manual banco de sangre

5/13/2018 Manual Banco de Sangre - slidepdf.com

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Banco de sangre

Recepción

Entrega de solicitud y cuestionario

Toma de muestra

Calibración de las venas para revisar si están aptas para la donación

Si son aprobadas se toman los tubos pilotos, signos vitales del paciente y BHC

Se pasa el paciente a la entrevista con la doctora encargada

Se realiza la asepsia, se coloca lidocaína y se procesa a la extracción de la donación

Al paciente se le da una colación

Procesamiento de la unidad

Se rotula la unidad poniendo el nombre completo del paciente, el grupo sanguíneo y la hora.

Se centrifuga

Se fraccióna en formula roja y plasma

Después el plasma se fraccióna en plasma y plaquetas

Se taran y se etiquetan las unidades

Pruebas

Tipeo sanguíneo

VIH Heptitis B y C

Chagas

Reginas

Brucela (rosa de bengala)

Pruebas cruzadas



Grupo sanguíneo

1) Se rotulan 9 tubos de la siguiente manera:

A, B, AB, RH, CRH, AT, A1, B1, O1.

2) Se agregan una gota de globulos rojos ya lavados a cada tubo:

A, B, AB, RH, CRH, AT.3) Se agregan dos gotas a de suero a problema a los tubos:

AT, A1, B1, O1.

4) Al tubo A se le agrega una gota del antisuero A

al tubo B se le agrega una gota del antisuero B

al tubo AB se le agrega una gota del antisuero AB

al tubo RH se le agrega una gota del reactivo RH

al tubo CRH se le agrega una gota del reactivo CONTROL RH.

Al tubo A1 s ele agrega una gota de células A

al tubo B1 s ele agrega una gota de células B

al tubo O1 se le agrega una gota de células O5) Se centrifugan los 9 tubos por 15 segundos.

6) Se sacan los tubos y se interpreta uno por uno su clasificación en la hoja de reportes para

grupos sanguíneos.



Lavado de eritrocitos y preparación de solución de eritrocitos al 2%.

Equipo:

1) Serofuge

2) Tubos 10x75 mm.

3) Pipetas Pasteur, o pipetas transfer.

4) Bulbos de succión

5) Parafilm.

Reactivos:

Solución salina isotónica (SSI).

Material biológico:

Glóbulos rojos problema.

Tecnica

1) Centrifugar la muestra a examinar por 3 minutos.

2) Rotular número de problema a examinar en otro tubo.

3) Con la pipeta transfer aspirar tres gotas del paquete globular y pasarlo al tubo ya rotulado.

4) Agregar la SSI hasta 2/3 partes del tubo, por la paredes de este para no hacer espuma o

burbujas.

5) Tapar la boca del tubo con parafilm mezclar por inversión 6 veces asta tener una solución

homogénea.

6) Centrifugar de acuerdo a la calibración de serofuge (lavado de glóbulos rojos).

7) Eliminar el sobrenadante, resuspenda suavemente el botón de eritrocitos.

8) Agregar SSI hasta 2/3 partes del tubo, cubrir con parafilm, agitar 6 veces suavemente.

9) Centrifugar nuevamente y repetir los pasos 7 y 8 por 2 ocasiones (el lavado de eritrocitos

se lleva a cabo 3 veces).

10) En el ultimo lavado decantar todo el sobrenadante y tomar una gota del paquete deeritrocitos lavados a otro tubo, agregarle 2 ml de SSI,, para preparar una suspensión al 2%.



Pruebas cruzadas

1) Separar el suero de los eritrocitos del paciente

2) Realizar un lavado de glóbulos rojos con SSF al 0.9%.

3) Se rotulan 3 tubos de la siguiente manera:

D (prueba mayor)R (prueba menor)

AT

4) Al tubo D agregar una gota de glóbulos rojos del DONADOR

y dos gotas de suero del RECEPTOR

5) Al tubo R agregar una gota de glóbulos rojos del RECEPTOR

y dos gotas de suero del DONADOR.

6) Al tubo AT agregar una gota de globulos rojos y dos gotas de suero del RECEPTOR.

7) Se ponen a centrifugar los tubos en la serofuge por 15 segundos

8) Se sacan los tres tubos y se anotan en su hoja correspondiente el resultado.

9) Se agregan dos gotas de ENLISST (o de albumina) y se centrifugan por 15 segundos.10) Se lee su interpretación y se anota con tubo en mano en su hoja de reporte.

11) Se incuban por 10 minutos a 37 grados centígrados si es con ENLISST (si es con albumina la

incubación es por 30 minutos a 37 grados centígrados).

