1 prologo del autor 2
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“PRINCIPIOS BASICOS DE AUTOMATIZACION EN LABORATORIO CLINICO” LIC. WILFREDO GOCHEZ QUINTANILLA
COORDINACION DE LABORATORIO CLINICO, UNAB JUNIO 2008.
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PROLOGO DEL AUTOR
Al hablar de principios básicos de automatización en el laboratorio clínico, estamos
refiriéndonos a una de las bases en las cuales se fundamentan los resultados de
muchos de los laboratorios clínicos modernos del siglo veintiuno, sin embargo es
bueno, tener una perspectiva de cómo se origino el termino de ¨Automatizacion¨ a
través de la historia y como este se fue aplicando en las actividades diarias de un
laboratorio.
En la historia de la medicina y sus avances desde la edad media podemos darnos
cuenta que el efecto tecnológico ha tenido una gran repercusión en acceder a nuevos
descubrimientos y estos a su vez han impactado sobre nuevas áreas de estudio entre
ellos, muchos aplicados a la medicina, por ejemplo tenemos el perfeccionamiento del
microscopio por el holandés AntonVan Leewenhoek (1668) y la repercusión que tuvo
en las actuales bases de ciencias como la microbiología y la hematología. Así también
tuvo una gran impacto el descubrimiento de los alemanes Bunsen y Kirchhoff al aplicar
experimentos de física y química en el fraccionamiento del haz de luz en sus distintas
partes (nanómetros) y su aplicación en la cuantificación de substancias, aparato
conocido actualmente como espectrofotómetro, que a su vez tuvo un gran efecto en lo
que actualmente es la Química Clínica y sus aplicaciones en la cuantificación de
distintos tipos de analitos, sustratos y enzimas.
No cabe duda que el efecto tecnológico ha sido y seguira siendo un gran pilar para el
descubrimiento de nuevos conocimientos, ha sido, es y será la base de donde surgió la
carrera de Laboratorio Clínico, Por lo tanto en esta pequeña revisión no busca ser un
texto de referencia para algo tan amplio y profundo como puede ser la automatización,
sino más bien es una guía practica de conocimientos básicos que le sirvan al alumno
para cuando este en sus prácticas en los hospitales y se encuentra por primera vez como
un usuario de este tipo de aparatos. Una de las principales dudas con las cuales se
pueden encontrar los alumnos al asistir a los diferentes áreas automatizadas de los
laboratorios de los hospitales es: ¿En qué principio se basa ese aparato para medir esa
prueba? ¿Cómo puedo saber si el aparato esta funcionando bien? ¿Cuáles son las partes
internas del equipo? ¿Cómo puedo usarlo para obtener un buen resultado?, etc. Estas
dudas son lógicas para alguien que inicia su carrera, tiene su respuesta desde el punto de
vista del fabricante, sin embargo es importante agregarle el fundamento científico.
En un laboratorio clínico como en cualquier otro laboratorio de medición y
cuantificación de analitos u otras substancias, son de suma importancia los resultados
que de ellos se generan, ya que servirán para la toma de decisión en el diagnostico,
evaluación, evolución y tratamiento de innumerables enfermedades de los pacientes, por
lo tanto es indispensable tener la plena confianza, rapidez y fiabilidad de los resultados
generados en ellos, por eso el profesional de la carrera de laboratorio clínico debe de
prepararse lo mejor posible para encarar los retos que deberá de enfrentar en el siglo
veintiuno.
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PROLOGO PRESENTACION INDICE
CAPITULO I:
A. Historia y definición de la Automatización. Pág. 4,5 B. Aplicación de la automatización al laboratorio clínico Pag.6,7,8
C. Diferentes áreas de Aplicación de la automatización en el laboratorio clínico Pag. 9
CAPITULO II:
A. Automatización en Química Clínica Pag. 10
A.1 Principios generales de Espectrofotometría Pag. 10, 11,12,13,14 A.2 El entorno automatizado del área de Química clínica Pag. 15
A.3 El Hardware Pag. 16 A.4 El software y el sistema LIS Pag. 17,18
A.5 Diferentes formas de cálculo principio y aplicacion Pág. 19,20,21,22 B. Automatización en Hematología Pag. 23
B.1 Principios generales de Citómetros Pag. 22 B. 2 Citometria de Impedancia Eléctrica Pag. 23
B.3 Citometria por Flujo láser. Pag. 24
C. Automatización en Banco de Sangre Pag. 27
C.1 Área de Inmunodiagnostico en el banco de sangre Pag. 27 Procedimientos de ELISA Pag.28 ,29 Modo de calculo CUTT – OFF Pag. 30
C.2 Automatización en la extracción y separación de componentes Pag. 31,32
CAPITULO III
A. Historia del Control de calidad Pag. 33
Conceptos básicos del Control de Calidad Pag. 34 Concepto y estima del error pag. 33,34
A.1 El control de calidad Interno Pag. 35 A.2 El control de calidad Externo Pag. 35
A.3. Instrumentos, materiales y software de control de calidad Pag. 36
A.4. Instancias internacionales de control de calidad Pag. 37, 38
RESUMEN DE ILUSTRACIONES Pag. 40
BIBLIOGRAFÍA Pag. 41
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CAPITULO I
A. HISTORIA Y DEFINICIÓN DE LA AUTOMATIZACIÓN
El concepto de máquinas automatizadas se remonta a la antigüedad, con mitos de
seres mecánicos vivientes. Los autómatas, o máquinas semejantes a personas, ya
aparecían en los relojes de las iglesias medievales, y los relojeros del siglo XVIII eran
famosos por sus ingeniosas criaturas mecánicas.
Algunos de los primeros robots empleaban mecanismos de realimentación para corregir
errores, mecanismos que siguen empleándose actualmente. Un ejemplo de control por
realimentación es un bebedero que emplea un flotador para determinar el nivel del agua.
Cuando el agua cae por debajo de un nivel determinado, el flotador baja, abre una
válvula y deja entrar más agua en el bebedero. Al subir el agua, el flotador también
sube, y al llegar a cierta altura se cierra la válvula y se corta el paso del agua.
El primer auténtico controlador realimentado fue el regulador de Watt, inventado en
1788 por el ingeniero británico James Watt. Este dispositivo constaba de dos bolas
metálicas unidas al eje motor de una máquina de vapor y conectadas con una válvula
que regulaba el flujo de vapor. A medida que aumentaba la velocidad de la máquina de
vapor, las bolas se alejaban del eje debido a la fuerza centrífuga, con lo que cerraban la
válvula. Esto hacía que disminuyera el flujo de vapor a la máquina y por tanto la
velocidad.
El control por realimentación, el desarrollo de herramientas especializadas y la división
del trabajo en tareas más pequeñas que pudieran realizar obreros o máquinas fueron
ingredientes esenciales en la automatización de las fábricas en el siglo XVIII. A medida
que mejoraba la tecnología se desarrollaron máquinas especializadas para tareas como
poner tapones a las botellas o verter caucho líquido en moldes para neumáticos. Sin
embargo, ninguna de estas máquinas tenía la versatilidad del brazo humano, y no podían
alcanzar objetos alejados y colocarlos en la posición deseada.
El desarrollo del brazo artificial multiarticulado, o manipulador, llevó al moderno robot.
El inventor estadounidense George Devol desarrolló en 1954 un brazo primitivo que se
podía programar para realizar tareas específicas. En 1975, el ingeniero mecánico
estadounidense Víctor Scheinman, cuando estudiaba la carrera en la Universidad de
Stanford, en California, desarrolló un manipulador polivalente realmente flexible
conocido como Brazo Manipulador Universal Programable (PUMA, siglas en inglés).
El PUMA era capaz de mover un objeto y colocarlo en cualquier orientación en un lugar
deseado que estuviera a su alcance. El concepto básico multiarticulado del PUMA es la
base de la mayoría de los robots actuales.
El diseño de un manipulador robótico se inspira en el brazo humano, aunque con
algunas diferencias. Por ejemplo, un brazo robótico puede extenderse telescópicamente,
es decir, deslizando unas secciones cilíndricas dentro de otras para alargar el brazo.
También pueden construirse brazos robóticos de forma que puedan doblarse como la
trompa de un elefante. Las pinzas están diseñadas para imitar la función y estructura de
la mano humana. Muchos robots están equipados con pinzas especializadas para agarrar
dispositivos concretos, como una gradilla de tubos de ensayo o un soldador de arco.
Las articulaciones de un brazo robótico suelen moverse mediante motores eléctricos. En
la mayoría de los robots, la pinza se mueve de una posición a otra cambiando su
orientación. Una computadora calcula los ángulos de articulación necesarios para llevar
la pinza a la posición deseada, un proceso conocido como cinemática inversa.
Algunos brazos multiarticulados están equipados con servocontroladores, o
controladores por realimentación, que reciben datos de un ordenador. Cada articulación
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del brazo tiene un dispositivo que mide su ángulo y envía ese dato al controlador. Si el
ángulo real del brazo no es igual al ángulo calculado para la posición deseada, el
servocontrolador mueve la articulación hasta que el ángulo del brazo coincida con el
ángulo calculado. Los controladores y los ordenadores asociados también deben
procesar los datos recogidos por cámaras que localizan los objetos que se van a agarrar
o las informaciones de sensores situados en las pinzas que regulan la fuerza de agarre.
Cualquier robot diseñado para moverse en un entorno no estructurado o desconocido
necesita múltiples sensores y controles (por ejemplo, sensores ultrasónicos o infrarrojos)
para evitar los obstáculos. Los robots como los vehículos planetarios de la NASA
necesitan una gran cantidad de sensores y unas computadoras de a bordo muy potentes
para procesar la compleja información que les permite moverse. Eso es particularmente
cierto para robots diseñados para trabajar en estrecha proximidad de seres humanos,
como robots que ayuden a personas discapacitadas o sirvan comidas en un hospital. La
seguridad debe ser esencial en el diseño de robots para el servicio humano.
