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Proyecto de tesis en hongosTRANSCRIPT
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES
PROYECTO DE TESIS
RESISTENCIA NATURAL DE LA MADERA DE Schizolobium amazonicum
Huber ex Ducke (Pino chuncho) AL ATAQUE DE DOS HONGOS
XILOFAGOS EN CONDICIONES IN VITRO
PROGRAMA DE INVESTIGACIÓN: Transformación de los recursos forestales
LINEA DE INVESTIGACIÓN : Evaluación del potencial forestal con fines
de transformación
EJECUTOR : NIETO BALDEÓN, Fohnclark Maceo
ASESOR : Ing. Msc. RUIZ RENGIFO, Ladislao
LUGAR DE EJECUCIÓN : Laboratorio de microbiología
DURACIÓN DE TRABAJO : 6 meses
Tingo María – Perú
2014
I. INTRODUCCIÓN
La Amazonía posee recursos forestales inmensos, albergando un
tercio de los bosques tropicales del mundo, donde el aprovechamiento
sostenible de los recursos forestales maderables requiere necesariamente de
la utilización de la biodiversidad de especies. Schizolobium amazonicum Huber
ex Ducke (Pino chuncho) según World Wide Fund for Nature WWF (2004) se
ha utilizado históricamente a nivel regional como poste y leña. No obstante, no
existe un aprovechamiento intensivo debido fundamentalmente a que no se
conoce su durabilidad natural y no le permitiría hacer frente a las diversas
condiciones ambientales. En el país existen escasos antecedentes sobre la
durabilidad de las maderas, tanto de especies nativas como exóticas. Por ende
la madera es un material que tiene limitaciones en determinadas condiciones
ambientales y de servicio, y es necesario solucionar los inconvenientes que
limitan su uso, por tanto el conocimiento de la resistencia al ataque de agentes
micoticos xilófagos, para determinar su durabilidad natural, es importante ya
que contribuye a la adecuada utilización de este producto y además brinda
información sobre su uso al estado natural.
Como parte del estudio tecnológico de maderas es necesario
efectuar ensayos de laboratorio para determinar la resistencia a la pudrición de
la madera. LOAYZA (1979) afirma que debido al corto período de
experimentación y a la facilidad de su rápida adopción para probar nuevos
productos al ataque de hongos, los ensayos de laboratorio son ventajosos con
relación a las de campo.
Una de las limitantes de la madera de Schizolobium amazonicum
Huber ex Ducke es la reducida información sobre el grado de resistencia a la
pudrición blanca, en consecuencia los productores tienen algunas dificultades
en el proceso de extracción y transformación mecánica. VALDERRAMA (1993)
sostiene que la madera de Schizolobium amazonicum Huber ex Ducke (Pino
chuncho) es susceptible al ataque biológico. De acuerdo a lo expuesto se
plantea la siguiente interrogante ¿Cuál será el grado de resistencia que tendrá
al ataque de dos hongos xilófagos en la madera de Schizolobium amazonicum
Huber ex Ducke en condiciones in vitro? Teniendo como hipótesis: la madera
de Schizolobium amazonicum Huber ex Ducke (Pino chuncho) es resistente a
la pudrición ocasionada por Schizophyllum commune Fries y Polyporus
sangineum L ex Fr. en condiciones in vitro.
1.1. Objetivo general
Determinar la resistencia natural de la madera de
Schizolobium amazonicum Huber ex Ducke (Pino chuncho) al ataque de dos
hongos xilófagos según las especificaciones de la Norma ASTM D 2017 – (96).
1.1.1. Objetivos específicos
Determinar el comportamiento de la resistencia natural de
la madera Schiolobium amazonicum Huber ex Ducke (Pino chuncho), al ataque
de hongos xilófagos Schizophyllum commune Fries y Polyporus sanguineus L
ex Fr, en los niveles bajo, medio y apical del fuste, en condiciones in vitro,
según la clasificación establecida en la Norma ASTM D 2017- (96).
Comparar las diferencias estadísticas en el grado de
resistencia a la pudrición blanca de la madera Schiolobium amazonicum Huber
ex Ducke (Pino chuncho) procedente de diferentes niveles del fuste.
Aislar el medio de los hongos xilófagos de pudrición blanca
de Schizophyllum commune Fries y Polyporus sanguineus L ex Fr.
