LE SERODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS

VDRL - TPHA

Elabor par : YASMERO

2O14

PLAN DE TRAVAIL

Introduction

I. Dfinition de la syphilis

II. Les symptmes et les phases dvolution de la syphilis

III. Les ractions de la srologie

IV. Linterprtation des rsultats

Conclusion

1

Introduction 1

Le diagnostic srologique repose sur la mise en vidence des anticorps induits par linfection et retrouvs dans le srum, celui-ci est trait pour retirer certaines substances qui peuvent gner la technique ce qui aboutit une certaine dilution Le patient doit tre de prfrence jeun.

I. Dfinition de la syphilis 2 La syphilis est une maladie infectieuse relativement frquente. En recrudescence, elle se trouve au 3me rang aprs les candidoses et les chlamydioses. Cause par un spirochte, le trponme ple (Treponema pallidum). La syphilis se transmet par les rapports sexuels, par voie transplacentaire ou exceptionnellement par contacts sanguins (piqre, transfusion). Le srodiagnostic de la syphilis est un examen consistant rechercher dans le sang des anticorps spcifiques la maladie. Celui-ci permettra de dterminer le stade de l'infection.

II. Les symptmes et les phases dvolution de la syphilis : 3, 4 La syphilis volue en 3 phases sur plusieurs mois (voire plusieurs annes), entrecoupes de phases asymptomatiques pendant lesquelles seul le diagnostic srologique est possible.

Quant La priode dincubation (temps entre le contact et lapparition des symptmes), celle-ci varie habituellement entre 10 et 90 jours. Les symptmes peuvent passer inaperus ou tre mal reconnus, et peuvent mme ne pas se manifester du tout. Mais lorsquils sont prsents, les symptmes se manifestent en trois stades:

Stade primaire

Trois quatre semaines aprs le contact, un chancre (ulcre trs superficiel, bords rguliers, dont la base est enfle et qui peut mesurer jusqu 1 cm de diamtre) apparat au site dentre du microbe (bouche, pnis, vagin ou anus). Le chancre ne cause gnralement pas de douleur et peut tre associ

1 Otto Braun-Falco, Dermatology, 2000, 282 p. 2

ADAM WYNTER, the Rosen Publishing Group, 2007, 64 p. 3

Didier Bessis, C. Francs, B. Guillot, Manifestations dermatologiques des maladies infectieuses mtaboliques et

toxiques, 2009 4 Michel Vaubourdolle, infectiologie 3eme ed. 2007, 334p.

2

des ganglions (petites bosses non douloureuses). Cest par contact direct avec ce chancre que linfection se transmet. La gurison du chancre se produit spontanment (sans traitement) en 3 8 semaines. Cependant, l'individu reste contagieux et le test sanguin de dpistage est souvent ngatif ce stade.

Stade secondaire

Non traite, la syphilis volue et quelques semaines (de six semaines six mois) plus tard, des rougeurs apparaissent sur la peau et les muqueuses, accompagnes de fivre, de fatigue, de maux de tte et de douleurs musculaires. Ces symptmes disparaissent d'eux-mmes sans traitement. La syphilis passe alors dans une phase de latence. Cest une priode dite silencieuse pendant laquelle linfection volue sans manifestation aucune. Seul un test de sang peut rvler la prsence du microbe. La personne demeure contagieuse. Le test sanguin sera gnralement positif ce stade, mais peut tre faussement ngatif chez les individus infects par le VIH.

Stade tertiaire

Aprs plusieurs annes, parfois 10 30 ans, des complications srieuses peuvent affecter la peau, les os, ainsi que les organes vitaux tels que le systme nerveux et le systme cardio-vasculaire.

III. Les ractions srologiques :

A - Raction antigne non trponmique : VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) Principe du VDRL :

Raction dagglutination passive sur lame en verre.

Lantigne utilis est dorigine cardiolipidique constitu de microcristaux de cholestrol sur lesquels sont adsorbs les molcules de cardiolipide = Haptne de Wasserman.

Des particules de charbon sont piges dans la combinaison Ac-Ag pour faciliter la lecture.

Rsultat du dpistage est rendu positif ou ngatif.

Rsultat est rendu en titre en cas de dpistage positif

Selon lorigine de lantigne utilis

Raction antigne non trponmique (Ag cardiologique)

Raction antigne trponmique

3

Technique du VDRL : Elments de la raction :

Srum frais.

Eau physiologique.

Antigne VDRL prs lemploi. Matriel:

Centrifugeuse

Micropipettes rglables (5-50L)

Plaques en verre

Portoir pour tubes hmolyse

Agitateur rotatif de Kline

Container de dchets contamins

Eau de Javel Mode opratoire :

a. La raction qualitative

Distribuer 50L de srum sur chaque puits de la plaque en verre.