12) Se sacan los tubos y se centrifugan nuevamente por 15 segundos, y se lee su

interpretación con tubo en mano, se registra en su hoja de reporte.

13) Se aforan los tubos ala mitad con SSF por tres ocasiones. En el ultimo lavado se decanta

totalmente el remanente de SSF.

14) Se agregan dos gotas de suero antiglobulina (COOMBS), y se centrifuga por 15 segundos.

15) Se lee su interpretación y se registra con tubo en mano en su hoja de reporte.

16) Para validar la prueba por último se agrega una gota de CELULAS CONTROL DE COOMBS, y

se centrifuga por un minuto.

17) Se sacan los tubos y se lee su interpretación anotando con tubo en mano en la hoja de

reporte.

ESTA FASE DEBE DE DAR LOR TRES TUBOS CON AGLUTINACION.



Determinación del fenotipo Rh

El sistema consta de varios antígenos siendo 6 los principales, uno de ellos hipotético,

denominados C, D, E, c-, e- (d- es hipotético). El más importante por su frecuencia es el D ( 94 % de

la población es D positivo y 6% es negativo). La tipificación habitual del sistema Rh con antisuero

D, indica que el sujeto investigado presenta o carece de antígeno D ( este es el mas inmunogenicodel sistema ), son inmunogenicos en orden decreciente c-, E, C, e-, por lo que se vuelve necesaria

su investigación en quienes resultan D negativos.

Objeitvo:

Identificar la presencia de antígenos C, D, E, c-e-, en la membrana del eritrocito.

Fundamento:

El contacto de antisuero especifico ( anti C, anti D, anti E, anti c-, anti e- ) con un glóbulo rojo que

posea el antígeno, provoca aglutinación macroscópica.

Material:

El mismo para la identificación de Rh.

Reactivos:

Sueros anti C, anti D, anti E, anti c-, anti e-.

Técnica:

1) Rotule tubos de 10x75mm. Como C, D, E, c-, e-.

2) Preparar una solución del 2-5% de eritrocitos previamente lavados.

3) Agregue una gota de anti C al tubo CAgregue una gota de anti D al tubo D

Agregue una gota de anti E al tubo E

Agregue una gota de anti c- al tubo c-

Agregue una gota de anti e- al tubo e-

4) Agregue una gota de eritrocitos a cada uno de los tubos y mezcle bien.

5) Centrifugue por 15 segundos.



6) Resuspenda suavemente el botón completo en cada uno de los tubos observando la

aglutinación.

7) Gradúe la aglutinación en cruces y regístrela en la hoja de reporte de fenotipo Rh.

Interpretación

El fenotipo de Rh se hereda en bloques de 3 antígenos, siendo CDe el fenotipo mas frecuente.

El fenotipo de los sujetos Rh negativo es cde.

Un sujeto puede ser D negativo, pero si en su fenotipo presenta C o E, su factor de Rh es positivo.



Detección de anticuerpos irregulares

1) Rotule un tubo como 1, otro como 11 y otro como AT

2) Agregue una gota de células 1 al tubo 1

agregue una gota de células 11 al tubo 11

agregue una gota de eritrocitos problema al tubo AT.3) Agregue dos gotas de suero problema a cada tubo.

4) Agitar suavemente y centrifugar por 15 segundos en serofuge,

resuspenda el botón de células suavemente, leer la aglutinación, graduar en cruces y

registrar en la hoja de resultados de anti irregulares.

5) Agregar una gota de de LISS o albumina

si se emplea LISS se incuba por 10 minutos a 37 grados centígrados, si se emplea albumina

se incuba por 25 minutos.

6) Sacar los tubos del incubador y centrifugar por 15 segundos en serofuge.

7) Examine cada uno de los tubos en busca de posible hemolisis, resuspenda el botón, lea la

aglutinación, gradúe en cruces, o si es negativo registre en la hoja de resultados.8) Lave las células tres veces después del último lavado decante completamente.

9) Agrague dos gitas del suero de COOMBS, a cada uno de los tubos, agite suevamente.

10) Centrifugue 15 segundos en serofuge.

11) Resuspenda el botón lea si hay aglutinación, gradúe en cruces y registre en registre en la

hoja de resultados de detección de anticuerpos irregularres.

12) ESTA FASE SIEMPRE DEBE DAR POSITIVO.

Una reacción positiva, esta es la aglutinación o una hemolisis en cualquier tubo hasta el paso 11,

indica que el suero problema se encuentra uno o varios anticuerpo irregulares.



