기기분석 액체크로마토그래피(hplc)...

크로마토그래피의 종류(BPC)기기분석기기분석__액체액체크로마토그래피크로마토그래피(HPLC)(HPLC)

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카이랄 크로마토그래피a) 'Pirkle' CSPs

Chiral phenylglycin or leucine derivatives5㎛ silica (ionic, covalent bonding)

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카이랄 크로마토그래피b) chiral protein : albumin

mobile phase : Phosphate buffer + small 1-propanol

c) ligand exchange 'chiral amino acid와 Cu2+ ‘chelate' separate α-amino acids, complex with Cu2+


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d) cyclodextrin

이온교환 크로마토그래피기기분석기기분석__액체액체크로마토그래피크로마토그래피(HPLC)(HPLC)

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이동상에 있는 용매 이온과 정지상에 있는 교환 이온과의 상호 작용의 세기


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• Suppressor column (억제관)분석 성분 이온에 영향을 주지 않고 전도도 측정에 방해를 주는이온을 방해하지 않는 이온으로 바꾸는 column (이온교환수지)


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• Retention of solution에 영향을 주는 인자- Sample의 특정 성분 성질- mobile phase의 종류와 온도- pH, 온도, 유기용매의 유무


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- Ion-pair chromatography (column : C-18)

- 비극성 정지상에는 전혀 머무르지 않는 아미노산이나 유기산과 같은 극성이아주 큰 화합물을 분리할 수 있도록 RP를 개선한 방법임

- 머무름을 증가시키려면 용질의 극성을 줄여야 함


이온쌍 (ion-pair) 크로마토그래피

9http://home.dongguk.edu/user/milab

- 머무름을 증가시키려면 용질의 극성을 줄여야 함- 이온 전하를 변화 시키기 위하여 이동상의 pH를 변화시키기도 하지만, 이것

으로 불충분할 때는 이온쌍 시약을 이동상에 첨가함- 이온쌍 시약은 분석물질과 반대의 전하를 띠는 작용기를 포함하는 탄소 사슬

을 갖는 화합물임- 이온쌍 시약은 분석물질과 ‘중화된’ 이온쌍, 즉 극성이 적고, 상당히 안정하며, - 지방친화적인 화학종을 형성하여 초기에는 비극성인 정지상에 달라붙으나

결국에는 이온교환 메커니즘에 따라 용리됨- 따라서 정지상에서 무기 양이온 또는 음이온의 분리가 가능함

cation : alkylsulfonic acid salts, pentane, hexane, octane, sulfonic acid,silver salt

anion : tetraalkylammonium salt, dialkylamine, ammonium salts

Ø Retention time에 영향을 주는 요소




Ø Retention time에 영향을 주는 요소1) alkyl chain length 길면 → tR 증가2) 농도 증가 → tR 증가3) pH 증가 → tR 증가4) 유기 용매 농도 증가 → non-polarity → tR 감소

이온쌍 (ion-pair) 크로마토그래피기기분석기기분석__액체액체크로마토그래피크로마토그래피(HPLC)(HPLC)


소수성 상호작용 크로마토그래피Hydrophobic interaction chromatography (HIC)

- 수용성 단백질과 같은 생유기 화합물의 분리에 주로 사용됨- 화합물들의 소수성의 차이를 이용함- 비극성 정지상을 사용하며 높은 염농도 조건 (예, pH7에서 2 M황산 암모늄

과 0.1M 인산 일소듐)에서 용리함



과 0.1M 인산 일소듐)에서 용리함- 단백질의 소수성 부분이 정지상에 흡착 되며, 역염 기울기를 시작하여 염농

도를 감소 시키면 단백질이 이동상으로 탈착되며, 친수성이 높은 순서대로용리됨

- 이 과정은 화합물 합성시 워크업 과정에서 포화 소금용액 (brine)을 넣어주는것과 동일한 원리임

소수성 상호작용 크로마토그래피기기분석기기분석__액체액체크로마토그래피크로마토그래피(HPLC)(HPLC)


Supercritical Fluid Chromatography

1. 서론

Sample 1) nonvolatile or thermally unstable compound 2) contain no functional groups for the detection of

초임계 유체 크로마토그래피기기분석기기분석__액체액체크로마토그래피크로마토그래피(HPLC)(HPLC)

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2) contain no functional groups for the detection ofmethod spectroscopic or electrochemical

- Critical temperature : 그 온도 이상에서는 압력에 관계없이 액상으로존재 할 수 없는 온도 ( a supercritical fluid )

- Critical pressure : 그 임계온도에서의 증기압

§ 기체상과 액체상의 중간의 밀도, 점도 등 여타 성질을 갖는다.

Phase Diagrams기기분석기기분석__액체액체크로마토그래피크로마토그래피(HPLC)(HPLC)

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2. 기기


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- HPLC와 비슷다른 점 1) Oven (이동상의 정밀한 온도 조정)

2) Restrictor (제어기) : 초임계 유체에서 기체로 바꾸기 위한,압력 유지, 500~100 ㎛ 열린 모세관 column을

→ 5~10 ㎛ 모세관으로 2~10 ㎝ 길이로 연결

- Effect of pressure압력의 증가 → 이동상의 밀도 증가 → 용매력의 증가HPLC → 용매변화GC → 온도 변화SFC → 압력변화


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- Stationary phase모세관, packed column(충전관) 모두 사용가능 → 모세관을 많이 사용

10~20 ㎜ Φ : 0.05~0.10 ㎜ 두께 : 0.05~1㎛

- Mobile phaseCO2

or CO2/1~5% MeOH, ethane, pentane, nitrous oxide, NH3, THF, ether

Experiments

1. 이동상 제조


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2. Filtration and degassing


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3. 펌프내부 기포제거 (Priming)


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4. Column 확인


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5. Pump 압력 확인


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6. Column 누수 확인


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7. 온도 확인


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8. UV Detector


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9. Sample preparation


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10. Sample filtration


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11. Injection


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Analytical result from HPLC기기분석기기분석__액체액체크로마토그래피크로마토그래피(HPLC)(HPLC)

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