisito de estudiar 1 cada 5 diarreas.( el resto lo cumple de manera deficiente o no lo cumple).

SIVILA, 2014

VIGILANCIA LABORATORIAL DE INFECCIÓN POR Vibrio Cholerae DESDE EL LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL ( JAM, 2014 )Tabla 1. Distribución de genotipos en aislamientos de V. cholerae ( 2003 – 2014 )

Genes de identificación Genes de virulencia

No.aislamientos

(n; %)

Origen

(n)

V.cholerae O1/O139

ctxA tcpA tcpI stn H1 A2

V. cholerae no O1 no O139 - - - - 465; 97,6 125 340 V. cholerae no O1 no O139 - - - + 3; 0,63 0 3 V. cholerae no O1 no O139 + - + - 1; 0,21 1 0 V. cholerae no O1 no O139 - - + - 2; 0,42 2 0 V. cholerae O1 + + + - 1; 0,21 1 0 V. cholerae O1 - - + - 2; 0,42 2 0 V. cholerae O1 - - - - 1; 0,21 1 0 V. cholerae O139 V. cholerae O139 - - - - 1; 0,21 1 0 N Total 476; 100 133 343 1H: human;

2A: Ambiental

� La mayoría de los aislamientos fueron confirmadosfenogenotípicamente como Vc no-O1 no-O139 negativos para CT y TCPalelo El Tor

� excepto 1 Vch O1 CT TCP alelo El Tor de un caso de cólera, 2005 (H)2 Vch no-O1 no-O139 TCP, un Vc no-O1 no-O139 CT TCP (H)3 Vch O1 CT negativo (H)1 Vch O139 CT negativo (H)3 Vch no-O1 no-O139 STN (A)

�� 2014 2014 V. chV. ch O1 y O139O1 y O139,, notificados por el notificados por el

laboratorio en el marco de la vigilancia de diarreaslaboratorio en el marco de la vigilancia de diarreas

� SE 1 y 5, 2014 Dos casos V. ch O1 de Tucumán

un caso V. ch O139 de Tucumán

un caso V. ch O1 de Jujuy

� Casos de diarrea sanguinolenta (2),

� diarrea prolongada (1) y diarrea acuosa (1).

� Sensibles a atb. Los perfiles genéticos:

V. cholerae O1 ctxA (-), tcpA El Tor (-) , tcpI ( + ) dos casos

V. cholerae O1 ctxA (-), tcpA El Tor (-) , tcpI ( - ) un caso

V. choleraeO139 ctxA (-),tcpA El Tor (-), tcpI (-) un caso

� Antecedentes epidemiológicos

de viaje a un balneario del río,

barrio con condiciones deficientes sanitarias,

asistencia a una pileta de natación días previos

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-SfiI

100

90

80

70

PFGE-SfiI

CH1502

CH2507

J18/W

ST10568

ST29161

CH2283

VC182/14

VC188/14

VC920/09

VC923/09

Me11844

Me160

SO149

Vc4

Vc44

BA312

Vc602/08

Chaco

Chaco

Jujuy

Salta

Santa Fe

Chaco

Tucumán

Tucumán

Chaco

Chaco

Mendoza

Mendoza

Salta

Córdoba

Córdoba

Buenos Aires

Santa Fe

Human

Human

Enviro.

Human

Human

Human

Human

Human

Enviro.

Enviro.

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

1994-02-15

1997-07-25

1992-04-07

1995-03-08

1993-02-02

2005-10-01

2014-01-26

2014-01-27

2008-12-10

2009-03-17

1996

1995

2000

1994

1994

1994

2008-04-04

ARKZGS12.0017

ARKZGS12.0017

ARKZGS12.0017

ARKZGS12.0017

ARKZGS12.0017

ARKZGS12.0018

ARKZGS12.0110

ARKZGS12.0111

ARKZGS12.0116

ARKZGS12.0116

ARKZGS12.0025

ARKZGS12.0025

ARKZGS12.0027

ARKZGS12.0049

ARKZGS12.0049

ARKZGS12.0050

ARKZGS12.0062

O1

O1

O1

O1

O1

O1

O1

O1

Non-O1, O139,.

Non-O1, O139,.