Actividades a realizar en el banco de sangre

1) Al iniciar checar la temperatura del refrigerador y registrarla en la hoja, si la temperatura

marca arriba de 8 grados centígrados la unidades deben llevarse a otro refrigerador ,

checar la temperatura en el refrigerador del laboratorio , si la temperatura es adecuada,

se mantendrán en el laboratorio mientras se soluciona el problema.2) Se realizara diario el control de calidad de antisueros. ( especificidad y avidez).

3) Checar en la hoja de programación cirugías, para realizar las pruebas cruzadas.

se debe revisar si el paciente pasó al banco de sangre.

4) Cuando se realicen extracciones se anotara en la hoja de peso/volumen los datos: fecha,

numero de donador, numero de bolsa y peso.

apuntar en la hoja de ingresos, además si fue donación familiar o volluntaria.

5) En caso de intercambio, registrar la institución de donde proviene la unidad, y anotarla en

la libreta todos los datos del componente que ingresa.

6) Todos los donadores se deben registrar en la carpeta de serología.

7) A los donadores diariamente realizarles: grupo sanguíneo, anticuerpos irregulares, RPR,rosa de Bengala, en caso de urgencias se realizaran las pruebas especiales (HIV,HCV,

AgsHB). En caso de contrario se realizaran los jueves.

8) Toda unidad que se extraiga se debe poner en el refrigerador en posición vertical. Para su

sedimentación por gravedad.

9) A toda unidad se le registra con nombre completo del donador, numero de bolsa, numero

de donador, grupo sanguíneo y anotar resultados pendientes.

Así como fecha de extracción y caducidad.



Fraccionamiento

Preparación de concentrados eritrocitarios

La separación de globulos rojos se realiza por centrifugación entre 3400-4000 rpm, por 10

minutos. La temperatura debe ser de 4-6ºC.

Técnica:

1. Coloque la bolsa de sangre centrifugada o sedimentada (según sea el caso) en el extractor

de plasma.

2. Liberar suavemente el mecanismo de presión del extractor.

3. Cerrar con una pinza hemostática el tubo que comunica ambas bolsas o hacer un nudo

prefabricado, liberar el sellado de la bolsa primaria suavemente, retirándola pinza

hemostática y dejar fluir el plasma.

4. Cerrar nuevamente con la pinza o cerrar el nudo, cuando se haya hecho la remoción de

plasma, aplicar en este momento las grapas de cada lado de la pinza. Y cortar con lastijeras, en medio de las dos grapas.

5. Identificar la unidad de plasma anotando datos del tipo de componente que es plasma

fresco o envejecido. En caso de ser envejecido se pondrá en el anaquel de debajo de

refrigerador, para darlo de baja.

6. En caso de ser plasma fresco se pesa y se guarda en el congelador. Se procede a pesar el

concentrado de eritrocitos, anotando en la hoja de peso y volumen.

7. Se procede a realizar el hematocrito del C.E. debe de estar entre 70-80%.

Preparacion de plaquetas

Consideraciones importantes.

A) La puncion venosa debe ser limpia, atraumatica y la sangre debe de fluirrapidamente.

B) El tiempo de recolección no debe ser mayor de 10 minutos, preferentemente de 8

minutos.

C) Mantener la sangre a temperatura del laboratorio, no refrigerarla ya que esto puede

inducir cambios importantes en su sobreviva, presentándose a los 10-15 minutos de

exposición al frio.

D) Es muy importante que nuestro donador no este muy nervioso, ya que esto influye

también en la función de las plaquetas.

Una vez separada las plaquetas, se conservara a temperatura ambiente en agitación constante en

el rotador para plaquetas, hasta su transfusión se realiza con filtro especial, el cual banco de

sangre lo proporciona.



Componentes sanguíneos

Descripción e indicaciones

La donación y transfusión sanguínea son procedimientos médicos bien establecidos, virtualmente

inocuos para el donador y esenciales para los enfermos que requieren algunos de los

componentes sanguíneos. La elección cuidadosa del elemento a transfundir favorece el

aprovechamiento optimo de la sangre es decir, la donación de una persona, puede beneficiar a

cuatro pacientes al separarse en concentrado eritrocitario, plasma fresco, concentrado

plaquetario, erioprecipitado. La disposición de la sangre por componentes sanguíneos ha

simplificado los criterios de indicación de cada uno de ellos, lo que ha su vez permite brindar al

enfermo lo que realmente necesita, además con esto se ha logrado tener un mejor control de

calidad y disminuir el riesgo potencial de efectos adversos.

Sangre total

La sangre obtenida inicialmente de un donador es sangre total, que contiene todos suscomponentes activos dentro de las primeras 8 horas de haberse extraido.

Indicaciones:

La sangre total de menos de 7 dias de extracción puede ser empleada para exsanguinotransfusion.

