DIAGNOSTICO

DIAGNOSTICOConsideraciones generalesLas muestras clnicas habituales para el estudio de CMV son: suero para deteccin de anticuerpos, sangre completa para estudio de la inmunidad celular y para tcnicas de deteccin directa, y orina, saliva, sangre completa, plasma, suero, lavado broncoalveolar (LBA), lquido cefalorraqudeo y tejido para el estudio de CMV por tcnicas de deteccin directa. Dada la labilidad de CMV, las muestras que se enven para diagnstico directo deben mantenerse refrigeradas (4-10 C) hasta su procesamiento. Si este se demora ms de 72 h se conservarn a temperaturas de 80 C o menores, nunca a 20 o 40 C (congeladores normales).

Diagnstico serolgicoDeteccin de respuesta inmune humoral. Las tcnicas serolgicas para deteccin de anticuerpos especficos IgG e IgM frente a CMV son tiles fundamentalmente para: diagnstico de infeccin primaria sintomtica (mononucleosis, hepatitis) y determinacin del estatus serolgico de donantes y receptores de rganos. La demostracin de anticuerpos tipo IgM especficos o de seroconversin de anticuerpos IgG es el mtodo tradicional para detectar infeccin primaria. Sin embargo, la determinacin de IgM en muchas ocasiones da lugar a falsos resultados positivos, no permite demostrar infeccin recurrente y sus valores permanecen detectables durante meses. Por ello puede ser til para diagnstico de infeccin primaria sintomtica en nios, pero se desaconseja en la mujer embarazada, en la cual la mejor opcin es determinar la seroconversin de anticuerpos IgG.Deteccin de respuesta inmune humoral. Las tcnicas serolgicas para deteccin de anticuerpos especficos IgG e IgM frente a CMV son tiles fundamentalmente para: diagnstico de infeccin primaria sintomtica (mononucleosis, hepatitis) y determinacin del estatus serolgico de donantes y receptores de rganos. La demostracin de anticuerpos tipo IgM especficos o de seroconversin de anticuerpos IgG es el mtodo tradicional para detectar infeccin primaria. Sin embargo, la determinacin de IgM en muchas ocasiones da lugar a falsos resultados positivos, no permite demostrar infeccin recurrente y sus valores permanecen detectables durante meses. Por ello puede ser til para diagnstico de infeccin primaria sintomtica en nios, pero se desaconseja en la mujer embarazada, en la cual la mejor opcin es determinar la seroconversin de anticuerpos IgG.

CultivoCMV replica eficientemente en fibroblastos humanos. Las lneas celulares ms frecuentemente usadas son fibroblastos de pulmn embrionario como MRC-5. El tiempo que tarda en aparecer el efecto citoptico en fibroblastos se correlaciona con la carga viral en la muestra. En cualquier caso, el crecimiento en cultivo tradicional en tubo es lento y se requieren al menos 21 das para dar un resultado negativo.La mejor alternativa para la propagacin del virus en cultivo celular es el empleo de la tcnica de shell-vial (SV), que permite un diagnstico en 18-48 h. La muestra se inocula por centrifugacin sobre una monocapa de lnea celular MRC-5 crecida en un cubreobjetos circular que se deposita en un tubo de fondo plano. Tras incubacin durante 18-48 h se extrae el cubreobjetos y se realiza una inmunofluorescencia sobre la monocapa con anticuerpos monoclonales frente al antgeno de fase inmediata precoz p72.

Prueba de antigenemiaLa prueba de antigenemia se basa en el empleo de anticuerpos monoclonales para detectar la protena viral del tegumento pp65, producto del gen UL83, que es el antgeno viral mayoritario presente en leucocitos de sangre perifrica durante la infeccin por CMV. En esta tcnica se separa la capa leucocitaria de sangre completa anticoagulada. Un nmero determinado de leucocitos (habitualmente 100.000) se deposita sobre un portaobjetos con ayuda de citocentr- fuga y se tien con anticuerpos monoclonales murinos frente a la protena pp65. La PCR es la tcnica molecular ms empleada para la cuantificacin de ADN de CMV en muestras clnicas.El empleo de plasma en lugar de sangre completa ha sido recomendado por su mayor correlacin con replicacin activa de CMV, ya que la deteccin de ADN de CMV en sangre completa puede reflejar solamente la presencia del virus en los linfocitos donde CMV permanece en estado de latencia tras la infeccin primaria48. Igualmente, como reflejo de replicacin activa y diseminacin del virus. Diagnstico molecular

DIAGNOSTICO DIFERENCIALPuede ser muy difcil diferenciar las infecciones de CMV adquiridas despus del nacimiento en hospederos normales, de las causadas por virus Epstein-Barr (EBV). Esto ocurre en la mononucleosis, la hepatitis A,B,C, u otros virus de la hepatitis, la neumona intersticial y la causada por Pneumocystis carinii. Asimismo, resulta difcil diferenciar las infecciones congnitas por toxoplasmosis, rubola, HSV; tambin es importante diferenciar entre sfilis congnita y sepsis bacteriana, u otras posibles entidades que causan confusin en recin nacidos de las causadas por CMV. Todas pueden acompaarse de manifestaciones similares. Estas diferencias se establecen por estudios de laboratorio. En el presente, se dispone de determinaciones de IgM especfica para CMV, toxoplasmosis, rubola y HSV. La recuperacin del agente especfico en CMV, rubola o HSV es un medio riguroso de identificacin. El mtodo de inmunofluorescencia de anticuerpos distingue la formacin activa de anticuerpos de la inmunidad pasiva de origen materno.