Unidad: Universidad Autónoma Metropolitana Iztapalapa

División: Ciencias Biológicas y de la Salud

Grado: Licenciatura

Título del trabajo: Efecto de los fitoestrógenos en la anatomía e histología de la

Vesícula Seminal de la rata Wistar.

Nombre del participante: Martínez Flores Karina

Nombre y firma de los asesores:

M. en C. Mario García Lorenzana M. en C. Ma. del Rosario Tarragó Castellanos

Lugar de realización del trabajo: Área de Neurociencias (Laboratorio de

Neurobiología Tisular, S-336), de la Universidad Autónoma Metropolitana

Iztapalapa.

México, D.F., a 1 de julio de 2004.

DR. OSCAR A. MONROY HERMOSILLO

DIRECTOR DE LA DIVISIÓN DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD

PRESENTE

Estimado Dr. Monroy:

Aprovecho la presente para saludarlo y al mismo tiempo informarle que la

alumna Karina Martínez Flores con matrícula 99335630, de la licenciatura en

Biología, terminó satisfactoriamente su Servicio Social titulado “Efecto de los

fitoestrógenos en la anatomía e Histología de la vesícula seminal de rata macho

Wistar”.

La fecha establecida para finalizar el Servicio Social era el 17 de Mayo del

2004, y esto no fue posible debido a que el número de ejemplares procesados y

por analizar fundamentales para el desarrollo y cumplimiento de los objetivos

propuestos, rebasarón la estimación proyectada.

Agradeciendo la fineza de sus atenciones me pongo a sus órdenes para

cualquier aclaración.

A t e n t a m e n t e

“Casa abierta al tiempo”

M. en C. Mario García Lorenzana

Profesor Titular “B” de Tiempo Completo

Area de Neurociencias,

Departamento de Biología de la Reproducción

México, D.F., a 1 de julio de 2004.

DR. OSCAR A. MONROY HERMOSILLO

DIRECTOR DE LA DIVISIÓN DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD

PRESENTE

Estimado Dr. Monroy:

Aprovecho la presente para saludarlo y al mismo tiempo informarle que la

alumna Karina Martínez Flores con matrícula 99335630, de la licenciatura en

Biología, terminó satisfactoriamente su Servicio Social titulado “Efecto de los

fitoestrógenos en la anatomía e Histología de la vesícula seminal de rata macho

Wistar”.

La fecha establecida para finalizar el Servicio Social era el 17 de Mayo del

2004, y esto no fue posible debido a que el número de ejemplares procesados y

por analizar fundamentales para el desarrollo y cumplimiento de los objetivos

propuestos, rebasarón la estimación proyectada.

Agradeciendo la fineza de sus atenciones me pongo a sus órdenes para

cualquier aclaración.

A t e n t a m e n t e

“Casa abierta al tiempo”

M. en C. Ma del Rosario Tarragó Castellanos.

Profesor Titular “C” de Tiempo Completo

Area de Neurociencias,Departamento de Biología de la Reproducción

FORMATO PARA SER LLENADO POR EL (LOS) ASESOR (ES) INTERNO Y EXTERNO

PARA EL PROYECTO INICIAL DEL SERVICIO SOCIAL

1. Nombre y adscripción de los asesores.

M. en C. Mario García Lorenzana

M. en C. Ma del Rosario Tarragó Castellanos.

Area de Neurociencias

Depto. Biología de la Reproducción, CBS, UAMI.

2. La naturaleza del que procede el servicio social es.

[ x ] a) Proyecto de Servicio Social asociado a la investigación que se realiza

en las áreas departamentales.

[ x ] Interno

[ ] Externo

[ ] Por convenio

[ ] b) Proyecto de Servicio Social asociado a actividades disciplinarias

realizadas por el asesor.

3. Nombre del proyecto que deriva el Servicio Social e institución u organismo que lo

avala.

“Efecto del Coumestrol sobre Glándulas Sexuales Accesorias en Ratas Macho Wistar”

Area de Neurociencias, Departamento de Biología de la Reproducción; División de

Ciencias Biológicas y de la Salud, Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa.