En 1995 funcionaban unos 700.000 robots en el mundo industrializado. Más de 500.000
se empleaban en Japón, unos 120.000 en Europa Occidental y unos 60.000 en Estados
Unidos. Muchas aplicaciones de los robots corresponden a tareas peligrosas o
desagradables para los humanos. En los laboratorios clínicos, los robots manejan
materiales que conlleven posibles riesgos, como muestras de sangre u orina. En otros
casos, los robots se emplean en tareas repetitivas y monótonas en las que el rendimiento
de una persona podría disminuir con el tiempo. Los robots pueden realizar estas
operaciones repetitivas de alta precisión durante 24 horas al día sin cansarse. Uno de los
principales usuarios de robots es la industria del automóvil. La empresa General Motors
utiliza aproximadamente 16.000 robots para trabajos como soldadura por puntos,
pintura, carga de máquinas, transferencia de piezas y montaje. El montaje es una de las
aplicaciones industriales de la robótica que más está creciendo. Exige una mayor
precisión que la soldadura o la pintura y emplea sistemas de sensores de bajo coste y
computadoras potentes y baratas. Los robots se usan por ejemplo en el montaje de
aparatos electrónicos, para montar microchips en placas de circuito.
Las actividades que entrañan gran peligro para las personas, como la localización de
barcos hundidos, la búsqueda de depósitos minerales submarinos o la exploración de
volcanes activos, son especialmente apropiadas para emplear robots. Los robots también
pueden explorar planetas distantes. La sonda espacial no tripulada Galileo, de la NASA,
viajó a Júpiter en 1996 y realizó tareas como la detección del contenido químico de la
atmósfera joviana.
Ya se emplean robots para ayudar a los cirujanos a instalar caderas artificiales, y ciertos
robots especializados de altísima precisión pueden ayudar en operaciones quirúrgicas
delicadas en los ojos. La investigación en telecirugía emplea robots controlados de
forma remota por cirujanos expertos; estos robots podrían algún día efectuar
operaciones en campos de batalla distantes.
Los manipuladores robóticos crean productos manufacturados de mayor calidad y
menor costo. Sin embargo, también pueden provocar la pérdida de empleos no
cualificados, especialmente en cadenas de montaje industriales. Aunque crean trabajos
en los sectores de soporte lógico y desarrollo de sensores, en la instalación y
mantenimiento de robots y en la conversión de fábricas antiguas y el diseño de fábricas
nuevas, estos nuevos empleos exigen mayores niveles de capacidad y formación. Las
sociedades orientadas hacia la tecnología deben enfrentarse a la tarea de volver a formar
a los trabajadores que pierden su empleo debido a la automatización y enseñarles
National Aeronautic Space Agengy
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nuevas capacidades para que puedan tener un puesto de trabajo en las industrias del
siglo XXI.
B. APLICACIÓN DE LA AUTOMATIZACION EN LABORATORIO CLINICO:
Fig. 1. Gustav Robert Kirchhoff (izq.) Antón Van Leewenhoek (centro) y su microscopio (Derecha)
Robert Wilhelm Bunsen (1811 – 1899) Químico alemán que con su compatriota el
físico Gustav Robert Kirchhoff, invento el espectroscopio y promovió el análisis del
espectro que les condujo al descubrimiento del cesio y del rubidio.
Bunsen nació en Gotinga el 31 de marzo de 1911 y estudio en la universidad de esta
ciudad, entre 1836 y 1852 dio clases sucesivamente en el instituto politécnico de
Kassely en las universidades de Marburgo y Breslau (Actualmente Wroclaw, Polonia),
después fue profesor en la universidad de Heidelberg hasta que se retiro en 1889.
Considerado uno de los más grandes químicos del mundo Bunsen descubrió en 1843 el
antídoto que aun hoy en día se utiliza contra el arsénico. Su estudio sobre los cianuros
dobles confirmo el principio de química orgánica en el que la naturaleza de un
compuesto depende de los radicales que lo componen. Además invento el mechero
Bunsen, un mechero de gas utilizado en laboratorios científicos. Entre otros de sus
inventos están además el calorímetro de hielo, una bomba de filtro y la célula eléctrica
de cinc y carbono. Los resultados de sus estudios sobre los gases residuales se
publicaron en el clásico “Métodos gasométricos”(1857). Bunsen murió el 16 de agosto
de 1899 en Heidelberg.
Gustav Robert Kirchhoff, nació en Konigsberg (actualmente Kaliningrado, Rusia) y
estudio en la universidad de esta ciudad. Fue profesor de física en la universidad de
Breslau, Heidelberg y Berlín. Con el químico alemán Robert Wilhelm Bunsen,
desarrollo el espectroscopio moderno para el análisis químico. En 1860 los dos
científicos descubrieron el cesio y el rubidio mediante la espectroscopia. Kirchhoff
dirigió importantes investigaciones sobre la transferencia de calor y también expuso dos
reglas actualmente conocidas como las leyes de Kirchhoff, con respecto a la
distribución de la corriente en los circuitos eléctricos.
En 1859, estos dos científicos, Gustav Robert Kirchhoff y Robert Wilhelm Bunsen
fueron los primeros en descubrir que cada elemento emite y absorbe luz de colores
característicos, que aplicaron al análisis químico. Este instrumento que es uno de los dos
tipos principales de espectroscopio, está formado por una rendija, un conjunto de lentes,
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un prisma y un ocular. La luz que va a ser analizada pasa por una lente colimadora, que
produce un haz de luz estrecho y paralelo, y a continuación por el prisma. Con el ocular
se enfoca la imagen en la rendija, de hecho lo que se ve son una serie de imágenes de la
rendija conocidas como líneas espectrales, cada una con un color diferente, porque el
prisma separa la luz en los colores que la componen. Este descubrimiento sentaría las
bases del desarrollo químico e investigativo que diera paso al concepto de laboratorio
clínico moderno.
Para principios del siglo XX, se vislumbraba un nuevo panorama debido a las
innovaciones tecnológicas de la época y la electrificación masiva en las ciudades junto
a los avances en las ciencia de la salud, se aplicaron descubrimientos en la química y la
física, que permitieron a compañías desarrollar el instrumental necesario para los 1avances en la medicina diagnostica de la época. Así surgen compañías como la: Klett –
Summer de Detroit Michigan USA con el desarrollo de su colorímetro, en los años de
1940, que fue uno de los aparatos con mas aceptación en nuestro país hasta a principios
de los años 80, posteriormente surgieron otras compañías con espectrofotómetros más
complejos, análogos como: Perkin Elmer, Spectronic D, etc. Que fueron
modernizándose de acuerdo al avance electrónico de la época cambiando su tecnología
hacia equipos digitales.
La compañía Technicon introdujo en 1957 su primer analizador automatizado (1) que
fue un analizador de lotes secuencial, de canal único y flujo continuo capaz de proveer
un solo resultado de prueba en casi 40 muestras por hora.
Fue hasta 1970 que se introdujo una competencia a este analizador por medio del
descubrimiento del Dr. Norman Anderson con su primer analizador centrífugo, sub
producto de una investigación de la NASA (1) la innovación de este sistema fue además
de una alternativa al sistema continuo fue el uso de la innovación de las tecnologías de
las computadoras. Pero fue hasta 1975 que se perfeccionaron estos aparatos con la
miniaturización de las computadoras y el avance en la industria de los polímetros para la
fabricación de cubetas ópticas de plástico de gran calidad.
A estos equipos se le unió el Automatic Clinical Analizar (ACA) de la compañía Dade
Behring en 1970 que fue el primer analizador discreto de flujo continuo así como el
primer instrumento en tener capacidades de acceso aleatorio mediante el cual se podían
analizar muestras fuera de secuencia de lote según se requiera.
Otro de los hitos importantes en estos avances fueron la introducción de tecnologías de
análisis de micro muestra y reactivos, además de incorporar de manera extensa la
tecnología de computadoras en su diseño y uso, Ortho-Clinical Diagnostics, 1978(1).
Desde 1980 se ha ido desarrollando analizadores mas poderosos que incorporan
características importantes como: Software y Hardware cada vez mas sofisticados y
rápidos, fibra óptica, Lecturas policromaticas, sistemas On line para resultados
inmediatos, avances en equipos semi – automatizados, etc. Pero no ha sido hasta
mediados de los años 90 que en nuestro país han ido avanzando este tipo de tecnologías
y logrando posicionarse en especial en los grandes hospitales, debido especialmente por
su requerimiento en manejo de mayores volúmenes de muestras, necesidad de rapidez
en los resultados, necesidad de optimización del recurso humano de los hospitales y por
la facilidad de disposición de presupuestos para poder adquirir estas tecnologías, no así
en los laboratorios pequeños especialmente en las periferias e interior del país.
Otro grave problema actual es la falta de incorporación de esta información en los
planes de estudio de las universidades formadoras de recursos profesionales en el país,
existe casi un divorcio total entre contenidos universitarios y realidad en los
1 “Química Clinica, principios, procedimientos y correlaciones” Michael L. Bishop. 5ª Edición
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establecimientos de salud, y sumado a esto esta también la poca preparación que dan las
compañías distribuidoras a los personales de cada hospital, especialmente a estudiantes
o a nuevas contrataciones.
Fig.2 Equipo Hitachi 912, analizador automatizado de química clínica. Roche Diagnostics.
Fig. 3 Espectrofotómetro análogo Perkin Elmer, uno de los primeros equipos usados en
los laboratorios clínicos del país.
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C – DIFERENTES AREAS DE APLICACIÓN DE LA AUTOMATIZACION EN
LABORATORIO CLINICO
Desde 1995 ha habido grandes cambios en los analizadores automatizados, en efecto
estos se han vuelto más compactos, rápidos y fáciles de usar como resultado del
refinamiento en los avances electrónicos y de software de las compañías. La
automatización ha avanzado con características de independencia e intervención mínima
del operador (1).
Otro avance en el campo de los analizadores es el desarrollo de la inmunoquimica
cuyas técnicas nos permiten el ensayo de la cuantificación de: fármacos, marcadores
tumorales, hormonas, anticuerpos específicos de enfermedades infecto contagiosas, etc.
