dosaje de creatinina
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FUNCION RENALCREATININA
OBJETIVOS
- Aprender a realizar el dosaje de creatinina en suero y orina.- Conocer el fundamento del método de dosaje de creatinina.- Aprender a realizar los cálculos correspondientes para determinar la
concentración de creatinina, y la depuración de creatinina endógena.
PARTE TEORICA
1. INTRODUCCION:
Las pruebas clínicas de laboratorio permiten a veces detectar la presencia de anormalidades de la función renal mucho tiempo antes del desarrollo de los síntomas de la enfermedad, lo cuál posibilita una investigación para descubrir la causa de dichas anormalidades. Las pruebas funcionales renales evalúan la severidad de la enfermedad renal y el seguimiento de su evolución.
2. ANATOMIA DEL RIÑON:
a) ANATOMIA MACROSCOPICA:
Los riñones son órganos pares situados en la parte posterior del abdomen a ambos lados de la columna vertebral, cada riñón posee una longitud de 12 -13cm, un ancho de 5-7 cm. y un espesor de 2.5 cm., en el adulto cada riñón pesa aproximadamente 150 gr. además tienen la forma de un pallar o haba , haciendo un corte longitudinal se observa:
Un tejido fibroso llamado Cápsula que cubre exteriormente a los riñones.
La Zona Cortical que presenta numerosas granulaciones formados por los Corpúsculos de Malpighi (Glomérulos)
La Zona Medular de aspecto estriado debido a la gran cantidad de conductos que contiene llamados Tubos Uriníferos los cuales se agrupan de 10 -12 para formar las pirámides cuyos vértices son denominados Papilas que desembocan en los Cálices Menores los cuales se unen para formar 2 -3 formaciones tubulares mayores denominados Cálices Mayores que finalmente se unen para formar la Pelvis Renal.
La Pelvis Renal es una cavidad situada detrás del hilio en ella terminan las pirámides formadas por los tubos colectores, la pelvis ocupa la zona media del riñón denominada Hilio Renal a través del cuál llegan y salen del riñón los vasos sanguíneos mayores.
La Pelvis Renal recibe la orina recién formada y disminuye progresivamente de calibre para continuarse luego con el uréter hasta llegar a la vejiga donde se almacena la orina para ser finalmente vaciada al exterior a través de la uretra.
b) ANATOMIA MICROSCOPICA:
Cada riñón consta aproximadamente de 1 millón de unidades funcionales o Nefrones , los que tienen una longitud aproximada de 30-38 mm.
El nefrón comienza con el Glomérulo el cual es un ovillo capilar formado a partir de la arteriola aferente y drenado por una pequeña arteriola eferente.
El glomérulo se halla rodeado por la Cápsula de Bowman la cuál es una esfera hueca y estructuralmente una parte del tubo urinífero.
El Túbulo Contorneado Proximal el cual pasa a través de la corteza penetra en la médula y da origen a las ramas descendente y ascendente del Asa de Henle .
La rama gruesa ascendente del Asa de Henle reingresa ala corteza donde forma el Túbulo Contorneado Distal.
La unión de 2 o más túbulos distales forman un Tubo o Conducto Colector a medida que este desciende a través de la corteza y la médula se une a otros tubos colectores y aumentando de tamaño a medida que descienden por la médula los conductos de cada pirámide se fusionan formando un Conducto Central que desemboca a través de la papila en un Cáliz Menor.
3. FISIOLOGIA DEL RIÑON:
La función principal del riñón consiste en regular el medio interno del organismo para mantenerlo en un estado constante de equilibrio. El riñón es el principal regulador de todas las sustancias de los líquidos orgánicos y es fundamentalmente responsable del mantenimiento de la homeostasis hidroelectrolítica en el organismo .El riñón ejerce 5 funciones principales:
Formación de la orina. Regulación del equilibrio hidroelectrolítico Regulación del equilibrio ácido-base Excreción de los productos de desecho del metabolismo proteico Función hormonal
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a) FORMACIÓN DE LA ORINA
Las sustancias que forman la orina normalmente se encuentran en la sangre .Los riñones actúan manteniendo constante la cantidad de dichas sustancias y sólo las eliminan si se encuentran en una cantidad mayor a la normal.
