recuento de heterotrofos 3
TRANSCRIPT
1
CIENCIAS BIOLÓGICAS
ALUMNO: tafur gonzales jairo
CURSO: Microbiología acuática
TEMA: Recuento de heterótrofos
DOCENTE: Olga Francia Arana
Lambayeque, octubre del 2012
INTRODUCCION
Las bacterias se dividen en dos tipos, dependiendo de su capacidad de absorber dióxido de carbono del medio ambiente. La bacteria heterótrofa-HB obtiene dióxido de carbono de sustancias orgánicas como carbohidratos y proteínas. La mayoría de las bacterias son heterótrofas, incluyendo a los patógenos humanos y a la mayoría de las bacterias encontradas en los sistemas deagua potable. Muchas variedades de bacterias heterótrofas se encuentran en la naturaleza. Las bacterias heterótrofas juegan un papel vital en el reciclaje natural de sustancias.
Bacterias heterótrofas son aquéllas que necesitan materia orgánica como fuente de energía; Las bacterias heterótrofas sobreviven como parásitos, creciendo dentro de otros organismos y utilizando tanto los nutrientes como la maquinaria celular de la célula huésped. Son las que cierran el ciclo de la materia en los ecosistemas al degradar cualquier sustancia orgánica a sus elementos inorgánicos originales.
La medición de bacterias heterótrofas en el agua potable puede proporcionar Información útil a los operadores de plantas de agua, ingenieros sanitarios, supervisores de la calidad del agua y analistas de laboratorios de calidad del agua. Durante el tratamiento la densidad bacteriana varía y en la red de distribución se puede monitorear el deterioro de la calidad a través de los métodos de recuento heterotrófico en placas. La aplicación constante del método de RHP seleccionado proporcionará datos básicos para evaluar cambios en la calidad bacteriana del agua potable.
II. OBJETIVOS
Determinar la calidad higiénica del agua.
III. MARCO TEORICO
Microbiología acuática
Bacterias Heterótrofas
Definición
Este tipo de bacterias parasitan a los seres vivos y usan los compuestos orgánicos que estos elaboran. Dentro de este grupo existen las bacteriaspatógenas o parasitarias son las causantes de enfermedades en los seres vivos. También están aquellas bacterias de la putrefacción o saprófitas que descomponen las sustancias orgánicas en las que viven y se valen de su materia orgánica muerta para poder alimentarse pudiendo alterar las características organolépticas del agua. Otro tipo de bacterias son las simbióticas, que viven en cooperación con otros organismos. Por último están aquellas que realizan fermentaciones, de las que se vale el humano, como el ácido acético, fermentos lácticos, entre otros.
Por lo tanto, tanto las bacterias que causan como las que no causan enfermedades son heterótrofas.
Medios selectivos versus no selectivos para la reproducción de bacterias heterótrofas
Los medios RHP empleados para enumerar los heterótrofos encontrados en el agua se consideran medios no selectivos porque no tienen compuestos inhibitorios ni selectivos para un determinado grupo de bacterias. Algunos compuestos que se usan en los medios selectivos son las sales biliares, sulfato de laurilo de sodio o desoxicolato de sodio (usado en medios para la detección de coliformes), azida de sodio (selectiva para enterococcos), colorantes (verde brillante) y antibióticos. Las condiciones de incubación, incluida la temperatura, pueden ser selectivas y por consiguiente tales condiciones deben estar especificadas para las bacterias particulares que se procura detectar o enumerar.
Usos del recuento heterotrófico en placas
Microbiología acuática
El recuento heterótrofico en placas es un procedimiento sencillo que se puede realizar por el método de placa fluida, difusa o filtración por membrana (FM) y es una herramienta muy útil.Aunque no es esencial para evaluar la seguridad del agua potable, los resultados del RHP proporcionan información que complementa los resultados de los coliformes totales. El recuento de heterótrofos se puede usar para indicar la composición bacteriana general del agua de la fuente y la eficacia y eficiencia de los procesos de tratamiento del agua, como la sedimentación, coagulación, filtración y cloración.