De hecho en la actualidad la sangre total puede ser indicada en deficiencia sintomática de la

capacidad transportadora de oxigeno con hipovolemia marcada asociada a choque, sangrado

activo con perdidas del volumen circulante, pacientes con sangrado activo que han recibido

cuando menos cuatro unidades del concentrado eritrocitario, en transfusión masiva. (siempre y

cuando la sangre total sea fresca menos de 8 horas de haber sido extraido).

Volumen aproximado: 405-495ml

Tiempo de infusión: de 3-4 horas

Concentrado eritrocitario

Los eritrocitos son transfundidos para mejorar la capacidad de transportación del oxigeno. Los

criterios para el empleo de paquete globular debe ser definido y bien establecido de acuerdo a los

criterios médicos y en conjunto con banco de sangre que incluyan categorías de pacientes

considerando el riesgo, edad, función cardiopulmonar y renal.

Indicaciones:

y Anemia sintomática en un paciente normovolemico, considerando el nivel de

hemoglobina no corregibles por otros medios.

y Perdida aguda (>15%) del volumen sanguíneo total estimado.



y Nivel de hemoglobina preoperatorio 8 gr asociado a cirugía mayor con perdida de sangre

en gran cantidad.

y Nivel de hemoglobina 9g/dl en pacientes con un régimen de transfusión crónica.

Características del concentrado eritrocitario:

y La unidad produce un incremento de 1 gramo de hemoglobina, 3% de hematocrito.

y Contiene un volumen entre 180-350ml.

y El hematocrito de cada concentrado es de 70-80%

y Su tiempo de infusión es de 2-3 horas.

y Su tiempo de preservación, es de acuerdo al anticoagulante utilizado, el mas utilizado es

actualmente CPDA-I con 35 dias, o CPDA-I con manitol 45 dias.

y Para su transfusión se utiliza filtro normal, dependientes de antecedentes de reacción

transfusional se usara filtro especial SEPACELL R500.

Plasma fresco congelado

El plasma fresco congelado es el obtenido y congelado a menos de 40ºC dentro del intervalo de 8

horas siguientes a la donación. Si elplasma es obtenido después de 8 horas de colectada la sangre

total se denomina plasma envejecido y su concentración de los factores de coagulación V y VIII se

reducen considerablemente.

Indicaciones terapéuticas

y Deficiencia de factores de coagulación (factor II, V, VII, IX, XI, XIII).

y Hemofilia B (en sustitución del concentrado purificado de F.IX).

y Coagulación intravascular.

y Defectos multiples de factores.

y Intercambio plasmático en la purpura trombocitopenica/síndrome hemolítico urémico).

y Revertir el efecto de los anticoagulantes orales.

y Reemplazamiento de anticoagulantes naturales (deficiencia de T-III, deficiencia de

proteína C y S).

y Enfermedad hepática.

y Síndrome de transfusión masiva.

No se debe usar plasma fresco como expansor del volumen o suplemento nutricional

Tecnicas de transfusión

La bolsa de plasma se mantiene a balo maria a 37ªC, la descongelación de la bolsa no debe durar

mas de 30 minutos, la bolsa se mantiene dentro de una bolsa. Una vez descongelado el plasma se

debe de transfundir entre las primeras 12 horas. El plasma se transfunde con filtro normal.

Características del plasma fresco congelado



El plasma contiene un volumen entre 180-350ml, el plasma contiene 250 a 400 mg de fibrinógeno

por unidad y 100 a 150 UI/dl de factor VIII. La dosis recomendada es de 10-15 ml/kg de peso. La

sobrecarga circulatoria puede ocurrir cuando se exceden dosis de 30 ml/kg/dia.

Crioprecipitado

Uso terapéutico

Los crioprecipitados se emplean en pacientes con hemofilia A, suceso que permite mejorar la

calidad en la atención de estos pacientes al transfundirse específicamente la cantidad de factor

VIII, con el transcurso del tiempo y con el conocimiento de las proteínas presentes en los

crioprecipitados, su uso terapéutico se amplio a las enfermedades como: enfermedad de von

Willebrand, deficiencias de fribrinogeno, disfibrinogenemias, CID y deficiencias de factor XIII.

Dosis:

Una unidad de F.VIII x Kg de peso incrementan en 2% la actividad plasmática del F.VIII y la cantidad

del F.VIII requerida depende del sitio e intensidad de la hemorragia. En los pacientes con CID en

general se recomienda la transfusión de 10 bolsas de crioprecipitados para un aporte de

fibrinógeno entre 2000 y 2500 mg.