En la formación de la orina se consideran 3 procesos: Filtración ,Reabsorción y Secreción el primer se realiza en el Corpúsculo de Malpighi mientras que los dos últimos en el tubo urinífero
Filtración: Aproximadamente un 25% del volumen sanguíneo bombeado por el corazón circula por los riñones. El volumen cardiaco normal es de 4-6 lt x min por lo tanto en cada minuto circulan por el riñón aproximadamente 1000 a 1500 ml de sangre.
El glomérulo esta compuesto por una membrana basal semipermeable la cual permite el pasaje de agua y electrolitos pero es relativamente impermeable a las moléculas de mayor tamaño.Los capilares glomerulares difieren de otros capilares del organismo en que la presión hidrostática en su interior es aproximadamente 3 veces mayor que la presión hidrostática en otros capilares. Como consecuencia de la elevada presión, las sustancias son filtradas a través de la membrana semipermeable hacia el interior de la Cápsula de Bowman a una velocidad de 130 ml/min este valor es conocido como el Índice de Filtración Glomerular (IFG).
Las células y las proteínas plasmáticas de gran tamaño no pueden pasar a través de la membrana semipermeable por lo tanto el filtrado glomerular esta esencialmente compuesto por plasma sin proteínas.El IFG representa un parámetro importante tanto en el estudio de la fisiología renal como en la evaluación clínica de la función renal.En personas normales se forman 130 ml /min de filtrado por lo tanto cada día se forman mas de 187 000 ml de filtrado, la excreción urinaria normal es de 1500 ml/día cifra que representa el 1% de la cantidad de filtrado formados por lo tanto el 99% restante debe ser reabsorbido por el riñón.
Reabsorción: Se realiza a lo largo del tubo urinífero mediante ella muchas sustancias filtradas en el glomérulo son reabsorbidas por los capilares de la arteriola eferente que rodean a dicho tubo.
La absorción puede ser total como sucede con el agua ; glucosa ,NaCl , K, Ca ,Mg ,vitaminas ,hormonas , etc . Estas sustancias para ser excretadas su concentración en la sangre debe ser mayor a la normal.La absorción puede ser limitada también y por tanto formar parte de la orina estas sustancias son la úrea , ácido úrico y fosfatosTambién existen sustancias no reabsorbidas y que deben ser forzosamente excretados como los sulfatos , fosfatos , nitratos y fenoles .Todas estas sustancias son productos de desecho que serían tóxicas para el organismo en concentraciones elevadas .Sustancias como la creatinina, inulina , manitol y sacarosa no son reabsorbidas en absoluto por los túbulos renales.
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Secreción: La cual consiste en la eliminación de las sustancias no filtradas hacia el tubo colector .
Composición de la orina:
En condiciones normales por litro esta formada:
Agua 955 gr NaCl 10gUrea 20gAcido Urico 0.5gFosfatos 1gOtros 13.5g. 1000mlLa úrea se origina al descomponerse los aminoácidos en el hígado o en los tejidos formándose primero el amoniaco que al combinarse con el CO2 forma la úrea.El ácido úrico es el producto final de las núcleoproteínas como es insoluble en el agua tiende a cristalizar resultando ser un constituyente de los cálculos renales, cuando la cantidad de este ácido es muy alta se deposita en las articulaciones ocasionando la gota.El NaCl es eliminado en orina cuando su concentración es mayor de la que normalmente existe en sangre. Los fosfatos que ayudan a mantener la alcalinidad de la sangre
b) REGULACIÓN DEL EQUILIBRIO HIDROELECTROLÍTICO
El riñón es el responsable del mantenimiento de la composición electrohidrolítica del organismo, donde el riñón mantiene al organismo en equilibrio con relación a una variada cantidad de sustancias cada una de las cuales se excretan en cantidades equivalentes a las ingeridas , la ruptura de este equilibrio produce transtornos bioquímicos.
c) REGULACIÓN DEL EQUILIBRIO ÁCIDO-BASE
Diariamente el organismo genera productos de desecho y si estas sustancias no fuesen eficazmente eliminadas o neutralizadas se acumulan provocando lesiones celulares.
d) EXCRECIÓN DE LOS PRODUCTOS DE DESECHO DEL METABOLISMO PROTEICO
Es una de las principales funciones del riñón consiste en la eliminación de los productos nitrogenados del catabolismo proteico como:
Urea: A medida que los aminoácidos son desaminados se produce amoniaco el cual es tóxico y por ello es transformado en úrea ( Hígado ) .La concentración de úrea en sangre es determinada en la forma de nitrógeno ureico sanguíneo (BUN).
