liquidos serosos 1 comp

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 ESTUDIO CITOQUÍMICO DE LIQUIDOS SEROSOS Lic. Mercedes Catani Dra. Rosario San Martín Dr. Isidoro Prudente Dra. Silvia Zunino Torres Hospital de Clínicas. Departamento de Laboratorio Clínico. Repartición Hematología y Citología.

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ESTUDIO CITOQUÍMICO

DELIQUIDOS SEROSOS

Lic. Mercedes Catani Dra. Rosario San Martín

Dr. Isidoro Prudente Dra. Silvia Zunino Torres

Hospital de Clínicas.

Departamento de Laboratorio Clínico.

Repartición Hematología y Citología.

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LÍQUIDO SEROSO:

Se denomina así al líquido quenormalmente se encuentra en lascavidades serosas:

-Cavidad pleural: 10-20 ml

-Cavidad peritoneal: 50 ml-Cavidad pericárdica: 100 ml

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DERRAME SEROSO:

Acumulación patológica de líquido enuna cavidad serosa

Pleural (derrame pleural)

Pericárdica (derrame pericárdico)

Peritoneal (ascitis)

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Capilarsistémico

serosavisceralserosaparietal

Presiónhidrostática

Presióncoloidosmótica

Capilarpulmonar

c. linfático

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MECANISMOS DE FORMACIÓN DE DERRAMESSEROSOS

p. hidrostática

p. coloidosmótica

permeabilidad capilar

obstrucción del drenaje linfático

InsuficienciaCardíacaCongestiva

S.nefrótico

Cirrosis

InfeccionesE.. Inflamatorias

Neoplasias

Neoplasias

Traumatismo

TRASUDADO

EXUDADO

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Los derrames serosos pueden presentarsecomo complicación de distintas patologías.

Su estudio citoquímico y bacteriológico no

sólo proporciona una orientacióndiagnóstica sino que en algunas situacionesdetermina conductas terapéuticas.

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Examen macroscópico

ASPECTOHemorrágico Punción traumática, derramesneoplásicos, traumatismos,TEP

Hemático o serohemático No tiene valor diagnóstico

Turbio Sobrenadante límpido: células

Sobrenadante turbio: bacterias

lípidosOpalescente, lechoso Derrames quilosos y

seudoquilosos.

 

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Examen químico

1. Parámetros bioquímicos utilizados para

diferenciar trasudados y exudados

2. Parámetros bioquímicos para

determinar la etiología de un exudado

 

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Criterios de Light

Proteínas líquido pleuralProteínas séricas

LDH liquído pleuralLDH sérica

LDH en líquido pleural 200 UI / L

> 0.5

> 0.6

>Se considera que el líquido es un exudado cuando cumple uno

o más de estos criterios 

 

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60 mg / dl60 mg / dlColesterol *

200 U / L 200 U / LLDH

30 g / L 30 g / LProteínas

ExudadoTrasudado

* Sólo en líquidos pleurales , en líquidos de ascitis se

utiliza como criterio para diferenciar derramesneoplásicos de no neoplásicos

PARÁMETROS BIOQUÍMICOS UTILIZADOS PARADIFERENCIAR TRASUDADOS de EXUDADOS

PLEURALES

 

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PARAMETROS UTILIZADOS EN LIQUIDOS

DE ASCITIS

Gradiente de Albúmina

Albúmina sérica – albúmina líquido :

>= 1.1 g/l = HTTP < 1.1 g/l = no HTP

 

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Etiología de un exudado pleural 

Parámetros bioquímicos GLUCOSA

pH

TRIGLICÉRIDOS

AMILASA

CREATININA

 

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•DERRAMES PARANEUMÓNICOSCOMPLICADOS

•BK

•ENF. REUMÁTICAS

•NEOPLASIAS

GLUCOSA

Su concentración es similar a la plasmática enlos trasudados y en la mayoría de los exudados

Valores 60 mg/dl pueden verse:

 

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•DERRAMES PARANEUMÓNICOSCOMPLICADOS

•BK

•Enf. Reumáticas•Neoplasias

•Acidosis sistémica 

pH Sólo tiene valor diagnóstico cuando se

determina en las mismas condiciones que el pHarterial

Valores 7.2 pueden observarse en:

 

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Triglicéridos Su determinación está indicada en líquidos de aspecto

opalescente o lechoso y en aquellos con sobrenadanteturbio. Permite diferenciar:

- derrames quilosos (obstrucción del drenaje linfático con

acumulación de linfa – neoplasias-)-seudoquilosos ( por acumulación de colesterol – BK, AR-).