Estos instrumentos que usan estas técnicas como: Nefelometría, inmunoensayo
competitivo y no competitivo con detección de quimioluminicensia, etc.
Además de estos avances y el desarrollo de los citómetros o contadores de células en
hematologia, las principales áreas automatizadas en el laboratorio clínico son:
Química Clínica
Hematologia
Inmunodiagnostico o tamizaje
Fraccionamiento y extracción de componentes de banco de sangre.
Etc.
Otra de las fuerzas impulsadotas de los procedimientos automatizados es la realidad
del aumento de mayor volumen de análisis en los establecimientos y la necesidad de la
rapidez de la respuesta, además de la necesidad de análisis mas completos en los
perfiles de los pacientes aparentemente sanos, han ido sustituyendo a las pruebas
individuales según los cambios dictados por políticas recientes en Medicare y Medicaid
(Sistemas de salud en USA) que conducen a nuevos diagnósticos en pacientes
asintomático. (1)
Hay muchas ventajas en la automatización de las áreas de laboratorio clínico, uno de
ellos es incrementar el número de pruebas que realiza un laboratorio clínico en un
determinado periodo de tiempo. Otro es reducir los costos por pago de mano de obra
calificada como es un profesional en laboratorio clínico para así poder reducir los costos
por prueba. Otro aspecto importante es reducir el índice del error humano para bajar así
la variabilidad de resultados de laboratorio en laboratorio. Esto permite mejorar los
resultados en los programas de control externo de la calidad y se corrigen los errores
inherentes a la metodología. Además se eliminan los errores potenciales de los procesos
manuales por mal pipeteo, calculo y trascripción de resultados. (1)
Cada vez existe mas conciencia en lo delicado de la labor de los resultados de
laboratorio clínico, por ello las inversiones en tecnologías van enfocadas en mejorar los
procesos de producción y calidad de estos, la globalización ha llegado, es una realidad y
no nos permite mantenernos aislados, por esta razón no podemos quedarnos atrasados
en la competencia de los resultados y la constante medición de los procesos analíticos
para la estima del error. Es por ello que el avance de la automatización en las áreas
hospitalarias y de laboratorios grandes y de mediano volumen muy difícilmente se va a
rezagar, por lo tanto es nuestra obligación como profesionales conocer de una manera
técnica y científica lo relacionado a estas nuevas formas de trabajar..
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CAPITULO II:
A. AUTOMATIZACIÓN EN QUÍMICA CLINICA.
El área de Química Clínica fue una de la primera área en automatizarse,
especialmente debido al auge en el volumen de muestras manejadas en los hospitales y
al cambio de políticas en la solicitud de pruebas individuales por perfiles completos,
para chequeos más profundos en los pacientes con diferentes patologías crónicas como
la diabetes, otros trastornos endocrinológicos, etc. Así como el nuevo concepto de
chequeos de rutina para el descubrimiento de trastornos asintomático (Presión
Sanguínea, Canceres, etc.) Esto además de la necesidad de la rapidez y las nuevas
tendencias mundiales en la modernización de las metodologías y estándares de la
calidad.
Pero para poder conocer acerca de la automatización en el área de Química Clínica es
necesario primero entender los conceptos sobre los cuales se basan estos equipos.
En el estudio de los principios de la espectrofotometría, conoceremos en que se
fundamentan las lecturas de los diferentes tipos de equipos en el área de la química
clínica.2
A 1.PRINCIPIOS GENERALES DE ESPECTROFOTOMETRIA
Tomaremos en cuenta los siguientes aspectos, para analizar este capitulo:
Conceptos básicos
Terminología Básica
Principios físicos químicos
i. CONCEPTOS BASICOS:
I. ESPECTROFOTOMETRIA
Se le denomina Espectrofotometría a la parte de la física que estudia a la luz y su
descomposición espectral, en cada uno de sus componentes y su interacción con las
substancias (analitos, substratos, enzimas, etc) para poder cuantificar a estas a partir de
la absorción de luz por las partículas y contrastando las con patrones de concentración
conocida, esto gracias a la aportación de los físicos alemanes Bunsen y Kirchoff, que en
el año 1853 desarrollaron el primer aparato de este género llamado “espectroscopio”.(2)
Se define por luz aquel tipo de energía electromagnética cuya velocidad es una
constante en el universo y que se desplaza a todas direcciones en forma de partículas
llamadas fotones a una velocidad de 299,792.458 km/seg. y de la cual hay dos fuentes
principales:
I- Energía de alta radiación: Generada por las estrellas, súper novas, quásar, el sol, etc.
II- Energía de Baja radiación: Generada por la energía Alterna o Directa. Dependiendo
de su generación puede ser:
i. Energía Eléctrica, Corriente alterna: Generación de alta tensión: 220voltios, 110 v.
Energía Corriente Directa: utilizada por instrumentos electrónicos a 6v, 10v, 12v o
24 v.
2 Enciclopedia Encarta 2005
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La espectrofotometría, se basa en la luz y su refracción a través de un prisma o filtro
intersticial para descomponerla en sus distintas partes o para poder medir y cuantificar
reacciones químicas en substancias, llámese a estas: Analitos, Substratos o Enzimas.
(Fig. 1) A esta refracción para descomponer en sus distintas partes a la luz se le llama
Longitud de onda y se mide en nano metros (nm). o mil millonésima parte de un metro.
(10 -9 mt.)
Para poder cuantificar una sustancia se necesita que dos fenómenos ocurran:
1) TRAMITANCIA: Es el fenómeno de transmisión de la luz en un 100% en un rango
determinado.
2) ABSORBANCIA: Es la absorción de la luz por las substancias presentes en la cubeta
previo a una calibración a cero con agua destilada.
ii. TERMINOLOGIA BASICA:
ABSORVANCIA: Capacidad de un analito, enzima o sustrato de absorber cierta
cantidad de luz emitida por una fuente.
TRAMITANCIA: Capacidad de trasmitir el 100% de la luz emitida por una
fuente y descompuesta en un rango especifico.
NANOMETRO: Rango de medición equivalente a 10 (-9) de un metro o la
millonésima parte de un metro. Se utiliza para medir los distintos rangos en que
la luz se descompone.(distancia entre cresta y cresta de LO)
LUZ ULTRAVIOLETA: Es aquella que va de los 320- 410 nm. Se utiliza
generalmente para mediciones enzimático, no es detectable al ojo humano. Fue
descubierta en 1801 por J. Ritter While.
LUZ VISIBLE: Es aquella que va de los 420- 570 nm. Se utiliza para medir
reacciones colorimétricas. Es detectable a simple ojo.
LUZ INFRAROJA: Es aquella que va de los 580 – a los 800 nm.Se utiliza para
poder “eliminar” las coloraciones parasitas de las muestras en el modo de lectura
Bicromatico.
LINEA BASE: o cero con agua destilada, es cuando llevamos el instrumento a
cero absorbancia (100% tramitancia) para comenzar la lectura.
BLANCO REACTIVO: es la eliminación de la coloración natural del reactivo a
través de le medición de su Abs. Sin muestra añadida.
ESTANDAR O PATRON: es una solución estable de concentración conocida de
un analito, substrato o enzima, el cual no varia y es especifico para cada reactivo
químico que se utiliza.
FACTOR DE CALIBRACION: Es la relación matemática para determinar una
concentración a partir del valor de absorbancia de un patrón o estándar
establecido. Es igual a:
FC = Concentracion St / Absorvancia ST x Abs. Mx
GALVANOMETRO: Instrumento electrónico que mide la luz enviada por el
sensor óptico y la transforma en pulsos electrónicos directamente proporcional a
la cantidad de luz emitida, la cual se expresa en forma digital o análoga
(Instrumentos de aguja).
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CONTROL NORMAL : Es un suero bovino o humano cuya concentración de
Analitos, enzimas y sustratos es conocida, la cual varia a limites permisibles
Establecidos por el fabricante y expresados en Desviaciones Estándar. El valor
del control normal ronda los limites normales de los parámetros establecidos en
humanos.
CONTROL ANORMAL: Es un suero bovino o humano el cual Tiene valores
por lo general alterados o altos de los analitos, substratos o enzimas según los
limites normales del ser humano. S e utilizan para medir la Linealidad de las
pruebas y de los equipos.
iii. PRINCIPIOS FISICOS-QUIMICOS
Reacción química:
Esta se da en el tubo de ensayo o cubeta de reacción de acuerdo con los parámetros
establecidos por el fabricante como son:
- Volumen de relación Reactivo – muestra
- Tipo de muestra a usar y forma de extracción (Edta, citrato de Sodio, etc.)
- Pipeteado, temperatura de reacción, Tiempo de Incubación, Lectura.
- Forma de cálculo, etc.
Al estar lista esta reacción se procede a la cuantificación del analito, substrato o enzima
por medio de la medición de luz (fotones) que estas partículas presentes en la reacción
absorben. (Esquema.1)
CUBETA DE REACCION
FUENTE LUZ _______ ______
REFRACTADA _____________ SENSOR GALVANO
xn xn OPTICO METRO
100% tramitancia xn xn Moléculas reaccionando
0% ABs. xn Xn %Abs
____________
LUZ ABSORVIDA
Esquema 1. Principio de absorción de luz por las partículas reaccionando en un porta
cubetas o tubo de ensayo de un aparato de química clínica.
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La química clínica ha avanzado muchísimo desde el desarrollo y aplicación del primer
“espectroscopio” por Bunsen y Kirchhoff (1856) convirtiéndose actualmente en una
sofisticada tecnología de vanguardia que utiliza a la luz y su aplicación en la medición
de absorción de substancias sean estos analitos, sustratos o enzimas de valor clínico en
el diagnostico de muchas enfermedades en el ser humano.
