repository.uinjkt.ac.idrepository.uinjkt.ac.id/dspace/bitstream/123456789/34266...dr. h. arif...
TRANSCRIPT
v
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum wr.wb.
Alhamdulilahirabbil’alamin, puji serta syukur saya panjatkan
kehadirat Allah SWT, karena atas segala rahmat dan karunia-Nya saya
dapat menyelesaikan penelitian ini. Shalawat serta salam semoga tetap
tercurah limpahkan pada Nabi besar Muhammad SAW, yang membawa
cahaya kebenaran sampai akhir zaman.
Penelitian ini tidak dapat terlepas dari bantuan berupa masukan,
kritik maupun saran dari berbagai pihak. Untuk itu penulis menyampaikan
rasa terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Prof. Dr. H. Arif Sumantri, M. Kes selaku Dekan FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta, dr. Achmad Zaki, M. Epid, SpOT selaku Ketua
Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta, serta seluruh dosen Program Studi Kedokteran dan
Profesi Dokter yang selalu membimbing serta memberikan ilmu kepada
saya selama menjalani masa pendidikan di Program Studi Kedokteran dan
Profesi Dokter FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. Ibu Nurlaely Mida Rachmawati, M. Biomed, DMS, dan dr. Devy Ariany,
M. Biomed selaku dosen pembimbing penelitian saya, yang selalu
membimbing dan mengarahkan saya dalam menyelesaikan penelitian ini
dengan baik. Juga para dewan penguji dr. Djauhari Widjajakusumah, AIF,
PFK dan dr. Ahmad Azwar Habibi, M.Biomed.
3. Kedua orang tua saya yang tercinta, H.Mulia Nasution dan Hj. Samroh
Nasution yang selalu memberikan cinta dan kasih sayang, memberikan
doa, nasihat, serta semangat dalam hidup saya.
4. Kakak saya, Sutan Rijal Hakim Nasution dan adik saya, Putri Amalia
Nasution yang menjadi penyemangat hidup saya dan banyak membantu
saya dalam penelitian ini.
vi
5. Drg Laifa selaku penanggungjawab (PJ) laboratorium Riset. Ibu Laely
selaku PJ Animal house dan Ibu Endah Wulandari selaku PJ laboratorium
Biokimia yang telah memberikan izin atas penggunaan lab pada penelitian
ini.
6. Untuk teman seperjuangan penelitian, Fahrizal Harris Harahap, Fadel
Askary dan annisa Mardhiyah.
7. Seluruh mahasiswa PSPD 2013 yang selalu memberi dukungan dan
berjuang bersama meraih mimpi di masa depan.
8. Laboran yang terlibat Ibu Ai, Ibu Lilis, Mas Rachmadi. Juga pada Mas
Haris, Mas Panji yang sangat membantu berlangsungnya penelitian ini.
9. Semua pihak yang tidak bisa saya sebitkan satu persatu.
Saya sangat mengharapkan kritik dan saran dalam penelitian ini agar
dapat terus dilanjutkan dan bermanfaat untuk berbagai pihak Karena
Penelitian ini masih jauh dari kesempurnaan, saya sangat mengharapkan
kritik dan saran untuk perbaikan dan kelanjutan penelitian ini. Demikian
laporan penelitian ini saya tulis, semoga dapat memberikan manfaat bagi
penulis khususnya dan para pembaca pada umumnya.
Jakarta, 23 Desember 2016
Penulis
vii
ABSTRAK
Fathur Rahman N. Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter . Efek
Pemberian Ekstrak Kayu Nigella sativa terhadap Glukosa Darah, HDL Dan
LDL Tikus Diabetes Mellitus yang Diinduksi Streptozotocin. 2016.
Diabetes melitus (DM) merupakan penyakit kronis yang ditandai dengan
hiperglikemia yang berhubungan dengan defisiensi atau resistensi insulin.
Penyakit ini ditandai dengan peningkatan kadar glukosa darah dan gangguan
metabolisme salah satunya lemak. Habbatusauda (Nigella sativa) merupakan
tanaman dari timur tengah yang menjadi pengobatan alternatif untuk menurunkan
glukosa darah. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa ektrak Nigella sativa
dapat memberikan efek signifikan (p<0.05) terhadap penurunan kadar glukosa
darah dan LDL serta peningkatan HDL. Untuk itu dilakukan penelitian dengan
tujuan untuk mengetahui efek pemberian ektrak Nigella sativa 300 mg/kgbb per
hari terhadap glukosa darah, HDL dan LDL tikus DM strain Sprague dawley yang
diinduksi Streptozotocin selama 21 hari. Hasil penelitian didapatkan penurunan
kadar glukosa darah (p<0.05), peningkatan HDL (p<0.05) yang signifikan dan
penurunan LDL (p>0,05) yang tidak signifikan. Pada penelitian ini dapat
disimpulkan bahwa ekstrak Nigella sativa dapat menurunkan kadar glukosa darah
dan LDL serta meningkatkan kadar HDL pada tikus diabetes strain Sprague
dawley yang diinduksi Streptozotocin.
Kata kunci: Nigella sativa, glukosa darah, HDL,LDL, DM, tikus
ABSTRACT
Fathur Rahman N. School of Medicine. Effect of Nigella sativa Extracts on
Blood Glucose, HDL and LDL in streptozotocin-induce diabetic rat. 2016.
Diabetes mellitus (DM) is a chronic disease characterized by hyperglycemia
associated with a deficiency or insulin resistance. The disease is characterized by
elevated blood glucose levels and metabolic disorders such as fat. Habbatusauda
(Nigella sativa) is a plant from the middle east which is an alternative treatment to
lowering blood glucose. Previous research suggests that Nigella sativa extract can
provide a significant effect (P <0.05) towards a decrease in blood glucose levels
and LDL and increase HDL. This study was carried out to investigate the effects
of Nigella sativa extract, 300 mg / kg per day for 21 days on blood glucose, HDL and LDL level in streptozotocin-induce diabetic rats. The result showed
significant decrease of blood glucose levels (p <0.05), an increase of HDL (p
<0.05), and not significant decrease of LDL level (p> 0.05) . In conclusion,the
administration of Nigella sativa could decrease blood glucose and LDL and
increase HDL level in streptozocin-induced diabetic rats.