Las complicaciones asociadas al uso de los crioprecipitados se presentan en caso de una

transfusión de una gran cantidad de bolsas, que por la carga de fibrinógeno y fibronectina pueden

ocasionar disfunción plaquetaria potencialmente hemorrágica.

Concentrado plaquetario:

La transfusión de concentrados plaquetarios es un tratamiento útil en pacientes conenfermedades

oncohematológicas y hematológicas. El objetivo de la transfusión de plaquetas es prevenir la

morbilidad y mortalidad secundaria a hemorragia que pueden ocurrir en pacientes cuando la

quimioterapia o la historia natural de la enfermedad producen trombocitopenia severa. Las

indicaciones de de plaquetas incluyen profilaxis y tratamiento de hemorragia.

Es importante considerar es efectiva en prevenir episodios de hemorragia, sin embargo también es

cierto que el riesgo de la infeciones transmitidas por la transfusión y la aloinmunización y la

refractariedad a plaquetas son un riesgo importante.

Indicaciones terapéuticas:

Hemorragia clínicamente significativa debida a trombopenia y trombopatia .

PROFILACTICAS.

Trombopenias severa reversible: PLAQUETAS MENOS DE 10,000/microL ( no en PTI).

Trombopenia menor de 30,000/microL y riesgos asociados (fiebre, hipertensión y drogas).



Recuento de plaquetas menor a 50,000/microL en pacientes que van a ser sometidos a cirugía

mayor.

Rendimientos y dosis:

La dosis habitual es de una unidad por cada 10 kg de peso cada unidad debe producir un

incremento de 5,000 plaquetas por microL. Una transfusión de plaquetas es efectiva si se corrige

la hemorragia activa o si existe un incremento en la cuenta de plaquetas. El efecto hemostático no

es inmediato comenzando entra las cinco y siete horas post transfusión, siendo la duración media

del efecto en condiciones normales dos a tres días. El control de plaquetas post transfusión se

debe realizar a la hora de haber transfundido el ultimo paquete.



Tipificación ABO: prueba inversa

Centrifuga serológica

Gradilla

Tubos de ensayo de 12x75 mm

Pipetas de transferencia

Marcadores

Material Biologico :

Eritrocitos del grupo A1 suspendidos al 2%

Eritrocitos del grupo B suspendidos al 2%

Eritrocitos del grupo O suspendidos al 2%

TECNICA:

1) Colocar tres tubos de 12x75 y rotularlos como A1, B, o

2) Agregar una gota de eritrocitos A1 al tubo A1

agregar una gota de eritrocitos B al tubo B

agregar una gota de eritrocitos O al tubo O

3) Agregar dos gotas de suero problema a cada tubo, agitar suavemente para homgenizar.

4) Centrifugar en serofuge por 15 segundos, resuspenda suavemente, leer la aglutinación

tubo por tubo, gradue en cruces y registre los resultados en la hoja de reporte con tubo en

mano, como prueba inversa.

INTERPRETACION:

La aglutinación de lo eritrocitos por el plasma correspondiente demuestra la presencia del

anticuerpo correspondiente en el plasma estudiado.

Células A1 Células B Células O Gpo. indentificado

O+ 4-3+ 0 A

4-3+ 0 0 B

O O 0 AB

4-3+ 4-3+ 0 O



Determinacion del subgrupo de A (A1 y A2)

EQUIPO:

Centrifuga serológica

Gradilla

Tubos de ensayo de 12x75 mm


Marcadores

REACTIVOS:

Lectina Anti A1 ( extracto de Dolichus Biflorus)

MATERIAL BIOLOGICO:

Eritrocitos problemas suspendidos al 5%

TECNICA:

1) Colocar un tubo de 12x75 mm y rotularlo como A1

2) Agregar una gota de lectina Anti A1 al tubo A1

3) Agregar una gota de eritrocitos problema al tubo A1

4) Agitar suavemente para homogenizar y centrifugar en serofuge por 15 segundos

5) Resuspenda suavemente, lea la aglutinación, gradúe en cruces y registre en la hoja de

tipificación como lectina A1 con tubo en mano.

Nota :

De 2-4+ el subgrupo identificado es A1

De 0-1+ probablemente A2 u otro subgrupo de A

Las persona con subgrupo de A2, prensentan reducción en la cantidad de N-acetilgalactosaminil

transferasa, por lo que presenta más antígeno H (substancia H) en la superficie de los eritrocitos.

A1 y A2 constituyen los grupos mayores de A (99%). De ellos aproximadamente el 80% es A1 y el

20% es A2.



Determinación el antígeno D ( factor Rh)

OBJETIVO:

Identificar la presencia del antígeno D (Rh) en la membrana del glóbulo rojo.

