Exploracin de la sangre y rganos hematopoyticos. Hay diferentes mtodos de exploracin de la sangre que permiten, no slo diagnostico de las afecciones hemticas en sentido estricto y las recuperaciones de las mismas sobre el cuadro sanguneo, sino que proporcionan datos de gran valor diagnostico sobre la funcin de determinados rganos. 1- Velocidad de sedimentacin de los eritrocitos (u.s.e o eritrosedimentacin). La velocidad de sedimentacin de los eritrocitos (u.s.e) no es una prueba de rutina, si no especfica de, es decir se realiza cuando se sospecha de un proceso infeccioso como son: Brucela, tuberculosis, pimetra, neumona verminosa, cncer, sida; etctera..., ese es su objetivo fundamental. Esta determinacin debe realizarse dentro de las dos horas de recogida sangre, pasado este tiempo puede disminuir la velocidad de sedimentacin. El pronstico es medir la velocidad con que sedimentan los glbulos rojos de una columna de sangre, es decir, su depsito en el fondo de la columna. La sangre con anticoagulante se deposita en una pipeta de vidrio con dimensiones estndar y se deja reposo durante un tiempo determinado; este tiempo es una hora, dos horas y 24 horas. A) Mtodo de la pipeta (tubo) de Westergreen. El mtodo de Westergreen se ha adaptado como mtodo estndar para la determinacin de la U.S.E, en consecuencia, los tubos de un Wintrobe suelen destinarse actualmente a la determinacin del hematocrito. El tubo (pipeta) de Westergreen es ms largo (30 centmetros) que el de Wintrobe que tiene una escala de 20 centmetros se llena con ms facilidad, pero requiere ms sangre (aproximadamente 1,2 ml). Su aspecto se parece a una pipeta y su escala est dividida en milmetros, enumerando las divisiones en centmetros de 0 a 20 de arriba abajo, o de o de 0 a 200 milmetros. Se ha comprobado que la u.s.e que resulta difiere poco de la que se obtiene utilizando sangre con EDTA o heparina. (Si es necesario, la sangre puede conservarse a 4 grados Celsius durante 24 horas antes de la realizacin y ejecucin de la prueba). Sin embargo, es costumbre utilizar la sangre conteniendo, naturalmente, algn otro anticoagulante). Tcnica: 1- Se mezcla la sangre suavemente durante dos minutos como mnimo 20 veces. 2- Se coloca la punta de la pipeta por debajo de la superficie de la sangre y se aspira sangre hasta la seal 0 o centmetros. Si se sobrepasa ligeramente por encima de la seal 0 o centmetros, se deja que se descargue y hasta la posicin correcta. Se limpia el exceso de sangre de la punta de la pipeta con una gasa o algodn. 3- Se pone la pipeta en un soporte o bastidor para pipeta de Westergreen. Se impide que la sangre situada en la parte inferior del soporte, que obtura la punta (se debe comprobar que esta almohadilla no est alterada y que la punta de la pipeta no est astillada para que no se derrame la sangre). La parte superior de la pipeta se sostiene mediante una pinza de resorte (en los rumiantes se inclina el soporte a un ngulo de 45 grados, pues en esta especie la velocidad de sedimentacin es muy lenta. En las dems especies se deja el soporte en posicin vertical (ngulo de 90 grados). 5- Tan pronto como la pipeta llena se ponga en el resorte coger el tiempo en el reloj. 6- Asegurarse de que el soporte no se mueva durante una hora para todas las especies. 7- Poner el soporte lejos de la luz directa del sol; La prueba debe realizarse a la temperatura normal de la habitacin (18-22 grados Celsius). 8- al cumplirse una hora, se lee en la pipeta la distancia en milmetros, que han descendido los hemates, es decir, el punto y que se unen la escala del plasma 1