Realizando un vistazo desde los primeros aparatos utilizados en la química clínica, hasta
la actualidad, nos damos cuenta que el principio de la espectrofotometría se aplica a
todos los instrumentos antiguos y modernos. Ejemplos de algunos equipos en distintas
epocas: Desde 1940 hasta la fecha:
Klett Summers (colorímetro desarrollado en 1940 por una compañía de Detroit)
Colorímetro Análogo.
Spectronic Kley- Adams digital
Spectronic Perkins – Elmer
Biosystems Spectronic semi- automatizado
Bayer RA-100
Analizadores automatizados: Hitachi, Bayer, Abbot, Human, Biosystems,etc,
2002.
El principio es básicamente el mismo en la espectrofotometría, lo que cambiado es :
Sensibilidad y presición del método
Cantidad de muestras Ej. Klett 2ml, semi-automatizados 400ul – 100 ul.
Formas de cálculo automatizada
Sistemas de aspiración incorporadas
Velocidad y cantidad de muestras procesadas.
Uso de Hardware y software sofisticados
Uso de sistemas LIS (Laboratory interfase systems)
Control de calidad incorporado.
Etc.
Actualmente ha avanzado tanto este campo de la espectrofotometría que se ha
convertido un campo de batalla entre las grandes empresas mundiales por hacer
mejorías en tiempo y velocidad de procesado de muestras, así como el uso de
poderosas computadoras y micro procesadores para poder ofrecer más formas de
cálculo y análisis “On Line” simultáneos a la generación de datos; ante este panorama el
profesional en laboratorio clínico actual, debe de estar conciente de los procesos y
sistemas de aseguramiento de la calidad, estandarizados mundialmente, por
instituciones y bibliografía actualizada así como el uso de software y materiales de
control que garanticen la calidad de su trabajo.(Ver capítulo III)
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Colores de la luz visible
Longitud de onda de la Color absorbido Color observado
Absorción máxima (nm).
380 – 420 Violeta Amarillo - verdoso
420 – 440 Azul - violeta Amarillo
440 – 470 Azul Naranja
470 – 500 Verde - azuloso Rojo
500 – 520 Verde Púrpura
520 – 550 Verde amarillento Violeta
550 – 580 Amarillo Azul - violeta
580 – 620 Naranja Azul
620 – 680 Rojo Verde - azuloso
680 – 780 Púrpura Verde
Fig.4 Colores del espectro de luz y sus respectivos nanómetros.
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Fig. 5 Colorímetro de química clínica Klett Sumer. (1940)
A. 2 EL ENTORNO AUTOMATIZADO DEL AREA DE QUIMICA CLINICA
Actualmente hay que estar muy conciente de las distintas fases a las cuales se les va a
aplicar el proceso de la automatización, tomando en cuenta las tres fases principales de
un proceso metodológico: 3
Fase pre- analítica
Fase Analítica
Fase post – analítica
En la mayoría de los procesos es lo mas común automatizar a la fase analítica del
procedimiento metodológico, pero siempre en la búsqueda del concepto de calidad total
actualmente se han incorporado las tres fases en un solo conjunto denominado el
Entorno automatizado del área de química clínica. (3)
En este entorno hay que saber reconocer los pasos necesarios para imitar y mejorar las
técnicas manuales. Los pasos principales en un procedimiento generalmente se pueden
enumerar:
1. Preparación e identificación de la muestra.
2. Medición de la muestra y entrega.
3. Sistemas de reactivos y entrega
4. Fase de Reacción química
5. Fase de Medición.
6. Procesamiento de señal y manejo de datos.(1)
3 “El control interno de la Calidad” Javier Gella, Biosystems España.
16
A3, 4, 5 HARDWARE – SOFTWARE -LIS
La fase pre – analítica comienza en la buena obtención y preparación de la muestra,
que es y ha sido un proceso manual en la mayoría de los casos, pero actualmente se han
incorporado procesos automatizados desde el ingreso del paciente en la ventanilla de la
recepción del laboratorio donde se le asigna un código de barra y se le ingresa al
sistema donde se le asigna la cantidad de pruebas solicitadas, esta información llega
desde el ordenador hasta el aparato de química en el área especificada a través de un
cableado llamado Sistema de interfases de laboratorio (LIS) donde el aparato se carga
con esta información especifica del paciente, su código de barra y las pruebas a realizar.
En el área de recepción, el flebotomista encargado de la sangría del paciente deberá
pegar al tubo de la muestra el código de barra correspondiente para que este sea llevado
hasta la separación y cargar el suero o plasma al rotor del aparato para que este inicie la
secuencia de búsqueda con su lector de código de barras. Al detectar el código asignado
revisa en su memoria las pruebas asignadas y comienza a procesar el listado en una
secuencia lógica agrupando las pruebas de acuerdo a la metódica específica.
Al finalizar el listado de trabajo este envía la información al computador para que este
pueda mostrar los resultados en pantalla, para una posterior validación de la corrida, de
acuerdo a las características especificas ingresadas a la programación previa del aparato
en detección de alarmas especificas del aparato y el control de calidad asignado, de
acuerdo a la corrida simultanea de calibradores y controles comerciales.
Al recibir estos resultados y analizarlos de acuerdo a los parámetros de la calidad (ver
capitulo III) se validan dejándolos listos para que nuevamente en la recepción del
laboratorio se puedan imprimir los resultados a través del software y el sistema de
cableado LIS donde viaja la información.
En conclusión podemos afirmar que las metodologías han avanzado mucho en lo que
a Automatización en química clínica respecta, los principios físicos y químicos de la
espectrofotometría son los mismos, pero se han hecho grandes innovaciones en estas
áreas que nos traen hasta la actualidad donde hay una gran opción de equipos
automáticos y semi automáticos de tamaño compacto, rápidos y modernos que
conjuntan diferentes principios como los que hemos mencionado anteriormente para
poder abarcar la determinación de los distintos sustratos, enzimas y analitos de valor
clínico, junto con la cuantificación de las nuevas metodologías Inmunoquimicas para la
valorización de Marcadores tumorales como el PSA, (Antigeno prostático especifico)
drogas terapéuticas y de abuso, Hormonas, Anticuerpos específicos, Inmunoglobulinas,
etc. En fin todas las valorizaciones necesarias para la evaluación del paciente.
Un aspecto importante en estas cuantificaciones es la relación matemática de la
reacción química que sucede en la cubeta de reacción, de esta forma, nos cercioramos
de la validez de la reacción, a este conjunto de relaciones matemáticas le llamamos:
“Formas de Calculo”.
En el proceso manual las formas de calculo generalmente se realizan por el personal que
realiza la prueba, de manera que de esta forma, se esta sujeto a caer en fallas de calculo
y errores humanos en la realización de estos, siendo esta una de las principales fuentes
de error post – analítico.
Los modernos computadores con sus microprocesadores son una poderosa herramienta
para evitar estas fallas, estos aparatos junto con los software desarrollados por los
fabricantes de los aparatos recogen la información cruda (Lecturas de absorbencias,
limites de absorción, valor de estándares, formas de calculo, etc) para procesarlas y en
algunas ocasiones especialmente en los sistemas On line, se reciben los resultados en el
17
monitor de la computadora en tiempo real en unos cuantos segundos después de hecha
la lectura de la reacción..
Es preciso que el futuro profesional en laboratorio clínico, estudie las principales
formas de cálculo y sus aplicaciones, y que estas se incorporen a los planes de estudio
de la carrera de las distintas universidades.
Fig. 6 Equipo automatizado de Química Clínica marca Architect. Abbot Diagnostics
18
Fig. 7 En esta figura podemos observar el rotor de muestras con selector de código de barras (Parte
inferior izquierda), además de las cubetas de reacción y lectura (Parte superior izquierda). Se puede ver
también a los brazos automatizados de dispensado de reactivo, muestras y lavados (Uno en la parte
superior izquierda y dos en la derecha). Este modelo tiene compartimientos refrigerados para reactivos (2
Parte derecha).
19
A.5 DIFERENTES FORMAS DE CÁLCULO. PRINCIPIO Y APLICACIÓN
1. CONCEPTOS GENERALES
2. MODOS DE CÁLCULO
3. TIPOS DE LECTURA
4. CONTROL DE CALIDAD
1. CONCEPTOS GENERALES
El modo de cálculo se define como la relación matemática que expresa el resultado de
la reacción química que ha ocurrido en el tubo de ensayo o cubeta de reacción, y que
sirve para cuantificar en forma exacta la cantidad de analito, substrato o enzima
presente al final de la reacción.4
Para que ocurra esta reacción en forma satisfactoria, deberá de tomarse en cuenta
ciertos parámetros que influencian el resultado de la misma como son:
Tiempo: Es el tiempo exacto cronometrado desde el inicio del proceso hasta el
final con la lectura del tubo o la cubeta.
Temperatura: Es la medición de la energía calórica en forma de movimiento de
partículas, cuyas variaciones son criticas en toda reacción. Es de suma
importancia las reacciones a 37ªC debido al valor clínico de estas.
PH: Potencial de hidrogeno es critico en toda reacción.
Protocolo: o Inserto es la guía de instrucciones en el proceso de la reacción
otorgado por el fabricante del mismo.
Reactivo 1, 2 , o más : Son las cantidades de reactivos presentes en la reacción.
Muestra: Es la muestra problema a la cual se le busca la concentración y se
mezcla con los reactivos. Ej.: Suero, plasma, LCR, Orina, etc.
Lectura: Es la medición a través de Espectrofotometría del resultado final de la
reacción química.
Longitud de Onda: Es el rango específico expresado en manómetros (distancia
entre cresta y cresta) donde se desarrolla la mayor absorbancia del espécimen de
muestra investigado.
Etc.
Debido a este conjunto de especificaciones en cada reacción y al desarrollo actual en
el avance de la fabricación de los reactivos así, como de los instrumentos de medición ,
y la capacidad de los profesionales involucrados en esta área, es que se ha mejorado en
la clasificación de las formas de calculo, las cuales se han agrupado en formas
especificas de acuerdo a las características de sus reactantes en alrededor de más de 10
formas de cálculo conocidas hasta hoy de las cuales cinco o mas, son las utilizadas en
el área de cuantificación de analitos, substratos o enzimas de valor medico.