Material y equipo:

El mismo utilizado en la determinación del grupo ABO

Reactivos:

Suero anti D

Suero control Rh ( debe ser de la misma marca que el suero Anti-D)

Anti globulina humana ( suero de coombs)


Eritrocitos problema suspendidos al 5% y

Células control de coombs.

Tecnica:

1) Colocar en la gradilla dos tubos de 12x75 mm. Y rotularlos como D y CRh

2) Agregar una gota de suero Anti-D al tubo D

3) Agregar de control Rh al tubo CRh

4) Agragr una gota de eritrocitos problema a cada tubo5) Agite suavemente, centrifugar en serfuge por 15 segundos

6) Se resuspende suavemnete, leer la aglutinasion, graduar en cruces y resgitrar tubo por

tubo en la hoja de reporte de tipificasion ABO. Asegurarse de resuspender completamente

todo el botón antes de decidir que no a ocurrido aglutinación.

7) Si al reacción de aglutinación en el tubo, D es de 4+, 3+, o 2+; reportar como Rh positivo.

Aquí concluye la prueba.

el tubo CRh no debe mostrar aglutinación. Si esto ocurriese debe comunicarse al

responsable del banco. Se debe repetir la prueba con reactivos nuevos, Anti-D y Control

de Rh.

8) Si no se observa aglutinación en el tubo D, o si esta es <2+, repetir el procedimientodesde 1, si se repiten los resultados 9.

Tecnica Nº5

Tipificaion de la variante Du.



9) Sila reacción de aglutinación es menor de 2+ incube los tubos D y CRh a 37ºC por 30

minutos en el termoblock.

10) Saque los tubos agítelos suavemente para homogenizar y centrifuge por 15 segundos en

serofuge, resuspenda suavemente, lea la aglutinación gradue en cruces registre en la hoja

de tipificasion ABO Rh como albumina a 37ºC, si ocurre aglutinación reportar como Rh

positivo, si no ocurre aglutinación pasa al numero 11.

11) Lave las células con SSF. Tres veces asersiorandose de suspender el botón completamente.

En el ultimo lavado decante completamente.

12) Agregue dos gotas de suero coombs a cada tubo

13) Agite suavemente para homogenizar, centrifuge 15 segundos en serofuge.

14) Resuspenda suavemente, lea la aglutinación, gradue en cruces y registre en lahoja de

resultados ABO Rh.

si ocurre aglutinación registre como Du positivo, debe considerarse como Rh positivo.

si no ocurre aglutinación registre como Du negativo debe considerarse Rh negativo.

debe practicarse fenotipo de Rh.

15) Para validar la prueba ; agregue una gota de células control de coombs.

agite suavemente, centrifugue 15 segundos en serofuge

resuspenda suavemente, lea la aglutinación, gradue en cruces y registre en la hoja de

reporte ABO Rh.

si no ocurre aglutinación, debe repetirse toda la prueba desde el lavado de eritrocitos.

Anti-D CRh Conclusión

4+, 3+, 2+ 0 Rh positivo

2+, 1+,0 0 ?

Después de la incubación

Anti-D CRh Conclusión

Aglutina No aglutina Rh positivo

No aglutina No aglutina Pasa a fase de coombs

Fase de coombs

Anti-D CRh Conclusiones

Aglutina No aglutina Du positivo

No aglutina No aglutina Du negativo



Determinación de hematocrito ( técnica de microhematocrito)

Fundamento:

El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados como un procentaje del volumen del

sangre total de una muestra. El hematocrito venoso coincide estrechamente con el obtenido por

punción cutánea.

La muestra puede obtenerse de tubos con o sin anticuagulante, en caso de anticuagulante se

aceptan la heparina, oxalato o EDTA.

Material y equipo:

3-5 de sangre venosa en tubos con EDTA.

O sangre venosa obtenida de muestra directa por puncion capilar.

Técnica:

1) Mezclar por inversión 6 veces el contenido del tubo

2) Llenar le tubo de microhematocrito por atracción capilar, ya sea a partir del punto de

atracción capilar o tubo de sangre venosa

3) Permitir que la sangre fluya libremente en el tubo capilar inclinándolo un poco.

4) Llenar el capilar a tres cuartos de su capacidad.

5) Retirara el capilar limpiando el extremo que estuvo en contacto con el punto de muestra.

6) Sellar el capilar por el extremo con la marca sin pasar la marca

7) Colocar en la microcentrifuga el capilar con el extremo sellado dirijido hacia afuera

8) Centrifugar de acuerdo ala calibración dela microcentrifuga

9) Leer el hematocrito con la ayuda de un lector o con regla graduada en centímetros

10) Registre el resultado en la hoja de selección de donador y en libro de donadores.

