afstudeer presentatie mlo

Proeve van bekwaamheidMycotoxines

Door:Patrick van Dorst

08/04/11 Mycotoxines 2

Inleiding Doel Mycotoxines Onderzoek Resultaten Conclusie Aanbevelingen


Doel Methode ontwikkeling:

Bepalen van DON (Deoxynivalenol) Bepalen van 15-A-DON (15-Acetyl

Deoxynivalenol ) Met of zonder opzuiverings kolom 2 verschillende kolommen:

DONprep kolom (Biopharm) Bond Elute® Mycotoxine (Varian)


Mycotoxines Gif Organismen van de

schimmelfamilie Fusarium

Aëroob Vochtigheid/

temperatuur Mycotoxine niveau

stijgt


Mycotoxines (oorzaken) Primaire verontreiniging

(veld-mycotoxine): Granen kunnen tijdens de teelt besmet met

een mycotoxine producerende schimmel.


Mycotoxines (oorzaken) Secundaire verontreiniging

(mycotoxine vorming tijdens bewaring / transport): Opgeslagen granen / suikerbieten kunnen

beschimmeld raken door bijv.: Fusarium


Mycotoxines (oorzaken) Metabolisme:

Vee krijgt veevoeder dat beschimmeld is, de mycotoxine raakt gemetaboliseerd en komt terecht in de voedselketen

Aflatoxine in veevoeder: Kaas Melk


Onderzoek HPLC-analyse met UV-detector Benodigdheden en instellingen Analyse

Standaarden Breimonsters

Voorbereiden Analyse

Rechtstreeks Opgezuiverd


Benodigdheden / instellingen Loopvloeistoffen 2 soorten

Loopvloeistof A Water/acetonitrile/methanol 82,5% / 12,5% / 5%

Loopvloeistof B Water/acetonitrile/methanol 15% / 80% / 5%


Benodigdheden / instellingen Extractie vloeistof

H2O /Acetonitrile 10% / 90%

Stapgradiënt UV detector

Golflengte 240nm Kolommen

Biopharm Varian


Benodigdheden / instellingen

2,0100035,0

2,0100016,1

125757,1

1,5257516,0

2,0100018,0

1010035,1

101007

Flow (ml/min)% opl. B% opl. ATijd (min)

1010045,0

101000


Analysestandaarden

IJklijn DON en 15-A-DON Spike oplossing:

[DON] = 440 µg/ml [15-A-DON] = 420 µg/ml

Oplossing A

13ml spike 50ml opl. A4,374,586

25ml Std 6 50 ml opl. A1,751,835

25ml Std 5 50 ml opl. A0,70,734

25ml Std 4 50 ml opl. A0,280,293

25ml Std 3 50 ml opl. A0,110,122

25ml Std 2 50 ml opl. A0,0550,061

Verdunning[15-A-DON] (µg/ml)[DON] (µg/ml)Standaard


Analysestandaarden

IJklijn voor DON: y=3,88x2+2,32x


Analysestandaarden

IJklijn voor 15-A-DON: y=-1,52x2+2,71x


Analysebrei monsters

Gebruik DONprep kolom van Biopharm


Analysestandaarden

Spike oplossing 5x verdund: 3,52 μg/ml

Analyseren Rechtstreeks DONprep

Area`s

045000Kolom 2

036000Kolom

125000146000Rechtstreeks 2

125000149000Rechtstreeks

15-A-DON

(area)

DON (area)Methode


Analysestandaarden

Spike oplossing DON 5x verdund: 3,52 μg/ml

Analyseren Rechtstreeks DONprep

µg/ml0,582e opvang

1,821ste opvang

3,46Rechtstreeks

DON (μg/ml)

Methode



Monster voorbereiding



Gebruik Bond Elute® Mycotoxin kolom van Varian


Analysebrei monster


Resultaten Monsters

Rechtstreeks DONprep

Aanwezigheid van: DON 15-A-DON


Resultaten Monsters

Rechtstreeks Kolom Varian

Opzuiveren monster Aanwezigheid van:

DON 15-A-DON


Resultaten Monsters Afwezigheid van:

DON 15-A-DON ?

Rt DON= 7,5 min.

Rt 15-A-DON= 15 min.


Conclusie Kolom van Biofarm

Veel voorbewerking Specifieke binding, alleen voor DON De eiwitten kunnen maar een bepaalde

[DON] vasthouden (2,0µg/ml) [DON] geconcentreerder Duur in aanschaf


Conclusie Kolom van Varian

Weinig voorbereiding Niet specifiek

DON 15-A-DON

Onbeperkte [DON] & [15-A-DON] Zuivert het monster van verontreiniging Goedkoper in aanschaf


Conclusie Het monster moet eerst voorbewerkt worden

voor analyse De DONprep kolom is geschikt wanneer je

alleen DON moet bepalen, maar kan geen ander mycotoxines vasthouden.

De Bond Elute® Mycotoxin kolom van Varian laat meerdere mycotoxines door.


Aanbevelingen Nog beter opzuiveren van de monster Spiken of de desbetreffende component

aanwezig is. Gebruik Bond Elute® Mycotoxin kolommen om

kosten te besparen. Uitgebreider onderzoek nodig

Meerdere mycotoxines bepalen Methode verder ontwikkelen

Andere detectie methode testen

Bedankt voor uw aandacht

Zijn er toch nog vragen?

afstudeer presentatie mlo

Education