Keywords: Nigella sativa, blood glucose, HDL, LDL, DM, rat
viii
DAFTAR ISI
LEMBAR PERNYATAAN ..........................................................................ii
LEMBAR PERSETUJUAN ........................................................................iii
LEMBAR PENGESAHAN ..........................................................................iv
KATA PENGANTAR ...................................................................................v
ABSTRAK ...................................................................................................vii
DAFTAR ISI ...............................................................................................viii
DAFTAR TABEL ..........................................................................................x
DAFTAR GRAFIK ......................................................................................x
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................xi
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................x
BAB 1 PENDAHULUAN
1.1 Latar belakang .................................................................................1
1.2 Rumusan masalah ...........................................................................2
1.3 Hipotesis .........................................................................................2
1.4 Tujuan penelitian ............................................................................2
1.4.1 Tujuan umum ........................................................................2
1.4.2 Tujuan khusus ........................................................................2
1.5 Manfaat penelitian ..........................................................................3
1.5.1 Bagi peneliti ..........................................................................3
1.5.2 Bagi institusi ..........................................................................3
1.5.3 Bagi masyarakat ....................................................................3
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Metabolisme Nutrien ......................................................................4
2.1.1 Karbohidrat ...........................................................................4
2.1.2 Protein ...................................................................................5
2.1.3 Lipid ..........................…........................................................6
2.1.4 Diabetes Melitus ...................................................................7
2.1.5 Patofisiologi Diabetes Melitus ............................................7
2.1.6 HDL dan LDL pada DM ….................................................9
2.1.7 Streptozotocin ...………….................………....................10
2.1.8 Habbatusauda (Nigella sativa) ............................................11
2.2 Kerangka Teori ………………………………………………....14
2.3 Kerangka Konsep .........................................................................15
2.4 Definisi Operasional .....................................................................16
ix
BAB 3 METODE PENELITIAN
3.1 Disain Penelitian ............................................................................17
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................17
3.2.1 Waktu Penelitian ................................................................17
3.2.2 Tempat Penelitian ...............................................................17
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian .....................................................17
3.3.1 Kriteria Inklusi ....................................................................18
3.4 Cara Kerja Penelitian ....................................................................18
3.4.1 Alat Penelitian .....................................................................18
3.4.2 Bahan Penelitian ..................................................................19
3.4.3 Adaptasi Hewan Sampel ......................................................19
3.4.4 Induksi Tikus dengan Streptozotocin ..................................19
3.4.5 Pemberian Ekstrak Nigella sativa .......................................20
3.4.6 Pengukuran Sampel .............................................................20
3.4.6.1 Glukosa Darah .........................................................20
3.4.6.2 HDL dan LDL..........................................................20
3.5 Pengolahan dan Analisis Data ......................................................21
3.6 Alur Penelitian ……………..........................................................22
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil dan Pembahasan ...…...….…...…....…………………........23
4.1.1 Glukosa Darah......................................................................23
4.1.2 High Density Lipoprotein (HDL).........................................25
4.1.3 Low Density Lipoprotein (LDL)..........................................27
4.2 Keterbatasan penelitian ...............................................................29
BAB 5 SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan ........................................................................................30
5.2 Saran ..............................................................................................31
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................31
LAMPIRAN .................................................................................................34
x
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1 Rata-rata Glukosa Darah Tikus Setiap Kelompok Penelitian …..23
Tabel 4.2 Hasil Analisa Data Glukosa darah setiap Kelompok Penelitian ..24
Tabel 4.3 Rata-rata Kadar HDL dari Setiap Kelompok ...............................25
Tabel 4.4 Hasil Analisa Data HDL Tikus Setiap Kelompok Penelitian.......26
Tabel 4.5 Rata-rata Kadar LDL dari Setiap Kelompok ...............................27
Tabel 4.6 Hasil Analisa Data LDL Tikus Setiap Kelompok Penelitian ......28
DAFTAR GRAFIK
Grafik 4.1 Rata-rata Glukosa Darah Tikus Setiap Kelompok Penelitian ....24
Grafik 4.2 Rata-rata Kadar HDL dari Setiap Penelitian ..............................26
Grafik 4.3 Rata-rata Kadar LDL dari Setiap Kelompok Tikus ...................28
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Surat Keterangan Tikus Sehat ..................................................34
Lampiran 2 Hasil Determinasi Tanaman .....................................................35
Lampiran 3 Hasil Pengujian Ekstrak ...........................................................36
Lampiran 4 Gambar Proses Penelitan ..........................................................37
Lampiran 5 Cara Perhitungan ......................................................................40
Lampiran 6 Riwayat Penulis ........................................................................42
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Metabolisme Karbohidrat ............................................................5
Gambar 2.2 Metabolisme Lipid ………………………...................................6
Gambar 2.3 Akibat Akut Diabetes Melitus .....................................................7
Gambar 2.4 Struktur Kimia STZ ....................................................................10
Gambar 2.5 Fase reaksi glukosa darah setelah induksi STZ (fase II-IV) ......11
Gambar 2.6 Nigella sativa .............................................................................12
Gambar 6.1 Surat keterangan tikus sehat .......................................................34
Gambar 6.2 Surat hasil determinasi tanaman .................................................35
Gambar 6.3 Surat hasil pengujian ekstrak ......................................................46
Gambar 6.4 sampel .........................................................................................37
Gambar 6.5 Pengukuran bb ............................................................................37
Gambar 6.6 Induksi STZ pada sampel ...........................................................37
Gambar 6.7 Pemberian ekstrak Nigella sativa ...............................................37
Gambar 6.8 Pengambilan glukosa darah sampel ...........................................37
Gambar 6.9 Proses sacrificed dan pengambilan darah sampel ......................37
Gambar 6.10 Alat untuk Pengukuran HDL dan LDL ....................................38
Gambar 6.11 Proses sentrifugasi ...................................................................38
Gambar 6.12 Alat centrifuge ..........................................................................38
Gambar 6.13 Freezer .....................................................................................38
Gambar 6.14 Streptozotocin ...........................................................................38
Gambar 6.15 Hasil Uji HDL .........................................................................39
Gambar 6.16 Hasil Uji LDL ...........................................................................39
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Diabetes melitus (DM) merupakan suatu penyakit gangguan
metabolik menahun yang ditandai oleh kadar glukosa darah yang melebihi
nilai normal. Dengan kata lain DM merupakan suatu kelompok penyakit
metabolik dengan karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena kelainan
sekresi insulin, kerja insulin, atau kedua-duanya. Hal tersebut berhubungan
kerusakan jangka panjang, disfungsi, atau kegagalan beberapa organ
tubuh.1,2
Penelitian epidemiologi telah menunjukkan adanya kecendrungan
peningkatan angka insiden dan prevalensi diabetes melitus di berbagai
penjuru dunia. WHO membuat perkiraan bahwa pada tahun 2000 jumlah
pengidap diabetes diatas umur 20 tahun berjumlah 150 orang dan dalam
kurun waktu 25 tahun kemudian yaitu 2025, jumlah itu akan meningkat
menjadi 300 juta orang. Data terakhir WHO (2005) menunjukkan
peningkatan tertinggi jumlah penderita diabetes melitus justru terjadi di
Asia Tenggara. Indonesia akan menempati peringkat 5 dunia dengan
jumlah penderita 12,4 juta orang pada tahun 2025. dan menurut
Kementerian Kesehatan tahun 2013 di Indonesia yang mengidap penyakit
diabetes melitus diatas umur 15 tahun sebanyak 6,9 %. Diabetes tertinggi
dari diagnosis dokter di Indonesia adalah Yogyakarta.2,3
Besarnya insidensi, prevalensi, dan komplikasi diabetes melitus
menggambarkan betapa pentingnya pencegahan dan penatalaksanaan dini
penyakit tersebut. Biji jintan hitam atau Nigella sativa (NS) merupakan
bahan obat alternatif yang digunakan semenjak ribuan tahun silam. Nabi
Muhammad SAW bersabda bahwa biji jintan hitam digunakan untuk
mengobati segala penyakit kecuali maut. Berdasarkan hasil riset UNS
ekstrak Nigella sativa dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus
2
diabetes. Disini peneliti ingin mengetahui penurunan kadar glukosa darah
tikus diabetes yang diinduksi STZ (sreptozotocin).2,4
Dalam penelitian Kanter (2003) dilaporkan bahwa Nigella sativa
memiliki efek anti diabetik pada tikus diabetik. Dilaporkan juga bahwa
Nigella sativa dapat mempengaruhi profil lipid yaitu dengan menurunkan
trigliserida, kolestrol total dan LDL serta meningkatkan HDL, dengan
dosis 400-600 mg/kg. Namun pada penilitian ini peneliti menggunakan
dosis 300 mg/kgbb dengan tujuan mendapatkan dosis minimal dengan efek
yang signifikan.5,6,7
1.2 Rumusan Masalah
Apakah ekstrak jintan hitam (Nigella sativa) dapat menurunkan kadar
glukosa darah, LDL dan meningkatkan HDL pada tikus Sprague dawley
diabetes melitus yang diinduksi streptozotocin?
1.3 Hipotesis
Ekstrak jintan hitam (Nigella sativa) dapat menurunkan kadar glukosa,
LDL dan meningkatkan HDL pada tikus Sprague dawley diabetes melitus
yang diinduksi Streptozotocin.
1.4 Tujuan Penelitian
1.4.1 Tujuan Umum
Mengetahui efek pemberian ekstrak jintan hitam (Nigella sativa)
terhadap kadar glukosa darah serta HDL dan LDL pada tikus
Sprague dawley diabetes melitus yang diinduksi Streptozotocin.
1.4.2 Tujuan Khusus
1. Mengetahui efek pemberian ekstrak Nigella sativa dosis 300
mg/kgBB terhadap penurunan kadar glukosa darah pada tikus
Sprague dawley diabetes melitus yang diinduksi Streptozotocin.