Resultados:

Valores aceptados NOM-003-SSA2-1993

Sexo Hematocrito 0-1500 SNM

Masculino 41%

femenino 38%



Preparación de eritrocitos sensibilisados (células control de coombs)

Equipo y material:

Tubos de 12x75mm


Termoblock a 37ºC

Serofuge

Reactivos:

SSF 0.9%

Albumina bobina al 22%

Antiglobulina humana ( suero de coombs).


Eritrocitos grupo O Rh positivo

Tecnica:

1) Centrifugar 2 ml de sangre O positivo 2 minutos en serofuge. Eliminar el sobrenadante.

2) Lavar los eritrocitos con SSF 4 veces, en el últimos lavado eliminar todo el sobrenadante.

rotular como tubo 1

3) En otro tubo mezclar 4 gotas de suero Anti-D 16 gotas de albumina bobina al 22%, rotularcomo tubo 2

4) Agregar todo el contenido del tubo 2 al tubo 1, cubrir con parafilm,mezclar suavemente 6

veces por inversión

5) Incubar en termoblock a 37ºC durante 30 minutos

6) Lavar los eritrocitos 3 veces con SSF

7) Tomar una gota de eritrocitos y diluir al 5% con SSF ( una gota de eritrocitos + un ml de

SSF).

8) Practicar control de calidad:

En un tubo de 12x75 colocar dos gotas de eritrocitos sencibilisados mas tres gotas de

suero de coombsagitar suavemente, centrifugar variando el tiempo de 5 segundos a partir de 15 segundos

resuspender suavemente, lea la aglutinación, gradue en cruces y registre en la hoja de

control de calidad de reactivos y células CCC.

calibre de acuerdo al tiempo optimo hasta obtener una aglutinación de 3-4 cruces.

conservar los eritrocitos a 4-6ºC durante 4 o 5 dias, o hasta que se observe hemolisis



Prueba de coombs directo

Funadamento: el antisuero de coombs utilizado en esta prueba contiene una

inmunoglobulina (IgG) y fracciones del complemento (C3d) dirijidas cntra anticuerpos IgG

unidos ala membrana del eritrocitos. Un resultado positivo se obtiene por medio de una

reacción antígeno-anticuerpo la cual es visible al efectuarse la aglutinación en los

eritrocitos.

Material y equipo:

El utilizado en la determinación de ABO

Reactivos:

SSF .9%

Suero de coombs ( anti IgG) poliespecifico

Células control de coombs (CCC)


2 ml con EDTA ( centrifugar el tubo y tomar las dos gotas de paquete globular).

Técnica:

1) Colocar dos gotas de la muestra problema en un tubo 12x75 mm, debidamente

identificado

2) Agrega dos ml de SSF

3) Colocar dos gotas de las suspensión anterior en un tubo identificado como CD

4) Lavar tres veces con SSF; en el ultimo lavado eliminar todo el sobrenadante colocando

la boca del tubo sobre una gasa.

5) Adisionar dos gotas de suero de coombs y homogenizar

6) Centrifugar 15 segundos según el tiempo obtenido en la calibración del serofuge; fase

antiglobulina.

7) Leer la aglutinación, graduar en cruces. Anotar resultados en la libreta

correspondiente.

8) Si se observa aglutinación reportar; coombs directo positivo.

9) Si no se observa aglutinación, agrega una gota de CCC y repetir los pasos 6 y 7

10) Para validar la prueba el resultado de la CCC debe ser positivo una cruz o dos cruces

interpretación:

Positivo Aglutinación en el paso numero 8

Negativo No aglutinación en el paso numero 8 CCC

aglutinaninvalido No se observa aglutinación: CCC no

aglutinado repetir proceso



Rosa de bengala

Introducción:

El rosa de Bengala es una técnica de aglutinación en portaobjetos o placa para la detección

cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos Anti-brucela en suero humano.

Las suspensión bacteriana y coloreada, es aglutinada por Ac, IgG o IgM presentes en el suero del

paciente.

Equipo y material:

Agitador mecanico rotatorio de velocidad regulable a 80-100 RPM

Pipetas de plástico incluidas en el kit

Placas de plástico con fondo blanco incluidas en el kit

Aplicadores de madera

Cronometro

Centrifuga

Reactivos:

Rosa de bengala

Control positivo

Control negativo

Muestra:

Suero fresco. Estable 7 dias 2-8 ºC o 3 meses a -20ºC

la muestra con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba. No utilize muestras

altamente hemolisadas o lipemicas.

Técnicas:

Antas de inicar a temperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del

ensayo disminuye a temperatura baja.