Non-O1, O139

Non-O1, O139

O49

Non- O1, O139

Non- O1, O139

Non- O1, O139

Non- O1, O139

Dendograma de relación genética de una selección de aislamientos de Vibrio cholerae de Argentina, analizados con la enzima SfiI, con el coef. Dice.

V ch O1 epidémico

V ch O1 2005 y 2014

BDN: 237 aislamientos de V. cholerae

SfiI: 218 patrones, NotI: 124 patrones

Similitud: 85,7% (SfiI)

con cepa O1 epidémica

Similitud: 61,5% (SfiI) Vc603/08

CF17170

VC465/11

VC181/14

VC704/14

VC707/14

SO47/W

Me3

SO28W

T12550

T13074

T2220

T612/W

VC591/14

Vc2037/07

BA115018

VC575/13

SO34

Pilcomayo

VC849/07

J31/W

VC183/14

ST2761

VC491/14

VC308/11

Santa Fe

Buenos Aires

Buenos Aires

Tucumán

Chaco

Chaco

Salta

Mendoza

Salta

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Jujuy

Tucumán

Buenos Aires

Buenos Aires

Salta

Formosa

Tucumán

Jujuy

Tucumán

Salta

Buenos Aires

Buenos Aires

Human

Human

Human

Human

Enviro.

Enviro.

Enviro.

Human

Enviro.

Human

Human

Human

Enviro.

Human

Human

Human

Human

Human

Enviro.

Human

Enviro.

Human

Human

Human

Human

2008-04-04

2002

2011-02-21

2014-01-23

2012-01-01

2012

2000

1995

2000

1995-01-03

1994-12-30

1994-02-25

1994-03-14

2014

2007

2002

2013-04-14

2000

1992

2007

2000

2014-01-24

1993

2014-02-26

2011-02-02

ARKZGS12.0062

ARKZGS12.0010

ARKZGS12.0102

ARKZGS12.0114

ARKZGS12.0131

ARKZGS12.0132

ARKZGS12.0015

ARKZGS12.0044

ARKZGS12.0028

ARKZGS12.0041

ARKZGS12.0041

ARKZGS12.0041

ARKZGS12.0041

ARKZGS12.0124

ARKZGS12.0009

ARKZGS12.0071

ARKZGS12.0117

ARKZGS12.0070

ARKZGS12.0053

ARKZGS12.0012

ARKZGS12.0091

ARKZGS12.0113

ARKZGS12.0094

ARKZGS12.0121

ARKZGS12.0090

Non- O1, O139

O36

Non-O1, O139,.

O139

Non-O1, O139

Non-O1, O139

O37

Non-O1, O139

O14

O1

O1

O1

O1

O1

Non-O1, O139

O111

Non-O1, O139,.

Non- O1, O139

Non- O1, O139

Non- O1, O139

Non- O1, O139

Non-O1, O139

O139

Non-O1, O139

Non-O1, O139

Vch O1 var Tucumán Vch O1 Jujuy 2014

� MLST: Ch 2283 mismo grupo clonal que Vc O1 epidémicas no así la Variante Tucumán. S.G. Fraga, 2008

Similitud: 61,5% (SfiI)

con la “Var Tucumán”

Cepas (n) Fecha derivación lugar de procedencia Origen Tipo de muestra Caracterización fenogenotípica ( pruebas bioquímicas-PCR)

8 2008 - 2009 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna, río Negro V. cholerae no-O1 no-O139 ctx- tcpA El Tor - stn - (8)

3 oct-13 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna V. cholerae no-O1 no-O139 ctx - tcpA El Tor - stn - (3)

6 abr-14 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna, río Negro V. cholerae no-O1 no-O139 ctx - tcpA El Tor - stn - (4)

V. cholerae no-O1 no-O139 ctx- tcpA El Tor - stn + (2)

N= 17

Tabla. Aislamientos de V. cholerae no-O1 de origen ambiental del Chaco 2018-2014

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-SfiI

100

80

PFGE-SfiI

VC708/14

VC709/14

VC704/14

VC707/14

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Environment

Environment

Environment

Environment

2009-10-01

2012-01-01

Lagoon

Lagoon

River water

River water

ARKZGS12.0130

ARKZGS12.0136

ARKZGS12.0131

ARKZGS12.0132

2014-04-21

2014-04-21

2014-04-21

2014-04-21

Figura 1- Dendograma con el coeficiente de Dice con la enzima SfiI de los aislamientos ambientales de Vibrio cholerae no-O1 no-O139 de Chaco.