2. Mengetahui efek pemberian ekstrak Nigella sativa dosis 300
mg/kgBB terhadap penurunan kadar LDL pada tikus Sprague
dawley diabetes melitus yang diinduksi Streptozotocin.
3
3. Mengetahui efek pemberian ekstrak Nigella sativa dosis 300
mg/kgBB terhadap peningkatan kadar HDL pada tikus Sprague
dawley diabetes melitus yang diinduksi Streptozotocin.
1.5 Manfaat Penelitian
Adapun penelitian ini diharapkan memiliki manfaat bagi:
1.5.1 Institusi
Menjadi salah satu hasil penerapan Tri Darma Perguruan Tinggi
yaitu Penelitian.
1.5.2 Peneliti
a. Mendapat kesempatan menambah wawasan dan pengetahuan
tentang efek Nigella sativa terhadap kadar glukosa darah
b. Sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar serjana kedokteran
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan (FKIK) UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta.
1.5.3 Masyarakat
a. Menambah informasi kepada maryarakat tentang efek ekstrak
Nigella sativa terhadap kadar gula darah serta HDL dan LDL.
b. Menurunkan angka persentase penyakit DM.
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Metabolisme Nutrien
2.1.1 Karbohidrat
Dalam pencernaan tubuh terbentuk 80% glukosa dan sisanya yaitu
fruktosa dan galaktosa yang akan dirubah secara cepat menjadi glukosa
dalam hati, sehingga glukosa merupakan jalur umum akhir untuk
mentranspor kahbohidrat ke seluruh jaringan. Kemudian glukosa akan
ditranspor melalui membran sel jaringan menuju sitoplasma sel dengan
mekanisme difusi terfasilitasi13
.
Setelah diabsorbsi dalam sel, glukosa dapat disimpan dalam bentuk
glikogen melalui proses glikogenesis. Jika glukosa tersebut dibutuhkan
oleh tubuh maka glikogen akan dipecah melalui proses glikogenolisis13
.
Dalam proses pembentukan ATP diawali dengan proses glikolisis
yang akan menghasilkan 2 asam piruvat, 2 ATP dan 4 atom H per molekul
glukosa. Kemudian asam piruvat akan dikonversi menjadi asetil koenzim
A. Kemudian asetil koenzim A akan masuk kedalam siklus asam sitrat
yang hasil akhirnya terbentuk 4 CO2 + 6 atom H + 2 CoA + 2 ATP.
Setelah itu akan terjadi proses dehidrogenasi, dekarboksilasi dan
fospolirasi oksidatif yang akan menghasilkan ATP13
.
Dalam proses glikolisis dan siklus asam sitrat dalam sel hati juga
dapat terbentuk trigliserida yang merupakan gabungan dari gliserol 3-P
dan asam lemak KoA. Kemudian trigliserida akan menjadi VLDL dengan
bantuan lipoprotein B-100 dan lemak lainnya13
.
5
Gambar 2.1 Metabolisme Karbohidrat
Sumber : Liberman
2.1.2 Protein
Asam amino yang didapatkan dari protein akan melalui proses
deaminasi dalam hati dengan dibantu oleh enzim amino transferase. Ketika
asam amino telah dideaminasi, asam keto yang dihasilkan dapat dioksidasi
melalui dua proses yang berurutan, yaitu : (1) asam keto diubah menjadi
zat kimia yang sesuai, yang dapat masuk kedalam siklus asam sitrat. (2)
zat tersebut dipecah oleh siklus asam sitrat dan digunakan sebagai energi
dengan cara yang sama seperti penggunaan asetil koenzim A yang
dihasilkan dari metabolisme karbohidrat dan lemak. Zat tersebut juga
mempunyai kerja yang sama seperti asetil koenzim A dalam pembentukan
trigliserida13
.
6
2.1.3 Lipid
Dalam pencernaan sebagian besar trigliserida dipecah menjadi
monogliserida dan asam lemak. Kemudian ketika melalui sel epitel usus
monogliserida dan asam lemak akan disintesis kembali menjadi trigliserida
baru yang masuk kedalam limfe dalam bentuk droplet kecil yang tersebar
yang disebut kilomikron. Selanjutnya kilomikron akan dihidrolisis oleh
Lipoprotein lipase (LPL) membentuk kilomokron remnant yang
merupakan substrat hati untuk menjadikannya Very low density lipoprotein
(VLDL), selain dari kilomikron remnant hati juga mendapat substrat lain
berupa asam lemak bebas yang di dapatkan dari sel adiposa dan asam
lemak bebas yang bersirkulasi dalam darah. Kemudian VLDL ini akan di
ekskresikan oleh hati ke pembuluh darah dan di hidrolisis oleh LPL untuk
membentuk Intermediate density lipoprotein (IDL), LDL, asam lemak
bebas dan gliserol.13
Gambar 2.2 Metabolisme Lipid
Sumber: guyton
7
Selain dari VLDL dan LDL terdapat liporotein lain yang memiliki
fungsi baik pada tubuh yakni HDL, karena HDL memiliki fungsi sebagai
RCT (Revers Cholestrol Tansport) yakni HDL berperan menerima
kolestrol dari perifer dan mengirimnya ke hati untuk di sintesis kembali.
Sedangkan LDL memiliki fungsi membawa kolestrol ke seluruh tubuh
untuk mensintesis dinding-dinding sel.14,15
2.1.4 Diabetes Melitus (DM)
Menurut World Health Organization (WHO) diabetes
merupakan kumpulan masalah anatomik dan kimiawi yang disebabkan
oleh difisiensi absolut atau relatif dan gangguan fungsi insulin.
Sedangkan menurut American Diates Association (ADA) Diabetes
adalah kumpulan penyakit yang dikarakteristikkan dengan tingginya
kadar glukosa darah yang disebabkan oleh ketidak mampuan tubuh
menghasilkan dan atau menggunakan insulin.8,9
2.1.5 Patofisiologi Diabetes Melitus
Diabetes melitus merupakan suatu sindrom yang ditandai dengan
terganggunya metabolisme karbohidrat, lemak dan protein yang
disebabkan oleh defisiensi insulin dan atau penurunan sensitivitas jaringan
terhadap insulin.13
Pada umumnya kedua tipe diabetes mengganggu metabolisme
semua bahan makanan utama. Pengaruh resistensi atau tidak adanya
insulin terhadap metabolisme glukosa adalah mencegah efisiensi
penggunaan dan pengambilan glukosa oleh sebagian besar tubuh, sehingga
mengakibatkan konsentrasi gula darah meningkat, penggunaan glukosa
menurun dan penggunaan lemak dan protein meningkat.13
Diabetes melitus dibagi menjadi dua, yaitu tipe 1 dan tipe 2.
Diabetes tipe 1 disebabkan karena kerusakan sel β pankreas atau penyakit
yang mengganggu produksi insulin. Infeksi virus atau kelainan autoimun
dapat menyebabkan kerusakan sel beta pankreas pada pasien diabetes tipe
8
1. Faktor herediter juga berperan penting pada kerusakan sel beta pankreas
meskipun tanpa infeksi virus dan kelainan autoimun, penghancuran Pulau
langerhans diinfiltrasi oleh lifosit T dan autoantibodi yang menyerang
jaringan pulau langerhans dan insulin. Pada 80% pasien terbentuk antibodi
yang menyerang glutamat dekarboksilase. Sedangkan diabetes tipe 2
ditandai dengan hiperinsulinemia disebabkan dari kompensasi oleh sel
beta pankreas pada penururan sensitivitas insulin yang dikenal sebagai
resistensi insulin. Sebagian besar pasien diabetes tipe 2 mengalami
kelebihan berat badan. Peningkatan berat badan . Hal ini menyebabkan
penurunan penggunaan glukosa pada jaringan otot dan lemak. Sehingga
menakibat peningkatan masa sel lemak menyebabkan turunnya
adiponektin dan meningkatnya TNF α, sehingga menyebabkan resistensi
insulin yang memaksa kenaikan pelepasan insulin. Penurunan sensitivitas
insulin sebagian besar mengganggu metabolisme glukosa namun tidak
pada lemak dan protein.13,16
Peningkatan kadar glukosa menimbulkan berbagai pengaruh dalam
tubuh. Akumulasi glukosa ekstraseluler menyebabkan hiperosmolaritas.