4. Justificar la vinculación del asesor con el proyecto de Servicio Social.

Dentro de las actividades del proyecto mencionado, se requiere el procesamiento

histológico y análisis morfométrico de material biológico, por lo que es necesario

incorporar alumnos a esta actividad.

5. Desglosar las actividades que desarrollará el asesor para dirigir el Servicio Social.

ETAPAS MESES

1 2 3 4 5 6

Revisión bibliográfica x x x x x x

Trabajo de bioterio x

Procesamiento de material

biológico

x X

Análisis morfométrico x x

Elaboración del informe x

¿ Considera que la formación que el alumno recibe en la UAM-I es adecuada y suficiente

para su desempeño profesional? ¿ Por qué?

Sí, porque permitió rápidamente incorporarse a la dinámica del proyecto (procesamiento

histológico y análisis morfométrico de material biológico).

6. Anote las fortalezas y debilidades detectadas por usted con respecto a la formación

del estudiante.

Una de las debilidades que encontramos, no solo en nuestro estudiante, sino en general

en todos los estudiantes, es la dificultad para expresarse de manera escrita. Creo que

sería conveniente promover cursos que les permitan desarrollar esta capacidad. Sin

embargo, en nuestro estudiante esta dificultad se subsano gracias a su empeño y

esfuerzo personal.

M. en C. Marío García Lorenzana M.enC. Ma del RosarioTarragó Castellanos.

Nombre: Martínez Flores Karina, Matrícula: 99335630, Licenciatura: Biología

Título del Proyecto: Efecto de los fitoestrógenos en la anatomía e histología de la

Vesícula Seminal de la rata Wistar.

Registro: B.057.03

Nombre de adscripción de los asesores:

M. en C. Mario García Lorenzana Departamento de Biología de la Reproducción

C.B.S.

M. en C. Ma. Del Rosario Tarragó Castellanos Departamento de Biología de la

Reproducción C. B.S.

El 17 de Noviembre se comenzó administrar diferentes dosis de coumestrol a las

ratas, posteriormente se les sometió a eutanasia para obtener las glándulas

seminales y se empezaron a registrar (Glándulas seminales) para comenzar a

prepararlas y procesarlas en el Histoquinet, posteriormente se incluyeron en

paraplast y así poder realizar los cortes transversalmente, luego de obtener el

número de cortes necesarios de los siete tratamientos se tiñeron con tres técnicas

de tinción: Hematoxilina-Eosina, PAS y Azul de Alciano.

Posteriormente se analizaron histológicamente las laminillas de cada tratamiento

para ver si se modificaron sus características de secreción y estructura además

se midió el tamaño de las células de el epitelio para realizar análisis estadístico.

Visto Bueno:

_________________________ _________________________

M. en C. Mario García Lorenzana M. en C. Ma. Del Rosario Tarragó

C.

____________________________

Martínez Flores Karina

“Efecto de los fitoestrógenos en la anatomía e histología de la Vesícula

Seminal de la rata Wistar”

INTRODUCCIÓN

A los compuestos presentes en las plantas que tienen la capacidad de

producir efectos estrogénicos se les denomina, de manera genérica,

fitoestrógenos. En un punto de vista más concreto, se definen así porque son

compuestos en los que se ha demostrado inducir una respuesta similar al de los

estrógenos, es decir que tienen la capacidad de unión a receptores a estrógenos y

la capacidad de inducir una respuesta específica a genes aceptores de estrógenos

(Kurzer, 1997).

Dentro de los fitoestrógenos existen diversas familias de moléculas que se

incluyen de manera general dentro de los denominados isoflavonoides y

corresponden en realidad a tres grupos: las isoflavonas, los pterocarpenos y los

coumestanos (O¨neil et al., 1986). Todos estos compuestos siguen la misma ruta

metabólica, lo cual las ubica en el mismo grupo (Dewick y Martin, 1979).

Los compuestos derivados del ácido cinámico, ácido p-coumárico, etc. son

derivados, en realidad, de amino ácidos aromáticos, dan origen a compuestos de

15 carbonos, como el coumestrol (Salisbury y Ross, 1992).