4 “Manual del usuario Bts-370 Plus” Biosystems España
20
2. MODOS DE CÁLCULO
I. PUNTO FINAL ( END POINT):Es aquella reacción donde existe un desarrollo
de color que es directamente proporcional a la cantidad del analito o substrato
investigado y en este procedimiento pueden utilizarse uno o dos reactivos, la
absorbancia puede medirse con una (monocromática) o dos (Bicromatica)
longitudes de onda. Se utilizan para este calculo rangos entre los 490 – 540 nm. (
fig. 1) Ej. Glucosa, Colesterol, Triglicérido, etc
II. MODO DIFERENCIAL (DIFERENTIAL MODE): Este modo de análisis
requiere de dos reactivos, el reactivo 1 para el blanco de la muestra y el reactivo
2 para la reacción global. Cada mezcla de reacción es incubada en pocillos
separados y se realiza una única medida de absorbancia de cada una de ellas. La
Calibración puede basarse en el uso de calibradores o un factor dado por el
fabricante.(fig. 1) Se usa un rango de los 510 – 540 nm Ej. Bilirrubina Total y
directa.
III. TIEMPO FIJO (FIXED TIME): La absorbancia de la mezcla es leída a dos
tiempos fijos, después de una incubación, solo un reactivo puede usarse. Se
utiliza en un rango de 490 – 520 nm. Ej. Creatinina.
IV. MODO CINETICO ( KINETIC MODE): El modo cinético se utiliza para medir
la concentración de actividad catalítica. La absorbancia de la mezcla de reacion
es medida por de 4- 31 veces posterior a una incubación a una temperatura
determinada. En este procedimiento se utiliza un único reactivo. Generalmente
la concentración es determinado por u n factor dado por el fabricante. Se usa un
rango entre 320 – 340 nm. Ej. TGO, TGP, Amilasa, Ck total, Ck mb, etc.
V. MULTIESTANDAR: Este procedimiento existe una reacción de color que es
medida como en un punto final, y que puede ser directamente proporcional o
inversamente proporcional a la concentración del analito o substrato u hormona
que se investiga. Se construye una curva de calibración que dependerá de la
prueba realizada. Se usa un rango entre los 450 – 510 nm. Ej. T3 , T4, TSH,
PSA, Testosterona, Insulina, etc.
VI. CUTT – OFF ( CORTE): Este procedimiento se utiliza para poder realizar
lecturas basados en absorbancias de controles positivos y absorbancias de
controles negativos , utilizando estas para generar una línea de corte para
discriminar pruebas positivas de las negativas, utilizada especialmente en el área
de inmunodiagnostico para pruebas infecto – contagiosas en los bancos de
sangre. Son mas bien utilizados en procedimientos basados en la metodología de
ELISA. Ej. HIV, Hbag, HCV, Toxoplasma, etc.
21
3. TIPOS DE LECTURA.
La lectura se refiere a la medición de la absorbancia de las pruebas, esto dependerá de la
tecnología disponible para este fin, específicamente dependerá del aparato que se
disponga en el laboratorio.
Existen dos modos de lecturas para las pruebas:
Lectura Monocromática: Se realiza una sola lectura de la absorbancia de la
mezcla después de un tiempo determinado. Ej. Espectrofotómetros simples.
Lectura Bicromatica: Dos lecturas de la absorbancia de la mezcla después de un
tiempo determinado simultaneas, Una con el filtro de lectura principal y la otra
con el filtro de referencia, generando dos lecturas A1 y A2 de la cual se realiza
la siguiente operación :
A1 – A2 = Absorbancia Final.
A1: Absorbancia del rango principal
A2: Absorbancia del rango de referencia
Esto se utiliza generalmente para eliminar las coloraciones parasitas* de las muestras, y
garantiza una mejor exactitud en la determinación. (4)
* Coloración parasita es aquella donde la muestra esta coloreada antes de reaccionar con
el reactivo especifico.
4. CONTROL DE CALIDAD.
Para garantizar plenamente la exactitud en la realización de estos procedimientos a
través de estas formas de cálculo es indispensable el uso de los controles de calidad, al
utilizar equipamiento semiautomatizado o automatizado estos son un requisito para cada
corrida diaria. En procedimientos manuales es importante usar estos controles para
asegurar el reporte que generemos, para ello existe los Controles Interno y Externo de la
calidad los cuales estudiaremos como todo un capitulo aparte de este estudio. (Capitulo
3).
22
Fig. 8 Analizador espectrofotómetro semi-automatizado de química clínica marca Bts- 330 Biosystems.
Aparato usado en laboratorio clínicos mas actualizados de bajo volumen (abajo) Espectrofotómetro marca
UNICO usado también en prácticas de laboratorio clínico.(Arriba)
23
B. AUTOMATIZACIÓN EN HEMATOLOGÍA
La Hematología fue otra de las primeras aéreas de laboratorio en automatizarse,
debido, entre otras razones, al aumento de los volúmenes de muestras hospitalarias y a
la necesidad cada vez mas apremiante de la rapidez de los resultados,
especialmente en las salas de Emergencias y de cuidados intensivos. Un factor
importante fue el riesgo biológico potencial en el manejo de la muestra, especialmente
desde el inicio de la epidemia del SIDA y otros virus*, y además de la necesidad de
reducir la variación interlaboratorial de una misma muestra.
B. 1 PRINCIPIOS GENERALES DE CITOMETROS DE HEMATOLOGIA
Fue a partir del descubrimiento patentado por Wallace Coulter (1956) que la
compañía Coulter (Becken – Dickinson) la que lanzo el primer contador de células en
los años 1978. (5) Desde esa fecha hasta la hoy en día, estos han avanzado
enormemente, hasta convertirse en los actuales citometros de flujo de línea completa
que hay en la actualidad.
En la actualidad existen básicamente dos tipos de aparatos automatizados en
hematologia:
B.2 - Citometros por impedancia eléctrica
B.3 - Citometros por citometria de flujo láser.
La realización de la biometría hematica a través del proceso automatizado se realiza a
través de una secuenciación de los pasos, este se inicia desde la aspiración de la muestra
y su dilución en un buffer especifico para llevar determinar generalmente los siguientes
parámetros:
-Cuantificación de la hemoglobina (Hb)
-Cuantificación de los eritrocitos (RBC)
-Cuantificación de los reticulocitos y de los RBC nucleados
-Cuantificación de los leucocitos (WBC)
-Cuantificación plaquetaria.
La medición de la Hb se basa en la relación lineal entre la cantidad de luz que se
absorbe en una banda de absorción particular y la absorción de la muestra.( ).
Generalmente utilizando el método de la cianametahemoglobina o lauril sulfato de
sodio. Los eritrocitos se miden por el método de la impedancia de la abertura, técnicas
que dispersan luz usando laser LED o tungsteno o una combinación de las dos
tecnologías. Esta técnica patentada por Wallace Coulter en 1956 se conoce como el
principio de Coulter y se utiliza para contar RBC, WBC y plaquetas. Un flujo de
corriente eléctrica se establece a través de una abertura de dimensiones conocidas.
Cuando una célula o partícula pasa a través de la abertura, la célula impide el flujo de la
corriente y causa un impulso en el voltaje. Las células y las partículas se cuentan
registrando el número de pulsos de voltaje que ocurren durante un intervalo de medición
El volumen celular se determina midiendo la magnitud del pulso que se genera, se fijan
las entradas electrónicas, permitiendo al analizador discriminar los pulsos o
cuantificaciones de los eritrocitos, de las plaquetas, detritus y del ruido eléctrico. Las
correlaciones estadísticas se aplican en el software del analizador. Para evitar la
recirculación de las células por las cámaras (abertura) una vez contadas se remueven de
la zona de detección con un líquido de arrastre.
Virus de la Hepatitis A, B, C.
24
Los leucocitos pueden contarse y diferenciarse dentro de un amplio número de
categorías por diversas metodologías. Según el fabricante la zona de detección puede
ser: optica, de conductancia, de impedancia o una combinación de todas. Por medio de
estas metodologías estos determinan el conteo total de los WBC y de las distintas
poblaciones de estos o formula diferencial.
Otra importante metodología para el conteo de los WBC y los diferenciales se
determina usando citometria de flujo combinada con laser semiconductor. Se obtiene
información celular usando la dispersión de luz frontal para determinar el volumen
celular, la dispersión de luz lateral para evaluar la estructura interna de la célula, y la luz
fluorescente lateral para dar información sobre los ácidos nucleicos RNA/DNA. La
ventaja de este método es que tiene la capacidad de dar el recuento total de la formula
diferencial, pueden contar reticulocitos además de reconocer todas las variantes
normales y anormales de las células incluyendo células atípicas con características de
células progenitoras o inmaduras. 5 .
Fig. 9 Principio de Coulter. Desarrollado por Wallace Coulter en 1956. Básico para conteo automatizado
de células en hematología.
.
En estos procesos es importante siempre el mantenimiento constante del equipo por
parte del equipo técnico de la empresa que pertenece el equipo, para su óptimo resultado
además de la realización de la corrida de los distintos controles en los tres niveles: Bajo,
Normal y Alto.
No obstante siempre es recomendable corroborar cualquier dato anormal por medio de
un proceso manual, ya que a través de este estaríamos viendo directamente a las tres
líneas celulares y es el mejor control de calidad que podemos aplicar.
5 “La Ciencia del Diagnostico de Laboratorio” Crocker & Burnett, 2ª Edición
25
Fig. 10 Analizador para coagulación marca Instrumentation Laboratory ACL 100.
Fig. 11 Joseph y Wallace Coulter. Los inventores del “principio coulter, Básico para los citometros de
hematología modernos.
26
Fig. 12 Analizador automatizado para Hematologia marca ABX Pentra 80.
