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PROBLEMAS DE DILUCIÓN

1) 1 ml de cultivo de bacterias se diluye con 9 ml de peptona.1/10 de ml de esta

dilución se diluye en 9.9 ml de peptona. De esta dilución 1/10 de ml se pone en

una placa con 25 ml de medio. Luego de 24 h de incubación se contaron 219

colonias. ¿Cuántas células había en el cultivo original?

1 ml 0,1ml

0,1ml

9 ml

10-1 10-3 219 colonias

10-3 = 219 x 1000 = 219000

Redondeo = 220000

Reporte = 22 x 104 UFC /ml o g

2) 5 g de yogurt se mezclan con 45 ml de agua de peptona. Se hacen dos diluciones

sucesivas de 1/100.1/10 de ml se pone en placa de la última dilución. Esto se hace

en duplicado. Luego de incubar se obtienen los siguientes resultados: 75 UFC Y 73

UFC. Calcular el número de UFC / ml o g de yogurt.

5g

0,01ml 0,1 ml

10-1 10 -4 10-6 

75UFC 73 UFC

10-6

=75000000 10-6

= 73000000 75000000 + 73000000 = 740000002

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Reporte = 74 x 106 UFC / ml o g

3) la muestra consiste de 10 ml de una dilución de 10-1 de jugo de repollo. La

asignación es hacer contaje total de placa aeróbica, tal que cada placa es una

inoculada con 0.1 ml. Se hacen en placa de siguientes diluciones: 10-2 ,10-3 , 10-4 y

10-5 . Has un diagrama del procedimiento indicado las cantidades de diluyentes einoculo a utilizar.

1ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 m10 ml 9 ml

9 ml 9 ml 9 ml 9 ml

0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml

10-2 10-3 10-4 10-5

4) Si se obtiene 120 calorías en la placa inoculada con 0,1 ml de la dilución 10 -2,

¿cuál será el UFC/ml en el jugo de repollo sin diluir?

10-2

120 UFC 120 UFC 0,1 ml

X 10 ml

X = 120 x 10 = 12000

0,1

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1.- ¿Por qué se cuentan entre 30 y 300 colonias en el método de cuenta total

estándar y que otro método de cuantificación en placa de microorganismos existe?

MÉTODO DE EXTENDIDO EN PLACA 

Es el método de elección para anaerobios facultativos y cultivo de

microaerófilos

MÉTODO DE VERTIDO EN PLACA. 

Esta técnica se usa generalmente para bacterias aerobias obligatorias.

RECUENTO POR DILUCIÓN:

Con esta técnica se logra una estimación del número de bacterias en lapoblación, que pueden multiplicarse en un medio líquido. Cualquier medio

puede emplearse, siempre que fomente el crecimiento de los

microorganismos por estudiar.El recuento por dilución es más exacto si se

inoculan varios tubos de medios de cultivos en porciones de 1 ml de cada

dilución. Varias porciones de las diluciones críticas, en estas circunstancias,

contienen un microorganismos viable y otras no lo contienen. Se han

calculado tablas para saber en un momento dado el número más probable

de bacterias en la muestra

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CUENTA ESTÁNDAR EN PLACA:

Se efectúan cuentas de colonias después de haber sembrado en la placa

cantidades alícuotas de la muestra. La cuenta estándar en placa no se

recomienda en el caso del agua porque la que contiene pocas bacterias

patógenas obviamente es más peligrosa que las que contiene muchas

saprofitas. Sin embargo, lo cual el agua es de buena calidad tenga cuentas

bajas, menos de 100 por mililitro.

PRUEBAS PARA DETERMINAR LA PRESENCIA DE BACTERIASCOLIFORME:

Varios medios selectivos diferenciales facilitan mucho el proceso paraexaminar muestras de agua en busca de microorganismos coliformes, el

examen supone tres pasos sucesivos:

a.  Prueba de presunción

b.  Prueba de confirmación

c.  Prueba de consumación.

2.- ¿Qué significa el término de unidad formadora de colonia (UFC)?

UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS.- 

Es un valor que indica el grado de contaminaciónmicrobiológica de un ambiente. 

Expresa el número relativo de microorganismos de un taxón determinado en un

volumen de un metro cúbico de agua. 

UFC es el número mínimo de células separables sobre la superficie, o dentro, de un

medio de agarsemi-sólido que da lugar al desarrollo de una colonia visible del

orden de decenas de millones de células descendientes. Las UFC pueden ser pares,

cadena o racimos, así como células individuales Unidad formadora de colonias. 

Una dilución hecha con bacteria y agua peptonada se coloca en el plato de agar

(Cuenta de plato agar para muestras alimenticias o Agar trypticase de soja paramuestras clínicas) y expandida en el plato siguiendo este patrón.

Las "Unidades Formadoras de Colonias" (ufc) se miden en (UFC por

mililitro).