Transpor maksimum glukosa berlebihan pada ginjal sehingga glukosa
diekskresikan di urin. Hal ini menyebabkan diuresis osmotik dengan
kehilangan air pada ginjal (poliuri). Sel kemudian akan kehilangan fosfat
dan magnesium yang juga di ekskresikan oleh ginjal. Protein akan dipecah
menjadi asam amino pada otot yang menyebabkan gangguan elektrolit dan
kelemahan otot. Selain itu terjadi juga lipolisis akibat defisiensi insulin
yang menyebabkan pelepasan asam lemak ke dalam darah. Asam lemak
didalam darah ini akan diubah oleh hepar menjadin VLDL dan LDL
sehingga kadar VLDL dan LDL dalam darah tinggi. Sementara itu pada
diabetes mellitus juga terjadi peningkatan jumlah dan aktivitas dari CETP
(Cholesterol Ester Transfer Protein). Tingginya CETP akan membuat
HDL menjadi kaya akan trigliserida sehingga menyebabkan HDL banyak
yang dipecah. Banyaknya HDL yang dipecah akan menurunkan kadar
HDL dalam plasma.16
9
Gambar 2.3 Akibat akut diabetes mellitus
Sumber: Silbernagl
2.1.6 HDL dan LDL pada Diabetes Melitus
Pada DM tipe 2 kadar LDL plasma biasanya normal, namun terdapat
gangguan pada katabolisme LDL di hati. Hal ini disebabkan salah satunya
karena penurunan jumlah reseptor LDL B/E yang berfungsi untuk
mengikat apolipoprotein B dan E. Apabila terjadi penurunan reseptor LDL
menyebabkan dua hal yakni penurunan katabolisme LDL oleh hati dan
peningkatan waktu tinggal LDL dalam plasma, sehingga menyebebkan
kadar LDL dalam plasma pada pasien diabetes melitus biasanya normal
atau sedikit meningkat.17
Pada pasien diabetes mellitus tipe 2 juga terjadi penurunan HDL
plasma, hal ini bisa disebabkan oleh beberapa faktor. Salah satunya yakni
terjadi peningkatan enzim lipase hepar yang menyebabkan peningkatan
katabolisme HDL. Faktor yang lain yakni pada diabetes mellitus tipe 2
terjadi peningkatan pool of triglyceride-rich yang menyebabkan banyak
10
trigliserida yang ditransfer ke HDL sehingga trigliserida dalam HDL
meningkat. Pada HDL yang memiliki jumlah trigliserida yang banyak akan
menyebabkan peningkatan aktivitas lipase hepar sehingga katabolisme
HDL meningkat. Peningkatan katabolisme HDL ini akan menyebabkan
HDL dalam plasma turun.17
2.1.7 Streptozotocin
Streptozotocin (STZ) adalah agen anti mikroba dan juga digunakan
sebagai agen kemoterapi. Streptozotocin dilaporkan sebagai diabetogenik.
Streptozotocin memiliki nama kimia 2-Deoxy-2-
([(methylnitrosoamino)carbonyl]amino)-D-glucopyranose. Memiliki sifat
kimia hydrophilic dan cell-toxic glucose.18
Gambar 2.4 Struktus Kimia Streptozotocin
Sumber : lenzen.s. 2008
STZ menginhibisi sekresi insulin dan menyebabkan diabetes
mellitus dependen insulin. Kedua efek tersebut berhubungan dengan sifat
kimianya yang disebut dengan potensi alkilasi. Toksisitas STZ tergantung
pada aktivitas alkilasi DNA transfer gugus metil dari streptozotocin ke
molekul DNA menyebabkan fragmentasi DNA. Hal ini menyebabkan
stimulasi berlebihan dari poly (ADP-ribose) polymerase sehingga terjadi
kekurangan NAD+
seluler dan ATP. Kekurangan simpanan energi seluler
(NAD+
dan ATP) menyebabkan nekrosis dari sel β pankreas.18
11
Gambar 2.5 Fase Reaksi Glukosa Darah Setelah Induksi STZ (fase II-IV)
Sumber : Lenzen.s. 2008
Terdapat 3 fase yang terjadi setelah pemberian STZ pada hewan
percobaan. Fase pertama terjadi kenaikan konsentrasi gula darah satu jam
setelah pembrian. Kenaikan gula darah ini terjadi karena inhibisi sekresi
insulin. Fase kedua terjadi hipoglikemi dalam 4 sampai 8 jam setelah
pemberian. Hipoglikemi terjadi karena banyaknya insulin di sirkulasi
akibat streptozotocin merangsang pecahnya sel membran dan granul
sekretori. Fase ketiga adalah fase hiperglikemi diabetik permanen, ditandai
dengan hilangnya integritas sel beta. Fase ini terjadi dalam 12 sampai 48
jam setelah pemberian.18
2.1.8 Habbatusauda (Nigella sativa)
Nigella sativa dikenal sebagai benih hitam atau black cumin dalam
bahasa inggris dan habbat al-barakah dalam bahasa Arab. Dinamakan
Nigella sativa, hidup di Timur Tengah, Afrika Timur dan Asia. Nigella
sativa merupakan keluarga Ranunculaceae, memiliki ukuran 2-4 mm,
bijinya berbentuk seperti perahu berwarna hitam dan sering digunakan
untuk bahan makanan dan obat-obatan. Nigella sativa merupakan obat
yang sudah digunakan semenjak ribuan tahun silam. Nabi Muhammad
S.A.W bersabda bahwa Nigella sativa dapat digunakan untuk mengobati
semua penyakit kecuali maut.
12
Gambar 2.6 Nigella sativa
Yarnell. E. 2011
Nigella sativa mengandung campuran terpenoid berat molekul
rendah. Dapat di isolasi dengan distilasi uap atau supercritical carbon
dioxide.sehingga menghasilkan minyak volatil. Minyak volatil dengan
kualitas yang baik mengandung 18%-24% Thymoquinone yang bekerja
menurunkan sintesis kolesterol, selain itu juga mengandung asam lemak,
terdiri atas omega 6 sebanyak 50%,omega 9 sebanyak 25 %, dan asam
palmitat 18%. Konsentrasi thymoquinone pada minyak sebesar 3,5-8,7
mg/g.19
Nigella sativa juga mengandung flavonoid yang bekerja
meningkatkan densitas reseptor LDL dan berikatan dengan
apolippoprotein B sehingga menurunkan kadar LDL dan meningkatkan
kadar HDL dalam darah.
Nigella sativa dilaporkan memiliki efek hipoglikemik yang
signifikan pada tikus yang normal maupun diabetes yang di induksi
dengan Streptozotocin. Dilaporkan juga terdapat penurunan level lipid
serum dan berat badan pada tikus yang diberikan Nigella sativa. Kenaikan
peroksidasi lipid pada tikus yang di induksi STZ mengalami penurunan
yang signifikan setelah diberikan Nigella sativa. Hal ini menunjukkan sifat
13
protektif Nigella sativa yang merupakan efek anti oksidatif pada
flavonoid.20
Penurunan aktivitas SOD, GPx dan CAT pada hepar dan ginjal
selama diabetes menunjukkan produksi radikal bebas oksigen reaktif.