transparente superior y la columna de glbulos rojos que sedimentan en la parte inferior. La U.S.E se expresa entonces en milmetros / hora o quizs mejor en milmetros/1 hora, ya que la U.S.E no es constante y la velocidad para dos horas no ser necesariamente el doble de la velocidad en una hora. Valores normales de la eritrosedimentacin. Rumiantes------------ 3 mm / hora. Caninos ------------ 5 mm / hora. Equinos ------------ 50 mm / hora. Notas 1- Teniendo en cuenta que un bajo volumen de clulas compactas producir generalmente un incremento en la U.S.E, se ha realizado con frecuencia en el pasado la correccin de la eritrosedimentacin de acuerdo con el volumen celular compacto. Sin embargo, algunos autores ( Dacie y Lewis, 1968 ) piensan que fue como consecuencia de que el efecto de la anemia sobre la eritrosedimentacin es irregular en cualquier caso, solamente uno de los muchos factores que pueden producir alteraciones en la eritrosedimentacin, la correccin de los resultados no es importante. 2- En ocasiones no hay una separacin clara entre el plasma y la columna de glbulos rojos en sedimentacin, el lugar de ello parece haber una progresin gradual del uno a la otra; lo que se llama de sedimentacin estratificada y se debe a la presencia en la sangre de gran nmero de reticulocitos o de leptocitos que como consecuencia de que no se agrupan fcilmente (en cartuchos) como los glbulos rojos normales, descienden con una velocidad ms lenta. Este hecho hace imposible obtener una lectura clara de la eritrosedimentacin. 3- La pipeta de Westergreen tiene las ventas de que se llena ms rpidamente y se limpia con ms facilidad, asimismo, que puede permitir descubrir velocidades de sedimentacin muy elevadas. Teniendo en cuenta que la cantidad de glbulos rojos es aproximadamente la mitad del volumen de sangre total, no pueden sedimentar ms de la mitad de la longitud de la pipeta, es decir 100 mm en la pipeta de Westergreen. Son raros los valores de la eritrosedimentacin que sobrepasa los 50mm / hora aunque se han sealado valores de hasta 96 mm / hora. Interpretacin 1- Cualquier aumento de la tendencia a que los glbulos rojos se agreguen en cartuchos incrementar la eritrosedimentacin, porque las agrupaciones de clulas descienden con ms rapidez que las clulas aisladas. Se cree que la mayora de las infecciones agudas y crnicas y la mayora de las enfermedades neoplsicas y degenerativas estn relacionadas con alteraciones de las protenas del plasma especialmente un aumento que el nivel del fibringeno plasmtico, que aumenta la intensidad de la formacin de los cartuchos de glbulos rojos. En consecuencia en dichas enfermedades la eritrosedimentacin se encuentran a menudo aumentada. 2- asimismo, como consecuencia del efecto del volumen celular compacto sobre la eritrosedimentacin, esta ltima se incrementa frecuentemente en los casos de anemia. La eritrosedimentacin es una medida completamente inespecfica y puede utilizarse tanto como prueba de orientacin para descubrir la existencia de una enfermedad como el ndice del proceso de la enfermedad. Sin embargo, el hallazgo de una velocidad de sedimentacin normal no excluye la posibilidad de que exista una enfermedad. 2

Hematocrito de Wintrobe. El trmino hematocrito significa separacin de la sangre por centrifugacin, la sangre se separa en tres capas bien claras; a saber: a) La masa eritroctica en el Fondo denominada volumen globular o VG, VGA, VCC. b) Una capa blanca o gris de leucocitos y trombocitos situada inmediatamente por encima de la masa de glbulos rojos que se denomina capa anteada o costra flogstica o Buffy Coat. c) El plasma sanguneo. Tcnica 1- Mezclar suavemente la sangre como mnimo 20 veces. 2- LLenar con la jeringuilla y la aguja larga calibre 16 hasta la marca de 1 1/2 ml con sangre venosa bien mezclada. 3- insertarla la punta de la aguja en el fondo del tubo de Wintrobe y expulsar la sangre haciendo presin sobre la jeringuilla, extrayendo la aguja conforme el tubo se va llenando hasta la marca de 10 por la escala de la derecha. 4- se coloca el tubo en la centrfuga procediendo a centrifugarlo a 3000 o 3500 revoluciones por minuto segn la especie animal ser el tiempo a excepcin de los rumiantes que es 45 minutos, todas las dems especies es de 30 minutos. 5- al finalizar el tiempo de centrifugacin se quita el tubo y se coloca cuidadosamente en soporte de tubos de Wintrobe. 6- se mide la lectura de la capa de glbulos rojos en milmetros, utilizando la escala situada a la derecha del tubo (0-10) de abajo arriba. La cifra obtenida es de volumen de clulas compactas o globular agrupadas que se expresa como porcentajes en sistema antiguo; ahora se expresa en la unidad 1, Ej: VCC o VGA= 47 % y ahora es 0,47. (valor normal segn la especie ver la tabla U/1 y valores aproximados) 7- sobre la capa de glbulos rojos est el Buffy-Coat , capa leucocitaria que est constituida por una mezcla de leucocitos y plaquetas. Se mide y se anota su grosor, su valor normal va de 0,5 a 1,5 mm que es igual a 0,5 a 1,5% de gruesa. Si tiene menos en 0 ,5mm se supone la existencia de leucopenia (diferencias de leucocitos). Un grosor de mayor de 1,5 mm sugiere que existe leucocitosis (nmero excesivo de leucocitos). Debe observarse tambin la presencia de cualquier tinte rojizo de en la costra flogstica, que se debe generalmente a la presencia de gran nmero de glbulos rojos inmaduros o anormales. 8- se anota el color de plasma si es diferente del color rojizo claro habitual y la cantidad. A partir del VGA podemos obtener valores aproximados de hemoglobina y recuento de glbulos rojos. Frmula moderna para hallar la hemoglobina a) volumen globular aglomerado en unidad 1 x 1000 -- concentracin de hemoglobina en g / L. 3 Ej: 0,24 x 1000 --- 80 g / L. 3 Mtodo antiguo para clculos de hemoglobina a) volumen globular aglomerado como porcentaje --- concentracin de hemoglobina (en g / 100 ml). 3

