uvs syndrome: establishment and characterization of fibroblastic cell lines transformed with simian...

6
UV s Syndrome: Establishment and Characterization of Fibroblastic Cell Lines Transformed with Simian Virus 40 DNA Toshiki Itoh and Masaru Yamaizumi Department of Cell Genetics, Institute of Molecular Embryology and Genetics, Kumamoto University School of Medicine, Kumamoto, Japan Ultraviolet±sensitive syndrome (UV s S) is a newly established photosensitive disorder. Patients with UV s S showed mild clinical manifestations similar to classical types of xeroderma pigmentosum, and had biochemical phenotypes of Cockayne syndrome but not those of xeroderma pigmentosum. Fibroblasts from a UV s S patient were treated with simian virus 40 DNA containing the large T antigen with a defective origin of DNA replication to establish a transformed cell line. We obtained two independent transformed cell lines (Kps3SVY and Kps3SVI3) and report their initial characterization. These cells showed the same pattern in variable number of tandem repeat analyses as a primary ®broblast cell strain, Kps3, and retain the UV s S phenotype as demonstrated by increased UV sensitivity (three to four times more sensitive to UV than normal cells) and by reduced recovery of RNA synthesis after UV irradiation (20%±30% of that of normal cells). These cells, however, showed different phenotypes as regards plating ef®ciency, doubling time, and trans- fection ef®ciency in spite of the fact that the same method was used to transform the cells. Kps3SVY cells were closer in phenotype to Kps3 cells than Kps3SVI3 cells. As a variable number of tandem repeat analyses also showed that Kps3SVI3 cells have lost one of the two alleles in some chromosomes, this may explain the different phenotypes between Kps3SVY and Kps3SVI3 cells. Moreover, these cells were distinct from cells with Cockayne syndrome group A or B. Thus, these cell lines provide the opportunity to conduct transfection studies on cells with the UV s S defect in DNA repair and transcrip- tion. Key words: Cockayne syndrome/transcription 3 - coupled repair/variable number of tandem repeat/xeroderma pigmentosum. J Invest Dermatol 114:101±106, 2000 T here are several genetic diseases that have increased ultraviolet (UV) sensitivity due to defects in DNA repair. Recently, we reported a new category of photosensitive disorder, UV±sensitive syndrome (UV s S) (Itoh et al, 1994, 1995, 1996). UV s S was found to be distinct from xeroderma pigmentosum (XP), including XP variant (XP-V) and Cockayne syndrome (CS), by a complementation assay and a postreplication repair assay (Itoh et al, 1994, 1995). XP is a rare autosomal recessive disorder characterized by sun sensitivity, cutaneous and ocular deterioration, and premature malignant skin neoplasms (Cleaver and Kraemer, 1995). There are seven complementation groups, XP-A through XP-G, defective in nucleotide-excision-repair (NER). A separate group, XP-V, exhibits defective postreplication repair (Cleaver and Kraemer, 1995). CS is also a rare autosomal recessive disorder with severe growth retardation, progressive neurologic degeneration, pigmentary retinopathy, cataracts, hearing loss, gait disturbance, dental caries, a wizened appearance, calci®cation of the basal ganglia, and photosensitivity (Lehmann, 1987; Nance and Berry, 1992; Cleaver and Kraemer, 1995). CS is classi®ed into two complementation groups (Cleaver and Kraemer, 1995) and involves actively transcribed genes (Venema et al, 1990; Van Hoffen et al, 1993). UV s S patients show mild clinical manifestations similar to those of XP-E, XP-F, or XP-V (Itoh et al, 1996). Fibroblasts derived from such patients showed UV sensitivity and a failure of recovery of RNA synthesis (RRS) after UV irradiation, in spite of having a normal level of unscheduled DNA synthesis (UDS) (Itoh et al, 1994). These ®ndings were reminiscent of those of CS. To obtain suitable cell lines for use in gene analysis or cloning studies, we attempted to immortalize ®broblasts derived from a UV s S patient and obtained two independent clones. We describe here the isolation and initial characterization of immortal clones of UV s S ®broblasts. MATERIALS AND METHODS Cells and media Kps3 is a primary ®broblast designated UV s S (Itoh et al, 1994, 1995). The human primary ®broblast cell strain XP2SA (XP-V) and CS1MO (CS complementation group B (CS-B)) were purchased from the Human Science Research Resources Bank (HSRRB, Osaka, Japan). Mori was a primary normal ®broblast cell strain established in this laboratory (Itoh et al, 1994, 1995, 1996). WI38VA13 was a normal SV40-transformed cell line. CS2OSSV, SV40-transformed CS-A cell line, was kindly gifted from Dr. M. Ikenaga (Kyoto University). CS1MOSV, SV40-transformed Manuscript received May 18, 1999; revised August 13, 1999; accepted for publication September 20, 1999. Reprint requests to: Dr. Toshiki Itoh, Department of Cell Genetics, Institute of Molecular Embryology and Genetics, Kumamoto University School of Medicine, Kuhonji 4±24±1, Kumamoto 862±0976, Japan. Email: [email protected] Abbreviations: CS, Cockayne syndrome; NER, nucleotide-excision- repair; PDL, population doublings; RRS, recovery of RNA synthesis; SV40, simian virus 40; TCR, transcription-coupled repair; UDS, unscheduled DNA synthesis; UV s S, UV s syndrome; VNTR, variable number of tandem repeat; XP, xeroderma pigmentosum. 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 101

Upload: masaru

Post on 06-Jul-2016

215 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: UVs Syndrome: Establishment and Characterization of Fibroblastic Cell Lines Transformed with Simian Virus 40 DNA

��� ������� ����������� ��� ��������������� ������������ ���� ����� ��������� ���� ����� ����� ��� !