II. REVISIÓN DE LITERATURA
2.1. Generalidades
2.1.1. Schizolobium amazonicum Huber ex Ducke
Clase : MAGNOLIOPSIDA
Subclase : ROSIDAE
Orden : FABALES
Familia : FABACEAE
Género : Schizolobium
Especie : amazonicum
Nombre cientifico : Schizolobium amazonicum
Nombre comun : Pino chuncho
2.1.1.1. Ecología y distribución
Según REYNEL (2003), manifiesta que la especie se
encuentra distribuida en el Perú, en los departamentos de Amazonas,
Huánuco, Madre de Dios, San Martin a un nivel de 1200 m.s.n.m,
asimismo indica que es una especie con tolerancia heliofita de rápido
crecimiento, presente en bosques secundarios tempranos y tardíos,
además de encontrarse en claros de bosques primarios.
2.1.1.2. Descripción dendrológica de la especie
El Pino chuncho es un árbol que alcanza hasta 35 m de
altura, con fuste recto y cilíndrico, con un diámetro de hasta 1 m, raíces
engrosadas. La copa es alargada y abierta formada por hojas
compuestas bipinnadas, alternas. (REYNEL, 2003).
2.1.1.3. Aspectos reproductivos / propagativos
Nº de semillas por kilogramo: 1300 – 1600, porcentaje de
germinación: 52 % semillas frescas, en condiciones ambientales de
laboratorio, temperatura media 24.6 °C y humedad relativa media 65 %
(ROJAS, 1991).
Tiempo de conservación de la semilla: Semillas
almacenadas en refrigeradora a 5 °C Durante 22 meses, observan un 14
% de porcentaje de germinación, tratamientos pre germinativo: 88 % con
las mismas semillas de 22 meses de almacenaje en refrigeradora a 5 °C
y con un tratamiento de inmersión en agua hirviendo hasta su
enfriamiento. En otro ensayo obtiene entre 76 a 96 % con semillas
frescas, con un tratamiento de agua hirviendo dejando enfriar 3 minutos
antes de poner la semilla. (ROJAS, 1991).
2.1.1.4. Distribución natural
País: Amazonía del Perú, Brasil, Ecuador, Colombia y
Bolivia. Probablemente introducida en Paraguay y México
Tipos de bosque: Habita en bosques secundarios,
periódicamente inundados (Loreto y Ucayali). Abundante en bosques
secundarios (San Ramón, Pichanaki), Regeneración natural abundante
en Selva Central y distribuido en riberas de ríos de las provincias de
Oxapampa, Chanchamayo y Satipo
Tipos de suelo: ULTISOL, ENTISOL, INCEPTISOL. (ROJAS,
1991).
2.1.1.5. Descripción de la madera
PROMPEX, (2000) menciona que la madera es suave y
liviana, muestra poca diferencia entre la albura que presenta un color
blanco cremoso y el duramen que es de coloración café rojizo pálido, de
olor y sabor no distintivos, presenta granos entrecruzados y de textura
gruesa.
Presenta ciertas características tecnológicas, densidad
básica (g/cm3) de 0.49, contracción tangencial (%) de 4.80 y contracción
radial (%) de 4.56.
2.1.1.6. Usos
Conservación: Para recuperación de tierras degradadas,
mejora y conservación de suelos, revegetación y ornamental
Madera: Muebles sencillos, machihembrado, potencial para
pulpa y papel, cajonería, palitos de fósforo y mondadientes
No maderable: Apreciado por su valor melífero y polinífero.
(SOTELO, 1992).
2.1.2. HONGOS
Los hongos xilófagos empleados para la investigación se
clasifican dentro de la clase: Basidiomicetes.
2.1.2.1. Características generales
BECKER (1976) menciona que los más importantes
destructores de la madera son los hongos e insectos que utilizan los
compuestos de la madera para alimentarse. Estos organismos ayudan a
mantener en equilibrio la naturaleza al transformar los compuestos
químicos de la madera en sustancias vitales para nuevas vidas. Al
mismo tiempo constituyen un problema para la sociedad empeñada por
prolongar la vida útil de los productos de maderas. Hay una sucesión
natural de los agentes biológicos destructores de la madera que se
presentan en función al contenido de humedad. La madera rolliza con
alto contenido de humedad es susceptible de ser atacada por insectos
de la familia Escolitiladae, comúnmente denominados insectos
descortezadores.