Pengobatan dengan Nigella sativa meningkatkan aktivitas enzim-enzim
ini, sehingga melawan kerusakan yang diakibatkan radikal bebas selama
diabetes. Pengobatgan dengan nigella sativa meningkatkan level GSH
yang terdapat pada sel β pulau langerhans dan melindungi dari kerusakan
oksidatif dengan meregulasi status redoks pada protein di membran.21
14
2.2 Kerangka Teori
Defisiensi
insulin
(-) Mempengaruhi
metabolisme lipid
Stimulasi poli
(ADP-ribose)
Fragmentasi DNA
Transfer gugus
alkil dari
streptozotocin ke
molekul DNA
Gugus alkil
Streptozotocin
Nekrosis sel β
pankreas
Kekurangan
NAD+ dan ATP
Peningkatan
kadar glukosa
Diabetes
melitus
↓ produksi
insulin
↑ FFA
↑Lipolisis
↑ aktivitas
lipoprotein lipase
↓HDL ↑ LDL
↑ VLDL
Menekan
inflamasi oleh NO
dan ROS
Menghambat
glukoneogenesis
Nigella sativa
Pertumbuhan
dan fungsi normal
jaringan
Phytosterol Thymoquin
one
Asam
linoleat
↓ absorbsi
kolesterol
Hambat enzim
HMG-CoA
reduktase
Kolesterol ↓
↑ aktivitas
CETP
↑ HDL kaya
trigliserida
↑pemecahan
HDL
(-)
(-)
(-)
15
2.3 Kerangka Konsep
(-)
(-)
Nigella sativa
Asam
linoleat
Phytosterol Thymoquinone
↓ HDL ↑LDL
↑ glukosa
darah
Destruksi sel
β pankreas
Diinduksi
Streptozotocin
Tikus Strain
Sprague Dowley
Diabetes
mellitus
↑ lipolisis
Hiperglikemi
(-)
16
2.4 Definisi Operasional
No Variabel Definisi
operasional
Alat ukur Cara
pengukuran
Skala
pengukuran
1 Gula darah
sewaktu
(GDS)
Hasil pemeriksaan
gula darah sampel
tanpa
mempertimbangkan
waktu terakhir
makan
Strip dan
glukometer
(NESCO)
Sampel darah
diteteskan pada
strip glukometer,
tunggu sampai
interpretasi
muncul pada alat
Numerik
2 High
Density
Lipoprotein
Lipoprotein
berdensitas tinggi,
diproduksi di hati
dan usus halus.
ELISA
Reader
Sampel serum
dicampurkan
dengan reagen
HDL,
selanjutnya
dinilai dengan
ELISA reader
Numerik
3 Low
Density
Lipoprotein
Lipoprotein yang
berfungsi
mengangkut
kolesterol,
trigliseerida dan
lemak lain (lipid)
dari hati ke
jaringan.
ELISA
Reader
Sampel serum
dicampurkan
dengan reagen
LDL,
selanjutnya
dinilai dengan
ELISA reader
Numerik
4 Nigella
sativa
Ekstrak etanol
70%, daun Nigella
sativa dengan dosis
300 mg/kg BB
yang dilarutkan
dengan akuades
Timbangan
analitik
Menimbang
ekstrak dengan
timbangan
analitik
Numerik
17
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Desain yang digunakan pada penelitian ini adalah desain eksperimental.
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
3.2.1 Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan Februari 2014 – Desember 2016
3.2.2 Tempat Penelitian
Penelitian dilakukan di Animal House, Laboratorium Biologi dan
Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, jl.
Kertamukti No. 05, Pisangan, Ciputat 15419, Tangerang Selatan.
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian
Hewan percobaan yang digunakan adalah tikus jantan strain
Sprague dawley berumur 90 hari, dengan berat badan rata-rata 180-200
gram. Sampel diperoleh dari Departemen Patologi, Institut Pertanian Bogor
(IPB). (Lampiran 1)
Terdapat tiga kelompok pada penelitian ini, yaitu : 1). Kelompok
kontrol negatif yang terdiri dari 9 ekor tikus yang tidak diberikan
perlakuan. 2). Kelompok kontrol positif atau kelompok tikus DM yang
diinduksi dengan Streptozotocin 48-60 mg/kgbb terdiri dari 6 ekor tikus. 3).
Kelompok perlakuan, yaitu tikus DM yang telah diinduksi dengan
Streptozotocin dan diberikan terapi ekstrak Habbatusauda dengan dosis 300
mg/kgBB/hari terdiri dari 8 ekor tikus.
Untuk menentukan jumlah sampel pada setiap kelompok
penelitian, digunakan rumus Mead’s Resource Equation Formula sebagai
berikut :
18
Keterangan
E = Error Component (10-20)
N = jumlah individu percobaan (sampel) dalam semua kelompok (dikurangi 1)
B = Blocking Component (dikurangi 1)
T = Jumlah kelompok terapi (dikurangi 1)
E = N – 0 – T E = N – 0 – T
≥ 10 = ( N – 1 ) – ( T – 1 ) ≤ 20 = ( N – 1 ) – ( T– 1 )
≥ 10 = ( N – 1 ) – ( 3 – 1 ) ≤ 20 = ( N – 1 ) – ( 3– 1 )
≥ 10 = ( N – 1 ) – 2 ≤ 20 = N – 3
≥ 10 = N – 3 N ≤ 23
N ≥ 13
Berdasarkan perhitungan tersebut, maka jumlah sampel yang
didapat dalam rentang 13 - 23. Pada penelitian ini jumlah sampel yang
digunakan adalah 18 ekor tikus untuk tiga kelompok penelitian.
3.3.1 Kriteria Inklusi
1. Kelompok kontrol negatif : Tikus jantan strain Sprague dawley dengan
glukosa darah sewaktu < 200 mg/dl.
2. Kelompok kontrol positif dan perlakuan: Tikus jantan strain Sprague
dawley dengan glukosa darah sewaktu >200 mg/dl.
3.4 Cara Kerja Penelitian
3.4.1 Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah glukometer
beserta strip dan lansetnya, kit HDL dan LDL, centrifuge, vorteks,
E = N – B – T
19
spektrofotometer, minor set, tabung EDTA dan tabung mikro, timbangan
untuk mengukur berat badan tikus, sonde, kandang tikus, botol minuman
dan tempat makanan tikus.
3.4.2 Bahan Penelitian
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian adalah ekstak dari
biji Habbatusauda (Nigella sativa) yang diperoleh dari pusat konservasi
Kebun Raya Bogor sebanyak 2 kg.
Bahan-bahan kimia yang digunakan pada proses induksi adalah:
Streptozotocin, dapar sitrat dan aquades. Untuk proses sacrifice
menggunakan dietileter (ether). Sedangkan untuk proses pengukuran kadar
HDL dan LDL digunakan reagen kit HDL dan LDL.
Makanan yang diberikan pada tikus adalah pelet dan minuman
dengan air bersih serta alas kandang diberikan serbuk kayu.
3.4.3 Adaptasi Hewan Coba
Hewan coba diadaptasikan di Animal house selama 14 hari. Hewan
coba diadaptasikan baik terhadap tempat tinggal baru maupun adaptasi
terhadap makanan dan minuman dengan tetap memastikan higienitas
kandang dan makanan.
Hewan coba ditempatkan pada kandang yang berisikan serbuk kayu
sebagai alas kandang. Jumlah hewan coba dalam setiap kandang adalah 3
ekor tikus. Hewan coba diberikan makanan pellet dan minuman air bersih
setiap hari serta serbuk kayu sebagai alas kandang diganti maksimal setiap
3 hari sekali atau setiap serbuk kayu kotor.
3.4.4 Induksi Tikus Dengan Streptozotocin
Hari ke-15 tikus dipuasakan selama 10 jam sebelum diinduksi dengan
streptozotocin 48-60 mg/kgBB secara intraperitoneal. Injeksi STZ
mengarah pada degenerasi sel beta pankreas pada pulau langerhans.
Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan 5 hari setelah induksi (hari ke-
21). Tikus dengan glukosa darah lebih dari 200 mg/dl digunakan untuk
kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan.
20
3.4.5 Pemberian Ekstrak Nigella sativa Terhadap Tikus
Setelah tikus dinyatakan DM, dilakukan pemberian ekstrak Nigella
sativa setiap hari selama 3 minggu (hari ke-21-41), ekstrak Nigella sativa
diberikan secara oral menggunakan alat sonde dengan dosis 300
mg/kgBB/hari.
3.4.6 Pengukuran Sampel
3.4.6.1 Glukosa Darah
Pengambilan darah dilakukan dua kali, yaitu pertama saat sebelum
pemberian ekstrak dan terakhir saat pemberian ekstrak selesai (hari ke-42).
Pengambilan darah dilakukan dengan memotong sedikit ujung ekor tikus.