������� ���� � �� � ���������� ���� �� ���� �������� �������� �� ������� ��� ������ � �������� ������� �!� ���� "����� �� �������� �������� #�

�����"����#�������"� ������ $����% �� � ���������������� &���������"� �������' (������� �������� ����� ��� �������� ������������ ������ ���������� ��&�� � )������ &�*�����+ ��� ������������ &�����&�� � ��,���� ������ ����� ���� � )������ &�*�����' ������������ � ���� &������ ���� ������� ���� ����� "������ � ! ��������* ��� ���*� � ����*�� ���� ��������"� ��*�� � � ! ��&������� � ��������� ���������� ���� ����' -� ������� �� ����&��������������� ���� ����� $.&�/��0 ��� .&�/��1/% �����&�� ����� ������� ���������������' ����� ���������� ��� ��� &������ �� "������� ����� ������ ��&��� �������� �� � &����� 2������� ����������+ .&�/+ ��� ������ ��� ���� &�����&� ������������ �� ��������� �� �������"��� $����� ���� ���� �� �������"� � �� ���� ���� �����%��� �� ������� ���"��� � 3 ! ��������� ����� ��

���������� $4�5#/�5 � ���� � ���� �����%' ����������+ ���"��+ ����� ��������� &�����&�� ����*���� &�����* ��2������+ ������* ���+ ��� �����6������ ��2������ �� �&��� � ��� ���� ���� ��� ������� ��� ���� � ������� ��� �����' .&�/��0����� ���� ����� �� &�����&� � .&�/ ����� ����.&�/��1/ �����' !� � "������� ����� � �������&��� �������� ��� ����� ���� .&�/��1/ ����� ��"���� �� � ��� �� ������� �� �� ������+���� �� �)&���� ��� ��������� &�����&�� �������.&�/��0 ��� .&�/��1/ �����' 7��"��+ ����� ��������� �������� �� ����� ���� ��,���� ������*��& ! � 8' ����+ ����� ���� ����� &�"��� ���&&������� � ������ ����������� ������� � ��������� ��� ���� ������ �� � ! ��&��� ��� ��������&6���' ��� ����� ��� ��� ����������� ����������� �������� ��� ���� �� ��� ������ �� � ���� ���� ���������� ������������ � ������ ���� ��� ! " # "$% &"""

��� � � ��!� � ������ ������� ��� �!� �� ������� !����� $ %& ������!��� ��� �� ������� � �'( ��� ) *������� +� ��� ��� �+ ����� � �������������!� ���� �� � %,������!� ��� ���$ %�"& $���� �� ��� -../� -..0� -..1&) %�" +�

���� �� �� ������� � �� 2� ��� � ���������� $34&� �������34 ! �� $345%& � ������ ��� ��� $�"&� �� ������������ ��� � ���� �������� ��� ��� $������ ��� -../� -..0&) 34 �� � ������� ������!� ���� �� �� ��� ���� �� �� ������!���� ������� � ���� ���� �� ����� � ���� � ����� ��� ������� $���!� � � ��� �-..0&) ��� � � ��!� ������������ � ����� 345( �� ����345�� �������!� � ���������5�2�����5 ��� $'�*&) ( ��� ��� ���� 345%� �2������ �������!� ���� �������� ��� $���!� �� ��� � -..0&) �" �� ��� � ������� ������!� ���� �� +�����!� � � �+�� �� ����� � �� ����!� �� ������ ����� ����

������ � ��������� �� ���� �� �� ����� ��� ����� �������� � ���� +����� ��� ��� ����6���� �� ��� �������� � �����������!��� $7���� -.89: '�� � ;� ��-..<: ���!� � � ��� � -..0&) �" �� �����6�� ��� �+������������� � ���� $���!� � � ��� � -..0& ��!��!�� ���!��� � �� ���� ���� $%��� �� ��� -..=: %>���� �� ��� -..?&) %�" ������ ���+ ���� ������ ���������� ����� �� �����

�� 345�� 345@� � 345% $���� �� ��� -..1&) @�� ������ �� �!��� �� ���� ������ ���+�� % ������!��� � ���� � �� ���!� ��� *'( �������� $**"& ��� % � ������ � ����� �� �!�� � �� ��!�� �� ���������� �'( �������� $ �"& $���� �� ���-../&) ����� 6���� +� � �������� �� ����� �� �") �� ����������� ���� ���� �� ��� � ��� ����� � ����� �������� +��������� �� ���� ����� 6� ������ �� �!�� � �� %�" ������ ������ �+� �������� �����) A� ���� ��� �� � ���������� � ����� �� ��� ����� �� ���� �� ����� �� %�"6� ������)

�(��*�(7" ('� ���>B�"

����� ��� ���� ���? �� � �� � 6� ����� �������� %�" $���� �� ���-../� -..0&) ��� ��� � �� � 6� ����� ���� �� � 34<"( $345%& ��"-�B $�" ������������ � ��� ; $�"5;&& +� � �� ����� � �� ���>�� "����� *��� �� *���� ��� ;� $>"**;� B��� #�&) �� �+� � �� � � �� 6� ����� ���� �� � ���������� � ���� ��� �� �$���� �� ��� -../� -..0� -..1&) A�?8%(-? +� � �� "%/=5� ��� ������� ���) �"<B""%� "%/=5� ��� ��� �"5( ���� ���� +� ����� ������� �� � ) �) ���� $����� �!� ����&) �"-�B"%� "%/=5� ��� ���

���� ��� ����!�� �� -8� -...: �!���� (����� -?� -...: ��������� ��������� "������� <=� -...)*�� �� �C����� ��D � ) ������� ����� ��� ���� �� ���� ��������

�������� �� ������� ��� ������ � �������� ������� �!� ����"����� �� �������� ����E� /,</,-� ������� 81<,=.91� #�) ����D�������F���)�������5�)�)E�(�� �!�����D �"� ������ ��� ���: '�*� ���������5�2�����5

��� : 4�7� �������� ��������: **"� ���!� � �� *'( ��������:"%/=� ���� !� �� /=: ��*� � �� �����5������� ��� : �"����������� �'( ��������: %�"� %� ��� ���: %'�*� ! �������� �� ���� ����: 34� 2� ��� � ����������)

==<<5<=<3G==GH-0)== I ���� ���� � <=== �� ��� "������ �� �!�������!� �� �������� ��)

9�9

Page 2: UVs Syndrome: Establishment and Characterization of Fibroblastic Cell Lines Transformed with Simian Virus 40 DNA