1) Centrifugar la muestra a utilizar por 4 minutos y separa el suero y rotular numero de

muestra

2) Depositar una gota d ela muestra con la pippeta incluida en el kit y una gota de cada uno

de los controles positivos y negativos, sobre círculos distintos en la placa incluida en el kit.



3) Homogenizar suavemente el reactivo de rosa de bengala antes de usar. Depostitar una

gota con el gotero del kit junto a cada una de las gotas anteriores

4) Mezclar las gotas con un palillo procurandi extender l amuestra por toda la superficie

interiro del circulo. Emplear palillos distintos para cada muestra

5) Situar la placa sobre el agitador rotatorio a 80-100 RPM durante 4 minutos

Importante el exeso de tiempo de agitación puede originar la aparision de falsos positivos.

Interpretación:

Examinar microscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación imedientemente

después de retirar la placa del agitador a presencia de aglutinación indica una

concentración de anticuerpos Anti-brucela igual o superior a 25 uL/ml.

Control de calidad:

Se recomienda utilizar el contro positivo y negativo para controlar la funsionalidad del

reactivo.

Interferencias:

Hemoglobina (10g/L) lípidos y factores reumatoides no interfieren. La bilirrubina interfiere

a partir de 2.5mg/dl.



RPR

Prueba rápida de Reagina (sífilis)

La prueba de RPR es una prueba de floculasion no treponemica macroscópica que es

utilizada para detectar y cuetificar reaginas , un anticuerpo anti-lipidico encontradi en el

suero o plasma de las personas con sífilis y ocasionalmente en personas con infecciones

agudas o crónicas en otras condiciones de la sífilis.

El antígeno utilizado en el equipo es una modificación del antígeno VDRL el cual contiene

macropartículas de carbón para realzar la diferencia entre un resultado positivo y uno

negativo. Si una muestra contiene reaginas, ocurre la floculación con las partículas de

carbón contenidas en la suspensión del antígeno, la cual aparece como un acumulo negro.

Las muestras no reactivas se observan con un ligero color gris

material y equipo:

pipeta de plástico

placa de plástico con circulo

pipetas agitadoras

aguja numero 18 sin bisel ( utilizada para dispensar aproximadamente 17 ml de la

suspensión del Ag)

rotor de 100 RPM

cronometro

reactivos:

suspensión de antígeno RPR

control positivo de RPR

control negativo de RPR

material biológico:

suero o plasma con EDTA

nota: evitar la hemolisis si la muestra esta severamente lipemica de manera que se

oscurece es el estado de las partículas de antígeno la muestra no debe ser utilizada.

Tecnica

Prcedimiento cualitativo :

1) lleve a temperatura la suspensión del antígeno de RPR

2) rotular en la tarjeta de identificación de las muestras y de controles

3) con la pipeta de plástico tome una gota de la muestra problema y en posición vertical

colocar una gota de muestra en el sitio correspondiente. Utilizando el extremo plano

de la pipeta, extienda la muestra para cubrir el total de la superficie del círculo.

Repetir el mismo procedimiento para cada muestra.

4) Colocar una gota de los controles positivo y negativo en el sitio correspondiente



5) Agite el frasco de suspensión del antígeno antes de utilizarlo, colocando una hota de

suspensión de antígeno sobre cada muestra NO EXTIENDA.

6) Agite por 8 minutos a 100 RPM en el rotador

7) Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente

8) Lea macroscópicamente bajo la luz intensa

Resultado:

REACTIVO: presencia de floculos grandes o pequeños en el centro o la periferia del circulo de la

prueba .

DEBIL REACTIVO: presencia de floculos pequeños pero definidos.

NO REACTIVO apariencia lisa, uniforme pero sin floculos visibles.

Los resultados positivos deben ser confirmados mediante pruebas de las muestras utilizando

procedimientos cuantitativos. Se recomiendan pruebas serológicas confirmativas tales como el

ensayo microaglutinasion para anticuepros treponemicos (MHA-TP). El diagnostico final debe estar

en base ala correalsion de los resultados de prueba junto con otros hallazgos clínicos. Las muestras

que son no reactivas pero dudosas, se deben de repetir y cuantificar ya que se pueden detectar

reacciones poco frecuentes en prozona.

Substancias interferentes

Como todo el antígeno tipo cardiolipina, pueden ocurrir resultados falsos positivos. Estos

resultados pueden ser causados enfermedades tales como lepra lupus eritrematoso

mononucleosis infecciosa, malaria y neumonía viral. Varios reportes indican la presencia de

resultados falsos positivos en el embarazo. Enfermedades autoinmunes y adicciones narcoticas

pueden dar reacciones falsas positivas.

manual banco de sangre

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