Estos compuestos están presentes en bajas concentraciones en las

plantas, su efecto en estas es principalmente antimicrobiano (Feet y Osman, 1982)

y fungicida (Sukumaran y Gnanamanickam, 1980).

Los efectos de las isoflavonas en machos es la reducción de la

concentración de testosterona en plasma, atrofia del epitelio de los seminíferos,

atrofia de las glándulas sexuales accesorias (vesículas seminales, coagulantes,

etc.) y provoca metaplasia en las vesículas seminales (Cline et al. 2004).

Los miembros de la familia de las glycoproteínas (gonadotropinas) están

compuestos por dos subunidades una ∝ y otra β, las cuales estimulan a las

gónadas. La subunidad β contribuye a la especificidad de la acción de las

hormonas. Estas subunidades son importantes para que sea eficiente la

interacción con el sistema receptor-hormona en las células blanco. Por lo que el

sistema hormona- receptor funciona como las señales electrónicas en la atmósfera

que son recibidas e interpretadas por la radio/televisión. Así que la hormona

circulante en la sangre es la señal que recibida por el receptor en la célula para

designar las funciones (Ram, 1999).

Con respecto a las denominadas vesículas seminales, estas se denominan

en el ratón como glándulas seminales porque están formadas por un sistema de

pliegues, formando un divertículo irregular y porque estas tienen actividad

secretora a diferencia de las vesículas seminales que solo sirven de receptáculos

y reservorios de espermatozoides (Brian, 1994).

Estas pueden ser identificadas por su epitelio cuboidal simple y por su

intensa tinción eosinófila de sus secreciones. El conducto por el cual se une a la

glándula coagulante también se identifica por su epitelio simple y por su

abundante secreción eosinófila (Smith,1968).

En ratas, las vesículas seminales son pareadas e internamente están

estructuradas por un sistema de divertículos irregulares, en cambio en otros

mamíferos esta consiste de tejido glandular compacto arreglado en forma de

múltiples lóbulos y con un sistema de conductos secretores. El epitelio es

generalmente pseudoestratificado con células columnares. (Smith, 1968)

Los principales conductos excretores están revestidos por epitelio cilíndrico

estratificado; toda la configuración de la glándula es semejante a una estructura

pinnada (es decir, un conducto central a partir del cual se ramifican radialmente

piezas terminales secretoras). También se observan subdivisiones lobulares.

La lámina propia submucosa es típica. La túnica muscular puede tener

capas interna circular y externa longitudinal, o bien éstas se mezclan. En caso de

estar presentes, las túnicas adventicia o serosa son características.

El líquido seminal, junto con las secreciones de otras glándulas sexuales

accesorias, proporcionan un vehículo para el transporte de los espermatozoides.

El producto blanco y gelatinoso secretado ayuda a la formación del tapón vaginal

en algunos roedores. Las secreciones ricas en fructosa son utilizadas como fuente

de energía por los espermatozoides eyaculados. (Banks, 1996). En cuyos la

vesícula seminal ha sido usada como un modelo de estudio de acción de

diferentes hormonas en el epitelio. (Smith, 1968)

OBJETIVO GENERAL.

Analizar el efecto de diferentes dosis de Coumestrol en la morfofisiología de la

vesícula seminal.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Análisis morfométrico de la vesícula seminal tratada con diferentes dosis de

coumestrol.

Análisis del efecto del coumestrol en la organización histológica de la vesícula

seminal.

Análisis estereológico del epitelio glandular de la vesícula seminal

MATERIAL Y MÉTODO

A 70 ratas juveniles se les administraron 0, 12.5, 25, 50, 100, 200 y 400 µg/100µl

de coumestrol durante 3 días, posteriormente se les eutanasió por decapitación,

luego se disecó el aparato reproductor y se aisló la vesícula seminal, que se fijó

con Bouin Dubosqu y se lavó con alcohol de 70% hasta desteñir de ácido pícrico,

posteriormente se deshidrataron con alcoholes graduales de 80, 96, 100, también

se aclararan con Xileno después se incluyeron en Paraplast, y así se realizaron

cortes a 7 µm de espesor, se tiñeron con la técnica de tinción de H-E, PAS y azul

de alciano (Presnell y Schreibman, 1997) la cual se realizó con los siguientes

tiempos: (EN ANEXO); posteriormente los cortes se analizaron con el software

KS-300 y un microscopio Axioskope (Zeiss). Se obtuvieron las medidas de cinco

células de cada epitelio estudiado, con los cuales se realizaron análisis

estadísticos como desviación estándar, promedio así como también se obtuvo el

índice órgano somático.