Sebelum pemotongan ekor terlebih dahulu tikus dibius sampai tidak sadarkan
diri menggunakan larutan eter yang memiliki efek anastesi (secara inhalasi),
proses ini bertujuan untuk mengurangi rasa sakit saat dipotong ujung
ekornya. Darah diteteskan pada strip pengukur glukosa darah dan diukur
dengan glukometer. Pengukuran yang dilakukan adalah untuk mengukur
kadar glukosa darah tikus.
3.4.6.2 HDL dan LDL
Setelah mendapatkan data glukosa darah tikus selama 3 minggu
pemberian ekstrak Nigella sativa, maka tikus akan di sacrifice (hari ke-42)
dengan cara dibius terlebih dahulu menggunakan larutan eter hingga terbius
dalam, yaitu jika dilakukan penekanan pada tungkai tidak berespon.
Kemudian dilakukan pengambilan darah tikus sebanyak 3 ml melalui vena
cava inferior. Darah yang diambil dimasukan dalam tabung mikro (1,5 ml)
untuk selanjutnya dilakukan sentrifugasi. Sentrifugasi dilakukan selama 15
menit, dengan kecepatan 3000 rpm. Plasma yang diperoleh kemudian
dipisahkan dan disimpan kembali ke tabung mikro dan disimpan pada suhu
-80˚C, untuk pengukuran kadar HDL dan LDL selanjutnya. Pengukuran
kadar HDL dan LDL plasma sampel menggunakan kit HDL dan LDL dan
dibaca dengan menggunakan dengan alat ELISA reader.
21
3.5 Pengolahan dan Analisa Data
Data glukosa darah, HDL dan LDL yang terkumpul dilakukan
pengolahan dan pengujian data secara komputerisasi menggunakan SPSS
22. Uji statistik yang digunakan adalah One-Way Anova karena variabel yang
diteliti adalah numerik lebih dari 2 kelompok dengan data tidak berpasangan.
22
3.6 Alur Penelitian
Tikus Tiba di Animal House
(hari 1)
Adaptasi selama 2 minggu
Makan, minum dan serbuk
kandang ad libitum
(hari 1-14)
Kontrol (-) n=9, Gula darah
< 200 mg/dl
(hari 15)
Tikus yang akan diinduksi
N= 18 tikus
Gula darah <200 mg/dl
Induksi STZ 60 mg/kgbb
(Hari 15)
Kontrol (+) n=9
Gula darah pada hari ke 21
>200 mg/dl
Makan, minum dan serbuk
kandang ad libitum
(Hari 21)
Perlakuan, n=9
Gula darah pada hari ke 21
>200 mg/dl
Makan, minum dan serbuk
kandang ad libitum
(Hari 21))
Sonde oral aquades 3 ml
Makan, minum dan serbuk
kandang ad libitum
(hari 21-41)
Sonde oral aquades 3 ml
Makan, minum dan serbuk
kandang ad libitum
(hari 21-41)
Sonde oral Ekstrak Nigella
sativa 300 mg/kgbb/hari
dalam aquades 3 ml
Makan, minum dan serbuk
kandang ad libitum
(hari 21-41)
Sacrifice
Ukur Gula darah ,
Sacrifice, ether dan pengambilan darah dari vena cava inferior
sebanyak 3 cc
(Hari 42)
Sentrifugasi darah 3000 rpm
Hasil plasma disimpan di
refrigerator -80°c
Plasma dicampur dengan kit
HDL dan LDL
Analisis HDL dan LDL
Kadar gula
darah
Kadar HDL
dan LDL
Analisis
statistik
23
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Jumlah hewan yang digunakan dalam penelitian ini adalah 27 ekor tikus.
Higga akhir pengamatan, jumlah hewan yang tersisa tinggal 23 ekor tikus.
Empat ekor tikus mati setelah proses induksi Streptozotocin dan selama
penelitian berlangsung. Jumlah hewan yang tersisa masing-masing adalah: 9
ekor tikus kelompok kontrol negatif, 6 ekor tikus kelompok kontrol positif dan 8
ekor tikus kelompok perlakuan. Kematian hewan penelitian diduga antara lain
akibat efek toksisitas Streptozotocin.
4.1 Hasil dan Pembahasan
4.1.1 Glukosa Darah
Data glukosa darah yang diambil adalah jumlah rata-rata glukosa darah
pada 1 minggu setelah diinduksi Streptozotocin dan akhir penelitian selama 3
minggu. Induksi Streptozotosin bertujuan untuk mendapatkan tikus DM
dengan kadar glukosa darah minimal 200 mg/dl. Tikus DM ini akan
dimasukkan dalam kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan.
Adapun data yang didapatkan adalah sebagai berikut.
Tabel 4.1 Rata-rata Glukosa Darah Tikus Setiap Kelompok Penelitian
1 minggu Setelah
Diinduksi
(mg/dl)
Akhir Minggu ke-3
Perlakuan
(mg/dl)
presentase
penurunan
(%)
Kontrol Negatif 122 133 -9
Kontrol Positif 469 516 -10
Perlakuan 513 349 32
24
Grafik 4.1 Rata-rata Glukosa Darah Tikus Setiap Kelompok Penelitian
Dari tabel dan grafik rata-rata glukosa tikus didapatkan pada kelompok
perlakuan mengalami penurunan kadar glukosa darah setelah minggu ketiga
terapi, sedangkan pada kelompok kontrol positif dan kontrol negatif
mengalami mengalami kenaikan kadar glukosa darah. Pada kelompok kontrol
positif terjadi kenaikan kadar glukosa darah disebabkan oleh efek dari
Streptozotocin, sedangkan pada kelompok kontrol negatif kenaikan glukosa
darah disebabkan oleh fluktuasi kadar glukosa darah yang dipengaruhi oleh
faktor makanan. Selanjutnya dilakukan penghitungan statistik menggunakan
uji One-Way Anova untuk melihat perbedaan dari setiap kelompok yang satu
dengan yang lainnya terhadap glukosa darah.
Tabel 4.2 Hasil Analisa Data Glukosa Darah Setiap Kelompok Penelitian
Kelompok Glukosa darah
(mg/dl)*
p-value
Kontrol Negatif 133.33 ± 23.62
0.0000
Kontrol Positif 516.67 ± 64.18
Perlakuan 348.5 ± 36.29
*Data adalah mean ± St. Deviasi
0
200
400
600
Sebelum Diinduksi 1 minggu SetelahDiinduksi
Setelah Minggu ke-3Terapi
Kontrol (-)
Kontrol (+)
Perlakuan
GDS (mg/dl)
25
Dari tabel di atas diperoleh nilai p<0.05 pada uji one-way anova,
Yang menunjukkan terdapat perbedaan glukosa darah yang bermakna,
selanjutnya dilakukan uji Post Hoc untuk mengetahui hubungan antar
kelompok penelitian. Dan didapatkan perbedaan yang bermakna pada tiap
kelompok penelitian. Dapat disimpulkan dengan pemberian ekstrak Nigella
sativa dosis 300 mg/kgBB/hari selama 3 minggu memberikan efek penurunan
kadar glukosa darah tikus yang diinduksi Streptozotocin.
Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh
Kaleem et.al. (2006) yaitu terjadinya penurunan kadar glukosa darah pada
tikus yang diberikan ekstak Nigella sativa secara oral dengan dosis 300
mg/kgBB selama 30 hari. Pada penelitian yang dilakukan Abbasi (2014) juga
terjadi penurunan kadar glukosa darah pada pemberian ekstrak Nigella sativa
secara oral dengan dosis 50 g/kgBB selama 14 hari pada tikus yang diinduksi
Alloxan dengan dosis 120 mg/kgBB.21,23
Nigella sativa merupakan antioksidan yang dapat melindungi sel dari
keadaan stres oksidatif akibat radikal bebas dan dapat meningkatkan produksi
insulin. Nigella sativa meningkatkan sensitivitas insulin sel dan uptake
glukosa di adiposit sehingga dapat menurunkan kadar glukosa darah.22,24
4.1.2 High Density Lipoprotein (HDL)
Data HDL yang diperoleh adalah data rata-rata kadar HDL dari setiap
kelompok yang diambil pada akhir penelitian yaitu tiga minggu setelah
diberikan perlakuan. Data HDL yang diperoleh sebagai berikut:
Tabel 4.3 Rata-rata Kadar HDL dari Setiap Kelompok
Kelompok Rata-rata kadar HDL ± SD
Kontrol Negatif 87,2 ± 78,72
Kontrol Positif 180,2 ± 35,99
Perlakuan 187,7 ± 40,19
26
Grafik 4.2 Rata-rata Kadar HDL dari Setiap Kelompok
Dari tabel 4.3 menunjukkan rata-rata kadar HDL pada kelompok
kontrol positif (180,2 mg/dl) dan rata-rata kelompok perlakuan (187,7
mg/dl), sedangkan rata-rata kadar HDL kelompok negatif (87,2 mg/dl).