El monitoreo de heterótrofos en el agua distribuida puede proporcionar información sobre la limpieza del sistema de distribución, desarrollo de bacterias después del tratamiento, efectos de los cambios de temperatura en el agua y del cloro residual en la población bacteriana.
IV. METODOLOGIA
Existen 3 métodos:
A. Método de placa fluida (MPF)
El método de placa fluida para el análisis del RHP de las muestras de agua presenta algunas desventajas que limitan la recuperación de las bacterias.
Como usa agar licuado a una temperatura de 44 a 46 °C están expuestas a la presión del calor lo cual es probable que las bacterias fisiológicamente estresadas o dañadas no se desarrollen debido a alguna forma de inhibición metabólica.
Otra desventaja es que mediante este método sólo se puede analizar un máximo de 1,0 ml de muestra.
Microbiología acuática
B. Método de placa difusa (MPD)
Este método evita la tensión del calor del agar licuado temperado usado en el método de placa fluida. Por lo general, cuando se aplica un período de incubación no mayor de 3 días, se produce un mejor desarrollo de la pigmentación en las colonias de bacterias, independientemente del medio usado.
Es recomendable examinar un volumen de 0,1 ml a 0,5 ml. Cuando se dispone de medios de crecimiento más ricos.
El método de placa difusa no es un procedimiento nuevo. Ha sido utilizado por muchos años y se ha demostrado que permite recuentos mayores de placas que el procedimiento de placa fluida
C. Método de filtración por membrana (PPM)
La técnica de filtración por membrana es una de las herramientas más versátiles para un microbiólogo del agua y la mayoría de los
Microbiología acuática
analistas conocen el procedimiento de filtración por membrana para la determinación de coliformes totales.
El uso del método de filtración por membrana para el recuento de heterótrofos permite examinar grandes volúmenes de aguas turbias y es particularmente útil cuando el recuento es bajo.
Las ventajas del procedimiento de la filtración por membrana es que requiere menos tiempo y espacio para la incubación y materiales.
El recuento de colonias en los filtros de membrana blancos puede ser un problema debido al tamaño pequeño de la colonia para algunas bacterias y la falta de contraste entre las colonias no pigmentadas y la membrana blanca.
Este problema se puede resolver al ajustar la fuente de luz en un ángulo bajo a fin de crear un efecto de sombreado o al inclinar la placa y volver a enfocar el microscopio. Esta última manipulación requiere un reajuste continuo del microscopio pero funciona bien para los filtros de membrana con cuadrículas.
SEGUN LA NORMA, TENDREMOS EN CUENTA LO SIGUIENTE, PARA NUESTROS CALCULOS:
Microbiología acuática
V. MATERIALES:
Para la dilución: Diluyente es SSFE.
Pipetas de 10 y 1 ml.
Placas estériles.
Medio de cultivo: agar PLATE COUNT o agar de recuento.
Muestra: Agua de Río…………………….
VI. PROCEDIMIENTO:
1. Preparación de materiales: rotular las placas: numero de muestra, dilución, fecha y Tº en la tapa. Y tomar las características físicas de la muestra, como: olor, color, turbidez, sedimento, pH y temperatura.
Microbiología acuática
2. Preparación de las diluciones:
La muestra inicial debe estar homogenizada y nunca en reposo.
100 102
Microbiología acuática
1 ml de muestra
99 ml de SSFE
Muestra inicial
1 ml 0.1ml 1ml 0.1ml
100 10-1 10-2 10-3
ESQUEMA DE LA PREPARACION RÁPIDA DE DILUCIONES
100 Para esta dilución se tomo 1 ml de la muestra y se sembró un placa( método de placa fluida)
10-1para esta dilución se tomo 0.1 ml de la muestra y se cultivo en placa fluida
10-2 Para esta dilución se llevo 1 ml de la muestra en 99 ml de SSFE. Una vez preparada se tomo un 1 ml de esta solución y se sembró en placa
Microbiología acuática
10-3 de la dilución anterior se tomo 0.1 ml y se sembró en placa vertida
Microbiología acuática
Uso de material estéril Preparación de las diluciones
3. Preparación de la muestra:
Agitar la muestra, si se tiene partículas van a ir al fondo entonces los microorganismos también irán al fondo. Se dan movimientos fuertes 20 a 25 veces evitando la formación de espuma y utilizar la muestra rápidamente.
