Lubomír Kovář

Mikrobiologický ústav AVČR v.v.i.Vídeňská 1083, Praha 4-Krč

IMUNOGENNÍ SMRT NÁDOROVÝCH BUNĚK INDUKOVANÁ HPMA KONJUGÁTY.

Imunogenní vs. neimunogenní apoptóza

Imunogenní vs. neimunogenní apoptóza

Obeid, Nat Med. 2007 Apetoh, Nat Med. 2007 Špíšek, Blood. 2007

Imunogenní vs. neimunogenní apoptóza

Obeid, Nat Med. 2007 Apetoh, Nat Med. 2007 Špíšek, Blood. 2007

Imunogenní vs. neimunogenní apoptóza

Obeid et al. 2007

Molekulární mechanismy imunogenní apoptózy

Zitvogel et al. 2008

Dox-HPMAAM Dox-HPMAHYD

Dox=doxorubicin; HPMA=N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid

HPMA konjugáty

Protinádorová imunita indukovaná HPMA konjugáty

Říhová et al, Trends Biotechnol. 2009 27:11-7

Retransplantace myší vyléčených konjugátem Dox-HPMAHYD.

Dox-HPMAHYD (1 x 25 mg Dox. eq./kg)

Dox-HPMAHYD (1 x 75 mg Dox. eq./kg)

volný doxorubicin (3 x 6 mg/kg)

kontrola

Protinádorová imunita indukovaná HPMA konjugáty

Říhová et al, Trends Biotechnol. 2009 27:11-7

Retransplantace myší vyléčených konjugáty Dox-HPMAAM a Dox-HPMAAM-HuIg.

Dox-HPMAAM

Dox-HPMAAM-HuIg

kontrola

Plazmatická membr

ána

CRTERp57

CD47β-actin

Buněčný

lyzát

CRTERp57

CD47β-actin

Kontrola

DoxDox-

HPMAH

YD

Dox-HP

MAA

M

Dox-HPMA

-HuIgAM

Imunogenní apoptóza – kalretikulin (CRT)

p-eIF2a; 3h

p-eIF2a; 5h

eIF2α

Kontrola Dox Dox-HPMAHYD

Dox-HPMAA

M

Dox-HPMA-HuIgAM

Imunogenní apoptóza – kalreticulin (CRT)

Imunogenní apoptóza – kalreticulin (CRT)

Přerušovaná čára ukazuje míru exprese kalretikulinu po inkubaci buněk s konjugátem Dox-HPMAAM.

Imunogenní apoptóza – heat shock proteins (HSP)

Imunogenní apoptóza – heat shock proteins (HSP)

HMGB1, supernatant, 24h

HMGB1, supernatant,72h

β-aktin, supernatant, 72h

HMGB 1, lyzát, 72h

KontrolaDox Dox-

HPMAHYD

Dox-HPMAAMDox-HPMA-

HuIgAM

Imunogenní apoptóza – HMGB1

Uvolňování High-mobility-group box 1 (HMGB1) proteinu z EL4 buněk.

Dox-HPMAAM-HuIgKontrola Doxorubicin Dox-HPMAHYD Dox-HPMAAM

Hoechst 33258

24h

24h; aCRT

CFSE

In vitro fagocytóza nádorových buněk

Gated on CD11c+ dendritic cells

CD8α

PBS Kontrola Doxorubicin

Dox-HPMAHYD Dox-HPMAAM Dox-HPMAAM-HuIg

CFSE

In vivo fagocytóza nádorových buněk

Gated on CD11c+ dendritic cells

In vitro fagocytóza nádorových a nenádorových buněk

In vivo indukce protinádorové odpovědi (Winnův test)

Závěr

Závěr

· Volný a hydrazonově vázaný doxorubicin stimulují expresi kalretikulinu a HSPs a uvolnění HMGB1.

Závěr

· Volný a hydrazonově vázaný doxorubicin stimulují expresi kalretikulinu a HSPs a uvolnění HMGB1.

· Amidicky vázaný doxorubicin stimuluje jen expresi HSPs.

Závěr

· Volný a hydrazonově vázaný doxorubicin stimulují expresi kalretikulinu a HSPs a uvolnění HMGB1.

· Amidicky vázaný doxorubicin stimuluje jen expresi HSPs.

· Nádorové buňky inkubované s volným, hydrazonově i amidicky vázaným doxorubicinem jsou fagocytovány dendritickými buňky.

Závěr

· Volný a hydrazonově vázaný doxorubicin stimulují expresi kalretikulinu a HSPs a uvolnění HMGB1.

· Amidicky vázaný doxorubicin stimuluje jen expresi HSPs.

· Nádorové buňky inkubované s volným, hydrazonově i amidicky vázaným doxorubicinem jsou fagocytovány dendritickými buňky.

· HPMA vázaný doxorubicin je lepší stimulátor protinádorové imunity než volný

Závěr

Volný doxorubicin

HPMA vázaný doxorubicin

Závěr

Volný doxorubicinlepší stimulátor imunogenní apoptózy in

vitro

HPMA vázaný doxorubicin

Závěr

Volný doxorubicinlepší stimulátor imunogenní apoptózy in

vitro

HPMA vázaný doxorubicinlepší induktor protinádorové imunity in

vivo

Mikrobiologický ústavAVČR, v.v.i.

Blanka Říhová

Marek Kovář Ondřej HovorkaMilada Šírová David VětvičkaJakub Tomala Martina KabešováPavlina Jungrová Helena Mišurcová

Ústavmakromolekulární chemie

AVČR, v.v.i.

Karel Ulbrich

Tomáš Etrych Dana Plocová

Petr Chytil Jiří StrohalmMichal Pechar Vladimír ŠubrMartin Hrubý Martin Studenovský