Según NOVOA (2006) la constitución de los hongos es
relativamente simple, el cuerpo fructífero se conforma de células
individuales llamadas hifas, células muy finas, con un diámetro de
aproximadamente 2u.m., microscópicas que poseen ramificaciones y
paredes transparentes conformadas por quitina. El micelio mediante la
secreción de enzimas se encarga de suministrar alimento a los hongos,
por lo tanto, tanto las hifas como el micelio son los verdaderos
destructores de la madera. Los hongos se desarrollan mediante las
esporas que son las responsables de su propagación, y se producen
dentro de los cuerpos fructíferos que dan lugar a los principales grupos:
Agaricales y Polyporales. Existen muchas variedades de hongos que
utilizan a la madera como fuente de alimentación y los daños producidos
por estos organismos pueden originarse incluso cuando un árbol está en
pie.
2.1.2.2. Factores que influyen en desarrollo de los hongos
NALVARTE (1996) opina que el desarrollo de estos
organismos, es necesaria la existencia de ciertos factores
indispensables para su actividad fisiológica, como son:
a) Humedad: Factor de gran importancia para la
germinación, actividad enzimática, la absorción, y el transporte de sustancias;
se desarrollan entre 30 - 50%.
b) Temperatura: Los hongos necesitan de una
temperatura moderada para llevar a cabo su actividad vital, encontrándose
dicha temperatura entre 20 a 40°C, finalizando toda actividad por debajo de los
3°C.
c) Oxígeno: Los hongos pertenecen al grupo de
organismos aerobios y su respiración es posible cuando existe oxígeno en el
ambiente en el cual se encuentran.
d) pH: La germinación de las esporas y el crecimiento
del micelio dependen en gran parte del valor del pH, las maderas presentan un
valor cercano a 5 y se sabe que los valores óptimos para el desarrollo de los
hongos están entre 5 y 6, es decir en un medio ligeramente ácido.
e) Alimento: La madera constituye el alimento de los
hongos, y en la mayoría de los casos, no pueden alimentarse directamente de
ella, sin embargo lo hacen mediante la acción de enzimas que ellos mismos
segregan, descomponiéndola en sustancias más simples y fácilmente
asimilables.
2.1.3. Hongos cromógenos
Los hongos cromógenos son los que producen manchas en
la superficie de la madera, siendo uno de los más comunes la mancha
azul; se presentan en madera almacenada, aserrada y en trozas; esta
coloración no puede ser eliminada, desvalorizando el material para
algunos usos. Se alimentan de sustancias de reserva en las células
parenquimáticas de la albura, las hifas penetran a través de los radios
leñosos mediante presión mecánica del extremo de las hifas, sin
secreción de ectoenzimas que producen la lisis de la pared celular, por
esta razón estos hongos no alteran las propiedades físicas y mecánicas
de la madera (GUEVARA, 1986)
2.1.4. Mohos
Son hongos que desarrollan su micelio en la superficie de la
madera, penetrando las hifas en el interior a poca profundidad y
ocasionando coloraciones o manchas, las cuales, junto con una pelusa
blanquecina, pueden eliminarse mediante un cepillado leve. Se
alimentan de sustancias de reserva depositadas en el interior de las
células parenquimáticas de la albura, no dañando las paredes celulares,
por lo que no alteran las propiedades mecánicas de la madera afectada.
(GUEVARA, 1986).
2.1.5. Pudrición
Referida a la degradación de la madera en sus componentes
químicos. La madera está conformada fundamentalmente por lignina y
celulosa, sustancias muy apetecibles para los hongos de la pudrición
(GUEVARA, 1986).
2.1.5.1. Pudrición blanca
Estos tipos de hongos descomponen todos los elementos de
la pared celular, entre ellos la lignina, mediante la acción de sus
ectoenzimas, la madera afectada pierde su color característico, se
vuelve fibrosa y se rompe con facilidad. La lignina se encuentra como
material de incrustación en la lámina media y paredes celulares de la
madera, por tratarse de un proceso de oxidación y no de hidrólisis, los
hongos que degradan lignina deben poseer enzimas catacolasas o
difenil oxidasas. (KOLLMAN, 1959).