RESULTADOS

Los datos que se obtuvieron del material procesado se agruparon en

anatómicos (tabla 1 y gráfica 1), histológicos cualitativos (figura 1 y 2) y

morfométricos (tabla 2 y gráfica 2).

Tabla 1. Índice Glándula Seminal Somático (Peso glándula seminal /Peso

Corporal *100).

Grupo Promedio Desv Stan Error Stan

A 0.243 0.067 0.023

B 0.262 0.057 0.018

C 0.332 0.077 0.025

D 0.355 0.052 0.016

E 0.336 0.049 0.015

F 0.318 0.098 0.032

G 0.218 0.122 0.038

Tabla 2. Altura del Tejido Epitelial (Promedio y Desviación estándar). GRUPO A

1554 1558 1560 1585 1593

A3 A7 A4 A1 A8 PROM DESV

12.62 11.12 12.62 11.00 10.66 11.60 0.95

9.52 9.25 12.68 14.22 10.89 11.31 2.12

9.43 13.75 11.52 12.36 10.75 11.56 1.63

11.87 10.06 11.74 12.48 9.81 11.19 1.19

11.08 14.07 12.72 11.87 11.71 12.29 1.15

11.59 1.41

GRUPO B

1601 1613 1627 1629 1633 1637

B10 B5 B3 B6 B4 B1 PROM D. S

13.59 9.38 11.73 10.61 14.28 12.01 11.93 1.82

16.68 10.46 9.52 11.63 12.05 16.73 12.85 3.12

13.18 10.93 9.18 13.26 9.31 10.28 11.02 1.82

12.39 8.40 11.06 13.78 13.26 11.88 11.79 1.93

10.51 11.13 12.00 10.74 12.86 16.01 12.21 2.06

11.96 2.15

GRUPO C 1543 1567 1573 1577 1579 1599 1603 1607

C1 C6 C3 C10 C4 C9 C8 C7 DESV PROM

11.92 12.48 16.46 12.35 17.40 11.45 9.70 13.00 2.57 13.09

14.10 11.94 13.64 12.54 14.68 16.52 10.05 14.00 1.94 13.43

14.64 13.25 16.15 15.64 14.72 12.82 10.75 13.81 1.72 13.97

15.50 12.73 18.68 14.61 17.94 10.78 10.56 13.75 3.00 14.32

13.90 11.88 13.63 11.20 13.45 12.62 12.40 12.62 0.92 12.71

2.03 13.51

GRUPO D 1556 1581 1587 1605 1615 1623 1635 1639

D4 D6 D6 D7 D7 D2 D8 D10 PRO

M

DESV

11.20 9.98 12.01 13.17 12.40 11.57 14.18 14.80 12.41 1.59

12.31 12.05 8.59 11.36 14.57 10.11 13.74 11.95 11.83 1.90

11.12 10.57 11.19 13.57 12.76 12.76 10.95 12.25 11.89 1.08

11.61 13.68 8.17 15.51 12.54 10.34 13.61 11.19 12.08 2.27

13.05 13.26 13.78 16.60 10.78 8.72 10.68 12.00 12.36 2.39

12.12 1.85

GRUPO E 1563 1565 1569 1597 1617 1625

E4 E6 E9 E10 E8 E1 PRO

M

DESV

13.71 9.09 13.96 12.68 10.30 15.04 12.46 2.30

13.39 10.39 15.05 13.76 9.94 14.93 12.91 2.23

12.52 7.63 14.56 9.73 9.60 13.26 11.22 2.64

13.57 12.41 10.83 13.28 10.03 14.57 12.45 1.73

13.29 9.70 14.14 13.09 10.36 12.13 12.12 1.75

12.23 2.13

GRUPO F 1575 1589 1595 1609 1619 1621 1631

F10 F3 F8 F1 F2 F5 F6 PROM DESV

11.63 11.93 11.45 13.66 10.50 11.18 12.24 11.80 0.99

13.72 14.64 11.06 15.77 9.94 10.54 13.01 12.67 2.21

12.31 13.75 11.67 13.26 11.57 10.18 12.45 12.17 1.18

12.71 13.19 10.47 13.05 12.40 11.26 9.40 11.79 1.44

9.20 9.33 10.26 14.21 10.68 10.30 9.44 10.49 1.74

11.78 1.51

GRUPO G G5 G2 G4 G1 G7 G10 G8 G3 PROM DESV

15.21 10.72 11.97 11.16 12.57 9.66 15.98 13.48 12.59 2.19

12.86 9.95 12.48 11.26 15.43 12.49 13.04 13.46 12.62 1.60

12.18 10.04 9.24 12.08 14.25 10.64 18.07 11.71 12.27 2.80