�"5; ���� ��� +� ���������� � �� ��� �� �) (�� ����� +� � ����� �� ���������J� ����6�� ����J� ������ ������� ������ $����: ��'�� !��� �(& ����������� +��� -=K ���� ��!�� �� �� $@;": ��'& ���������� L4������� � $-== ���� �� ��&� �� �������� $-== �� �� ��&M � ������6�� ������ � 0K �B<)

(����� � ! �"%� �58,-1� ������ �������!� �������� � ��� ������ !� �� /= $"%/=&� +� �� ����� � �� ��� >"**; $����� �� ���-.8=&) ���'(�G'��� �2� ����� !���� � ����� ������ +��� ����� � �� �!�� ��� $� ����� �(&) ���%�;'( � �"%<��+� � �� ����� � �� �������) ��"(0 $>��� �� ��� -..0& ���;��"�1 $� ����� �� ��� -..<& +� � ����� ������ � �� � ) �)�)@ ����� � $ �!� ���� �� ��2� "����5+���� ������ ���� & � � )#)>)#) >���E��� � $� ���� �!� ����&� �������!���) ���5��� ����� �2� ����� !���� � +� �� ����� � �� 4 ���� $������A�&) �� ���� ��� ���5�*��1� ���� ��;��"�1 � ���5�� +� ��������� �� "� � $*���� ������� ;����������� ������ �� ��& �?9��� � �������� �*��1 ��'( ��� ���5��)

� ! ����������� ��� ����������� B� �� ���� � �'(� ������� 0� -=0,-� -=1 ����� �� ���? +� � ������ ��� -== ��������) � ������� +� � ��� ��� ���� ��� ������5��������� ��������� ������ $����� � ������� ���: "� ����� 7 #�����(&) �+��� ��� �� �� �� �"%� �58,-1 ������ �'( +� ���� �� �������) �+���5��� ��� � ��� � �������� ����� +� � ������� � �+� ���� ������ � ��N����) "�!� � +���� ��� � � ��� ��� �������+� � ������������ � �� ��� � �+��5 ����� 6� ������ �� ���� �� ������� � ����� � ����� ��!� ���!���) ��� ����� �� ������������� �� +� � ��� ������ -D/ � -D8� +�� ���� �� E��� �������N����� ���� ���� ����� � ���� � ����� � �+��) (��C���� �� �������������� +� � � ��� ��� !�� � ����� �� ����� �� ���� � �+��5���������) A�� ��� ����� ����� � ����� ���� +� � ������ �� ��������� ��������) "�!� � ������� ��� ��� ��� �� �������� � � ���� �+� � ���!������ �����) A� �!� ���!� �� �+� ���� ������ ����� ������ �� � ��������) ��� ����� +� � �������� ���?"%� ����?"%�?) ���?"%� � ���?"%�? ����� �!� ��� � ������ ������ � �� �!� 1 � / �� �������!���)� ������� ��6����� +� ���� ���� �� ��� ������ ��������

� ��������� ������ � ���� ���� ��!�) ; ��N�� - � ���� � �'(� �������� -� -=1 ����� �� ���?"%� � ���?"%�? +� � ������ ���-== �� ������) ���'(�G'�� $�!�� ���& ������ �'( +� ��������+��� "6 � $'�+ ���� ;������ ;�!� ��� �(& � 0=��) ��� ����� �� �� �� ��� ���� ���'(�G'�� +� ���� �� ��� ����)�+���5��� ��� � ��� � �������� ����� +� � ������: 9< � ��� � �������� -0=,?==�� �� �� �� �/-8 $������ � � ����� '�& +����� �� ��� ����) (�� �2������ ? +� ��� � �������� ����� +� � 62��+��� 8=K ������ � ����� +��� �����)

� ! ����������� ��� �������� � ����������� ���?"%�?�;?� �"<B""%�; +� � ���� ����� �� ��� ������� �� ���%�;'( ��"%<�� �� ��� ������ � ���� ���� ��!�) "�!���5�+� ��� � ��� � �������� -0=�� �� �� �� �/-8 +� ���� �� ��� ����) ;������?"%�?�;? � �"<B""%�; ����� �2� ����� �;'(5- � ���� ���6 ��� �� �������� L���������� �G� +���� ����������� ������ �;'( $(�5-& $B����� "������ ������ '�&M) ����� �� �� �� ��"(0 +� � ������� ��� ���?"%�?�;? ��"<B""%�; ����� �� ��� ������ � ���� ���� ��!�: -=�� �� ���5�*��1 +� � ������� ��� ���?"%�? � �"-�B"% ����� �� ��������� � ���� ���� ��!�) "�!���5�+� ��� � ��� � �������� -0=���� �� �� ��� ����� ; $��"(0& $�����& � �/-8 $���5�*��1& +� ����� �� ��� ����) (�� �2������ <,/ +� ��� � �������� ��!� �������� +� � ���!������ ������ � � �+ ��� ����� ��)

7�����:����� ����� ��� ��E����� ��� +� �� �� ��� � ���� ��������+�� � $���� �� ��� -../� -..0&) ���?"%�?� �"<B""%� � �"-�B"%����� +� � ������ � ��!� ����� � ������� ���� ���� ����������N���) ��"(0 � ���5�*��1 +� ��� ��E����� ��� ��� ������� ��� ������ +��� ���� ������) (��� ������� �� -1,</ �� ����� +� �� ����� +��� % ����� $<0/ �& � ���� �� -0 # �� �<) "����C������**" +� ���� �� � ���� ���� ��!�) ��� ��!� ����� +� � ��� ������� ���� ������� ������ � ���� '�;5? �������� � �2����� �� </ � �/��)

� ! &���� ��� ������� ������������ % ���� ���� �� ���� ���� $%'�*& � ���� $��'></� ��'O?<� ��'O-?<� � ����81&��!������ � ������ �� '��� �� �� $-.89& +� � �� ����� � �� ���>"**;) �� ������� ������� �� ��'></� ��'O?<� ��'O-?<� �

����81 � <C� /�� 1� � -9C� �������!���) %'�* � ���� +� � ������+��� L�5?<4M ���4 $1=== ��� �� ����& ���� ���� ��� �'( ������������ $(�� ���� ���!���� B>&) @�� ����� �� ��� ����� ������;�� ��� >�� �� 4�� �� � ��� � $*���� ������� ;����������& +� � ������ ��� �������� �� �'( �������� $0 � -=�� �� �2� ���� �'(& �������� � ?9�� �� -=,-< � ���� 0=,-== ���� �� ������ �� �����)��� �������� �'( � ����� +� � ����� � <0 �� ��� �� ����� =)8K�� -�� ��5�����G���( $�(�& � ��� ��� $4�� � � ��� � ������������� � ���� +��� ��'></ � ;�� �� � >�� � �������� ������ ���� +��� ����81& � -)<K �� -��(� � ��� ��� $4�� � ������������� � ���� +��� ��'O?< � ��'O-?<&) ����� ���� ���� +� � ������ � -��(� ����� � - % �� �� �� ��� �� -0,/- �) ��� �'(� ����� +� � ��� � ��� �� �� � � ���� � $>����5'P:(�� ���&) 4 ���� ������� +� � ��� ��� � 10�� � ������������� -�� ���(G9K $+�G!��& "�"G-� '>4B/� �> 9)< L-�'>4B/ $�> 9)<& ����� �� �������� �� 9- � �� '<>4B/ � /�� �� 80K>?4B/ �� ���� M ���� ���� �� ��� �� � ����� � $-.8/&) ��� 6��� � +� ���� ������ +��� � ���� � 10�� �� -8,<- � � ��� ��� ������� ���� �� � ���� �������) ��� 6��� � +� � +���� �� �� ����� � 10�� �� 0��+��� ������� ������ -K $+�G!��& "�"G/=�� -� '>4B/$�> 9)<&) ��� 6��� � +� � ����� ���� @�E�2 ;��5(���� ;("5<===$@�E� 4���� @���� ������ #�& �� �� �� ��� ����) ��� ����� ����'O-?< � ����81 +� � � ������� ���� (���� 4�������� 0)=5#����+ �)��������� �� ��� � �������� ��� "%/=5� ��� ��� ���� ���� +� �

� ����� �� ��� � ���� ���? ����� +� � ���� � ��� �������� ���������� � �C������ � ��� ������ � �� ���� � �������� �� ������� ) (����� � �C������ +� � ������ �� �� ����� �� ��� ���� ����������� � ��� ������ � ��� > ��,A���� � �C���� +� ���� ������ ��� ������� � �C������) ��� �!� �� � �������� ��� ��� "%/=5� ��� ��� ����� ����� �!� ��� �� �!�� � �� ����� ���� �� ���? �����+� ���� ���� �� ������������ �� ��� ������� � �C������ � �� ����������)

7��������� � ��� ��� 33� ����� �� ���������� �" �**" ��� % � ����� +� � ���� �� �� ������ ���� ���� ����+�� �$���� �� ��� -../& +��� ���� ����6�����) ; ��N�� �� ������� ! ��������+�� ����� �� � �� ���� � �� �������� ���� ���� <=�� ��C����$-,<� -=/ �����& �� ��� �����J� � ��� �� $A�?8%(-?& ���� ���������+� � ����� +��� ��� ��������� � �+� �+� � ��� ��� ��!� ����$-8��� -8��& $���� �� ��� -../&) ��� ����� +� � ������� �� 0,9 �)���� +� � ��� +���� +��� ��������5����� �� ���� $4;"&� � �����+��� % $<0/ �& � ���� �� ?= # �� �<� ���������� ������ +��� L?>M�������� $/=��� �� ��& �� <)0 �� � 62��) ��!� ����� +� � ������� ���� ������� ������ � '�;5? ������� $����&� � �2����� �� </ � �/��) � �� ��!� 0= ����� +� � ������ ��� ��� ������)**" +� ���� �� � ���� ���� ����+�� � $���� �� ��� -../&) B� ��

�+�� -=/ ����� +� � ����� � ��!� ���� � ���� ���� ��!� � ��������� -,< � �� ���� ��� � �+�� ����) ���� +� � ��� +���� +��� 4;" �� ����� +��� % $<0/ �& � ���� �� -0 # �� �<) ����� +� � ���������� �� <? � � ������ +��� L?>M� ���� $/=��� �� ��& �� - �)(��� ���� ��� +� �� �� ��� �� ��� ������ ���� ���� ��!�)

;���� �� ��� �*���� ���?"%� � ���?"%�? ����� +� � ������ �� ���� ������ �� � �+ � =)-K � =)?K ���� � ���) ��� ������ �� � �� ��� �� ���� � ��� +� ���� ���� �� %���� � ���!� $-..0&); ��N�� � ��� +� ������!�� � ������ 4;"� ������ �� /1��� � ��������� =)-K � =)?K � ������ ������ �� ��� -=�� '5<5��� �2���������� ���5'�5<5����������� ��� $>�4�"&� � �������������) ��� ������ � ��� �������� +� ����� � � ���� ���� ���� � ���� ����� � ?9�� ������ � 0K �B<)

������* ��� B�� -=/ ����� �� ���?"%� � ���?"%�? +� ������� ��� 1= �� ������) ����� +� � � !����� � ������ � ���� ��� !�� ���� � ��5���� �����) ��� ���� ���+� �� !���� � ���� �� �������� �2�� ����� �� ��� ���� ���)

�� ���"�"�� ����� ��� &�����* ��2������ % �� !�!� +� ���� ����� ��� �� ���� �� �� $-../&) ; ��N�� �� �� ��� ���� � �� ����� +� ��������� ��� 1= �� ������ � ���� �� ���� �� -= �) "����C������ �����+� � ���� +��� 4;" � �2����� �� % ����� $<0/ �& � N���� �� ��=)9 # �� � �� �) (��� -,< +�� ��� ����� +� � +���� +��� 4;"� 62��+��� 8=K $!��G!��& ������ � ����� +��� ������ � ������� +� �������) @� ��� ����� �� �� ������ +� � ���� �� �2�� ����) ��� ����!� �� !�!� +� ������� ������ ��� % ���� � ������� ������ ��� )�� ���� ��� ��� ������ �� ������ � % �� !�!�� ������ +� ���� � 6� ����� ��� �� -�� E��� ��� % � ����� � ��� ����� +� �

9�4 ��B> ('� �(�(�O �� �>� #B *'(7 B@ �'%�"���(��%� ��*�(�B7B��

Page 3: UVs Syndrome: Establishment and Characterization of Fibroblastic Cell Lines Transformed with Simian Virus 40 DNA

������� �� < +�) 4���� ��6����� +� ���� ���� �� ����� ���� �� = # �� �< �� % �� !�!�) % �� !�!� ���� � ��5���� ����� +� � �����+�D -� -=0 ����� +� �

������ ��� 1= �� ������ � ���� �� ���� �� -= �) "����C������ �����+� � ���� +��� 4;" � �2����� �� % ����� � ���� ���� ��!�) (��� ?�� !���� ����� +� � ������ �� ���� � ��5���� �����) @� ��� ������� �� ������ +� � ���� �� �2�� ����)

*�" 7�" ('� ��"� ""�B'

����������� � ����� ����6��������� ���� ������� ������ ���� �� ����� � �� � �� � ���� �� �� ���?� +�� ������� ��� "%/= �'( ������ ��� � �� � ���� +��� �������!� � ��� �� �'( �������� ��� ���? ����� �� ��� ������5�������� � ��������� ������) (��� ������ ��� ����� �� ����+� ���+�� ���� �� ������ ��N��� � +����� �� ������ ���� �� ���� �� � ��� ��� �����) ����� ����� +� � ������-D/ � -D8) ���� �2������� �� ���� � �+�� ���� ���� �� +������ � ��� ������ � ����6���� �2����� ���� ���) (��� ������ !��� ��� � �+��� ��+�!� � ��� � �+�� �� ��� �� ���������� � ����� ��� ����� � ��� ����� �� ��� �� � ���� $��* 9&)

A��� ���� �� ���� +� ���!� �� ���?"%� � ���?"%�? ������ �"%/=5� ��� ��� ���? 6� ������ � ����� �� �2�� �����)���?"%� ����� � �� �!�� � �� ��� � ���� �2�� ����� ����)� ��� ��� ���?"%�? ����� � �� �!�� � �� � ����� ��� ���� �� ����� � � � ���� � ���� ������� $��* 9&) ��� ���������� �� ��� � ���� ����� ���+�� 6��� ���� ��) ;��� ���?"%�� ���?"%�? ����� �2� ��� ��� "%/= � �� � ���� ������� ��� �� ���������� $�� �� ���+&)

� �3 �������� �� ��6 � +����� ����� ���� �� ����� ��� �!�� � �� ��� � ��� ���? ������ +� �������� %'�*����� $��* 4&) A� ���� ��� %'�* � ���� �� � �� � �

��*��� 9' (������ � &���������� � &����6<#9= ����������� �����&&������� � ���� 2��������' �������!� �������� �������� ��� ��� �� � �� � ������� +� � ���� ���� � �� ��� ���� �� ����� ���!� �� � �� ����� � ����� � ��� ������� �����) @��� � ������� ������� �� ���?"%�? �����)

��*��� 4'� �3 �������� � ����6��������� ���� ����� ��&��� ��� *����&�� � ��������� ����� ��� ��� &������� ���������' $�& �� ��� �� �� �� �� �� ������ �'(� �������� �� 4�� �� +������ � =)8K �� -��(� � ��� ���) ����� ���� ���� +� � ��� ��� �- % �� �� �� /- �) ��� �'( � ����� +� � �������� ���� ��'></� ���) 7� ���� � ������ �'( � �� ���?"%� $-&� ���?"%�? $<&����? $ %�"& $?&� �� � $� ��& $/&� � 34<"( $345%& $0&� �������!���)$& �� ��� �� �� �� �� �� ������ �'(� �������� �� 4�� �� +������ � =)8K �� -��(� � ��� ���) ����� ���� ���� +� � ��� ��� �- % �� �� �� -0 �) ��� �'( � ����� +� � �������� ���� ��'></� ���) 7� ���� � ������ �'( � �� ���? $-&� ���?"%�? $<== 4�7&$<&� ���?"%� $?&� � ���?"%�? $/&� �������!���) $& �� ��� �� �� �� �� �� ������ �'(� �������� �� ��� �� +� ����� � =)8K �� -��(�� ��� ���) ����� ���� ���� +� � ��� ��� � - % �� �� �� </ �) ����'( � ����� +� � �������� ���� ��'></ � ���) 7� ���� ������� �'( � �� ���?"%� $-&� ���?"%�? $<&� ���?"%�? $<== 4�7& $?&����? $/&� �� � $0&� �"-�B $�"5;& $1&� � 34<"( $9&� �������!���) $�&@�!� ��� �� �� �� �� �� ������ �'(� �������� �� >�� �� +� ������ =)8K �� -��(� � ��� ���) ����� ���� ���� +� � ��� ��� � - % �� �� �� <1 �) ��� �'( � ����� +� � �������� ���� ����81 � ���)7� ���� � ������ �'( � �� ���?"%� $-&� ���?"%�? $<&� ���?"%�?$<== 4�7& $?&� ���? $/&� �� � $0&� �"-�B $1&� � 34<"( $9&� �������!���) $�& @�!� ��� �� �� �� �� �� ������ �'(� +���� +��������� �� 4�� �� +� ����� � -)<K �� -��(� � ��� ���)����� ���� ���� +� � ��� ��� � - % �� �� �� <1 �) ��� �'(� ����� +� � �������� ���� ��'O-?< � ���) 7� ���� � �������'( � �� ���?"%�? $-&� ���? $<&� �� � $?&� 34<"( $/&� � ���?"%�$0&� �������!���)

%B7) --/� 'B) - #(' (*� <=== "%/=,�*('"@B*��� %" "�'�*B�� ��77 7�'�" 9�/

Page 4: UVs Syndrome: Establishment and Characterization of Fibroblastic Cell Lines Transformed with Simian Virus 40 DNA

