Cupriavidus pauculus, precedentemente noto come ceppo del gruppoCDC IVc-2, è un bacillo Gram-negativo ambientale di difficileidentificazione, spesso confuso con Pseudomonas spp. o Burkholderia spp.con i quali condivide numerose caratteristiche biochimiche e dichemiosensibilità.Raramente identificato come causa di infezioni umane, C. pauculus, è ingrado di provocare patologie clinicamente significative soprattutto inpazienti immunocompromessi con tumori ematologici, AIDS, e neisoggetti lungodegenti.Cupriavidus spp. è stato isolato dall’espettorato di pazienti affetti dafibrosi cistica (2, 3, 7) ed alcuni autori hanno riportato un caso diinfezione fatale sostenuto da C. gilardii in un soggetto in età pediatricaaffetto da anemia aplastica (4). Nonostante sia considerato causa diinfezioni nosocomiali, un caso di setticemia non fatale acquisita incomunità sostenuta da C. pauculus è stato riportato in un soggettoaffetto da leucemia (1) ed un altro caso di batteriemia in un neonatoimmunocompetente è stato pubblicato da Noyola ed Edwards (6).Tutti i ceppi del gruppo CDC IVc-2 crescono bene su piastre di agarMacConkey, Trypticase soy o agar con il 5% di sangue di montoneincubate in aerobiosi per 24 h a 37°C, dando colonie incolori, lisce,circolari e convesse. Gli isolati risultano catalasi ed ossidasi positivi, masi distinguono dai ceppi fenotipicamente simili per l’incapacità diridurre i nitrati a nitriti.Il profilo di sensibilità antibiotica in vitro evidenzia che i ceppiappartenenti al gruppo CDC IV c-2 sono generalmente resistentiall’ampicillina ed agli aminoglicosidi, mentre cefotaxime, ceftriaxone,imipenem, tetraciclina e ciprofloxacina sono i farmaci attivi (5).Si descrive il caso clinico di una pleurite essudativa causata da un ceppodel gruppo CDC IVc-2 in una paziente affetta da mielofibrosi.Nel mese di Febbraio 2011, un soggetto di sesso femminile, di anni 80,affetta da mielofibrosi, si ricovera presso il reparto di medicina delnostro ospedale con difficoltà respiratorie.Dall’anamnesi risulta una storia clinica di ipertensione, fibrillazioneatriale e mielofibrosi; nella settimana precedente al ricovero, inoltre, lapaziente riferisce febbre con diarrea e dolori addominali. All’esameobiettivo la paziente appare pallida e astenica. L’emocromo evidenzia:globuli rossi 3,81 x109 /mL (4.0 - 5.2 x109 /mL), emoglobina 8,3 g/dL (12.0– 16.0 g/dL); globuli bianchi 25,0 x106 /mL (4.0 - 11.0 x106/mL); VES 10mm/hour (0 - 10 mm/hour) e PCR 66,2 mg/L (0.0 - 7.0 mg/L).Sottoposta ad Rx torace, la paziente mostra versamento pleuricobilaterale, pertanto viene eseguita una toracentesi ed il liquido pleuricoviene inviato al nostro laboratorio.Il materiale biologico è sottoposto alle indagini microbiologiche secondoil seguente protocollo diagnostico:• esame microscopico mediante colorazione di gram e di ziehl neelsen• esame colturale su terreni solidi e brodi di arricchimento (tabella 1)

Vengono inoltre inviati i flaconi di emocoltura ed il siero per la ricercadi anticorpi anti: Coxsakie, Echovirus, Legionella, Chlamydia,Micoplasma e Coxsiella. Il liquido pleurico evidenzia una contaleucocitaria pari a 1280 elementi /mm3 ( 25% granulociti neutrofili).

Isolamento di un ceppo CDC IVc-2

dal liquido pleurico di una paziente con mielofibrosi

Ledonne R., Mauro M.V., Cavalcanti P., Filia M.A., Perugini D.,e Giraldi C.

U.O.C. di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare , Azienda Ospedaliera di Cosenza

CONCLUSIONII germi del gruppo CDC IVc-2 sono stati riconosciuti come patogeniopportunisti responsabili di infezioni nosocomiali in pazientiimmunocompromessi. Le soluzioni nebulizzate e l’acqua minerale sonoil possibile reservoir; nel nostro caso clinico la fonte dell’infezione non èstata identificata, tuttavia non si può escludere l’ossigeno terapiautilizzata dalla paziente in ambiente domiciliare.Pandoraea spp è un genere di recente identificazione, patogenoopportunista, causa di infezioni polmonari croniche in pazienti affettida fibrosi cistica e altre malattie polmonari; la sua identificazione nellaroutine di laboratorio risulta difficile per i limiti dei sistemi automaticiutilizzati, pur tuttavia la sua azione patogena non deve essere sotto-stimata laddove il soggetto presenti condizioni di immunosoppressione.