2.1.5.2. Pudrición marrón o parda
La madera que presenta este tipo de pudrición tiene una
apariencia resquebrajada en sentido transversal a la fibra, se la conoce
también como pudrición cúbica o rómbica, pierde peso afectando sus
propiedades físico - mecánicas. Este tipo de pudrición se caracteriza por
la degradación de la celulosa a través de una acción enzimática, es un
proceso complicado, la 23 cadena de celulosa formada por unidades B-
D glucosas que es el monómero que se halla unido por enlaces
glucosídicos B. (KOLLMAN, 1959).
2.1.6. Características de los hongos
2.1.6.1. Pycnoporus sanguineus L ex Fr.
a) Posición taxonómica
Reino : Fungi
Phylum : Basidiomycota
Clase : Agaricomycetes
Sub-clase : Gymnocarpi
Orden : Polyporales
Familia : Polyporaceae
b) Distribución
Bondarsetv (1981), menciona que es una especie
cosmopolita que se desarrolla en zonas templadas como en tropicales
crecen en la primera mitad del verano sobretocones y ramas de árboles.
SENASA (2008) ,reporta esta especie sobre maderas en : Rio Tambo en
Satipo, Junín; Iñapari en Tahuamanu y Las Piedras en Tambopata,
Madre de Dios, Rioja en San Martin, Sepahua en Atalaya y aserraderos
de Manantay , Coronel Portillo en Ucayali.
c) Sintomas
Pycnoporus sanguineus al degradar preferentemente la
lignina produce un deterioro de la pared de las células de madera del
árbol, dejándolo al final con las fibras celulosas sueltas y disgregadas
con un aspecto de color blancuzco
d) Características Macroscópicas y Microscópicas
El cuerpo fructífero o basidiocarpo se caracteriza por ser
sésil o atenuado en la base a sub- estipitadode 0.78 mm, de
consistencia membranosa flexible cuandoestá fresco, coriáceo cuando
está seco; el píleo o sombrero es flabeliforme o en forma de abanico de
3 a 8.5cm de ancho y de 1.8 a 4.5 de altura; superficie de color naranja
rojizo, brillante, glabro o sin presencia de pelos y suave al
tacto.Comestible, colectado en plantación de “achiote” sobre troncos,
ramas secas y madera quemada.
2.1.6.2. Schizophyllum commune Fries
a) Posición taxonómica
Reino : Fungi
Phylum : Basidiomycota
Clase : Basidiomycetes
Orden : Agaricales
Familia : Schizophyllaceae
b) Distribución
FERNANDEZ (2011) Probablemente es el hongo más
generalizado en existencia, encontrándose en todos los continentes
excepto la Antártida, donde no hay ninguna madera para utilizarse como
un sustrato. Su nombre significa “gill de división” y, por tanto, este es el
hongo de gill de división. No parece estar muy estrechamente
relacionadas con el otro gilled setas y la mayoría de los investigadores
colocaron en su propio orden el Schizophyllales. La función de agallas
para producir hialinos en su superficie. Parecen dividirse porque puede
secarse y rehidratarse (y así abrir y cerrar) muchas veces a lo largo de
una temporada de crecimiento. Tiene una gran adaptación para un clima
con lluvias esporádicas.A diferencia de otras especies de setas, el
micelio solo tiene que producir un conjunto de fructificación por año, que
luego puede secarse y rehidratarse y mantener en funcionamiento.
c) Síntomas
FERNANDEZ (2011) Es un hongo de decaimiento de
madera muy exitoso que causa una podredumbre blanca.
d) Características macroscópicas y microscópicas
Macroscópicamente, presenta Píleo de 0.4 a 2.5 cm de largo
y 0.7 a 3.0 cm de ancho; con forma de concha, espatulado a
semicircular; superficie cubierta por pelos finos y suaves de color blanco
a gris-rosáceo. Contexto de 0.1 a 0.3 cm de ancho, gris rosáceo. Olor y
sabor no distintivos. Himenio formado por lamelas grises, algunas veces
con tonos rosáceos, próximas, dispuestas radialmente, con pelos suaves
y finos en el dorso, de 0.1 a 0.2 cm de ancho; con lamélulas. Cuerpos
fructíferos adheridos lateralmente al sustrato, aunque algunos pueden
presentar un estípite pequeño de 0.3 a 0.8 cm de longitud y 0.3 a 0.5 cm
de ancho, con las mismas características de textura de la superficie del
píleo. Esporada blanca.
