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Attivazione e deplezione selettiva
di linfociti antigene-specifici
DottorandaElisa Piscianz
TutoreDr. Marco Rabusin
Dottorato di Ricerca in
MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO
E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA
direttore: prof . A. Ventura
XXIV Ciclo
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Trapianto di cellule staminali emopoietiche (HSCT)
trapianto
cellule del donatore
Ag virali altri Ag cellule staminali
attecchimento
ricevente
cellule infettate
GvI GvT
cellule tumorali
GvHD
celluledel ricevente
cellule target
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Obiettivi dello studio
• attivazione delle cellule Ag-specifiche
• inibizione o killing delle cellule attivate
Identificare le condizioni migliori per:
Mettere a punto un metodo per
identificare e depletare
i linfociti T allo-reattivi
entro 48-72 ore
risparmiare le cellule resting
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cellule allo-geniche da donatore
Mixed Leukocyte Reaction (MLR)
cellule stimolatrici linfociti responder
dal ricevente
LCL-EBV
cellule dendritiche
farmaci
Analisi:• vitalità: 7AAD• proliferazione: 3H-Thy, CFSE
allo-deplezione specifica
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Farmaci
• Folate methabolism inhibitionMethotrexate (Genestier L, J Clinical
Investigation, 1998)
• JAK pathway inhibitionTasocitinib (Manshouri T, Cancer
Science, 2008)
• Membrane electron transport inhibitionPhenoxodiol (Herst PM, Haematologica,
2009)
• GSH depletion3-HAA (Lee SM, Immunology Letters, 2010)
• Proteasome inhibitionBortezomib (Blanco B, Blood, 2006)
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Screening dei farmaci
3-HAA• metabolita Trp (IDO enzyme)• deplezione GSH• associazione con MnCl2 (Hiramatsu R, J Cellular Biochemistry,
2008)
tossicitàcellule resting
killing cellule attivate
Bortezomib• inibitore del proteosoma• compromette via IFk – NF-kB
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3-HAA e MnCl2
Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011
stimolazione con LCL-EBV
deplezione con 3-HAA/MnCl2
vitalità: 7AAD
60 ore
proliferazione: 3H-Thy
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3-HAA, MnCl2, Bortezomib
Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011
stimolazione con LCL-EBV
deplezione con 3-HAA/MnCl2/Bortezomib
vitalità: 7AAD
60 ore
proliferazione: 3H-Thy
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Stimolazione con DCs e deplezione con farmaci
MLR
MLR + 3-HAA/MnCl2
PHA
non stimolato
PHA + 3-HAA/MnCl2
non stimolato + 3-HAA/MnCl2
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Test di re-stimolazione
stimolazione con DCs
deplezione con 3-HAA/MnCl2
re-stimolazione (DCs 1st e DC 3rd)
60 ore
vitalità : 7AAD
60 ore
proliferazione: CFSE
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Conclusioni e prossimo futuro…
• metodo attuabile• somministrazione/associazione dei farmaci modulabile
• risposta a patogeni• Treg
emivita dei farmaci dopo deplezione