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La producción de úrea y BUN se encuentran aumentados cuando existe mayor cantidad de aminoácidos metabolizados lo cual puede observarse en dietas con elevado contenido proteico
La producción de Urea y BUN esta disminuidos en una dieta pobre en proteínas y enfermedad hepática severa.
La producción de urea excede su excreción renal en los individuos normales .
Creatinina: La creatinina es una sustancia de origen muscular constituida por 3 aminoácidos, la cantidad de creatinina que aparece en sangre depende de la masa muscular de la persona (:0.4-1.3 dl/ml ,:0.5 -1.2 ml/dl)
La creatinina sufre filtración glomerular pero no se reabsorbe y su secreción tubular es mínima
El incremento de creatinina en sangre indica un recambio muscular patológico por el músculo que se esta rompiendo o bien un fisiológico si el individuo presenta gran masa muscular como en el caso de los deportistas.
Por otro lado el incremento de creatinina en sangre puede deberse a una mala filtración glomerular , esto se valora con la Determinación de la creatinina en orina de 24 h estableciendo la relación existente entre ésta y la concentración de creatinina en sangre este parámetro es conocido como “ Aclaramiento de Creatinina “ o Clearance Renal.
Sus unidades son ml/min y valora la filtración glomerular , el valor normal de aclaramiento de cretinina esta entre 100 -130 ml/min .Su disminución indicaría que el glomérulo esta filtrando menos de lo debido mientras que su elevación indicaría una filtración anormalmente elevada .
Acido Urico:Los niveles plasmáticos de ácido úrico son mas elevados en hombres que en mujeres , el urato del plasma es filtrable produciendose una reabsorción asi como una secreción tubular de urato.
En casos de insuficiencia renal crónica avanzada existe un aumento progresivo del nivel plasmático de ácido úrico.
e) FUNCIÓN HORMONAL
El riñón posee importantes funciones metabólicas y endocrinas, sirve como efector de numerosas hormonas; influye sobre el metabolismo otras y por último actúa directamente como un órgano endocrino segregando hormonas reguladoras.
EICOSANOIDES. - Se trata de un grupo de compuestos derivados del ácido araquidónico, entre los que se incluyen las prostaglandinas E2 y F2, prostaciclina y tromboxano ~. Se sintetizan en diferentes estructuras renales (glomérulo, túbulo colector, asa de Henle, células intersticiales , arterias y arteriolas). Determinadas sustancias o situaciones aumentan su producción, como la angiotensina II, hormona antidiurética, catecolaminas o isquemia renal, mientras que otras inhiben su producción, como los antiinflamatorios no esteroideos. Actúan sobre el mismo riñón de varias formas:
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Control del flujo sanguíneo y del filtrado glomerular: en general producen vasodilatación.Ejercen un efecto natriurético, inhibiendo la reabsorción tubular de cloruro sódico.Aumentan la excreción de agua, interfiriendo con la acción de la HAD.Estimulan la secreción de renina.
ERITROPOYETINA.- Esta sustancia que actúa sobre células precursoras de la serie roja en la médula ósea, favoreciendo su multiplicación y diferenciación, se sintetiza en un 90% en el riñón, probablemente en células endoteliales de los capilares periglomerulares. El principal estimulo para su síntesis y secreción es la hipoxia.
