Metodologia diagnosticului de laborator în infecțiile bacteriene

Tipuri de bacterii

• Cu perete celular:• Gram +

• Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus

• Gram –• Enterobacteriacee

• Acido-rezistente• Mycobacterium

• Fără perete celular• Mycoplasma

• Obligatorii intracelulare• Rickettsia, Chlamydia

Tehnici de identificare bacteriană

• Fenotipică : morfologie (examen bacterioscopic și bacteriologic)

• Identificare pe baza caracterelor biochimice

• Imunologică: serologie

• Genotipică : metode de biologie moleculară

• Examenul bacteriologic presupune izolarea, cultivarea și identificareagermenilor bacterieni din diferite materiale patologice suspectede contaminare.• Mediile de cultură se pot împărți în două categorii:

• medii uzuale (obişnuite) pe care se dezvolta majoritatea germenilor patogeni. Ele pot fi: pentrubacterii aerobe; pentru bacterii anaerobe;

• medii speciale, destinate izolării, cultivării și cercetării însușirilor biologiceale anumitor specii de germeni. Ele pot fi: de izolare, de îmbogățire, selective, diferențiale;

Mediu neselectiv(cresc toate bacteriile)

Mediu selectiv(crește un tip de bacterie) Mediu nediferențial

(toate coloniile bacterienesunt la fel)

Mediu diferențial(cresc toate bacteriile darcoloniile au aspect diferit)

• Identificare biochimică• Catalaza: H2O2 + catalaza=O2+H2O;

• diferențiază Streptococcus / Staphilococcus

• Indol: triptofanaza degradează triptofanul în acid piruvic, amoniac și indol;• Indicator pentru Escherichia coli

+ -

• Fermentarea carbohidraților (zaharurilor) cu producere de acid și/sau gaz

• Teste rapide de identificare pe baza caracterelor biochimice

• Identificarea serologică cu ajutorul anticorpilor specifici:• Reacția de aglutinare

• Reacția de latex-aglutinare

• Reacția de imunofluorescență

Reacția de precipitare

• Testarea sensibilității la antibiotice: antibiograma

• Prin antibiogramă se înțelege testarea sensibilitățiiunei tulpini bacteriene izolate dintr-un produspatologic față de diverse antibiotice.

• Astfel se caracterizează capacitatea acestora de aopri dezvoltarea microbiană și dă informatii pentruselectarea celui sau celor mai active antibioticefață de microorganismul testat.

• Tehnici de identificare genetică a bacteriilor• Reacții de hibridizare

• Western blot

• Dot blot

• PCR clasic

• Real time PCR

• Multiplex PCR

• DNA microarray

Conduita diagnosticului de laborator în infecțiile salmonelice

• EN-ISO 6579:2002, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp.

1. Mediile de preîmbogăţire sunt folosite pentru cazurile în care în produsul patologic de examinat conține o cantitate mică de germeni patogeni șiun număr mare de germeni din flora de asociaţie.• EX: apă peptonată

2. Medii de îmbogățire lichide care favorizează creșterea selectivă asalmonelelor inhibând multiplicarea altor bacterii.

• EX: bulion Rappaport Vasiliadis

• bulion Muller-Kauffmann Tetrathionate

• bulion cu selenit de sodiu

+ control

3. Mediile selective (solide) favorizează, prin compoziţia lor chimică,dezvoltarea anumitor germeni.

• EX:• agar XLD

• mediul Wilson—Blair

• mediul Drigalski

• agar cu verde briliant

• agar Hektoen

4. Mediu neselectiv (agar nutritiv): pentru obținerea de colonii pure

• Agar XLD• E coli: colonii galbene

• Salmonella sp: colonii roșii cu centrul negru

• Shigella sp: colonii roșii

• mediul Wilson—Blair • Proteus sp: colonii verzi

• Salmonella sp: colonii negre cu luciu metalic

• E. coli : inhibată

• mediul Drigalski• Salmonella sp: colonii albastre-verzui

• E. coli : colonii galbene

• Mediul cu verde briliant• E coli: colonii galbe-verzui

• Salmonella sp.: colonii roz-roșii

• Agar Hektoen• E. coli: colonii galben portocalii

• Shigella sp.: colonii verzi

• Salmonella sp. : colonii verzi cu centrul negru

• Agar Rambach• E. coli: colonii albastre

• Proteus sp: colonii transparente

• Salmonella sp: colonii roșii

• Identificarea tulpinii de Salmonella sp. izolată:• Examen serologic (tipizare): reacția de seroaglutinare rapidă pe lamă

Kituri pentru serotipizareSero-quick ID kit: tipizare Salmonella enteritidisși Salmonella typhimurium

Cultură pură pe mediu neselectiv

• Sero-quick group kit: încadrarea tulpinii izolate la nivel de serogrup

Serogrup Antigen identificat

Conduita diagnosticului de laborator în infecțiile colibacilare

• Escherichia coli antigene:•O (somatice)•K (capsulare)•H (flagelare)• F (fimbriare)

Antigene și patogenitate

• Tulpinile de E. coli sunt clasificate în:• VTEC (verotoxigene)

• EPEC (eneteropatogene)

• ETEC (enterotoxigene)

• EIEC (enteroinvazive)

• EHEC (enterohemoragice)

• Escherichia coli și importanța sanitară:•VTEC serogrup O157 !•O26 , O145, O104

•Manualul OIE ediția 2008 ; capitolul 2.9.11

• Escherichia coli caractere biochimice: • lactoză +;

• indol +;

• uree - ;

• citrat -

INDOL

CITRAT

Pozitiv Negativ

UREE

Pozitiv Negativ

Examen bacteriologic

• Însămânțare pe medii neselective (bulion), incubare 24 h la 370C

• Pasaj pe medii selective:• mediul Drigalski: colonii galbene

• mediul Levine: colonii mov-închis cu luciu metalic

• Mediul Leifson: colonii roșii

• mediul Mac Conkey : colonii roz

• Identificarea serotipului de E. coli prin reacția de seroaglutinare

rapidă pe lamă sau latex aglutinare: identificarea antigenului somatic

(O) sau a antigenului fimbrial (F).

Conduita diagnosticului de laborator in infecțiile cu germeni din genul Mycobacterium

• Examen bacterioscopic: • frotiuri colorate prin metoda ZiehI-

Neelsen

• fortiuri colorate fluorescent: colorațiacu auramină-rodamină

• Examen bacteriologic - cultivare pe medii speciale:• Lowenstein Jensen

• Middlebrook