Microscopicamente presenta Las esporas miden de 3.0 a 5.0
por 1.0 a 2.0 μm, cilíndricas a ovaladas, hialinas y lisas. Los basidios
miden de 15.0 a 22.0 por 4.0 a 5.0 μm, hialinos, cilíndricos, con la base
angosta.
2.1.7. Efectos del ataque de los hongos de pudrición sobre las
propiedades de la madera
Estos hongos al desarrollarse pueden producir alteraciones
importantes en las características físicas y químicas de la madera
infectada, dependiendo de la intensidad de la pudrición y de efectos
específicos de los microorganismos. Los efectos de estos organismos
sobre la madera son:
a) Alteraciones de la composición química.
b) Disminución de peso.
c) Reducción de la resistencia.
d) Modificación del color natural.
e) Reducción de la capacidad acústica.
f) Incremento de inflamabilidad.
g) Disminución del poder calorífico
2.1.8. ASTM. NORMA – D1413-96
Es una buena herramienta para una evaluación acelerada
de la durabilidad de batidos tratados. De manera que cada especie de
madera puede ser analizada por separado. Interpretadas de la
consideración de que se requiere y resultando la distribución y los datos
mediana o la media de pérdida de peso para cada tratamiento.
III. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1. Ubicación
3.1.1. Ubicación política
El trabajo se desarrollará en el laboratorio de microbiología
de la Facultad de Recursos Naturales Renovables de la Universidad
Nacional Agraria de la Selva, políticamente ubicado en la ciudad de
Tingo María, distrito de Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, Región
Huánuco.
3.1.2. Ubicación geográfica
3.1.2.1. Lugar de procedencia de la muestra
La muestra la constituyen cinco arboles seleccionados
aleatoriamente de los especímenes de Schizolobium amazonicum Huber
ex Ducke (Pino chuncho), se extrajeron de la plantación forestal del
Centro de Investigación y Producción Tulumayo Anexo la Divisoria y
Puerto Súngaro (CIPTALD) de la Universidad Nacional Agraria de la
Selva, ubicado a la margen derecha del río Huallaga a 26 Km de la
carretera Tingo María – Aucayacu.
3.1.2.2. Laboratorio de microbiología
Geográficamente el laboratorio de microbiología de la
Universidad Nacional Agraria de la Selva, está ubicado en las
coordenadas geográficas (Longitud Oeste: 75° 59’ 52’’ y latitud Sur: 09°
17’ 08’’); a una altitud de 660 m.s.n.m., correspondiente a la Región
Selva, a la cual se accede por vía terrestre, por la carretera afirmada de
Lima a Tingo María.
3.1.3. Aspectos ambientales
Ecológicamente de acuerdo a la clasificación de zonas de
vida o formaciones vegetales del mundo y el diagrama bioclimático de
HOLDRIDGE (1982), Tingo María se encuentra en la formación vegetal
bosque muy húmedo Pre-montano Tropical bmh-PT, y de acuerdo a las
regiones naturales del Perú corresponde a Rupa Rupa o Selva Alta.
Hidrográficamente pertenece a la cuenca del río Huallaga; el
comportamiento climático es variable, con una precipitación anual pro-
medio de 3328.9 mm. Las mayores precipitaciones se producen entre
los meses de septiembre a abril y alcanza un máximo extremo en el mes
de febrero con un promedio mensual de 608.4 mm. En los últimos años
se han registrado los siguientes datos climatológicos relacionados con el
proyecto (Estación meteorológica José Abelardo Quiñones, 2010):
Temperatura máxima : 30,70 º C
Temperatura mínima : 18,90 º C
Temperatura promedio : 24,90 º C
Humedad relativa promedio : 86 %
Velocidad del viento máxima : 22,2 m/s
3.2. Unidades en estudio
Schizolobium amazonicum Huber ex Ducke (Pino chuncho).