BIBLIOGRAFIA1 Dan, M., S. A. Berger, D. Aderka, and Y. Levo. 1986. Septicemia caused by the gram-negative bacterium CDC

IV c-2 in an immunocompromised human.J. Clin. Microbiol. 23:803

2 Degand, N., E. Carbonnelle, B. Dauphin, J. Beretti, M. Bourgeois, I. Sermet-Gaudelus, C. Segonds, P. Berche, X.Nassif, and A. Ferroni. 2008. Matrixassisted laser desorption ionization–time of flight mass spectrometry foridentification of nonfermenting gram-negative bacilli isolated from cystic fibrosis patients. J. Clin. Microbiol.46:3361–3367.

3 Kalka-Moll, W., J. LiPuma, F. Accurso, G. Plum, S. Koningsbruggen, and P.Vandamme. 2009. Airway infectionwith a novel Cupriavidus species in persons with cystic fibrosis. J. Clin. Microbiol. 47:3026–3028

4 Karafin M.,Romagnoli M., Fink D. L., Howard T.,Rau R., Milstone A.M., and Carroll K. C., Fatal InfectionCaused by Cupriavidus gilardii in a Child with Aplastic Anemia Journal of Clinical Microbiology, Mar. 2010,p. 1005–1007

5 Moissenet, D., M. Tabone, J. Girardet, G. Leverger, A. Garbarg-Chenon, and H. Vu-Thien. 1996. NosocomialCDC group IV c-2 bacteremia: epidemiological investigation by randomly amplified polylmorphic DNAanalysis.J. Clin. Microbiol. 34:1264–1266.

6 Noyola, D. E., and M. S. Edwards. 1999. Bacteremia with CDC group IV c-2in an immunocompetent infant.Clin. Infect. Dis. 29:1572.

7 Vay, C., S. Garcia, G. Alperovic, M. Almuzara, M. Lasala, and A. Famiglietti.2007. Bacteremia due toCupriavidus paucula (formerly CDC group IVc-2) in a hemodialysis patient. Clin. Microbiol. Newsl. 29:30–32.

Dopo una settimana dal ricovero, si osserva un ulteriore incremento deiglobuli bianchi (37,9 x106 /mL) e viene eseguita un’altra toracentesi cheevidenzia un aumento dei globuli bianchi (11920 globuli bianchi/mm3

con il 72% granulociti neutrofili).Dalle piastre di agar con il 5% di sangue di montone incubate per 5giorni in aerobiosi, si rileva la crescita di piccole colonie che all’esamemicroscopico, eseguito con colorazione di Gram, risultano essere bacilliGram negativi. Le sottocolture su agar MacConkey, evidenziano lacrescita di colonie grigiastre, lucide e dalla forma rotondeggiante,catalasi ed ossidasi positive. Il sistema Bact ALERT segnala la positivitàdel campione incubato in terreno di arricchimento per aerobi dopo 5giorni di incubazione. Le colonie isolate dai terreni solidi e dallesottocolture sono identificate dal sistema Vitek 2 (BioMérieux, Marcyl'Étoile, France) come Cupriavidus pauculus.Trattandosi di un germe di raro isolamento nel nostro laboratorio, ilceppo viene inviato presso l’Istituto Superiore di Sanità per confermarel’identificazione.I test di sensibilità antibiotica sono eseguiti secondo il metodo di Kirby-Bauer in accordo alle linee guida del CLSI usando agar Mueller Hinton.Il ceppo isolato risulta sensibile ai seguenti antibiotici: Ciprofloxacina,Ceftazidime, Trimetropin-Sulfamethoxazole e resistente all’Amikacina.Viene instaurata una terapia antibiotica con ciprofloxacina (400 mg ogni12 ore iv) e dopo 5 gg la paziente viene dimessa con una terapia orale diCiprofloxacina (750 mg ogni 12 ore) per 2 settimane.Le indagini sierologiche e la ricerca di Mycobacterium Tubercolosisrisultano negative. 15 giorni dopo la dimissione la conta leucocitaria sulliquido pleurico evidenzia un netto miglioramento (5790 globulibianchi/mm3) ed alle visite di controllo successive, dopo ilcompletamento della terapia antibiotica, la paziente non mostra segni diinfezione recidivante.I tests di sequenziamento del gene per l’rRNA 16S, eseguiti dall’IstitutoSuperiore di Sanità, identificano il germe come Pandoraea apista, ceppoappartenente, come Cupriavidus pauculus, al gruppo CDC IVc-2 .

TERRENOINCUBAZIONE

LETTURATemperatura Atmosfera Tempo

Agar sangue 37°C 5% CO2 5gg quotidiana

37°C anaerobica 5gg quotidiana

Agar cioccolato 37°C 5% CO2 48h quotidiana

Brodo per aerobi/anaerobi

(BactAlert 3D BioMérieux,

Marcy l'Étoile, France).

37°CAerobia/anaerobi

a (in agitazione) 5 gg automatica

MGIT + IUTM 37°C aria 6 settimane settimanale

Tabella 1