VC707/14

VC1047/13

VC1049/13

VC706/14

VC1048/13

VC919/09

VC922/09

VC920/09

VC923/09

VC924/09

VC921/09

VC1379/08.

VC705/14

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Chaco

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Resistencia

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

Environment

2010-05-05

2013-03-12

2012-01-09

2012-11-19

2008-09-30

2009-03-05

2008-12-10

2009-03-17

2009-04-20

2009-02-23

2008-05-30

2012-01-09

River water

Lagoon

Lagoon

Lagoon

Lagoon

River water

Lagoon

Lagoon

Lagoon

Lagoon

Lagoon

River water

Lagoon

ARKZGS12.0132

ARKZGS12.0129

ARKZGS12.0126

ARKZGS12.0129

ARKZGS12.0128

ARKZGS12.0122

ARKZGS12.0119

ARKZGS12.0116

ARKZGS12.0116

ARKZGS12.0116

ARKZGS12.0123

ARKZGS12.0093

ARKZGS12.0135

2014-04-21

2013-10-24

2013-10-24

2014-04-21

2013-10-24

2008-08-11

2009-05-04

2009-05-04

2009-05-04

2009-05-04

2009-05-04

2008-07-17

2014-04-21

Aislamientos de V. cholerae no-O1 de agua de diferentes lagunas 2008-2009

Aislamientos de V. cholerae no-O1 stn+ de agua del río Negro 2014

No fueron identificados anteriormente en la BDN de V. cholerae

� Debido a que la resistencia a los antimicrobianos

ha ido en aumento en muchas partes del mundo,

es importante determinar la sensibilidad a los

antimicrobianos de Vibrio cholerae O1, al inicio de la

epidemia y monitorearla periódicamente.

� Los puntos de corte para interpretar las zonas de inhibición paraV. cholerae O1 fueron establecidos por la CLSI

Condiciones del test: Medio: Agar Mueller-Hinton

Inóculo: Método de crecimiento previo o suspensión de colonia directa, equivalente al estándar 0.5 de Mc

Farland. Preparar el inóculo en 0.85% NaClIncubación: 35 ± 2 ºC, aire, 16-18 horas.Control de Calidad: E.coli ATCC 25922 Servicio ANTIMICROBIANOS

INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran

Esquema de colocación de discos para la determinación de la sensibilidad a los

antimicrobianos por el método de difusión en V. cholerae.

TET

TMS

NAL CMP

CIP

AMP

TMS: trimetoprima/sulfametoxazol, NIT: nitrofurantoína/furazolidona, AMP:

ampicilina, CIP: ciprofloxacina; TET: tetraciclina; CMP: cloranfenicol, NAL: ácido

nalidíxico.

NIT

Servicio ANTIMICROBIANOSINEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran

� Es importante mantener la vigilancia de V. cholerae

� Para detectar tempranamente la aparición de casos de cólera asociados a V. cholerae O1 u O139 toxigénicos.

� Para identificar V. cholerae no-O1, no-O139 asociado a casos y brotes de diarrea.asociado a casos y brotes de diarrea.

� Para monitorear la emergencia de nuevas cepas con potencial patogénico y epidémico

� La incorporación de técnicas moleculares de diagnóstico y subtipificación aportan sensibilidad y especificidad parala vigilancia de este patógeno.

DesafiosDesafios futurosfuturos

�Transferir PCR para caracterización completa de V. cholerae inclusive para detección de la variante (LRN).

� Desde LRN secuenciación genómica para análisis de cepas emergentes con características nuevas de virulencia

AgradecimientosAgradecimientos

� Servicio Enterobacterias

� Servicio Fisiopatogenia, Antimicrobianos.

� Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP). Dra. Costagliola

� Universidad Nacional de Tucumán� Hospital del Niño Jesús de Tucumán� UNNE, Chaco

� Red Nacional de Laboratorios de Diarrea y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria