recuento de bacterias heterótrofas 2015ii
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Descripción del procedimiento e interpretacion de resultados.TRANSCRIPT
RECUENTO DE BACTERIAS HETERÓTROFAS
INTRODUCCIÓNBacterias heterótrofas son aquéllas que necesitan materia orgánica como
fuente de energía, al contrario de las bacterias autótrofas.
El recuento de bacterias heterótrofas proporciona un recuento aproximado
del número total de bacterias viables, lo que suministra valiosa información sobre
la calidad del agua y puede aportar datos que respalden el significado atribuido a
los resultados de los análisis de coliformes.
El recuento heterótrofo en placa es útil para valorar la eficacia de los distintos
procesos de tratamiento y puede tener una importante aplicación como análisis del
control dentro de una planta depuradora. También es útil para controlar la calidad
final del agua de un sistema de distribución, como indicador del recrecimiento de
microorganismos y de la acumulación de sedimento en secciones de circulación
lenta y en extremos muertos. También permite comprobar si el transporte del agua
ha sido correcto.
Frecuentemente las muestras que hay que estudiar tienen un número muy
elevado de microorganismos, por lo que se requiere diluirlas para poder contarlos.
Para ello se realizan diluciones seriadas, que posteriormente se siembran en
placas con medios de cultivo.
Existen varios métodos, con medios de cultivos diferentes, según las
características de los microorganismos y del medio a examinar.
La ley de aguas estipula que para realizar el recuento de heterótrofos hay
que contabilizar las colonias que se forman de una célula aislada y se denomina
UFC.
Se usa temperaturas de 37º para determinar patógenos y de 25º para
determinar bacterias ambientales.
Según INDECOPI para el Recuento de Heterótrofos en placa de acuerdo con
la Metodología: SMEWW-APHA AWWA-WEF.Part 9215 B, 22 nd Ed.
2012.Heterotrophic Plate Count.Pour Plate Method; el parámetro es dado por el
Ministerio de Salud en el D.S. Nº 031-2010-MINSA que es de 500 UFC/ml a 35°C.
OBJETIVOS Conocer el procedimiento de recuento de bacterias heterótrofas mediante el
método de la placa fluida.
Conocer el número de bacterias heterótrofas en una muestra de agua.
Determinar la calidad sanitaria del agua.
I. FUNDAMENTOLas bacterias heterotróficas (heterótrofas) se definen como aquellas
bacterias que usan compuestos del carbono orgánico como fuente de energía y
el carbono para su crecimiento, en contraposición con las bacterias autotróficas
que utilizan los compuestos inorgánicos como fuente de energía y el C02, como
fuente de carbono. Esta definición de bacteria heterótrofa es amplia e incluye
tanto a las bacterias saprofíticas como a las patógenas. Por lo tanto, tanto las
bacterias que causan como las que no causan enfermedades son heterótrofas.
Los medios para el recuento heterotrófico en placas (RHP) empleados para
enumerar los heterótrofos encontrados en el agua se consideran medios no
selectivos porque no tienen compuestos inhibitorios ni selectivos para un
determinado grupo de bacterias. Las condiciones de incubación, incluida la
temperatura, pueden ser selectivas y por consiguiente tales condiciones deben
estar especificadas para las bacterias particulares que se procura detectar o
enumerar.
El RHP es un procedimiento sencillo que se puede realizar por el método de
placa fluida, difusa o filtración por membrana (FM) y es una herramienta muy útil.
Aunque no es esencial para evaluar la seguridad del agua potable, los resultados
del RHP proporcionan información que complementa los resultados de los
coliformes totales.
El RHP se puede usar para indicar la composición bacteriana general del
agua de la fuente y la eficacia y eficiencia de los procesos de tratamiento del
agua, como la sedimentación, coagulación, filtración y cloración. El monitoreo del
RHP en el agua distribuida puede proporcionar información sobre la limpieza del
sistema de distribución, desarrollo de bacterias después del tratamiento, efectos
de los cambios de temperatura en el agua y del cloro residual en la población
bacteriana.
Método de placa fluida (MPF).- Este método para el análisis del RHP de las
muestras de agua presenta algunas desventajas que limitan la recuperación de
las bacterias. Como usa agar licuado a una temperatura de 44 a 46 °C, las
bacterias en la muestra de agua están expuestas a la presión del calor, lo cual
puede hacer que los microorganismos no sean viables. Además, como se
emplea un medio rico en nutrientes, es probable que las bacterias
fisiológicamente estresadas o dañadas no se desarrollen debido a alguna forma
de inhibición metabólica. Tanto la presión del calor como el medio de crecimiento
rico producen una recuperación reducida de las bacterias. Otra desventaja es
que mediante este método sólo se puede analizar un máximo de 1,0 ml de
muestra.
II. MATERIALES Muestras:
o M. 3: Agua de pozo.o M. 4: Agua de grifo 1.
Pipetas de 1 ml – 10 ml Placas Frascos Botellas Agar Plate Count
III. PROCEDIMIENTOSMétodo de placa fluida1. Homogenizar la muestra (agitar 25 veces la muestra de agua antes de verter
en placa)
2. Con una pipeta estéril aplicar la cantidad de muestra respectiva para cada dilución.
Para la dilución 100 y 10-1 se toma 1 ml y 0.1 ml respectivamente de la muestra original y se vierte en placa e inmediatamente se le agrega el agar (Agar Plate Count) diluido.
Para la dilución 10-2 y 10-3, se diluye 1 ml de muestra en 49.5 ml de diluyente.
De la dilución se toma 1 ml y 0.1 ml para tener las diluciones 10 -2 y 10-3
respectivamente y se vierten en placas y se agrega inmediatamente el agar diluido.
3. Mover las placas homogéneamente para que la muestra se extienda por toda la placa. Luego dejar que se solidifique el medio e Incubar.
Temperatura ambiente 35°C 24 a 48 horas.
Luego se midió el pH de la muestra de agua.
IV. RESULTADOSPara el recuento se toma las placas cuyo número de colonias este en entre 30-
300 y se multiplica por el factor de dilución.
Conteo:100: + 300 colonias 10-1: +300 colonias 10-2: 280 colonias 10-3: 253 colonias
MUESTRA N° 3
Temperatura Ambiente
Temperatura a 35°C
Conteo:
100: +300 colonias 10-1: + 300 colonias 10-2: 99 colonias 10-3: 26 colonias
Conteo:
100: 225 colonias 10-1: 174 colonias 10-2: 110 colonias. 10-3: 62 colonias
MUESTRA N° 4
Temperatura Ambiente
Temperatura a 35°C
Conteo:
100: + 300 colonias 10-1: 46 colonias 10-2: 11 colonias 10-3: 9 colonias
Recuento= (Σt. Ambiente + Σt.35°C) UFC/ml
TABLAS DE RESULTADOS
MUESTRA N° 3
T. AMBIENTE T. 35°C PROM. UFC UFC/ml100 +300 UFC + 300 UFC -10-1 + 300 UFC + 300 UFC -10-2 99 UFC 280 UFC 189.5 UFC 19 x 104
10-3 26 UFC 253 UFC 139.5 UFC 14 x 105
Recuento: 165 UFC/ml
MUESTRA N° 4
T. AMBIENTE T. 35°C PROM. UFC UFC/ml100 225 UFC + 300 UFC -10-1 174 UFC 46 UFC -10-2 110 UFC 11 UFC 60.5 UFC 61 x 103
10-3 62 UFC 9 UFC 35.5 UFC 36 x 104
pH:
8
Recuento: 48 UFC/ml
V. INTERPRETACÍON La muestra N° 3 presenta 165 UFC/ml. Esta dentro del rango establecido
por el MINSA. La muestra N° 4 presenta 48 UFC/ml. Esta dentro del rango establecido por
el MINSA.
Rango – MINSA: <500 UFC/ml
VI. CONCLUSIONES
Se logró determinar la presencia de heterótrofos en el agua.
Se logró determinar la calidad higiénica del agua la cual es apta para el consumo humano.
Se logró determinar la alcalinidad en la que se encontraba la muestra de agua.
VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:
Madigan, M., J. Martinko y J. Parker, “BROCK BIOLOGIA DE LOS
MICROOORGANISMOS”-8va Edición-Ed. Prentice May-1064pp.
Donald J. Reasoner, Ph.D. Recuento heterotrófico en placas División de
Contaminantes Microbiológicos, WSWRD, NRMRL Agencia de Protección
Ambiental de los Estados Unidos Cincinnati, Ohio 45268. Tomada el 12 de
junio del 2015 de
http://www.bvsde.paho.org/bvsala/e/fulltext/recuento/recuento.pdf.
http://www.digesa.minsa.gob.pe/publicaciones/descargas/
reglamento_calidad_agua.pdf