11.21 9.59 9.87 8.24 13.84 11.16 14.28 11.18 11.17 2.06

12.38 14.41 12.49 12.05 11.23 10.35 13.99 14.32 12.65 1.49

12.26 2.03

Gráfica 1 de índice Glándula Seminal Somático

Indice Glándula SeminalSomático

A B C D E F G

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

Tratamientos

Prom

edio

Se presentan diferencias significativas entre el grupo control y las dosis C,

D y E; en tanto que las dosis D y E son diferentes de B

Gráfica 2. Altura del Tejido Epitelial

Altura del Tejdido Epitelial

A B C D E F G

0

10

20

Tratamientos

Prom

edio

El grupo control es significativamente diferente a las dosis C, E y G; B es

diferente a C; C es diferente de A, B, D, E, F y G; E es diferente de C; E es

diferente de A y C; F es diferente de C; G es diferente de A y C.

Análisis Cualitativo

Como se aprecia en los cortes de las gládulas seminales su aspecto histológico se

debe a las invaginaciones extensas y elaboradas de su epitelio secretor, lo cual le

proporciona una extensa superficie secretora que permite que la luz se dilate tanto

como se va llenando con la secreción almacenada. En los distintos tratamientos se

aprecia secreción merocrina, la más abundante; apocrina, no abundante; y

holocrina escasa. (Figura 1). La secreción tiende en lo general a ser azul de

alciano negativo.

Fig. 1. Fotomicrografías de Cortes Tranversales de Glándulas Seminales de Rata Wistar. A Control se observa una secreción homogénea de tipo merocrina; B 12.5 µg/100µl Apréciese que hay dos tipos de secreciones holocrina y merocrina y el epitelio se observa pseudoestratificado; C 25 µg/100µl; D 50 µg/100 µl; E 100 µg/ 100 µl; F 200 µg/

100 µl; G 400 µg/ 100 µl. Nótese que conforme aumentó la cantidad de Coumestrol en el último tratamiento mostraba un comportamiento similar al de sin tratamiento (400x, H-E).

Fig. 2. Fotomicrografías de Cortes Transversales de Glándulas Seminales de Rata Wistar. A Control; B 12.5 µg/ 100 µl; C µg/ 100 µl; D µg/ µl; E µg/ 100 µl; F µg/ 100 µl ; G µg/ 100µl. Nótese la tinción más intensa en grupo D y E por el aumento de secreción que muestra secreción merocrina y holocrina. (50x, Azul- Alciano).

DISCUSIÓN

El índice vesículo somático (IVS) muestra una tendencia hacia el

incremento, que después disminuye ligeramente y se vuelve a un incremento. Este

comportamiento parece coincidir con las variaciones que se presentan en la altura

del epitelio y el tipo de secreción. Estos resultados denotan una hiperplasia e

hipertrofia morfofuncional (Jurado,1989).

El análisis cualitativo muestra heterogeneidad en cuanto al tipo de

secreción por cantidad, con un aparente incremento que corresponde a la

variación en el (IVS) (Groos et al. 1999). La tecnica histoquímica muestra una

ligera variación en la composición que parece seguir el mismo patrón del IVS y del

tipo de secreción por cantidad.