4. Siembra:
El medio de cultivo debe estar listo, licuado y enfriado a 45 a 48º C. Se coloca la muestra de la manera indicada según el esquema anterior y se agrega el medio de cultivo se deja reposar 5 minutos y luego incubamos 24 horas y hacemos la primera lectura y luego se deja 48 horas más a 35º C.
Microbiología acuática
Sembrando según técnica de la placa fluida
Colocando inmediatamente el medio PLATE COUNT
5. Lectura:
Se seleccionan las placas cuyos recuentos están comprendidos entre 30 y 300 UFC. Si las placas tienen un recuento menor de 30 anotar el número de colonias y multiplicamos por la inversa de la dilución. Si el número de colonias no está comprendido entre 30 y 300 y se excede de 300 seleccionar la placa cuyo recuento este próximo a 300 y multiplicar por la inversa de la dilución. Si no han desarrollado en las placas ninguna colonia comunicamos un valor inferior a una vez a un reciproco de la dilución más baja. El reporte de datos se da en UFC/ml.
Microbiología acuática
Placas después de realizar el conteo de las colonias
Microbiología acuática
Dilución 10
Recuento: 784 UFC
Dilución 10-1 (Incubación Medio Ambiente)
Recuento: 299 UFC
Dilución 10-1 (Incubación Estufa – 35°C)
Recuento: 320 UFC
Microbiología acuática
Dilución 10-3(Incubación – 35°C)
Recuento: 14 UFC
Dilución 10-2 (Incubación Estufa – 35°C)
Recuento: 30 UFC
VII. RESULTADOSDE LAS MUESTRAS ANALIZADAS
RESULTADOS DE LA MUESTRA ANALIZADA EN EL CASERIO RACA RUMI- CHONGOYAPE
Tipo de muestra: líquida, agua de ríoProcedencia: RíoLugar: Distrito de ChongoyapeMuestreador: Grupo 4Fecha: 26 de septiembre del 2012Cantidad: 450 mlPh: 7Temperatura: 21ºCResponsable: Yesica Monteza Salazar
Características Físicas De La Muestra: Color límpido, sin olor característico, pocas partículas en suspensión. Sin sedimento
Dilución Método de recuento en placa fluida
Temperatura Ambiente Temperatura 35°C
10o 789 Se trabajó mal
10-1 299 320
10-2 40 30
10-3 10 14
* No se trabajará con las últimas diluciones ya que están fuera del intervalo 30-300
=30+402
=3500 UFC
3.5x103 UFC/ml
VIII. INTERPRETACIÓN
Microbiología acuática
De acuerdo a los resultados presentados las muestras de AGUA PARA CONSUMO HUMANO, realizado y según lo establecido en el Reglamento de los Límites Máximos Permisibles del D.S. Nº 031-2010-MINSA (AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO) que establece los parámetros y límites máximos permisibles que debe tener toda agua de consumo/uso humano:
El agua muestreada y analizada en el Laboratorio de Microbiología - Facultad de Ciencias Biológicas de UNPRG, NO CUMPLE con la reglamentación correspondiente en el parámetroevaluado: Recuento de heterótrofos en placa fluida; la muestra proveniente del Caserío Raca rumi - Chongoyape no está dentro del límite permitido para aguas de consumo pues sobrepasa las 500 UFC/ml.
X. CONCLUSIÓN
La muestra analizada presenta un recuento de heterótrofos de 35x102 UFC/ml, y no es apta para el consumo humano.
XI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioAguas.htm
http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/
2010/05/PRT-712.02-072%20V%203%20Rto
%20heterotrofos.pdf
http://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/
gdwq3_es_fulll_lowsres.pdf
http://www.ispch.cl/lab_amb/doc/microbiologia_alimentos/PRT-
072.pdf
http://www.watersolutionsperu.com/pdf/analisis_cerper.pdf
Microbiología acuática