Fig. 13. Reportes de histogramas de poblaciones de glóbulos rojos y plaquetas anormales, macro
plaquetas, (Parte izquierda) En el control de calidad de lámina podemos observar glóbulos rojos
hipocromicos y presencia de macro plaquetas. (Parte derecha)
27
C. AUTOMATIZACIÓN EN EL BANCO DE SANGRE
C.1-AREA DE INMUNODIAGNOSTICO EN EL BANCO DE SANGRE
Definición:
I. Procedimientos de ELISA – Automatización en Inmunodiagnostico
II. Modo de calculo CUTT – OFF
El área de Inmuno Diagnostico dentro de un banco de sangre central o de referencia
se convierte en una de las áreas mas delicadas y especializadas, en el banco de sangre,
debido a lo delicado de sus resultados y lo importante que son en la toma de decisiones
para poder clasificar a los componentes sanguíneos en aptos o disponibles para el uso
de una terapia sanguínea o si hay que descartarlos debido a la presencia de un agente
patógeno potencialmente de riesgo biológico a la vida del paciente a ser transfundido.
Debido a los riesgos potenciales de transmisión de patógenos (Sífilis, HIV, HCV,
HAbs, Tripanosoma cruzi, etc.) la Organización Mundial de Salud ha establecido
parámetros estrictos en el control de los Donantes, estimulando a la donación de
voluntarios altruistas, pero podemos clasificarlos de acuerdo a la intención de la
donación en:
Donantes Altruistas
Donantes Familiares o Amigos (De la persona a transfundir)
Donantes comerciales
Estas categorías encierran cada una con su propio riesgo en la transmisión de
enfermedades debido al estilo de vida que llevan cada uno, siendo los Donantes
Altruistas las personas optimas para realizar una donación sanguínea. Sin embargo
siempre existen otras poblaciones de mayor riesgo que acuden a los bancos de sangre, y
no son honestos en la entrevista, engañando a los profesionales encargados de la
selección del donante. Por esta razón se vuelve tan importante el área de Inmuno
diagnostico debido a que esta área se convierte en la garante de la calidad del
componente sanguíneo y de que este se encuentre libré ¨ de agentes infecciosos.*
La medicina transfucional ha avanzado en los últimos años, convirtiéndose en una
poderosa herramienta en el tratamiento de diversas enfermedades muy delicadas como
el cáncer o raros trastornos en los factores de coagulación de los pacientes, además de
su vital importancia en la terapia de choque en los quirófanos y salas de emergencia de
todo el mundo, sin embargo hoy mas que nunca aumenta el riesgo de transmisión de
enfermedades contagiosas debido al auge de la pandemia de HIV a nivel mundial ( 32
millones de personas en el mundo) y de otras infecciones fatales como la Hepatitis A, B,
C , la enfermedad de Chagas entre otras. Debido a este problema y al avance de la
ciencia y la técnica las diferentes compañías del mundo están en una constante
competencia por desarrollar nuevas y mejores pruebas para el diagnostico de
enfermedades infecto contagiosas, además de los equipos y software para el análisis y la
interpretación de estas. Todo esto nos lleva a que cada vez mas se pueda asegurar en los
bancos del mundo de componentes sanguíneos seguros para el uso de los pacientes más
necesitados.
Virus de la inmunodeficiencia humana, Hepatitis A,B,C, Anticuerpos para sifilis
28
I. PROCEDIMIENTO DE ELISA – AUTOMATIZACIÓN DEL
INMUNODIAGNOSTICO.
El procedimiento de ELISA es uno de los inmuno ensayos más seguros y utilizados
por los bancos de sangre del mundo, debido a su alta sensibilidad y especificidad en la
detección de anticuerpos específicos contra agentes infectos contagiosos, hormonas y
marcadores tumorales. La metodología de ELISA y sus variantes como la
Quimioluminicescia son por hoy de las metodologías mas frecuentes en el uso de los
bancos de sangre.
La terminología ELISA se deriva de las siglas en ingles que significa:
E nzime = Enzima
L inked =Ligada
I nmuno =Inmuno
S orved =Absorcion
A ssay =Ensayo
Inmuno ensayo ligado a absorción de enzimas. Esta metodología esta basada en la
detección de anticuerpos específicos para diferentes tipos de antígenos. Las paredes de
polieritudeno de los pocillos están recubiertas de los antígenos de cada uno de los
agentes infecciosos, hormonas o marcadores tumorales a investigar y se ponen a
reaccionar con el suero del paciente para detectar la presencia de anticuerpos específicos
para cada uno de las diferentes pruebas. Al formarse el complejo Antigeno – Anticuerpo
se realiza un lavado para poder descartar los anticuerpos inespecíficos u otra sustancia
que pudiera interferir en la reacción, Se añade un substrato y se dejan reaccionar en
incubación para darle otro lavado para quitar el exceso de este, debe de agregarle
después un cromógeno que dará una reacción de color de acuerdo a la concentración de
anticuerpos presentes en la muestra. Después de una hora de incubación y desarrollo
color se detiene esta con la adición de un acido, dando una coloración final que será
leída en un lector de ELISA a una longitud de onda de 490 u otra dependiendo de la
técnica. Para interpretar las lecturas estás se plotean en curvas de calibración o para
modo de corte. Este modo cutt- off es generalmente usado para pruebas infecciosas.
Para determinar las concentraciones de las muestras o discriminar positivos de
negativos se montan estándares y controles positivos fuerte, positivo débil y negativo de
acuerdo a la metodología y a la prueba a realizar, y luego de acuerdo al valor cutt-off
asignado por el fabricante se determina un valor numérico o línea de corte de donde se
determinara que muestras están positivas y cuales son negativas, además de las pruebas
indeterminadas o “zona gris” que es un porcentaje brindado por el fabricante hacia
arriba y hacia abajo del valor de la línea de corte(Valor cutt-off), donde no se puede
determinar con certeza si son positivos o negativo. En este caso deberá de repetirse la
prueba serialmente hasta que salga de esta zona y de un resultado definitivo.
29
Esquema Nº 2 : Secuencia de pasos para realizar un ensayo de ELISA.
Ensayo de Micro Elisa
1)Pocillo impregnado 2) Adición del suero 3) formación del complejo
Del Anfígeno (Ag) Anticuerpos (Acs) Antígeno -Anticuerpo
4) 1º Lavado Exceso de 5) Adición del Sustrato 6) 2º Lavado Exceso de
Acs Sustrato
7) Adición de Cromógena 8) Adición de Stop 9) Lectura 490 nm
Fig. 14 .Analizador de pruebas de ELISA automático Axsym de Abbot Diagnostics.
30
II. MODO DE CALCULO DE CORTE (CUTT – OFF)
Este modo de cálculo es el que se aplica a la determinación de pruebas
infectocontagiosas como: HIV, Hepatitis A, B, C, Chagas, Toxoplasmosis IgG, IgM,
etc.
El modo Cutt – Off o corte se basa en un valor de absorbancia donde a partir de allí se
hará un corte para descrimnar pruebas positivas y negativas.
De este modo se correrán junto a las muestras los controles positivos (fuerte y débil) y
negativos los cuales generaran un valor de absorbancia de los positivos y negativos a los
cuales se calculara dependiendo de las absorbancia el valor cutt – off y se determinaran
los positivos de los negativos. Cierto porcentaje será el de los “Indeterminados” que
corresponde a cierto numero hacia abajo y hacia arriba del valor de corte, estos no se
sabe a exactitud si son positivos o negativos y deben de repetirse hasta obtener un valor
fuera de este rango o “zona gris”.
Hay pruebas que además de controles positivos y negativos utilizan calibradores o
estándares de valores conocidos de la concentración de inmunoglobulinas, que sirven
para determinar la positividad de las pruebas o para medir los resultados de las terapias,
por ejemplo en la determinación de toxoplasmosis IgG se cuantifica con un valor de un
estándar, esto nos da un parámetro para saber si la inmunoglobulina es de memoria que
ha quedado circulando en sangre o si se ha reactivado la infección.
En el caso de la IgM que es un pentámero de la fase aguda solo es necesario si es
positiva o negativa la presencia de este anticuerpo.
Esquema 2. Modo cutt – off (Corte)
0.60
Positivo fuerte 0.59
Control 0.58
0.57 + POSITIVOS(REACTIVOS)
Positivo débil 0.29
Control
Zona gris 0.25
___________________________________________________ cutoff (corte)
Negativo 0.15 Zona gris
0.13 - NEGATIVOS(NO REACTIVOS)
0.07
0.05
Esquema Nº3. Una prueba infecto contagiosa (HIV,HCV,Toxo IgG,etc) y su
interpretación de resultados en la forma de calculo de corte (Cutt-off) a partir de las
lecturas de controles positivos y negativos.
31
III. AUTOMATIZACIÓN EN LA EXTRACCIÓN DE COMPONENTES
SANGUÍNEOS
La extracción de los componentes sanguíneos está también en la lista de los procesos
automatizados, por medio de la utilización de aparatos extractores y fraccionadotes de
los diferentes componentes sanguíneos.
Estos aparatos son llamados aparatos de Aféresis y existen de diferentes marcas en el
mercado, entre ellos están: Baxter, Inmunetics, Gambro, etc.
La función de estos aparatos en la recolección de componentes esta en sustituir el
proceso manual de obtención y separación de la sangre, por medio de la utilización de
estos aparatos utilizando en lugar de la bolsa tradicional de donante, un descartable
especial que va conectado en un extremo a la aguja de punción al brazo del donante que
se conecta a un sistema de rotor centrifugo refrigerado especial para la obtención y
separación de los diferentes componentes como: Glóbulos rojos empacados, plasma
fresco congelado, plasma rico en plaquetas y concentrado de plaquetas.
El sistema consiste generalmente de tres módulos integrados que son el rotor extractor
refrigerado el sistema de monitoreo o software donde se controla el proceso y el sistema
de descartables donde se conecta el paciente.