Pada kelompok kontrol positif terjadi peningkatan kadar HDL melebihi
kelompok kontrol negatif hal ini tidak sesuai dengan teori.
Berdasarkan uji normalitas dan homogenitas, diketahui data
memiliki distribusi yang normal dan varians yang identik, sehingga
dapat dilakukan uji One-Way Anova. Data yang didapat adalah:
Tabel 4.4 Hasil Analisa Data HDL Tikus Setiap Kelompok Penelitian
Kelompok HDL
(mg/dl)*
p-value
Kontrol Negatif 87,2 ± 78,72
0,004 Kontrol Positif 180,2 ± 35,99
Perlakuan 187,7 ± 40,19
*Data adalah mean ± St. Deviasi
Hasil dari uji One-Way Anova menunjukkan adanya perbedaan
kadar HDL pada minimal dua kelompok percobaan (p<0,05), dan hasil
0,0
50,0
100,0
150,0
200,0
250,0
Kontrol (-) Kontrol (+) Perlakuan
mg/
dl
27
uji Post Hoc menunjukkan hasil bermakna antara kelompok negatif
dengan kelompok perlakuan dan kelompok positif (p<0,05). Namun hasil
tidak bermakna ditunjukkan antara kelompok positif dengan kelompok
perlakuan (p>0,05).
Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh
Kaleem (2006) yang menunjukkan peningkatan kadar HDL pada
pemberian ekstrak Nigella sativa secara oral pada tikus dengan dosis 300
mg/kgBB selama 30 hari. Demikian juga dengan hasil penelitian Kataabi
(2012) yang menunjukkan peningkatan kadar HDL pada pemberian
ekstrak Nigella sativa dengan dosis 2 gram/hari pada pasien diabetes
mellitus tipe dua selama 12 minggu.
4.1.3 Low Density Lipoprotein (LDL)
Data LDL yang diperoleh adalah data rata-rata kadar LDL dari
setiap kelompok yang diperoleh pada akhir penelitian yaitu selama tiga
minggu setelah diberikan perlakuan. Data LDL yang diperoleh sebagai
berikut:
Tabel 4.5 Rata-rata Kadar LDL dari Setiap Kelompok
Kelompok Rata-rata kadar LDL ± SD
Kontrol Negatif 32,6 ±14,56
Kontrol Positif 40,7 ± 6,21
Perlakuan 38,1 ± 13,29
28
Grafik 4.3 Rata-rata Kadar LDL dari Setiap Kelompok
Berdasarkan uji normalitas dan homogenitas, diketahui data
memiliki distribusi yang tidak normal dan varians yang identik, sehingga
tidak dapat dilakukan uji One-Way Anova. Selanjutnya dilakukan
perhitungan statistik menggunakan uji Kruskal-Wallis. Data yang didapat
adalah:
Tabel 4.6 Hasil Analisa Data LDL Tikus Setiap Kelompok Penelitian
Kelompok LDL
(mg/dl)*
p-value
Kontrol (-) 32,6 ±14,56
0,433 Kontrol (+) 40,7 ± 6,21
Perlakuan 38,1 ± 13,29
*Data adalah mean ± St. Deviasi
Dari tabel 4.6 menunjukkan tidak terdapat pengaruh pemberian ekstrak
Nigella sativa dengan dosis 300 mg/kgBB terhadap kadar LDL tikus
yang diinduksi streptozotocin (p=0,433).
Dalam penelitian ini penurunan kadar LDL setelah pemberian
300 mg/dl/hari ekstrak Nigella sativa selama 3 minggu menunjukkan
hasil yang tidak bermakna (p=0.433). Berbeda dengan hasil penelitian
yang dilakukan oleh Kaleem (2006) yang menunjukkan penurunan kadar
0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
Kontrol (-) Kontrol (+) Perlakuan
mg/
dl
29
LDL yang bermakna pada pemberian ekstrak Nigella sativa secara oral
dengan dosis 300 mg/kgBB selama 30 hari. Demikian juga dengan
penelitian Kataabi (2012) yang menunjukkan penurunan kadar LDL pada
pemberian ekstrak Nigella sativa dengan dosis 2 gram/hari pada pasien
diabetes mellitus tipe dua selama 12 minggu. Lamanya pemberian
Nigella sativa pada penelitian ini lebih pendek (3 minggu = 21 hari)
dibandingkan yang dilakukan oleh Kaleem (30 hari). Walaupun
pemberian Nigella sativa pada penelitian ini menunjukkan tidak adanya
perbedaan pada kadar LDL antara kelompok perlakuan dan kelompok
kontrol positif, namun pemberian Nigella sativa ini menunjukkan
kecenderungan menurunkan kadar LDL. Pemberian Nigella sativa
selama 21 hari menunjukkan penurunan 5% pada kelompok kontrol
perlakuan dibandingkan kontrol positif.21,25
Nigella sativa diketahui memiliki efek hipolipidemik karena
memiliki beberapa kandungan yang bekerja secara sinergis, antara lain
thimoquinone, nigellamin, serat larut air, sterol, dan flavonoid.
Thimoquinone dan nigellamin bekerja menurunkan sintesis kolesterol,
sementara serat larut air dan sterol bekerja menurunkan absorpsi
kolesterol di usus. Flavonoid pada Nigella sativa bekerja meningkatkan
densitas reseptor LDL dan berikatan dengan apolipoprotein B sehingga
dapat menurunkan kadar LDL dan meningkatkan kadar HDL dalam
darah. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian ini dimana terjadi penurunan
LDL dan peningkatan HDL.27,28
4.2 Keterbatasan Penelitian
Selama berlangsungnya penelitian ada beberapa hal yang menghambat
berkangsungnya penelitian, antara lain:
1. Proses ekstraksi tanaman tidak dilakukan sendiri.
2. Jumlah sampel yang digunakan sedikit terutama pada kelopok kontrol
positif dan kelompok perlakuan.
3. Dosis ekstrak yang diberikan hanya satu dosis (300 mg/kgBB/hari).
Sehingga belum ditemukan perbedaan data yang bervariasi.
30
BAB V
SIMPULAN DAN SASARAN
5.1 Simpulan
Berdasarkan uji statistik dan pembahasan pada penelitian ini,
dapat disimpulkan bahwa :
1. Pemberian ekstrak Nigella sativa dengan dosis 300 mg/kgBB selama
21 hari dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus Sprague
dawley diabetes melitus yang diinduksi Streptozotocin dengan hasil
yang signifikan (p<0.05)
2. Pemberian ekstrak Nigella sativa dengan dosis 300 mg/kgBB selama
21 hari dapat meningkatkan kadar HDL pada tikus Sprague dawley
diabetes melitus yang diinduksi Streptozotocin dengan mendapatkan
hasil signifikan (p<0.05).
3. Tidak terdapat pengaruh secara bermakna pemberian ekstrak Nigella
sativa dengan dosis 300 mg/kgBB selama 21 hari terhadap LDL tikus
Sprague dawley diabetes melitus yang diinduksi streptozotocin ( p =
0,540 ). Namun terdapat penurunan 9,6 % dari kelompok kontrol
positif dengan kelompok perlakuan.
5.2 Sasaran
1. Diharapkan dapat dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai
pemberian ekstrak Nigella sativa dengan dosis bervariasi, jumlah
hewan coba yang lebih besar, dan rentang waktu penelitian yang lebih
lama.
2. Diharapkan proses ektraksi berikutnya dapat dilakukan sendiri, untuk
menjamin ekstrak yang dipakai sesuai dengan yang diinginkan.