Estos resultados sugieren un efecto estrogénico y antiestrogénico con cierta

ciclicidad, la cual puede explicarse por el comportamiento de los fitoestrógenos

con los receptores a estrógenos. (Newsome & Kitts, 1980).

Nuestros resultados contrastados con otros obtenidos en este grupo de

trabajo nos llevan a pensar en que en eltracto genital masculino se presentan

dieferencias en la distribución en los tipos de receptores a estrógenos, sin

embargo esto deberá confirmarse con técnicas de mayor sensibilidad, que

permitan distinguir los diferentes productos de secreción.

CRITERIOS DE EVALULACIÓN.

1. Presentación de avances en seminarios del área de investigación 2.Reporte escrito

3. Presentación de resultados y conclusiones en congreso

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ANEXO

Técnicas de Tinción

Hematoxilina-Eosina

1) Xileno I 5 min.

2) Xileno II 5 min.

3) Xilol-alcohol (1:1) 3 min.

4) Alcohol 100º I 2 min.

5) Alcohol 100º II 2 min.

6) Alcohol-eter 2 min.

7) Alcohol 96º 2 min.

8) Alcohol 80º 2 min.

9) Alcohol 60º 2 min.

10)Agua destilada 3 lavados

11)Hematoxilina 5:30 min.

12)Agua de la llave lavado

13) Alcohol ácido lavado

14) Agua destilada lavado

15) Solución de Scott 8 min.

16) Agua destilada lavado

17) Eosina 5 min.

18) Agua destilada lavado

19) Alcohol 96º I lavado

20) Alcohol 96º II lavado

21)Alcohol 100º I lavado

22) Alcohol 100º II lavado

23) Alcohol- xilol lavado

24) Xileno I lavado

25) Xileno II lavado

En esta técnica las combinación de los dos colorantes, hematoxilina (morado) y

eosina (rojo), es la tinción más útil para el examen de materiales biológicos

(Junqueira, 1976).

Azul de Alciano Ph 2.8

1) Xileno I 5 min.

2)Xileno II 5 min.

3)Xilol-alcohol (1:1) 3 min.

4)Alcohol 100º I 2 min.

5)Alcohol 100º II 2 min.

6)Alcohol 96º 2 min.

7)Alcohol 80º 2 min.

8)Alcohol 60º 2 min.

9)Agua destilada 3 lavados

10)Ácido Acético al 3% 3 min.

11)Azul de Alciano 30 min.

12) Bicarbonato 0.3% 30 min.

13) Agua corriente lavado 10 min.

14) Kernechtrot 10 min.

15) Agua destilada lavado

16) Alcohol 96° I lavado

17) Alcohol 96° II lavado

18) Alcohol 100° I lavado

19) Alcohol 100° II lavado

20) Alcohol- Xilol

21) Xilol 100° I

22) Xilol 100° II

El colorante Azul de Alciano se utiliza para poner de manifiesto mucinas ácidas

secretadas por algunas células epiteliales y pueden combinarse con la reacción

de PAS para diferenciar mucinas epiteliales ácidas de las neutras.

Variando el pH u otras variables en las solución pueden utilizarse de manifiesto

la matriz extracelular de glucosaminoglucanos de la célula de sostén (Junqueira,

1976).

PAS-HEMATOXILINA

1) Desparafinar e Hidratar

2) Xileno I 5 min.

3) Xileno II 5 min.

4) Xileno-Alcohol 100° 5 min.

5) Alcohol 100° I 5 min.

6) Alcohol 100° II 5 min.

7) Alcohol 96° I 5 min.

8) Alcohol 96° II 5 min.

9) Alcohol 80° 5 min.

10) Alcohol 60° 5 min.

11) Agua destilada 5 min.

12) Ácido Peryódico 5 min.

13) Agua corriente 5 min.

14) Reactivo de Shift 12 min.

15) Metabisulfito de sodio 5 lavados de 2 min. Cada uno

16) Agua corriente 5 min.

17) Agua destilada lavado

18) Hematoxilina 5:30 min.