Las ventajas de estos sistemas esta en su gran eficiencia en la recolección y separación
de los componentes delicados como las plaquetas en mayor concentración por mm3 que
por medio de los medios tradicionales, además de la rapidez del proceso en la
obtención del componente existe la enorme ventaja que algunos de estos sistemas
ofrecen la opción del filtro leucoreductor cuyo fin principal es la disminución de la
cantidad de células blancas, para evitar la sensibilización de los pacientes
poli transfundidos o de pacientes con problemas de inmunosupresion o con cáncer,
también en pacientes mas delicados como los bebes. Estos filtros consisten en unos
dispositivos de cerámica que captan a la mayoría de glóbulos blancos reteniéndolos en
el así evita que se vallan junto con los componentes recolectados.
La desventaja de estos métodos esta en el precio, ya que un sistema descartable único
uso por cada paciente anda por alrededor desde los 150 – 260 USD, dependiendo de la
marca comercial y los aparatos también son caros y delicados en su manejo y
mantenimiento, pero esta es la nueva tendencia mundial en la obtención de
componentes sanguíneos automatizad
Filtro de Ceramica que atrapa la mayoria de glóbulos blancos presentes en la bolsa de plaquetas.
32
Fig. 15. Cassette de extracción y separación de componentes
sanguíneos de un solo uso, con sistema de
leucorreduccion.(Izquierda) Maquina centrifuga automatizada de
separación de componentes sanguíneos marca TRIMA de
GAMBRO.
33
CAPITULO III.
A.1 INTRODUCCION AL SISTEMA DE CONTROL DE LA CALIDAD
HISTORIA:
El sistema de control de la calidad en laboratorio clínico ha avanzado muchísimo
desde sus inicios en los procesos industriales de a principios del siglo XX. Ha
evolucionado hasta introducirse en la mayoría de ámbitos realizados por el ser humano,
incluyendo a los procesos en el laboratorio clínico.
Historia del control de Calidad:
En el principio de los procesos de control de calidad podemos mencionar a Walter A.
Shewhart que fue un analista estadístico de la compañía Bell Telephone quien desarrollo
su obra titulada ¨Economic control of quality of Manufactured Product¨ publicado en
1931. En esta obra se plasmaron los procesos estadísticos básicos para el control de la
calidad como son los valores mínimos necesarios en los procesos de rutina y la
medición de las desviaciones de estos y sus cosos económicos para el proceso.
Los procesos de control de calidad han sido siempre desde el principio
concernientemente al deseo de alcanzar las metas de calidad al mínimo costo. Shewart
identifico los elementos críticos en los cuales se esperan variaciones en los procesos de
rutina y la forma de cómo identificar los rompimientos en estos procesos para poder
eliminar las causas que lo originan.
Casi veinte años después aparecieron Levey and Jennings e introdujeron los métodos
estadísticos de control de calidad en los laboratorios, en 1950. Siguiendo las
recomendaciones originales de Shewart hicieron un grupo de mediciones del proceso y
calcularon los promedios de rango (máximas diferencias) ploteando los promedios de
los rangos en dos distintos gráficos. Además ellos (Levey – Jennigs) propusieron
realizar mediciones por duplicado de las muestras de los pacientes.
Después de esto Henry y Segalove desarrollaron un proceso alternativo en el cual se
establece muestras de referencias que son analizadas repetidamente en mediciones que
son ploteadas directamente, este sistema es conocido actualmente como Graficas de
Levey and Jennings. 6
Desde esa época a la fecha muchas empresas han desarrollado nuevos y mejores
productos para el aseguramiento de la calidad que son disponibles para la mayoría de
pruebas de laboratorio clínico. Al mismo tiempo hay disponibilidad de mayores
conocimientos en el entendimiento de los procesos de control de calidad a través de
literatura, software, programas estadísticos, productos, etc. y de organizaciones e
instituciones dedicadas a vigilar y fomentar los procesos multi control para evaluar e
interpretar los datos de control de calidad. Por lo tanto hoy en día hay una gran
disposición de información y herramientas para alumnos y profesionales que quieran
saber más acerca del sistema de aseguramiento de la calidad.
6 “Basic QC Practices” James Westgard, 2ª Edicion
34
A 2. CONCEPTOS BASICOS
CONTROL DE LA CALIDAD:
Es la parte del sistema de aseguramiento de la calidad que comprende todas aquellas
técnicas y procedimientos que se utilizan para monitorear el comportamiento de
determinados parámetros que pueden afectar los requisitos de calidad, entendiendo
como calidad a aquel dato o valor que más se apega a la realidad de la condición del
paciente en el momento de que fue tomada la muestra, en resumen es la “búsqueda de la
verdad” o del valor convencionalmente verdadero (3) en ese momento. Además nos
permiten medir errores y alertar sobre funcionamientos incorrectos. Ejerce control sobre
la fase analítica.
Se define como Error, a todo aquel dato o valor que se aleja del “valor verdadero”.
Tomando en cuenta que no existe un valor verdadero absoluto, especialmente cuando se
trabajo con mediciones de analitos médicos que son dinámicos y variantes, se conocerá
a este como el valor convencionalmente verdadero.
Existen dos tipos principales de error:
Error sistemático
Error Aleatorio
El error sistemático es aquel que se repite o persiste constantemente durante un
tiempo determinado, hasta que las condiciones que lo originan son cambiadas. Ejemplo:
Equipos deteriorados, reactivos vencidos, calibradores defectuosos, etc.
El error aleatorio es aquel que se da por razones fortuitas y no se repite necesariamente
con periocidad, afecta la precisión además de la calidad de los resultados. Ejemplo:
Mala toma de muestra, rotulación equivocada, mal pipeteado, etc.
Al hablar de estima del error debe de saberse en que parte del proceso analítico se esta
aplicando dicho medición. Existen en los procesos analíticos de cuantificación o
medición de substancias, tres fases, que pueden afectar la calidad, las cuales son:
1. Fase Pre-analítica
2. Fase Analítica
3. Fase post-analítica
La fase pre-analítica es toda aquella previa al proceso analítico (cuantitativo) y
comprende desde que el paciente llega al laboratorio con su orden de exámenes a la
recepción de laboratorio y la secuencia de pasos que lleva como la introducción de datos
al sistema interlaboratorial, elaboración de viñetas de identificación de tubos,
indicaciones previas o requisitos previos a la toma de muestra, la toma de muestra por
un profesional calificado, el uso de tubos adecuados (con o sin su respectivo
anticoagulante), hasta el traslado del área especifica donde se procesara la muestra y la
efectiva separación de componentes a usar dependiendo del tipo de examen a procesar.
En esta fase entran los requisitos de cadena de frió o traslado adecuados para poder
conservar intactas las muestras cuando estas son procesadas en laboratorios de
referencia.(13)
Los principales sistemas de control de calidad se aplican a la fase analítica donde se
controlaran factores críticos que afectan los resultados como son: Personal que realiza
los análisis, equipos de análisis (Instrumentos), reactivos, calibradores, técnicas, etc.
En esta fase se aplican los dos tipos de control de calidad control interno y externo.
La fase post analítica consiste en el análisis y la interpretación de los resultados de las
lecturas crudas de los aparatos (raw readings) y la aplicación de las distintas formas de
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calculo y formulas para obtener los valores cuantitativos de las unidades de magnitud
que se esten aplicando en su debido momento ej. mg/dl, gr/dl, mmol/lt, UI/lt, etc. Hasta
el mecanografiado de estos resultados para entregar el reporte al paciente o al medico de
este, en esta fase no aplican los dos principales sistemas de control de la calidad.
En la actualidad y con la tendencia del uso de los equipos automatizados y semi-
automatizados, se ha reducido este tipo de practica de interpretación manual de las
lecturas, ya que los equipos lo realizan de forma automatizada debido a la incorporación
de sistemas computacionales (software y microprocesadores) en los aparatos, los cuales
despliegan la información de los resultados finales con su unidad de magnitud y rangos
de referencia, alarmas, graficas de control de la calidad, etc a las pantallas de las
computadoras para solamente ser validados por un profesional encargado para que esta
sea mandado a un impresor y después al paciente o al medico. De esta forma se ha
reducido de gran manera el índice de “error humano” al analizar las lecturas y al
mecanografiar la información final de los resultados.
En una situación deseable u optima el error en la fase pre y post analítica debe de ser
eliminada o reducida a la mínima expresión para poder obtener resultados confiables.
Pero la tendencia actual en los sistemas automatizados de los laboratorios clínicos
modernos es de reducir al mínimo la injerencia del “error humano” y de automatizar
todo el proceso en lo que se conoce como el “entorno automatizado” que consiste en la
automatización desde la recepción hasta la generación y entrega de resultados. Aunque
siempre existirá la intervención humana en estos procesos, el personal deberá de estar
en constante capacitación para poder responder a los retos y reducir los errores
inherentes al proceso.
Los dos principales sistemas de control de la calidad que miden la fase analítica del
proceso son: Control interno y externo de la calidad.
2.1 TIPOS DE CONTROL DE CALIDAD
Existen muchos más sistemas de control de calidad, aunque generalmente se trabaja
con dos tipos básicos de control de calidad que debe poseer un laboratorio, estos son
similares en sus objetivos pero substancialmente diferentes en sus fines.
A. 1 - CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
Es de tipo prospectivo y valida las series analíticas o corridas diarias, está basado en el
tiraje de los sueros comerciales y el análisis de los resultados de acuerdo a la dispersión
de los valores con respecto al valor medio del suero o desviaciones estándares con
respecto a la media (esta información es brindada a través del inserto del fabricante).
En resumen se refiere a cuanto nos alejamos del valor real del suero (hacia arriba o
abajo del valor “real”) y de esta manera medimos la estimación del error.
A. 2 - CONTROL EXTERNO DE LA CALIDAD:
Es retrospectivo ofrece una estimación del error sistemático de los procedimientos de
medida empleados o de comparación entre distintos laboratorios.