31
DAFTAR PUSTAKA
1. Depkes RI. Pedoman Pengendalian Diabetes Melitus dan Penyakit
Metabolik. Jakarta: Depkes RI. 2008
2. Yuriska A. Efek Aloksan Terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus Wistar.
Semarang: UNDIP. 2009
3. Kemenkes RI. Riset Kesehatan Dasar 2013. Jakarta: Kemenkes RI. 2013.
4. Husna M. Pengaruh Pemberian Minyak Jinten Hitam (Nigella Sativa L.)
Terhadap Kadar Glukosa Darah Pada Tikus Diabetes Mellitus Akibat
Induksi Aloksan. Surakarta: UNS. 2008.
5. Kanter M, Meral I, Yener Z, Ozbek H, Demir H. Partial
Regeneration/Proliferation of the .BETA.-Cells in the Islets of Langerhans
by Nigella sativa L. in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats. The Tohoku
Journal of Experimental Medicine 2003;201:213–9.
doi:10.1620/tjem.201.213.
6. Buriro MA, 2007, Tayyab M. Effect of nigella sativa on lipid profile in
albino rat. Gomal J. Med. Sci, January – June, 2007, vol 5, No. 8
7. Kocyigit Y, 2009, The effect of dietary supplementation of Nigella sativa
L. on serum lipid profile in rats. Saudi Med J 2009; Vol. 30(7): 893-896
8. World Health Organization. Definition and Diagnosis of Diabetes Mellitus
and Intermediate Hyperglycaemia. 2006.
9. American Diabetic Association. Diagnosis and Classification of Diabetes
Mellitus. 2013.
10. Aagaard EM. Pathophysiology of Disease. New York McGraw-Hill. 2006
11. Harrison TR, Fauci AS. Harrison's principles of internal medicine. New
York, N.Y.: McGraw-Hill; 2008.
12. Perkeni, Konsensus Pengendalian Dan Pencegahan Diabetes Mellitus Tipe
2 di Indonesia 2011.
32
13. Hall JE, Guyton AC. Guyton and Hall textbook of medical physiology.
Philadelphia, PA: Saunders/Elsevier; 2011
14. Lieberman M, Marks AD, Peet A. Marks' basic medical biochemistry: a
clinical approach. Philadelphia: Wolters Kluwer Health/Lippincott
Williams & Wilkins; 2013.
15. Fisher EA. High-Density Lipoprotein Function, Dysfunction, and Reverse
Cholesterol Transport. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2012;32:2813-
2820.
16. Silbernagl S, Lang F. Color atlas of pathophysiology. Stuttgart: Thieme;
2000.
17. Verges B. Lipid modification in type 2 diabetes: the role of LDL and
HDL, Francaise de Pharmacologie et de The´ rapeutique Fundamental &
Clinical Pharmacology 2009 (23) 681–685
18. Lenzen S, 2007,The mechanisms of alloxan- and streptozotocin-induced
diabetes, Springer-Verlag 2007
19. Yarnell E et al, Nigella sativa Holy Herb of the Middle East, 2011;17 (2),
99-105
20. Halima R et al, Nigella sativa seed extracts enhance glucose-induced
insulin release from rat-isolated Langerhans islets, 2004; 18, 525-529
21. Kaleem M et al, Biochemical effect of Nigella sativa L seeds in diabetic
rats, Indian Journal of Experimental Biology, 2006. Vol. 40
22. Ali Benhaddou-Andaloussi et al, The In Vivo Antidiabetic Activity of
Nigella sativa Is Mediated through Activation of the AMPK Pathway and
Increased Muscle Glut4 Content, Hindawi Publishing Corporation
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine Volume 2011.
23. Abbasi P, Blood Glucose Lowering Effect of Nigella sativa in Alloxan
Induced Diabetic Rat, 2014; 2(2), 10-13
24. Ahmad A. A review on therapeutic potential of Nigella sativa: A miracle
herb. Asian Pac J Trop Biomed. 2013 May; 3(5): 337–352.
33
25. Huda Kaatabi et al, Favorable impact of Nigella sativa seeds on lipid
profile in type 2 diabetic patients, Journal of Family and Community
Medicine.
26. S. Asgary, Ameliorative effects of Nigella sativa on dyslipidemia, Italian
Society of Endocrinology (SIE) 2015.
27. Bahram P , Effect of dietary supplementation with Nigella sativa L.on
serum lipid profile, lipid peroxidation and antioxidant defense system in
hyperlipidemic rabbits, Journal of Medicinal Plants Research 2009 Vol.
3(10)
28. Elrehany M, Theraupetic Effect of Nigella Sativa on Patiens With
Coronary Artery Disease, Internal Medicine and **Cardiolgy, Faculty of
Medicine .Minia University1 and Al-Azhar Assiut University2, (Egypt), 1
january 2012, AAMJ, Vol. 10.
34
LAMPIRAN
Lampiran 1
Surat Keterangan Tikus Sehat
35
Gambar 6.1 Surat Keterangan Tikus Sehat
Lampiran 2
Hasil Determinasi / Identifikasi Bahan Uji
36
Gambar 6.2 Hasil Determinasi Tanaman
37
Lampiran 3
Surat Pengujian Ekstrak
Gambar 6.3 Hasil Pengujian Ekstrak
38
Lampiran 4
Gambar Proses Penelitian
Gambar 6.4 Sampel
penelitian
Gambar 6.5 Pengukuran bb (bb- 50)
Gambar 6.6 Induksi STZ pada
sampel
Gambar 6.7 Pemberian
ekstrak Nigella sativa
Gambar 6.8 Pengambilan
Glukosa darah sampel
Gambar 6.9 Proses sacrificed
dan pengambilan darah sampel
39
(Lanjutan)
(Lanjutan)
Gambar 6.10 Alat-alat untuk
pengukuran HDL & LDL
Gambar 6.11 Proses
Sentrifugasi
Gamba 6.12 Alat Sentrifuge
Gambar 6.13 Freezer
Gambar 6.14 Streptozotocin
40
Gambar 6.15 Hasil uji HDL
Gambar 6.16 Hasil uji LDL
41
Lampiran 5
Cara Perhitungan
1. Induksi Streptozotocin
Dosis yang digunakan 60 mg/kgbb
Dosis untuk tikus dengan rata-rata 300 g
= 300g x 60 mg
1000 g
= 18 mg
Untuk 30 tikus dengan rata-rata berat badan 300 g
= 30 x 300g x 60 mg
1000 g
= 540 mg
Jadi untuk penyuntikan 30 ekor tikus membutuhkan 540 mg Streptozotocin
Konsentrasi obat 6 mg jadi untuk 1 dosis pada tikus 300 g
0,1 ml
adalah 0,3 ml
Untuk 30 ekor tikus
6 = 540
0,1 α
α = 0,1 x 540 = 9 ml
6
Jadi untuk 540 mg Streptozotocin dibutuhkan 9 ml aquades
42
(Lanjutan)
2. Dosis Pemberian Ekstrak
Dosis 300 mg/kgbb
300 mg/1000grbb
30/100gbb
Konsentrasi obat 30 mg
0,1 ml
Pemberian ekstrak Nigella sativa :
30 mg x 300 = 90 mg 0,3 ml
100 g
Jadi untuk tikus dengan BB 300 g diberikan ekstrak Nigella sativa sebanyak
0,3 ml
43
Lampiran 6
Riwayat Penulis
Identitas
Nama : Fathur Rahman Nasution
Jenis Kelamin : Laki-laki
Tempat, Tanggal Lahir : Tanjung Balai, 25 juli1995
Agama : Islam
Alamat : Tangga Bosi II, kec. Siabu, Kab. Mandailing Natal,
Prov.Sumatera Utara
e-Mail : [email protected]
Riwayat Pendidikan
1997-1999 : TK Huraba
2001-2007 : SD II Tangga Bosi
2007-2010 : Pesantren Darul Mursyid
2010-2012 :Pesantren Darul Mursyid3
2012-2013 :MAN 1 Huraba
2013 - sekarang : UIN Syarif Hidayatullah Jakarta