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PREPARATIVA

PRESENTAN: Garca Rojas Faviola Jacobo Martnez Cristopher Joel Rivero Badillo

4/16/12

La cromatografa preparativa comprende un amplio campo de aplicaciones, desde el aislamiento de 1 g de muestra para identificacin espectroscpica hasta el aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g.

Que es?

La cromatografa preparativa se diferencia de la tcnica bsica en muchos aspectos, desde la preparacin de la suspensin del adsorbente que se hace con menos agua que de ordinario; esto ayuda a estabilizar el grosor de las placas que se precisa para una carga de mayor magnitud. Se secan al aire antes de activarlas en el horno.

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Generalmente se utilizan partculas cuyo tamao oscila entre 10 y 25 m.

La gel de slice es la sustancia ms empleada C . Preparativa. Se trata de una fase estacionaria inorgnica de caractersticas polares, y a la que es necesario activar por calefaccin previa a su uso. Esta fase estacionaria resulta adecuada para separar numerosas sustancias, tales como aminocidos, alcaloides, azcares, cidos grasos, lpidos, aceites esenciales, esteroides, as como tambin cationes y aniones inorgnicos.

ADSORBENTE S INORGNICOS (fe)

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El mecanismo predominante con esta fase estacionaria es la adsorcin, siendo posible la separacin de sustancias hidroflicas neutras, cidas y bsicas eligiendo convenientemente el eluyente.

Otro adsorbente polar, tambin muy utilizado, es la almina. Para obtener resultados reproducibles y separaciones ptimas, es necesario proceder a su activacin, con objeto de controlar la cantidad de agua adsorbida, la cual bloquea los centros activos. Dicha activacin normalmente se lleva a cabo calentando a unos 125-150 C durante un tiempo determinado.

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Para la preparacin de las placas, el material que constituye la fase estacionaria se dispone en forma de suspensin (en agua o en otro disolvente) y se extiende sobre una lmina de vidrio o de plstico, que puede ser rgido o flexible. Es fundamental que la capa sea lo ms uniforme posible, para lo cual suelen utilizarse dispositivos como el representado en la figura 12.21.

placa s

fig. 12.21 Preparacin de placas para cromatografa de preparacin. 4/16/12

Las placas utilizadas en cromatografa preparativa son placas grandes, de aproximadamente 20x20 cm, 20x40 cm y 20x100 cm; que permiten separar aproximadamente 1 g. de mezcla utilizando unos 35 g. de adsorbente.

El espesor ptimo oscila desde un mnimo de 0.5-1 mm o 1-2 mm. Empleando adsorbentes inorgnicos

As como cmaras separadoras para el revelado simultaneo de varias placas de estos tamaos.

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La siembra de la muestra se realiza mediante la ayuda de una jeringuilla o tubo capilar. La siembra se realiza a lo largo de una lnea recta (existen en el mercado diverso utensilios para evitar torcerse). Si al terminar la primera siembra todava queda muestra, se seca la primera siembra y se aplica la segunda, intentando que sta quede sobre la anterior, para as conseguir que el frente sea lo ms estrecho posible. La siembra debe realizarse a lo ancho de la placa. Una vez sembrada la muestra se desarrolla la cromatografa. Se utiliza un adsorbente con indicador fluorescente para ver en la lmpara ultravioleta donde han quedado las manchas de los diferentes compuestos, dichas manchas se marcan.

siembr a

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Una vez localizados los compuestos, stos se extraen de la fase estacionaria, uno a uno, con la ayuda de una esptula raspar para obtener el polvo este se recoge y se coloca sobre un papel de filtro u otro soporte. Posteriormente se coloca cada componente en un Erlenmeyer, y se mezcla con un disolvente (metanol). Una vez disuelto el compuesto se filtra varias veces para separar el compuesto y la fase estacionaria. Una vez separado se elimina el disolvente (destilacin), con lo cual se obtiene el componente separado.

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Rapidez Escaso consumo de eluyente Fcil deduccin de los eluyentes apropiados, por medio de ensayos previos en capas mas finas. Zonas de sustancias ntidas y fcilmente comprobables. Aislamiento sencillo de las manchas del cromatograma.

VENTAJ AS

Que sustancias sensibles pueden alterarse sobre la gran superficie de la capa

desventa ja

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CARACTERIZACION DEL GASOIL

Estudio de caso

Para esta caracterizacin se ha desarrollado un mtodo de separacin que se basa en la utilizacin de columnas de cromatografa lquida preparativa por las que se pasan diferentes disolventes que eluyen las correspondientes fracciones.

La elucin se controla continuamente por espectroscopa infrarroja (FTIR).

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LAS CONDICIONES DE TRABAJO SON LAS SIGUIENTES:

4.28 gr de gasoil se sometieron a cromatografa preparativa en columna abierta (2 cm de dimetro por 30 cm de longitud). En 43.6 gr de gel de slice (0.063-0.200 mm, 7230 mesh ASTM, Kieselgel 60 Merk). Dicha columna se preactiv 12 horas a 110 C antes de su uso. La columna se empaqueto con el primer disolvente usado en la elucin (hexano). El flujo del disolvente empleado fue de 5 ml/min y el volumen muerto de la columna fue de 60 ml.

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Los disolventes empleados y sus volmenes fueron los siguientes:

FRACCIN Hexano Tolueno 1 Tolueno 2 Cloroformo Tetrahidrofurano

VOLUMEN (ml) 500 20 400 360 300

El hecho de que aparezcan dos fracciones de tolueno se debe a que en la elucin con tolueno aparecen dos bandas bien diferenciadas que se recogieron separadamente.

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Tras la elucin se elimino el disolvente de las fracciones en rotavapor. Estas se recogieron con CHCl3 en viales y se secaron con N2 a temperatura ambiente y posteriormente, en estufa de vaco durante 1 hora a 30 C.

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