�� �������� <C $��* 4 ,�&� /� $�� �� ���+&� -9C $��* 4�&� �1 $��* 4�&) ��*��� 4 ���+� ��� ������ �� %'�* ����� � ���?����?"%�� ���?"%�?� � �� �� � ����� ��� � �� � ������ �� $�� �� 34<"(� � �"-�B&) ���?"%� � ���?"%�? ������������� �������� ������� �� ����� � ��� � ��� ���? ������ ���������� � �� ����� � �� �� 34<"(� � �"-�B ����� $��* 4 ,�&:��+�!� � ���?"%�? ����� �!� ���� �� �� ��� �+� �� �������� <C� 1 � ��� ��'></ � ��'O-?< ������ �������!��� $��*� 4 +�&) A� �� ��� �2���� ���?"%�? ����� � ��!� � ����� � ���� ��� ��� � ����� ���� ��� ��'></ � ��� $��*� 4�+ �&) B� ����� �+� �� �������� <C � ���?"%�? ����� � �� �2������ -==�������� �������� $4�7&� +���� ���������� ��� ��������+�� � ����� ����� � ��� ��� ������� � � ��� � ������? ����� $��* 4�� ���� : ��* 4�� ���� �&) ��� � ���?"%�? ������!� <== 4�7 +� ���� ���������� $��* 4�� ���� �: ��* 4�� ���� &)����� �� ����� ��� ���?"%�? ����� ���� �� �� ��� �+�

�� �������� <C +��� �� ���� ������) ;��� � ����� �������+� �������� ��� ���� ����� +� � �� �!�� � �� ��� � ��� ���?������ � ��� � �������� ��� ���?"%� � ���?"%�? ����� �� �!��� �� ���� ���� ���� �� ��� � ��� ���? ����� +� ���� ��-)?� -=,0)

��*��� /'7�&��*� � ����6��������� ���� �����' (�� �� ������� � �� ����� +� � ������ � ������� �� <,? �) $�& ���?"%�� $&���?"%�?� $& ���? �����) ���� ��D <==��)

��*��� �';���� ���"�� � ����6��������� ���� �����' ���?"%������ $�&: ���?"%�? ����� $�&) ����� +� � ������ � 1= �� ������� � ��������� � ���� ��� !�� $</� /8� 9<� -<=� � -// �& ���� � ��5���������) ��� ���� ���+� �� !���� � �� �� �� ���������2�� ����� �� ��� ���� ���) ��� "�� �� ����� �� ��� ������� �� ���� �����)

��*��� >'�� ���"�"�� � ����6��������� ���� �����' (�� �� ������� � �� ����� +� � �������� ��� 1= �� ������) (��� % � ������ N���� �� �� =)9 # �� �< �� �� ����� +� � ������� �� -/ �� 62��+��� 8=K ������� � ����� +��� �����) �� ���� ��� ��� ������ ��������� ������ +� ���� � 6� ����� ��� �� -�� E��� ��� %� �����) ��� ���� �� ����� !� �� �� �� �� � ��� �2�� �����D� � � � "��) A�?8%(-? ����� $�& +� � ���� � � �� ��� ��) ���?����� $�&: ���?"%� ����� $�&: ���?"%� ����� +��� -�� ������ $�&:���?"%�? ����� $�&: ���?"%�? ����� +��� -�� ������ $�&)

9�� ��B> ('� �(�(�O �� �>� #B *'(7 B@ �'%�"���(��%� ��*�(�B7B��

Page 5: UVs Syndrome: Establishment and Characterization of Fibroblastic Cell Lines Transformed with Simian Virus 40 DNA

7�&��*� ��� �������� ��������������� � ����6�����6���� ���� ����� ��� �� ������� �� ���?"%� ����?"%�? ����� �� ���+ � ��* /) ����� �� ���� ���� +� ��������� ����� �� ���? �����) ���?"%� ����� � ������ �� ��� ��� �� ���� ���� �� +��� ���?"%-? ����� �� �� ���� � �+�� � ������� $��* /&) ��� ������� ���� �� ����� ����� �����+ � ��* � � ����� 1) ��� � �+�� �� �� ���?"%� ����� +���+� �� ��� �� ���?"%�? �����) ��� ����� ��6����� �����?"%� ����� +� ��� ��+� �� ��� �� ���?"%�? �����$����� 1&) �� ��!� � ������� ���?"%� ����� ��� �� � �+ ����� � � ���?"%�? ����� � �+ �� ���� � ���� � $����� 1&) ��� % ������!���� ���?"%�? ����� +� � ����� �� ���? ������ ������?"%� ����� +� � �� � ������!� �� ���? ����� $��* >&) (�������� �� ������ � % �� !�!� +� �� ���� � ���� �����$��* >&+ +�� �� ��� � "%/=5� ��� ��� 34 ! �� ����� +����� $%���� � ���!� � -..0&) ;��� ����� ���+�� ��� ������ �**" $����� 11&) ����� � ����� �� ���� ��� ��� ������ ������ ����� ���? ������ ���?"%� � ���?"%�? ����� �2��������������� ����� �� ���������) ����� ������ ����� ���� �����?"%� � ���?"%�? �� �� ����� �� ��� ���� �� ��� ������� �� ��!� � �� �������� � ���� ���� ��!�)

�&��������� ���� �� ��6 � ��� "%/=5� ��� ��� %�" ����� � ������� � �� �" ������ +� �� �� ��� �� ��� ������������ ���� �� � �������) A� � ������� �"( � �";��'( ��� ���?"%�?�;? � ���?"%�? ������ � ���� �� %�� !�!� $��* =&) (������� �"( � �"; ����� +� � �����������+��� �"( � �"; ��'(� �������!��� $��*� = � �&� ���?"%�? �����+� � �� ����������� +��� ���� ��'( $��*� =�� �&) �� ��!� ��� ��6 � ����� ������� +� �� �� ��� ��� ��E����� ��� �����"( � �"; ��'() **" ��!��� �� ���?"%�? ����� +� � �� ���!� �� �� ��� ��E����� �� ����� ��'( $�� �� ���+&)����� ������ ��6 ��� ��� ���?"%�? ����� +� � ������� � �� �"�����)��� � ��� ���� ��� �� ��� ���!� ����� ���� ���� ��

������� �� � ���� �� ��� ���� ��� �� ��� � �� ���� �� �$����� �� ��� -.89&) ���� ���������� �� �5�� ����� �� � �� '�* ���������� � �� �����5������� ��� $��*&)�" ����� � ��6����� ����� ��� �� ��� � �� ���� �� � �� ��� ���!� ����� �)�)�

��6���� � ��*� � �!�� � �� ����� ����� ��� $%����� ��� -..=: ! >���� �� ��� -..?&) ��� �������!� ���� � �� �" �!���� ����� $� ����� �� ��� -..<: >��� �� ��� -..0&) �"; � ��������� ������� ������� ������ $� ����� �� ��� -..<&)�"(� ���� �� ����� �� ��� � ������5�� ��� ��� $A�&5 ���� ����� �� ������ � � ����� � ��� ��� +��� ��� �// � ����� ������ ������ � �� ����� ���� �@��>� �+����";� ���� $>��� �� ���-..0&) *������� ��� ��� ����� ���+�� �"; � 34(� � �";� 34; +� � ��� ��� $"���� � "� � -..9&) 34; � 34��!� ��� ���+ �� � � ������� � ������� �� �@��> $"������ �� ��� -..?� -../: % %�� � �� ��� -../&) ����� ������ ������� ����" �� �!��!�� � � �� ����� � '�*) �� ��!� � �� +������������� ��� �" +� ��6���� � �+� � �������D ���� ����* � ������� �� ����� � ���� � �� ����� $% ���� �� ���-..9&) ;����� %�" ������ ���+�� ��� ���������� �� ��� �������� �" $���� �� ��� -../� -..0& � "%/=5� ��� ��� %�" ��������+�� �" �������� $����� 11: ��*� >� =&� ��� �������!� ���� � %�" �� �� ��* ���� �G� � �� ����� ���� ) %�"������� ��+�!� � ���+�� ���� ������ ���������� +�������� ������ �� ������� ���� �� +��� �" ������) A� ������ ��� ���� ���� ���� �� �� ����� �� ��� ����� ���� �� ��*������ ���� �2����!� �����) *������� �� +� ��� ��� ��� �"����� +� � ��6���� � ��*�� ������ ������� $7��� � ����� �-..?&) �� �2����!� ����� ���� � ������ ������� ������ ������������� �� �� �� � �" ������� %�" ������ �� ���+ � �� ��!�� �� ��* ���� �2����!� �����) ����� ���� ���� ���� ��� ���� ����� �� ������� � ������� ������� � ����� +��� ��� %�"������ � �'( ��� � � �� �����)

�� ����� ��� ������� ������� ��� ������� ����� �� ����������� ��������

������ ��� ������ ������! ��� "���� #� $�������! ��� ��� %�� &�%� &���'������

��� ����� �� ���� �� (�������� ��� ��� )������ �(���� ��� ���(��� ��������� �� ���

�������(�� �� ���� ����� ���� *��� ��� ��� (��(������� �� ��� �������(�� ����

+��� +�� ��((����� (����� � )�����,��,-�� ���� ��� �������� �� "�������!

�����! �(���� ��� #������ �� %�(�� .�� �� � ��� ��*�/! � ��� 0���� 120����

$��������� .�� �� �/! � ��� ����� $��������� .�� �� �/! ��� � ��� 3��

$��������� ��� -��� ��� ������ .�� �� �/�

����� 1' �������� ��������������� � ����6��������� ���� �����

���?"%� ���?"%�?

4���� ��6�����1 � -=@5���� $K&� 0 <=� ������� ��6����� $����� � ��� ��& 0 � -=,0 , - � -=,0 - � -=,0 , 0 � -=,0

������� ���� $�& ?1 � ?< �� �+�� � =)-K � =)?K ���� � � -=@5����� , �

�4���� ��6����� +� ���� ���� �� �����5�� ��� ���)� ������� ��6����� +� ���� ���� �� ��� ������ �������� � ��������� ������ ���� ����� � ������� ���)������� ���� +� ���� ���� �� ������ ���� � ��5���� �����)�� �+�� � ���� � ��� +� ���� ���� �� �� ���� �� ������� � =)- � =)?K ���� � ���)

����� 11' ��"��� � ����������� � ! ��������� ��� ���"��� � 3 ! ��������� �� ����6��������� �����

�"� *����!� �" $K& **" *����!� **" $K&�

���?"%�?GA�?8%(-? --)/ � -)=G .)1 � -)= --. 1)- � =)1G</)< � <)8 <0���?"%�GA�?8%(-? -<)? � -)1G--). � -)< -=? 0)? � -)<G-8)? � -)/ <.���?G�� � -9)1 � -)?G-8)1 � -)<� .0 ?)= � =)/G-<)/ � -)- </

� �" +� ���� �� � �����+�) ��� ����� +� � � ����� +��� % � ���� �� ?= # �� �<� � ���������� ������ +��� L?>M�������� $/= ��� �� ��& �� <)0 �)�2���� � ���� +� </ �) �" �� � �� �� ������) �� � ��� � "�� �� 0= ���� ������)

*����!� �� $K& �� �" !���� �� �� �� ���� ���� �� +��� ����� �� � �� $A�?8%(-? � �� �& �����)**" +� ���� �� � �����+�) ��� ����� +� � � ����� +��� % � ���� �� -0 # �� �<� ������� �� <? �� � ������ +��� L?>M� ���� $/= ��� �� ��& �� - �)

**" �� � �� �� ������) �2���� � ���� +� </ �) �� � ��� � "�� �� 0= ���� ������)�*����!� �� �� **" !���� �� �� �� ����� ���� �� +��� ����� �� � �� $A�?8%(-? � �� �& �����)����� �� �� $-..1&)

%B7) --/� 'B) - #(' (*� <=== "%/=,�*('"@B*��� %" "�'�*B�� ��77 7�'�" 9�>

Page 6: UVs Syndrome: Establishment and Characterization of Fibroblastic Cell Lines Transformed with Simian Virus 40 DNA

*�@�*�'��"

��� �� ��� ����� � AD ������ ��C�����) 4�� ���� -�� �� 5�- 8-D-..-,-..0� -.8/

���!� #�� � ��� �>) 3� ��� � ���������� � ������ ��� ���) �D"� �!� �*� ;����� (7� "�� A"� %��� � $���&) ��� ������� ��� ��������6���� �� �������� �������) '�+ �� �D ��� +5>���� -..0� ��) /?.?,//-.