3.3. Procedimiento para recolección de datos
2.1.9. Trabajo de campo
El trabajo se realizará, con el apoyo de los profesores de la
facultad de Recursos Naturales Renovables en una plantación de pino
chuncho” que nos permitirá el aprovechamiento de dicha especia para el
siguiente estudio.
2.1.9.1. Seleccionado de árboles y marcado
Los árboles de la especie Schizolobium amazonicum Huber
ex Ducke (Pino chuncho) serán seleccionadas teniendo en cuenta sus
características fitosanitarias, morfológicas, dap y fuste comercial. Cada
árbol seleccionado se marcó y codifico con una clave de números
correlativos. La muestra lo constituyen cinco arboles seleccionados
aleatoriamente de los especímenes inventariados en la prospección.
2.1.9.2. Preparación de la madera y codificación
Los arboles previamente ya seleccionados se tumbaran,
luego se cortaron la trozas en dimensiones de 1.5 m de largo ,
codificando cada troza con números, obteniéndose de cada árbol
rodajas de 15 cm de espesor teniendo en cuenta la base , el medio y la
parte del ápice de la troza, las mismas que fueron aserradas siguiendo
los planos de orientación. Obteniendo tablas que fueron codificadas con
una clave que mostraba el nivel y número de la troza con su respectiva
orientación.
Pch1 B1 Especie: Pch (Pino chuncho), numero de troza: 1,
2, 3, 4 Y 5, nivel de troza: B (BASE), M (MEDIO) y A (APICE).
2.1.10. Trabajo de laboratorio
Para la ejecución del presente trabajo se tomara en
consideración los lineamientos indicados en la norma ASTM D 2017-
81(86).
2.1.10.1. Preparación de probetas de ensayo
Las probetas se prepararán en una sierra de disco con
dientes diamantados, inmediatamente con una lija se eliminaran los
residuos de aserrín y astillas de madera.
2.1.10.2. Preparación del medio de cultivo
Se preparara el medio de cultivo por disolución en agua
destilada caliente y uniformización por agitación manual hasta la
ebullición. Luego se esterilizo en autoclave a una temperatura de 121c y
15 lb de presión por espacio de 20 min.
2.1.10.3. Multiplicación de hongos en estudio
Para la siembra y cultivo de los dos hongos en estudio se
emplearan placas Petri con 30 ml de medio de cultivo Potato – Dextrose
- Agar, colocando en cada placa una rodaja pequeña de 0,5 cm de
diámetro con el cultivó del hongo desarrollado, para cada hongo se
realizara 6 repeticiones con la finalidad de eliminar posibles
contaminaciones de esta forma obtendremos cultivos puros los cuales
utilizaremos en las cámaras de pudrición. Luego de sembrar las placas
se llevaran a la cámara de incubación a una temperatura de 25c y
humedad relativa de 50% donde se dará lugar al desarrollo de los
hongos por espacio de 7 días.
2.1.10.4. Preparación de cámaras de pudrición
Se preparan 120 cámaras de pudrición, previamente fueron
lavadas, secadas y esterilizadas a una temperatura de 121c y 15 lb de
presión por espacio de 15 minutos luego se traspasan 15 ml de medio
de cultivo caliente y líquido a cada frasco de vidrio. Se dejan enfriar y se
colocan en posición horizontal sobre una superficie previamente
desinfectada con una solución de hipoclorito de sodio al 10%.
2.1.10.5. Inoculación de hongos a las cámaras de pudrición
Las cámaras esterilizadas que ya posee en su interior el
medio de cultivo serán inoculadas con pequeños trozos de cultivo de los
hongos xilófagos seleccionados para el experimento y serán
introducidas en la cámara de incubación a 27 ± 2 °C de temperatura y 70
% de humedad relativa hasta que el micelio cubra no menos de la mitad
de la superficie del medio de cultivo.
2.1.10.6. Acondicionamiento de las probetas de ensayo
Todas las probetas serán identificadas con: su número de
probeta, nivel de árbol y código de la especie de hongo en prueba y
colocadas en la regulada a 103 ± 2 °C hasta que obtengan un peso
constante, se colocan por espacio de 30 minutos en una campana de
desecación provista de cloruro de calcio y después se pesan en una
balanza con 0,01 g de precisión, que se considera el peso inicial del
experimento (PI). Se introducirá una probeta en cada cámara de
pudrición utilizando pinzas y guantes quirúrgicos esterilizados. Las tapas
serán parcialmente enroscadas para propiciar el intercambio gaseoso y
la disponibilidad de oxigeno indispensable para el metabolismo de los
hongos aeróbicos.