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 03¿Cuáles son algunos posibles errores que se podrían cometer en el método del

número más probable y que podría afectar su precisión? 

Pruebas Bacteriológicas de Contaminación: Se presupone que el objetivo de los análisis rutinarios son para determinar la

existencia de microorganismos patógenos en el agua. Sin embargo, esto no es

verdad, por las siguientes razones:

1.  Los organismos patógenos llegan al agua en forma esporádica y no

sobreviven mucho tiempo, por lo tanto, pueden no estar en una muestra que

se envíe al laboratorio. 

2.  Si se encuentran en pequeñas cantidades, pueden pasar desapercibidos a los

procedimientos empleados.

3.  Se necesitan 24 horas o más para obtener resultados de los exámenes y si se

encuentran microorganismos patógenos, muchas personas pueden habertomado agua antes de que se conozcan los resultados, y así haberse expuestos

a la infección.

Puestos que los exámenes de laboratorio para encontrar microorganismos

patógenos en el agua tienen las desventajas enumeradas, se han desarrollado

técnicas para detectarlas en las excretas, particularmente las del grupocoliforme.

Este propósito ha probado ser satisfactorio en la práctica y tiene las siguientes

ventajas:

1.  Los microorganismos coliformes, sobre todo E. Coli, habitan constantemente

en el intestino humano en grandes cantidades.

2.  Estos microorganismos viven más tiempo en el agua que los patógenos.

3.  Obviamente, una persona sana en general, no elimina microorganismos

patógenos, pero puede desarrollársele una infección intestinal y esos

microorganismos aparecerán en las materias fecales.

Las especies clásicas de este grupo son Escherichiacoli y Enterobacteraerogenes.

La relación de estos microorganismos con otros del grupo entérico – Salmonella,

Shigella, Proteus, Pseudomonas y alcaligenes, todos los cuales son bacilos

gramnegativos no esporulados.

Como estas especies tienen gran semejanza en su aspecto morfológicos y

características de cultivo, es necesario recurrir a pruebas bioquímicas para

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diferenciarlas. Reacciones que tengan las siguientes cuatro características son muy

importantes para lograr este propósito:

1.  Capacidad para producir Indol. E. Coli lo produce, y Ent. Aerogenes no.

2.  Cantidad de ácido producida en un medio especial de caldo glucosado,

adicionado del indicador rojo de metilo. Los dos microorganismos producen

ácido de la glucosa. Sin embargo, E. Coli produce pHmás bajo, lo que hace que

vire al rojo de metilo mientras que Ent. Aerogenes no cambia el color. 

3.  Capacidad para producir acetilmetilcarbinol en un medio de peptona

glucosado. Este compuesto químico se detecta por medio de la reacción de

Voges – Proskauer. E. Coli no produce acetilmetilcarbinol mientras que Ent.

Aerogenes sí lo hace.

4.  Utilización de citrato de sodio. Ent. Aerogenes es capaz de utilizar el citrato de

sodio como su única fuente de carbono, esto es, se desarrollará en un medio

de cultivo químicamente definido en el cual el citrato de sodio es el único

compuesto de carbono. E. Coli no se desarrolla en estas circunstancias.

Por conveniencia, a estas pruebas se las ha designado en forma colectiva

reacciones IMViC (I = Indol, M = rojo de metilo, Vi = reacción Voges – Proskauer y C

= citrato).

Es necesario cuidar los siguientes detalles cuando se sometan muestras de agua a

análisis bacteriológicos:

1.  La muestra se tomará en frasco estéril.

2.  La muestra ha de ser representativa de la fuente original.

3.  Se evitará la contaminación de la muestra durante y después de obtenerla.

4.  La muestra se analizará lo mas pronto posible.

5.  Si no es posible examinar la muestra enseguida, deberá guardarse en

refrigeración entre 0 y 10 ºC.Los procedimientos bacteriológicos de rutina

son:

a. Cuenta en placas para determinar el número de bacterias. 

b. Pruebas que revelen la presencia de bacterias coliformes

Recuento por dilución: 

Se basan estos métodos en la presunción de que las bacterias se hallan

normalmente distribuidas en un medio líquido, esto es, en las muestras repetidasdel mismo tamaño de un mismo producto, debe esperarse contengan el mismo

número de gérmenes como promedio; naturalmente, algunas de las muestras

pueden contener algunos gérmenes más o menos. La cifra media es el número más

probable (Most Probable Number o MPN).

Esta técnica se usa principalmente para la estimación de bacilos coliformes,

empleando caldo de MacConkey, pero puede utilizarse casi para toda clase de

gérmenes en muestras líquidas si puede observarse fácilmente el crecimiento, por

ejemplo, si hay turbidez y producción de ácido. Ejemplos de ellos son las levaduras

y hongos en jugos y bebidas de frutas, clostridios en emulsiones de alimentos, 

cadenas de esporos en suspensiones de harina.

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