SISTEMA RENINA-ANGIOTENSINA.- La renina es un enzima que escinde la molécula de angiotensinógeno, dando lugar a la angiotensina I. En el pulmón, riñón y lechos vasculares, ésta es convertida en angiotensina II, forma activa de este sistema, por acción de conversión dela angiotensina. La renina se sintetiza en las células del aparato yuxtaglomerular (agrupación de células con características distintivas situada en la arteriola aferente del glomérulo), en respuesta a diferentes estímulos como la hipoperfusión. La angiotensina II actúa a diferentes niveles, estimulando la sed en el sistema nervioso central, provocando vasoconstricción del sistema arteriolar y aumentando la reabsorción de sodio en el túbulo renal al estimular la secreción de aldosterona por la glándula suprarrenal.
METABOLISMO DE LA VITAMINA D.- El metabolito activo de la vitamina D, denominado 1,25 (OH)2 colecalciferol, se forma por acción de un enzima existente en la porción cortical del túbulo renal, que hidroxila el 25(OH) colecalciferol formado en el hígado.La producción de este metabolito, también denominado calcitriol, es estimulada por la hipocalcemia, hipofosforemia y parathormona. La hipercalcemia, en cambio, inhibe su síntesis. El calcitriol, por su parte, actúa sobre el riñón aumentando la reabsorción de calcio y fósforo, sobre el intestino favoreciendo la reabsorción de calcio y sobre el hueso permitiendo la acción de la parathormona. Su déficit puede producir miopatía y exige unos niveles mayores de calcemia para que se inhiba la secreción de parathormona por las glándulas paratiroides.
4. CONDICIONES RENALES PATOLÓGICAS:
a) GLOMERULONEFRITIS AGUDA (GNA):
Es una inflamación aguda de los glomérulos que trae como consecuencia una oliguria(reducción del volumen urinario) , hematuria, aumento del BUN y de los niveles séricos de creatinina, disminución del IFG , formación de edemas e hipertensión.
La presencia de eritrocitos en la orina ( hematuria) como observación aislada no es un indicio suficiente de la existencia de una glomerulonefritis aguda , dado que la sangre puede originarse en otro sector renal o del tracto urinario.
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Cuando se encuentran cilindros hemáticos en la orina es posible sospechar l presencia de una inflamación glomerular esto es de gran importancia diagnóstica.
Otras anormalidades incluyen proteinuria y anemia.
b) SINDROME NEFROTICO (SN):
Caracterizado por una proteinuria masiva , hipoalbuminemia ,hiperlipemia y lipiduria.Este síndrome posee múltiples causas y se caraceriza por un aumento de permeabilidad de la membrana glomerular ,que se manifiesta por una proteinuria masiva y por la excreción urinaria de cuerpos grasos .Los índices de excreción proteica usualmente exceden los 2 -3 g /dia en ausencia de una disminución del IFG, es posible que existan hematuria y oliguria
Como consecuencia de la pérdida masiva en la orina de proteínas séricas particularmente albúmina , la concentración proteica plasmática disminuye , con una reducción concomitante de la presión oncótica plasmática, este fenómeno trae como resultado un desplazamiento de líquido desde el espacio vascular hacia el espacio intersticial , con la consecuente formación de edema.Las posibles causas del síndrome nefrotico están asociados con:
Diversas formas de glomerulonefritis Procesos patológicos generalizados como amiloidosis ,
carcinoma , lupus eritematoso sistémico , glomerulonefritis sistémica
Transtornos mecánicos o circulatorios como trombosis de la vena renal o Pericarditis constrictiva.
Infecciones como sífilis , malaria , endocarditis bacteriana subaguda.
Con toxinas y alergenos como la Penicilamina , picadura de abeja , enfermedad del suero,etc
c) ENFERMEDAD TUBULAR(ET):
Los transtornos selectivos de la función tubular renal pueden determinar una disminución de la función renal proporcionalmente mayor con respecto a la disminución de índice de filtración glomerular .Los defectos de la función tubular pueden provocar una disminución de la reabsorción o de la secreción , o transtornos de la concentración y dilución urinarias.
La acidosis renal tubular (ART) es el transtorno clínico mas importante de la función tubular existen 2 tipos principales de ART:
ART proximal: Que se produce como consecuencia de una reduccion de la reabsorción proximal de bicarbonato y provoca una acidosis hiperclorémica.
ART distal: En la que existe una incapacidad de las células tubulares para generar y mantener la diferencia habitual de pH entre el líquido tubular y la sangre .