2.1.10.7. Instalación del experimento
Dentro de las cámaras de pudrición se colocaran las
probetas sobre una lámina de vidrio que será separa ligeramente entre
el medio de cultivo y la probeta. Las cámaras de pudrición fueron
etiquetadas con los datos siguientes. Número del árbol, nivel del árbol
código del hongo atacante y número de probeta. Luego se colocaron en
el cuarto de incubación a temperatura ambiente por espacio de 90 días.
2.1.10.8. Determinación del peso final
Finalizado el periodo de exposición se retiraran las probetas
de las cámaras de pudrición, se secan en estufa hasta peso constante,
se limpian restos de micelio y se colocan en una campana de
desecación provista de cloruro de calcio por espacio de 30 minutos,
posteriormente son pesadas en balanza con 0,01 g de precisión, que se
considera el peso final del experimento.
3.4. Datos a registrar
2.1.11. Calculo de la pérdida de peso
La pérdida de peso se calculará en las probetas de
manera individual se calculara con los pesos iniciales y finales de la
exposición frente a los agentes xilófagos. Esto se calcular con la
siguiente fórmula matemática
PP = (PI – PF) / PI * 100 %
Dónde:
PP es la pérdida de peso de las probetas del experimento,
expresada en porcentaje (%)
PI es el peso inicial de las probetas del experimento,
expresado en gramos (g)
PF es el peso final de las probetas del experimento,
expresado en gramos. (g)
2.1.12. Determinación de la resistencia natural
El grado de ataque provocado por la acción de los agentes
xilófagos se determinará por diferencia de peso y los resultados
obtenidos fueron interpretados de acuerdo al criterio la norma ASTM D
2017-81(86) que se presenta en el siguiente cuadro:
Cuadro Nº 1. Criterio para clasificar la resistencia natural
de la madera al ataque de los agentes xilófagos
Categoría Pérdida de peso % Grado de resistencia al hongo de prueba
A 0 - 10 Altamente resistenteB 11 -24 ResistenteC 25 - 44 Moderadamente resistenteD 45 a mas Ligera o no resistente
3.5. Unidades y variables experimentales
2.1.13. Unidades experimentales
La unidad en estudio es el Schizolobium amazonicum Huber
ex Ducke (Pino chuncho).
2.1.14. Variables
2.1.14.1. Variables dependientes
Pérdida de peso de las probetas por ataque de hongo
xilófago.
2.1.14.2. Variable independiente
a) Especie de hongo xilófago
- H1 (Pycnoporus sanguineus)
- H2 (Lenzites erubescens)
b) Nivel longitudinal del árbol
- N1 (Base)
- N2 (Medio)
- N3 (Ápice)
3.6. Diseño experimental
2.1.15. Diseño estadístico y factores en estudio
Las 120 probetas de madera de pino chuncho serán
distribuidas al azar en las cámaras de pudrición. Obtenidos los valores
de los índices de pudrición se calcularon el promedio por especie de
hongo xilófago, niveles de los árboles, la desviación estándar y el
coeficiente de variación.
El diseño empleado para el análisis de la resistencia a la
pudrición bajo la acción de cada hongo xilófago es el diseño
completamente randomizado con arreglo factorial donde se consideraron
6 tratamientos, probetas provenientes de cinco árboles y tres niveles
longitudinales por árbol.
2.1.15.1. D.C.R con arreglo factorial (2 factores)
F1 Hongos = 2 (H1=Pycnoporus sanguineus, H2=
Schizophyllum commune)
F2 Niveles = 3 (N1= Bajo, N2= Medio, N3= Ápice)
Repeticiones = 5 (arboles)
Unidades experimentales = 6 * 5 = 30
En cada nivel se colocaran 8 probetas de las cuales 4
estarán inoculadas con Pycnoporus sanguineus y 4 con Schizophyllum
commune .de las cuales se sacara un promedio de las cuatro probetas
inoculadas por el hongo y se obtendrá un resultado.