Estos controles son generalmente proporcionados como requisitos para funcionamiento
y licencias de apertura de laboratorios clínicos de atención a usuarios. Por lo tanto son
instituciones gubernamentales, asociaciones de profesionales, y compañías
internacionales las que proveen este tipo de servicios. Entre las principales instituciones
tenemos por ejemplo:
-Las juntas de vigilancia de las profesiones ( Ej. JVPLC)
-The College of American Pathologist (CAP)
-La red nacional de bancos de sangre
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- El laboratorio central del MSPAS, “Dr Max Bloch”
- La unidad de control de calidad del ISSS (Instituto Salvadoreño del seguro social)
- The American association of clinical chemistry (AACC)
- The American association of bank of blood (AABB)
A.3 - MATERIALES DE CONTROL , HERRAMIENTAS Y SOFTWARE
Los materiales de control de la calidad son esencialmente sueros liofilizados de matriz
variable, a los cuales ya se les conoce el valor de distintos analitos, substratos y enzimas
los cuales han sido cuantificados utiizando distintos métodos, reactivos y equipos y
cuya información es proporcionada a través de un inserto, en el cual se describe el valor
medio de la sustancia a controlar, el valor mínimo y el valor máximo de este en las
distintas metodologías y aparatos.
Los materiales de control deben de comportarse como muestras reales, ser estables bajo
las condiciones descritas por su fabricante, y tener una variación mínima en
concentración y composición de un vial a otro. Casi todos los materiales de control
preparados de forma comercial son liofilizados y requieren de reconstitución antes de
usarse. En la reconstitución, el diluyente se debe de agregar de forma exacta y con
cuidado al mezclar. Este paso es crítico ya que el mezclado incorrecto dará como
resultado valores de los controles fuera de rango.
La mayoría de controles son producen a partir de suero, los cuales pueden tener dos
diferentes matrices:
- Suero control de matriz bovina
- Suero control de matriz Humana
Los sueros de matriz bovina son mas baratos que los de matriz humana por lo cual
generalmente son los mas utilizados en muchos laboratorios, para la mayoría de las
pruebas los sueros bovinos satisfacen los requisitos necesarios para monitorear la
imprecisión, pero debido a diferencias substanciales entre las proteínas bovinas de las
humanas estos no son recomendados en el monitoreo de pruebas como: Ensayos
inmunoquimicos, bilirrubinas, etc.(1)
Los sueros de matriz humana son mejores que los sueros bovinos y según algunos
autores los materiales de control deben de ser de la misma matriz de las pruebas que se
están monitoreando ( J. Westgard), pero debido a los altos costos que generan el
tamizaje completo de los sueros en búsqueda de agentes infecciosos( virus HIV, Hbag,
HCV, etc), y a las limitantes existentes en esta materia prima por ser seres humanos, es
que los costos se elevan y no son los controles mas utilizados en los laboratorios
clínicos.
Los materiales de control deben de ser procesados como muestras problema, y sus
resultados deben de ser tomados en cuenta para poder tomar decisiones importantes
dentro de los laboratorios. En el caso del control interno de la calidad, este resultado nos
dará la pauta para poder reportar las corridas diarias que me lleguen al laboratorio en el
caso que los controles den dentro del límite establecido. De lo contrario cuando se salen
de estos límites se está en la obligación de detener el reporte de la corrida diaria y
volver a calibrar de nuevo y tirar otra vez los controles hasta que estos estén dentro de
los valores permitidos de desviación con respecto a la media.
Por esta razón el tiraje de los controles es esencial en la garantía de la calidad y
repercuten directamente en la credibilidad del laboratorio clínico. Actualmente existen
herramientas estadísticas muy buenas que a partir del uso de software nos llevan el
histórico del mes en corridas de treinta días, donde se muestran los resultados de
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desviaciones estándar, índices o coeficientes de variación, coeficientes de error absoluto
y de error porcentual (Ver fig.16)
Estas estadísticas son importantes debido a que nos permiten ver a través de los
gráficos (Levey-Jennigs) las tendencias de las corridas de los controles en dos series
(una normal y una patológica) para ver cuando los valores están o hacia abajo o hacia
arriba de la media o si se están repitiendo varias veces en un lado especifico de la curva,
esto nos da un panorama más amplio y permite tener información muy puntual para
tomar decisiones especialmente e importante para poder detectar errores sistemáticos.
Para conocer más acerca de la interpretación de estas curvas, existen actualmente en el
mercado literatura especializada para saber que reglas se están violando en un proceso
específico y qué medidas tomar para resolver estos problemas. A estas reglas se les
conoce actualmente como “Reglas de Westgard”, en alusión a su creador el Dr. James
O. Westgard pHD. Experto mundial y especialista de control de calidad en laboratorio
clínico.
Actualmente en laboratorio clínico existe una tendencia mundial hacia la garantía de
la calidad total en las distintas aéreas, debido a lo delicado que es un reporte de un
resultado, y las implicaciones legales que a esto lleva. Por esta razón existen en todo el
mundo organizaciones encargadas de la mejoría en los sistemas de calidad, esto se vio
reflejado en la aprobación en 1988 en los Estados Unidos de la ley de mejoría en los
laboratorios clínicos, CLIA1988, por sus siglas en ingles, además de otras normativas
especificas para laboratorios de cuantificación y análisis como la normativa ISO 17025,
entre muchas otras más. Existen también organizaciones de profesionales encargados
específicamente de la calidad de sus aéreas como la American Asociation of Clinical
Chemistry, (AACC) la American Asociation of Bank of Blood (AABB), etc. Que
constantemente realizan reuniones anuales y eventos científicos-culturales de formación
continua de los profesionales asociados para poder permitirles tener una licencia que les
permita ejercer la profesión en esos campos específicos.
Al hablar de sistemas de aseguramiento de la calidad, podríamos llenar varias
docenas de libros y no terminaríamos de agotar el tema, pero lo importante es lograr
despertar la conciencia, (especialmente en el estudiante), de lo importante que esto es,
no solamente porque a la larga sea más rentable ser confiable, si no porque es
éticamente correcto, ya que debido a la importancia que tienen nuestros resultados, no
podemos arriesgarnos a equivocarnos en los análisis, ya que detrás de cada reporte
existe una vida humana de por medio, esperando por este, para tomar decisiones que
lleven al mejoramiento de la calidad de vida.
Los procesos automatizados en laboratorio clínico no pueden realizarse sin un sistema
de control de la calidad, ya que estos los traen ya insertos en sus programas y software
internos. Por esta razón debe de estudiarse al menos lo mínimo para conocer en que
consisten y como se aplican, y esto ha sido el objetivo de esta obra.
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Fig. 16. Software de programa de control interno de la calidad que calcula automáticamente los índices de
error absoluto y relativo. (Abajo) Gráficos de Levey-Jennigs que calculan la dispersión de los valores de
un control normal de acido úrico en un periodo determinado.(Arriba).
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Fig. 17. Alumno de laboratorio clínico en sus prácticas en el Hospital Nacional “Dr. Juan José
Fernández” hospital nacional de la Zacamil, y algunos equipos automatizados: Pentra Abx Hematología,
Hitachi de Roche Diagnostics, Lector de tiras de uroanálisis de Roche diagnostics.
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RESUMEN DE FIGURAS E ILUSTRACIONES:
1. Figura Nº 1: Fotografía de Gustav Robert Kirchhoff quien junto a Robert
Bumsen desarrollaron el primer espectrofotómetro. Ilustración de Antón Van
Leewenhoek y su primer microscopio.
2. Equipo automatizado de química clínica marca Hitachi 912, de Roche
Diagnostics.
3. Espectrofotómetro análogo marca Perkin Elmer.
4. Los diferentes colores del espectro de luz y sus respectivos manómetros.
5. Colorímetro de química clínica marca Klett Sumers.
6. Equipo automatizado de química clínica marca Archited, de Abbott Diagnostics.
7. Rotor, Brazo automatizado, lector de código de barras de Equipo Hitachi 912.
8. Espectrofotómetro manual de química clínica marca UNICO.
Espectrofotómetro semi automatizado marca BTS- 330, de Biosystems.
9. Principio de Coulter. En el que se basan muchos citometros de hematologia
10. Analizador automatizado para coagulación marca Instrumentation Laboratory
ACL 100.
11. Fotografías de los creadores del efecto Coulter: Joseph y Wallace Coulter.
12. Analizador automatizado de hematologia marca Pentra 80, de ABX company.
13. Reporte de histogramas de equipo automatizado de hematologia y fotografías de
anormalidades en la línea roja y plaquetaria.
14. Analizador automatizado de Inmunodiagnostico por ELISA marca Axsym de
Abbot Diagnostics.
15. Equipo automatizado de extracción de componentes sanguíneos y su respectivo
cassette desechable marca Trima de Gambro.
16. Software del control interno de la calidad que muestra curvas de Levey and
Jennigs marca Biosystems.
17. Alumno de la carrera de Laboratorio clínico de la UNAB, en prácticas
hospitalarias en el Hospital Nacional “Dr Juan José Fernández” de la Zacamil,
junto a diferentes tipos de equipos automatizados.
18. Esquema Nº1: Principio de absorción de luz por las partículas de un analito
reaccionando en una cubeta. Ley de Beer-Lamber.
19. Esquema Nº 2: Secuencia de pasos del principio de una prueba de ELISA.
20. Esquema Nº 3: Prueba de ELISA y su interpretación en forma de calculo de
corte (Cutt-off) en una prueba infecto contagiosa y las lecturas obtenidas en ella,
para discriminar muestras positivas, negativas e indeterminados.
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BIBLIOGRAFÍA
1.- “Química Clínica, principios, procedimientos y correlaciones” Michael Bishop
McGraw hill. 5º Edición.
2. - “La ciencia del diagnostico de laboratorio” John Crocker – David Burnett McGraw
Hill. 2º Edición
3. - “Basic QC practices, Training in Statistical quality control for Healthcare
Laboratories”. James O. Westgard. 2º Edición.
4.- “El control interno de la calidad” Javier Gellar, Biosystems España.
5.- Enciclopedia Encarta 2005.
6.- www.historia de la automatización.com
7.- www.principio coulter.com
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