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Los transtornos de los mecanismos proximales provocan acidosis debido al pasaje de una mayor cantidad e bicarbonato que la que es capaz de reabsorber el nefrón distal de baja capacidad de reabsorción.
La pérdida de álcalis en la orina provoca la acidificación de la sangre en estos pacientes el pH urinario puede ser reducido a menos de 5 .
Los transtornos de reabsorción a nivel de los túbulos proximales puede producir hipouricemia , hipofosfatemia , y glicosuria renal.
En la proteinuria tubular se excretan menos de de 2 g/día de proteínas
d) INFECCION DEL TRACTO URINARIO (ITU):
Puede producirse en la vejiga (cistitis) o en los riñones ( pielonefritis) , el diagnóstico se formula ante la presencia de una concentración bacteriana urinaria de mas de 1000 000 colonias/ml.
En el tracto urinario infectado existe una mayor cantidad de leucocitos en la orina.
La presencia de cilindros leucocitarios indica pielonefritis. También puede observarse un aumento de hematíes en la orina.
e) OBSTRUCCIÓN DEL TRACTO URINARIO (OTU):
Puede producirse en las vías urinarias superiores e inferiores .La obstrucción inferior del tracto urinario se caracteriza por la presencia de orina residual en la vejiga después de la micción o retención urinaria .Mientras que la presencia de una obstrucción urinaria superior se establece mediante la demostración de un sistema colector dilatado por encima de una lesión constrictiva.
La OTU inferior se caracteriza por la lentitud del flujo urinario , la dificultad del vaciamiento vesical dificultades de la micción y chorro intermitente de la orina .
La obstrucción y el drenaje vesical incompleto pueden provocar lesiones renales y la aparición de síntomas de IRC.
En los casos de obstrucción completa se produce anuria y oliguria.
En el tracto urinario obstruido pueden superponerse síntomas de infección urinaria.
La OTU puede ser consecuencia de transtornos congénitos del tracto urinario inferior , de lesiones neoplásicas o de transtornos adquiridos como cálculos renales o constricciones uretrales.
f) CALCULOS RENALES:
Son depósitos duros con forma de roca que se desarrollan en algún punto del sistema urinario , estas piedras pueden bloquear la expulsión de orina causando daño , inflamación e infección es conocido también como nefrolitiasis .Se desarrollan cuando las sales y minerales contenidos en la orina forman grupos de cristales , estos son normalmente expulsados con la orina pero cuando se adhieren al tejido que cubre internamente el riñón
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o se depositan en un área donde la orina no puede arrastrarlos , pueden crecer hasta formar una piedra.
Se observan juntamente con la presencia de cólicos renales , hematuria y síntomas de infección del tracto urinario o de obstrucción urinariaLos cálculos renales pueden aparecer como consecuencia de infecciones recurrentes del tracto urinario por organismos productores de ureasa o en los casos en los que la orina se encuentra sobresaturada con importantes cantidades de calcio , ácido úrico , cistina.
Entre los diversos factores que promueven su formación estan:
Excesiva pérdida de liquido a través del sudor Poca ingestión de agua Dieta alta en proteínas Ciertos transtornos metabólicos , enfermedades que
desencadenan un exceso de calcio en la sangre Exceso de suplementos de calcio ,etc
g) INSUFICIENCIA RENAL AGUDA (IRA):
En esta enfermedad se observa un brusco deterioro de la función renal , puede clasificarse:
Prerrenal:La cual se produce en un nivel anterior a la llegada de la sangre a los riñones debida a una hipovolemia o transtornos de la perfusión como resultado de una insuficiencia cardiaca
Renal: Se debe a causas intrarrenales debido a una Necrosis Tubular Aguda , que representa la causa mas frecuente de IRA o debida a otras enfermedades renales que provocan un rápido deterioro de la función renal.Postrenal: Se produce después que la orina abandona el riñón debido a la presencia de una obstrucción .