Valores entre 50-110 mg/dl : estudio de quilomicrones

quiloso seudoquiloso

TG 110 mg/dl 50 mg/dl

 

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Líquido de Ascitis

Parámetros Bioquímicos

Gradiente de Albúmina

Albúmina sérica – albúmina líquido :

>= 1.1 g/l = HTTP < 1.1 g/l = no HTP

 

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Amilasa 

Valores de amilasa mayores al límite superiornormal en suero pueden verse en derramescausados por:

•Pancreatitis

•Rotura esofágica

•Neoplasias

 

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Urea y creatinina

Su determinación está indicada ante la sospechade presencia de orina en la cavidad serosa 

(estallido vesical, posoperatorio de cirugía abdominal).

Se encuentran valores aumentados de urea ycreatinina en el líquido seroso y valores normalesde creatinina en sangre.

 

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Citología de líquidos decavidades serosas

 

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Citología de líquidos decavidades serosas

Normalmente procedentes de:

• revestimiento seroso : célula mesotelial

• sistema monocítico / macrofágico

• capilares subserosos

 

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Célula mesotelial

NORMAL 

• Redondeada

• 18 a 40 u (25 u)

• Núcleo central ovoide

• 2 a 3 nucléolos• Citoplasma denso adelgazado en periferia

• Aisladas o en grupos de menos de 12 células

(ventana) 

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Célula mesotelial

REACTIVA• Mayor basofilia citoplásmica

• Bordes bien delimitados

• Discreto grado de anisocariosis 

 

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Célula mesotelial

INVOLUTIVA

•   Derrames crónicos

• Degeneración vacuolar

 

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Macrófago

• 45 % células normales en peritoneo. (CD68+)• 15 – 100 u (30 u)

• Núcleo excéntrico arriñonado

• Citop. claro,finamente vacuolado (encaje)• Material fagocitado

• Formas multinucleadas

y gigantes sólo enserositis reumática

 

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Células procedentes de

capilares subserosos• Glóbulos rojos. Punción (1 ul/mm3)

Hemorragia.• PMN. % variable. Inflamación.

Infarto.• Linfocitos. Procesos benignos: Formas T

NA. viral, TBC, neoplasias• Eosinófilos. (10%) Infección viral, parasitaria,

mesenquimopatías, TEP, Ntx, Htx.

 

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Cuadros citológicos patológicos

Células en proporciones variables dependiendo dela causa, duración y complicaciones del derrame.

• Inflamación . Inespecífica. Específica

• TBC• TEP• Cirrosis hepática• Derrames neoplásicos

 

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Inflamación

• Inespecífica. -células mesoteliales y PMN - IC- NA- sobreinfección

PMN +50%:- pleura: empiema- ascitis: PBE : recuento en

cámara de NeubauerPMN > 250/ mm3

- DPCA: GB > 100/ mm3

50% PMN  

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Inflamación

- AR - macrófagos

- m. gigantes multinucleados

- material necrótico granular

• Específica. eosinófilo.

- LES  - cél.LE 30% pleuritis lúpica.

- cél. mesoteliales y eosinófilos

 

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TBC• En pleura - infiltrado linfocitario crónico sin

reacción mesotelial.

• En peritoneo - infiltrado linfocitario crónico con

reacción mesotelial y macrofágica.

 

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TEP

Necrosis hemorrágica subpleural con reaccióninflamatoria perilesional.

• Citología pleomórfica : - fondo hemorrágico.

- reacción mesotelial a/v con

alt. citomorfológicas.- macrófagos con gránulos

de hemosiderina.

- PMN y linfocitos. 

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Cirrosis hepática

Celularidad pleomórfica: células mesoteliales,macrófagos, linfocitos, y PMN.

Puede observarse hepatocitos como célulasepiteliales poliédricas con núcleo central ydisposición acinar (no debe confundirse conmetástasis)

 

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Derrame neoplásico

• Mayor frecuencia corresponde a adenocarcinomas

de pulmón, mama, ovario.

• Tendencia a formar grupos celulares cohesivos,

tridimensionales o seudoacinos, cuyas células

presentan variadas atipías citomorfológicas.• El mesotelioma ( neoplasia de la serosa ) es muy

poco frecuente.

 

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MARCADORESTUMORALES

 

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MARCADORES

TUMORALES• Sustancia producida por la célula neoplásica

que refleja su crecimiento y/o actividad, y

permite conocer la presencia, evolución orespuesta terapéutica de un tumor maligno.• Incluye: 1)productos detectables in situ en

el tumor o sus metástasis y 2) productos

liberados a la sangre y detectables en suero.• Al 1º grupo dedicaremos nuestra atención.