Ajouter 16 L dAntigne VDRL

Placer la plaque sur lagitateur de Kline pendant 8 mn

Lire immdiatement au microscope

Deux types de ractions

Raction qualitative (Dpistage)

Raction quantitative (Dpistage Positif)

4

a. 1. Manipulations pour le test qualitatif

PUITS

Tmoin + Tmoin - Tmoins Ag VDRL

Srum inconnu

Srum 50 L du srum + 50 L du srum - 50 L deau physiologique

50 L du srum inconnu

Antigne VDRL 16 L 16 L 16 L 16 L

Placer sur un plateau rotatif (agitateur de kline) pendant 8 mn

Lecture + - -

a. 2. Lecture du VDRL

b. La raction quantitative :

Lorsque la raction quantitative est positive on ralise la mme raction avec une srie de dilution du srum au (1/2, , 1/8, 1/16, 1/32) avec de leau physiologique.

Le titre danticorps est exprim par linverse de la dernire dilution donnant une raction positive nette.

5

b. 1. Manipulations pour le test quantitatif

PUITS

1 2 3 4 5

Eau physiologique

50 L 50 L 50 L 50 L 50 L

Dilution 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32

Srum analyser en L

50 L Reporter 50

Reporter 50 L

Reporter 50 L

Reporter 50 L

Jeter 50 L dans leau de Javel

Ag VDRL 16 L 16 L 16 L 16 L 16 L

Agitation pendant 8 mn

Lecture

B - Raction antigne trponmique : TPHA (Treponema Pallidum Hemagglutination Assay) Principe du TPHA :

Raction dhemmagglutination passive ralise sur des microplaques.

LAntigne utilis est un lysat de trponema pallidum adsorb sur des hmaties.

Le dpistage consiste tester le srum la dilution de 1/80.

Des dilutions sont effectues pour le titre dans le cas du dpistage positif.

Technique du TPHA : Elments de la raction :

Srum frais.

Coffret de ractif prs lemploi. Matriel :

Centrifugeuse

Micropipettes rglables (5-50L), (50 200 L)

Pipette multicanaux

Plaques de microtitration fond en U

Cnes pour micropipettes

Portoir pour tubes hmolyse

Container de dchets contamins

Eau de Javel

6

Mode opratoire :

a. La raction qualitative

Distribuer le diluant dans les puits de microtitration comme suit dans le 1er, 3me, et 4 me puits mettez 25 L, dans le 2me puits mettez 100 L.

Ajouter 25 L du srum tester dans le puits numro 1.

Diluer lchantillon 1/20.

Ajouter 75 L de la suspension dHNS au puits 3, et le mme volume de suspension dHS au puits 4

La dilution finale des puits 3 et 4 est 1/80.

Couvrir la microplaque et laisser reposer pendant 45 60 min.

Effectuer la lecture lil nu.

a. 1. Manipulations pour le test qualitatif

Deux types de ractions

Raction qualitative (Dpistage)

Raction quantitative (Dpistage Positif)

3me

puits

1er

puits 2me

puits

4me

puits

25 L 25 L 25 L

25 L

25 L du

diluant

+ 25 L du

srum

100 L du

diluant

25 L du

diluant

+ 75 L

dHS

25 L du

diluant

+ 75 L

dHNS

Schma illustrant le mode opratoire du test TPHA

7

a. 2. Lecture du TPHA

1er Puits : voile uniforme couvrant tout le puits Fortement positif. 2me Puits: voile couvrant le 2/3 du puits Moyennement positif. 3me Puits: voile couvrant le 1/3 du puits Faiblement positifs. 4me Puits: Anneau trs serr bord nets (absence de voile) Ngatif.

b. La raction quantitative :

Lorsque la raction qualitative est positive (1/80) on ralise une srie de dilution du srum (1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560)

Le titre danticorps est exprim par linverse de la plus haute dilution donnant encore une raction positive

Cupule

A B C D E F G H

Tampon en L

25 25 25 25 25 25 25

Srum 1/20 en L

25 25* * * * * * **

HS en L 75 75 75 75 75 75 75 75

Dilution 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 1/5120 1/10240

Lecture + + + + + - - -

Titre retenu 1280 ( dernire cupule prsentant une hmagglutination nette ).

* : reporter 25 l dans la cupule suivante gauche.

**: jeter 25 l dans l'eau de javel

Srum n1

Srum n1

8

IV. Linterprtation des rsultats :

VDRL TPHA Diagnostic Examens complmentaires

- - Syphilis exclue ou contamination trs rcente

Refaire une srologie 10 15 jours plus tard

+ + Forte probabilit de syphilis

Situer le stade de linfection par une srologie quantitative

- + Syphilis rcente traite ou ancienne (traite ou non traite)

Une srologie quantitative

+ - Il faut confirmer le TPHA ngatif par une autre raction (FTA)

Si la raction FTA est ngative, il sagit dun faux positif en VDRL

Conclusion :

Le dpistage syphilitique repose sur la combinaison VDRL-TPHA en raison de: - La grande efficacit pour la dtection de T. Pallidum et lexclusion de toute autre forme

dinfection trponmique. - La lecture des rsultats peut seffectuer aprs une dure courte de la ralisation des

tests. - Ce sont les meilleurs tests pour effectuer un dpistage de routine

Pour poser le diagnostic, un bilan srologique complet est conseill afin de mieux situer lanciennet de linfection, surtout en labsence de signes cliniques.