La IRA se asocia con diversos grados de proteinuria , hematuria y con la presencia de cilindros hemáticos y otros tipos de cilindros en orina.Los niveles séricos de nitrógeno ureico y de creatinina aumentan rápidamente y se instala una acidosis metabólica.Según sea su causa la IRA puede evolucionar hasta una IRC o hasta una recuperación de la función renal , la mayor parte de los casos de necrosis tubular se recuperan una vez que la causa responsable ha sido tratada o eliminada.
h) INSUFICIENCIA RENAL CRONICA (IRC):
Es un síndrome clínico que resulta de la pérdida progresiva de la función renal , las manifestaciones sintomáticas no solamente son producto de una simple insuficiencia excretora , sino también de la insuficiencia de los mecanismos renales reguladores de algunas sustancias como el Na o el agua , de defectos de la biosíntesis , como la producción inadecuada de eritropoyetina con una anemia resultante y de la producción excesiva de ciertas sustancias normales en respuesta a transtornos químicos que
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se producen en la insuficiencia renal crónica como la formación excesiva de hormona paratiroidea .Pueden reconocerse 4 fases:
En el primer estadío solo se observa una disminución de la capacidad renal de adaptación fisiológica, es necesario que se produzca una pérdida de por lo menos un 50% de la función renal normal antes que se observe una elevación anormal de los niveles séricos de nitrógeno ureico o de creatinina.
El segundo estadio de la enfermedad renal progresiva es el correspondiente a una insuficiencia renal leve.
El tercer estadío consiste en el desarrollo de una Insuficiencia renal franca, con anemia progresiva, acidosis y tras manifestaciones clínicas y bioquímicas.
El cuarto estadío o fase final es el de uremia cuando todas las consecuencias de la insuficiencia renal se hacen evidentes.
5. SIGNIFICACIÓN CLÍNICA
La creatinina, producto de la degradación de la creatina, es un compuesto sumamente difusible cuya eliminación del organismo se efectúa a través del riñón y casi exclusivamente por filtración. Por este motivo, el clearance de creatinina endógena (introducido por Miller y Winkle en 1938) es uno de los métodos más frecuentemente utilizados como medida de filtración glomerular. Sin embargo los problemas prácticos, inherentes a la determinación de clearance (tales como la recolección de orina en niños, etc) han favorecido la difusión de la determinación de creatinina sérica como índice de funcionalismo renal.
De tal forma, se ha podido observar que ambos parámetros resultan importantes tanto en el diagnóstico como en el pronóstico de nefropatías, obstrucciones urinarias (por afecciones a próstata, vejiga, uréter) y anurias reflejas (secundarias a cálculos uretrales, por ejemplo) que pueden producir elevaciones de creatinina, reversibles luego de reparada la afección.
La creatinina tiene un peso molecular de 113.12 daltons, y su degradación desde creatina se da de la siguiente manera:
6. MÉTODOS
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7. MUESTRA
a) Recolección de la muestra:
Suero: se obtiene de manera usual.
Orina: se obtiene de 2 a 24 horas, empleando un recipiente perfectamente limpio y manteniendo en el refrigerador (2-10º C) durante la recolección. Medir la diuresis, tomar una alícuota y efectuar una dilución 1:50 de la misma. En caso de que la diuresis sea de 2 horas, multiplicar el volumen medido por 12 para calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas.
Orinas destinadas a esta determinación pueden mantenerse hasta 4 días en el refrigerador (2-10ºC) sin agregado de conservadores.
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b) Aditivos: no se requieren. No se recomienda el uso de plasma pues se obtienen resultados menores en un 8 a 15%.
c) Sustancias interferentes conocidas: hemólisis ligera a moderada no interfiere, pero no debe emplearse sangre total ya que aproximadamente el 60% del material Jaffe – reactivo de los eritrocitos no es creatinina.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: es conveniente utilizar el suero recié obtenido. Si esto no es posible puede mantenerse hasta 24 horas en refrigerador (2-10ºC) sin variaciones de los resultados.
8. Valores Normales
En Suero: Hombres 0.7 – 1.1 mg / dlMujeres 0.6 – 0.9 mg / dl
En Orina: 0.9 – 1.5 g/24 hrs
Valores Normales de Creatinina Endógena en adultos hasta 60 años 80 a 140 ml/min.