 

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INMUNOCITOQUIMICA

• .Definición: técnica que hace visible unareacción antígeno - anticuerpo en muestras

citológicas.• .Inmunohistoquímica (IHQ): si dicha

reacción se realiza sobre tejidos.

• .Aporta mayor sensibilidad diagnóstica a loscriterios exclusivamente morfológicos.

 

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METODOLOGIA

• Se utilizan Ac Monoclonales (Moabs):poseen alta homogeneidad de lugares

específicos de unión con el antígeno.• Los antígenos no deben ser destruidos nienmascarados por los procedimientostécnicos.

• Fijador: debe estar en función de los gruposreactivos antigénicos que se pretendedemostrar.

 

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METODOLOGIA

• Fijador: debe buscar un equilibrio entre lapreservación de la morfología y la

inmunoreactividad.• Se clasifican: 1) actúan por precipitación2) actúan estableciendo uniones cruzadas.

• Sistemas de revelado: hacen visible lareacción (IFD, IFI).

• Aplicable a PAAF, derrames, bloquescelulares, improntas, etc.

 

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PANELES DE

ANTICUERPOS• Los paneles de Moabs se realizan siguiendo 2

líneas: 1) por ANTIGENOS a estudiar

2) por TUMORES a detectar.• 1)Por Antígenos a detectar:• Ag Oncofetales : AFP, CEA.

• Mucinas: MUC1, MUC2, MUC3A, (CA-125,CA15-3, CA 27-29).• Citoqueratinas: 8, 18, 19, (CIFRA, TPS, TPA).

• Enzimas e inhibidores: NSE, SCC. 

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Tumores a estudiar

CQ VM LCA HMB

45

Carcinoma + - - -

Linfoma - + + -

Sarcoma - + + -

Melanoma - + + +

 

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Adenocarcinoma vsMesotelioma

AdenoC Mesotel.

CEA + -

CQ B Peso + +

CQ A Peso - +

CD 15 + -

B 72.3 + -

Desmina - +

 

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PROTOCOLO DE

PROCESAMIENTO DELIQUIDOS SEROSOS

 

PROTOCOLO DE

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PROTOCOLO DEPROCESAMIENTO DE

LIQUIDOS SEROSOS•Recepción de la muestra

Los líquidos obtenidos por punción seránremitidos rápidamente al laboratorio en 4 tubosa) tubo estéril para estudio bacteriológico.

b) tubo seco sin anticoagulante para estudiobioquímico.c) tubo con anticoagulante para estudio citológico.

d) tubo en anaerobiosis para determinación de pH. 

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Procesamiento

1) Macroscopía• color• aspecto• presencia o no de coágulo• presencia de restos tisulares

2) Centrifugación • convencional 2500 rpm 10’ 

 

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Procesamiento

3) Postcentrifugado• sobrenadante  - color

- aspecto

• sedimento  - volumen

- características -hemático- capa blanca celular

 

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Procesamiento

4) Estudio bioquímico del sobrenadante• glucosa

• proteínas totales

• colesterol

LDH• Tg (sobrenadante turbio)

• otras determinaciones - amilasa, urea, iones, etc.

 

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Procesamiento

5) Citología•   Frotis del sedimento resuspendido de

centrifugación convencional.

• CitocentrifugaciónSe realiza de rutina excepto en líquidos muy

hemorrágicos o purulentos, o con una gran capacelular en el sedimento convencional.Se resuspende el sedimento en 250ul de

sobrenadante y se carga la cápsula. 

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Ventajas de la citocentrifugación

• Mayor concentración celular.

• Disposición celular en monocapa evitando elsolapamiento.

• Conserva intacta la morfología celular.

• Permite realización de técnicas inmunocito-

químicas.

 

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• La citocentrifugación siempre debe ser realizadaen forma paralela a la centrifugaciónconvencional que aporta la noción cuantitativa de

los elementos celulares.

• De una serie de citologías de líquidos serosos que

fueron negativas para atipías citomorfológicasmediante centrifugación convencional , 36 %resultaron positivos para citocentrifugación.

 

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Procesamiento

6 ) Secado de lo frotis al aire y tinción con

MGG.Los tiempos de tinción son similares a los

empleados en extendidos hematológicos,

debiéndose acortar a la mitad la etapa deGiemsa.

 

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Confección del informe 

• Nombre del paciente• Procedencia• Datos filiatorios

• Tipo de material• Estudio realizado - macroscopía

- bioquímica

- citología- en suma diagnóstico

• Fecha