120(probetas) / 4(probetas inoculadas) = 30 U. E
2.1.16. Modelo matemático o teórico
Yijk = m… + Ni + Hj + (NH) ij + Bk + Eijk
Cuadro 2. Arreglo Combinatorio
Arreglo CombinatorioN1 N2 N3
H1 H1 N1 H1 N2 H1 N3H2 H2 N1 H2 N2 H2 N3
Cuadro 3. Cuadro de Tratamientos
Cuadro de Tratamientos1 H1 N12 H2 N13 H1 N24 H2 N25 H1 N36 H2 N3
3.7. Análisis estadístico
Se efectuará el análisis de la variancia para determinar si
hay diferencias estadísticamente significativas si las hubiera se trabajara
con un nivel de significación del 5% en el grado de pudrición ocasionado
por cada especie de hongo. De haber diferencias significativas se
efectuara la prueba de significación de Tukey.
Cuadro 4. Análisis de Variancia (ANVA)
Causas de variación gl SC CM F
Tratamientos (t) t - 1 SCt SCt/glt CMt/Cme-Niveles (n) n - 1 SCn SCn/gln CMn/Cme-Hongos (h) h - 1 SCh SCh/gln CMh/Cme
-Niveles x Hongost-(n+h)
+1SCn*h SCn*h/gln*h CMn*h/Cme
Error (e) glT - glt Sce Sce/gleTotal (T) tr - 1
IV. PLAN DE EJECUCIÓN
Actividades 2014 2015
SETOCT
NOV DIC ENE FEB
Elaboración/aprobación del proyecto
X
Seleccionado de árboles y marcado XPreparación de la madera y codificación
X
Preparación de probetas de ensayo X
Preparación del medio de cultivo X
Multiplicación de hongos en estudio XPreparación de cámaras de pudrición
X
Inoculación de las cámaras de pudrición
X
Acondicionamiento de las probetas de ensayo
X
Instalación del experimento X X X
Interpretación de resultados X X
Redacción X X
Sustentación X
V. PRESUPUESTO
Código Justificación del gasto Sub total (S/.) Total (S/.)1 Bienes de consumo. 5911.1. Material biológico:
1.1.1.Certificacion de Zepas de hongos
50
1.2. Material de laboratorio:1.2.2. Lejia 21.2.3. Frascos 3601.3. Material de seguridad1.3.1. Botas 201.3.2. Machete 101.4. Material de escritorio:1.5.1. Papel bond A4 1201.5.3. Etiquetas 51.5.4 Cuaderno 41.5.5. Lapiceros 51.5.6. Plumones marcadores 15
2Otros servicios de terceros
570
2.1. Impresión de trabajos 2002.2. Fotostáticas 1002.3. Encuadernación del trabajo 2703 Imprevistos (10%) 121.1
GRAN TOTAL 1,282.10
VI. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
ASTM. NORMA – D1413-96Standard Method of Testing Wood Preservatives
by Laboratory Soil – Block Cultures. American Society For Testing on
Materials.
ASTM. NORMA – D2017. 80Standard Method of Accelerated Laboratory Test
of Natural decay resistance of Woods. Annual Book of ASTM Standards
Part 22.
AWPA. NORMA M10-91.Standard Method of Testing Wood Preservatives By
laboratory Soil-Block Cultures. American Wood-Preservers’ Association.
1991.
CARTWRIGHT, K. FINDLAY W, P. 1958. Decay of timber and its prevention.
Forest Products Research Laboratory. London. 101 p.
RICARDO FERNADEZ. 2011. EL SCHIZOPHYLLUM COMMUNE. SOCIEDAD
ASTURIANA DE MICOLOGÍA.
LOAYZA V, M.1982. Resistencia natural de maderas de diez especies
forestales al ataque de termites. Revista Forestal del Perú. V 11(1-2) :
32-47.1982-83.
ROJAS, C. E. 1991. Germinación de 14 especies forestales en San Ramón.
INIAA – GTZ, Documento N° 67. San Ramón – Chanchamayo. 61 p.
SOTELO, M. A. 1992. Posibilidades del Pino chuncho (Schizolobium
amazonicum Huber ex Ducke) en la Industria de cajonería. Tesis M. Sc.
UNALM – Lima. 73 p.