19) Agua corriente lavado

20) Alcohol ácido lavado

21) Agua destilada lavado

22) Solución de Scott 8 min.

23) Agua destilada lavado

24) Alcohol 96° I lavado

25) Alcohol 96° II lavado

26) Alcohol 100° I lavado

27) Alcohol 100° II lavado

28) Alcohol-Xilol lavado

29) Xilol I lavado

30) Xilol II lavado

El método de PAS, tiene muchas aplicaciones en especial para poner de

manifiesto los hidratos de carbono, solos como glucógeno o combinados con otras

moléculas como proteínas (glucoproteínas). Puede utilizarse para delimitar las

membranas basales y algunas mucinas neutras secretadas por diversas células

epiteliales secretoras (Junqueira, 1976).

SOLUCIÓN DE BOUIN

Solución saturada acuosa de ácido pícrico 75 ml.

Formol 37-40% 2.5 ml.

Ácido acético glacial 5 ml.

HEMATOXILINA DE HARRIS

Hematoxilina 5.0 g.

Etanol al 100% 50.0 ml.

Alumbre de Potasio de amonio 100 g.

Agua destilada 1000 ml.

Óxido rojo de Mercurio 2.5 g.

Use un frasco de 2000 ml para el alumbre y el agua y uno más pequeño para el

etanol y la hematoxilina. Disuelva completamente el alumbre en el agua destilada

con la ayuda de color y de un agitador magnético. Agite vigorosamente para

disolver la hematoxilina en el alcohol a temperatura ambiente, remueva el alumbre

y el agua destilada de la fuente de calor, lentamente combine las dos soluciones

devolviendo la solución resultante a la fuente de calor hasta hervir tan rápido como

sea posible, aproximadamente durante un minuto o menos. Retire del calor y

lentamente añada el óxido de mercurio, ya que al añadirlo rápidamente provocaría

que la solución hierva y se derrame. Devuelva la solución a la fuente de calor

hasta que tome un color púrpura oscuro, después se retira del calor y se coloca en

un recipiente con agua fría hasta que baje su temperatura. La solución entonces

está lista, añada 20 ml de ácido acético glacial para intensificar la tinción nuclear,

filtre la solución cada vez antes de usarla.

SOLUCIÓN DE SCOTT

Bicarbonato de sodio 2.0 g.

Sulfato de magnesio 20.0 g.

Agua destilada 1000 ml.

A 2 g de bicarbonato de sodio disolverlos en 200 ml de agua destilada; a 20 g de

sulfato de magnesio disolverlos en 600 ml de agua destilada, mezclar ambas

soluciones y agregar 200 ml más de agua para aforar a 1000 ml (Presnell, Et. al,

1997).

HISTOQUINET

Alcohol 80° 1h.

Alcohol 96°I 1h.

Alcohol 96° II 1h.

Alcohol 96° III 1h.

Alcohol 100° I 1h.

Alcohol 100° II 1h.

Alcohol 100° III 1h.

Alchol-Xileno (1:1) 1h.

Xileno I 1:20min.

Xileno II 1:20min.

Paraplast I 2h.

Paraplast II 7h.

Nombre: Martínez Flores Karina

Matricula: 99335630

Teléfono: 01597-9777741

Licenciatura: Biología

División: Ciencias Biológicas y de la Salud

Unidad Universitaria: Iztapalapa

Trimestre Lectivo: P-04

Título del Proyecto de Investigación: EFECTO DEL COUMESTROL SOBRE

GLÁNDULAS SEXUALES ACCESORIAS EN RATA MACHO WISTAR.

Título del Trabajo del Servicio Social: EFECTO DE LOS FITOESTRÓGENOS EN

LA ANATOMIA E HISTOLOGÍA EN EL COMPLEJO GLANDULAR DE RATA

MACHO WISTAR.

Nombre de los Asesores:

M. en C. Mario García Lorenzana y M. en C. Maria del Rosario Tarragó

Castellanos

Lugar de realización: Área de Neurociencia (Laboratorio de Neurobiología Tisular,

S-336), de la Universidad Autónoma Metropolitana Iztapalapa.

Clave de Registro: B.057,03

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