����� �� "�� ��� #@� @ ��C�� *#D �2� ����� �� � �� ���� �� � ���5�������!������ �� ���� !� �� /=) 4�� ���� -�� �� 5�- 99D?8.8,?.=<� -.8=

>��� �(� 7� 7� ��� '� �� ��D ��� ������ ��� ��� � ��� ( ��� ������ A� ���� � ���� ��� ��� ��� +��� �"; � ���� � ������ �� *'(������ �� �� �@��>) #��� 8<D000,01/� -..0

���� �� B� �� ������� �D ( �+ %,������!� ��� ��� �� ������� �� ������������� � ���� �� 2� ��� � ���������� � ������ ��� ���D������� ���+�� ���������� �� ��� ������ �� ������ ��� ��� +������������ ����������) ����� 7�� ?-/D<??,</8� -../

���� �� @�E�+ �� B� �� ������� �D %" ��� ���� �+ ��� � ����� ��� �����������!� ���� �� +��� �������!� �'( ��� � �� ������� � ��2� ��� � ���������� ! �� � ���� ������������ � ��� -) -� %&�� )���� 01D-<19,-<91� -..0

���� �� ������� �� �������� �� >� �5�� �� ����� �� ����� �� B� �D������ �� ��� ������ �� �� �� ������ +��� %� ��� ���� �����������!����� �� +��� �������!� �'( ��� ) 6� % �������� -?/D--/9,--0=� -..1

7��� "(� ����� 4�D 4 ��� ���� ��� �� ������ �����5������ ���� ���� � �� ���� �� � �� ���!� ��� ��� �� �������!� � ��������� ���) 4�� ���� -�� �� 5�- .=D-=/..,-=0=?� -..?

7��� (*D ������J� ��� ��� � � ����5�������� ����D �������!� ��� +������ ��� ) #���� 7�� 9D8<,-=?� -.89

����� �� "��!� �� >+�� 4�D "������!� ���!� �� � �� �����5������� �'(���� � �� ��� � �� ���� �� � �� ��� ����� �>@* ���) #���0-D</-,</.� -.89

'��� �� 7���� � �� BJ����� 4� �� ��D % ���� ���� �� ���� ����$%'�*& � �� � �� ��� ��� �����) ����� <?0D-1-1,-1<<� -.89

'�� �(� ;� � "(D ������ ��� ���D �!��+ �� -/= ����) -� % ��� )����/<D18,8/� -..<

"������ 7� *�� *� >���� � "� �� ��D �'( ��� �������D ������� �� ;�@<$�@��>& ���� � �� ����� ���� ) ����� <1=D08,1?� -..?

"������ 7� �������� %� *�� *� �� ��D ��� �*��<G�'( ��� � ���� ���������� +��� ��� ���� �� ;�@<G�@��> � �� ����� ���� ) "�61 %-?D<?88,<?.<� -../

"���� �4� "� (D >�� � �� �����5 ��� ������� ���� �";G�*��1 �� �'(5��������� (�4�� ��� �� �� ������� � ���� �� ��� ��� ��� �� �� �� ����� ������2 �� ������ *'( ������ �� ��) % 6��� #��� <9<D-880,-8.=� -..9

� ����� �� % ���� (� �� A�� #� %� ����� A� ;����� �� >���E��� � #>#D�*��1� ����� �� �������� �� �����!� ��������� �� �!��!�� �������J� ��� ��� � � ��� ���� ��� �� ���!� ����) #��� 9-D.?.,.0?�-..<

% ���� (#� ! �� >� �� ��#� ����� �� �� >���E��� � #>#D ������ ��� ���D�������!� ��� �� � �� �����Q "�61 % -1D/-00,/-1<� -..9

% >���� (� '� E (�� ��� 7%� ! O���� ((� ������� � 7>@�%��� #D ��6���� ��� �� ��� � �� ���� �� � �� ���!� ���� ������� ��� ��� �����) ��� -��� 7�� <-D08.=,08.0� -..?

% %�� � (#� %� ����� A� � 7� �� ��D �� ����� �� 2� ��� � ���������� ��� ������ �� ��� � �� ����� ���� ;�@< $�@��>&) "�61 % -?D-1/0,-10?� -../

%��� #� ������� � 7>@� '� E (�� % O���� ((� ��� 7%D ��������� ������ � ������ ��� ��� �� �������� +��� ������ � ��� �� %5������ �'( ���� � � �� �������� ���!� �'() 4�� ���� -�� ��5�- 89D/9=9,/9--� -..=

%���� #4�� ���!� #�D 3� ��� � ���������� ! �� ����� � ������ ������ �������) ����� 7�� ??9D---,--9� -..0

��*��� ='�� ���"�"�� � ����6������������� ����� ����������� ���� ��! � ��8�� !' B� � -=0 ����� +� � �������� ��� 1=�� ������) (��� % � ����� � N���� ���� =)9 # �� �< �� �� ����� +� � ������� �� ? ��� ������ �� ���� � ��5���� �����) ������� �� ����� !� �� �� ��� �����+�� ���5����� �2�� �����D A�?8%(-? ����� $�& +� ����� � � �� ��� �� $�+� �2�� �����&) $�&�"<B""%�; ����� $�: ��� �2�� �����&:�"<B""%�;5��"(0 $�: �� �� �2�� �����&) $&�"-�B"% ����� $�: ��� �2�� �����&:�"-�B"%5���5�*��1 $�: �� �� �2�� �����&)$& ���?"%�?�;? ����� $�: �+� �2�� �����&:���?"%�?�;?5��"(0 ����� $�: ��� �2�� �����&)$�& ���?"%�? ����� $�: �+� �2�� �����&:���?"%�?5���5�*��1 ����� $�: ��2 �2�� �����&)� � � � "��)

9�= ��B> ('� �(�(�O �� �>� #B *'(7 B@ �'%�"���(��%� ��*�(�B7B��