PARTE EXPERIMENTAL
1) Fundamento del Método Colorimétrico: este método es empleado para la determinación cuantitativa de creatinina verdadera en suero y orina.
Este método se fundamenta en la reacción de Jaffé y consiste en que la creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio tamponado, previa desproteinización con ácido pícrico, obteniéndose un complejo de color anaranjado – amarillo, el cual se mide a 492 nm.
En la modificación cinética, la formación del complejo picrato-cratinina es monitoreada luego de 10 a 60 segundos de retardo tras la mezcla de los reactantes; esto permite que los interferentes de reacción rápida como el acetato sean eliminados en gran medida antes de efectuar la lectura inicial de absorbancia. Se realizan mediciones adicionales durante o al final de un período de 16 a 120 segundos, antes de que se han completado la reacción de la creatinina que los interferentes de reacción más lenta puedan reaccionar significativamente. No es necesaria la desproteinización, dado que la reacción este el picrato alcalino y la proteína es lenta y no se produce significativamente durante el intervalo habitual de la reacción cinética.
Se a descripto que el uso de un blanco de suero a pH 9,25 elimina interferencias causadas por proteínas y otros interferentes distintos de la creatinina. Se emplean buffers de fosfato (136 a 173 mmol/l) para producir pH de reacción de 9,65 a 11,50; por otra parte, las condiciones de reacción son comparables a la reacción manual de Jaffé. El intervalo de reacción es de 45 minutos a una temperatura de 3ºC. En estas condiciones de reacción los cromógenos seudocreatinínicos comúnmente hallados se describen
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F =
como no reactivos y la interferencia causada por la reacción de proteínas a pH 9,65.
2) Procedimiento
Se trabaja con una muestra estándar (cuya concentración es de 1 mg/dl), con una muestra de suero y otra de orina, de la siguiente manera:
Estándar Suero OrinaAcido Pícrico 250 ul 250 ul 250 ulNaOH 250 ul 250 ul 250 ulEstándar (1 mg/dl) 50 ulSuero 50 ul 50 ulOrina (1:50) 100 ulAgitar y leer rápidamente a 492 nm
Recomendación: se debe trabajar cada muestra una por una (es decir terminar con una y empezar con la otra), en el momento de la mezcla de los reactivos y de la lectura en el espectrofotómetro hacerlo rápidamente, pues de no ser así podrían haber variaciones en los resultados.
3) Resultados Obtenidos
Muestra Absorvancia ConcentraciónBlanco de reactivoEstándarSueroOrina
4) Cálculos:
Cálculos para determinar el factor de calibración.
[St] Ab St
Cálculos para determinar la concentración de la creatinina:
Creatinina en suero se expresa en mg/dl o mg/l:[Creatinina] = Ab muestra x factor
Creatinina en orina se expresa en g / 24 horas:
[Creatinina orina g/24 horas]= Ab muestra x V x [St] x dilución Ab St = Ab muestra x V x Factor x dilución = Cc. Creatinina x V x dilución
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Calculos para la determinación de la depuración de creatinina en la practica.
Cálculos para determinar la depuración de creatinina endógena: se expresa en ml/min.Ejemplo
DCE = Creatinina (orina) g/24 horas x (694) Creatinina (suero) mg/l
DCE = 0.54 g/24 hrs x 694 10 mg/lt
DCE = 37.47 ml / min
Para hallar el factor 694:
Ejemplo
1000 mg694 ml/min = (60 x 24) min 1 mg 1000 ml
El fotócolorimetrometro realiza dos lecturas: una a los 30 segundos y la otra a los 180 segundos, con estas lecturas realiza una curva característica:
[mg/dl]
Creatinina
30” 5’ Tiempo
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CUESTIONARIO
1.- ¿Como se interpreta los resultados de creatinina con respecto a la función renal?
2.- ¿Que métodos conoce para dosar creatinina e indique su fundamento?
3.- ¿Que método es el mas apropiado para dosar creatinina en el trabajo rutinario del laboratorio y por que lo utilizaría?
4.- ¿Que es y para que sirve la depuración de creatinina?
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5.- ¿Cuales son la condiciones y requisitos para tomar la muestra de sangre y orina para determinar creatinina?
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