3 Ej.: 24% -- 8 g % 3

Para llevarlo sistema moderno entonces se multiplica por 10. Ej: 8 x 10 = 80 g / L. Mtodo moderno para hallar recuento de glbulos rojos a) volumen globular aglomerado en unidad 1 (millones / dm cbicos = litro) 6 Interpretacin Puede obtenerse del hematocrito la siguiente informacin: 1- alteraciones del VCC o VGA. a) una disminucin del VGA indica la presencia de anemia. La determinacin posterior de hemoglobina y del recuento de glbulos rojos deben: a-1) confirmar la existencia de anemia (la determinacin aislada de la concentracin de hemoglobina no ser suficiente para este fin) a-2) permite calcular los ndices hematolgicos que indicando el tamao y el contenido de hemoglobina de los glbulos rojos, pueden permitir el diagnstico del tipo y causa del anemia. Sin embargo, debe apuntarse que el examen de los glbulos rojos en una extensin teida por Giemsa puede suministrar tambin datos acerca del tamao, forma y contenido en hemoglobina (aunque no con el mismo grado de exactitud) adems de cualquier alteracin en la forma y coloracin, que no pueden ponerse en evidencia con los ndices hematolgicos. ndices hematolgicos: partiendo de cada par de determinaciones pueden calcularse uno de los ndices hematolgico. 1- el volumen globular medio o volumen celular medio (VGM o VCM) es el volumen medio de un glbulo rojo aislado. Se expresa en fl (fenolitro). Frmula: VGM = VGA x 1000 recuento de glbulos rojos (millones / litros) Ej: 0,24 x 1000 = 53,33 fl 4 ,5 x 10 a la 12 C / L x 100 --- recuento de glbulos rojos

Ver unidades S / 1 y valores aproximados de diferencia de laboratorio clnico (tabla) los valores normales segn especie. Interpretacin. 1- V.G.M normal: normoctica. A- hemorragia aguda B- hemlisis C- falta de formacin de sangre 2- V.C.M elevado: macroctico. 4

A- aumento de la actividad de la mdula sea en algunas afectaciones ordinariamente asociadas a anemia normoctica, tales como hemorragia aguda y hemlisis. B- algunas deficiencias de los factores hematopoyticos 3- V.C.M bajo: microctico A- deficiencia de hierro B- deficiencia de cobre en algunos animales C- algunas deficiencias de los factores hematopoyticos 2- La concentracin media de hemoglobina globular o celular (C.M.H.G) o (C.M.H.C) es la cantidad de gramos de hemoglobina en un litro de glbulos rojos (es decir, no los gramos de hemoglobina que un litro de sangre total, si no en un litro de glbulos rojos). Se expresa en g / L (gramos por litro o decmetro cbico que es igual a un litro). Frmula: C.M.H.G g / L = concentracin de hemoglobina volumen globular aglomerado (V.G.A) Ej: 80 g / L --- 333.33 g / L 0,24 Ver unidad S / 1 y valores aproximados de referencia de laboratorio clnico (tabla), valores normales segn la especie. Interpretacin de C.M.H.G 1- C.M.H.C normal: normocrmica a- en muchos tipos de anemia, una elevacin o un descenso en el tamao medio de la clula viene acompaado de una elevacin o descenso correspondiente en el contenido de hemoglobina, de tal modo que la C.M.H.C queda dentro del margen de normalidad.

2- C.M.H.C baja: hipocrmica a- en la verdadera anemia hipocrmica, la reduccin en hemoglobina es relativamente de mayor que el promedio en la reduccin en el volumen del eritrocito 3- C.M.H.C elevado. a- no hay afeccin en la cual la C.M.H.C sobrepasa el lmite normal, puesto que el eritrocitos no puede estar sobresaturado de hemoglobina b- en la llamada anemia hipercrmica hay un aumento en el paso de la hemoglobina que por trmino medio contiene el eritrocito; pero sin que la concentracin de hemoglobina por unidad de volumen, haya aumentado. Interpretacin: Dichos ndices incorporan naturalmente los errores de los mtodos de los que se derivan, por lo que la C.M.H.G, que se obtiene de los dos mtodos ms exactos (VGA y concentracin de hemoglobina) es probablemente ms exacto que cualquiera de los dems. Cuando disminuye la concentracin de hemoglobina en un glbulo rojo se dice que es hipocrmico cuando es normal se dice normocrmico y aumentada es hemlisis (no existe la palabra hipercrmico) no hay afeccin en la cual la C.M.H.G sobrepasa el lmite normal, puesto que el eritrocito no puede estar sobresaturado de hemoglobina. (Estos trminos no deben confundirse con hipocromacia, normocromacia e hipercromacia que indican diferencias en la intensidad de la tincin, aunque generalmente tienen la misma causa, es decir, una alteracin en la concentracin de hemoglobina. 5

Los incrementos en VGA, generalmente combinado con una C.M.H.G normal o disminuida, indican la presencia de macroctos (hemates macrocticos), es decir glbulos rojos de tamao mayor que el normal. Una disminucin a en la VGA y C.M.H.G indican la presencia de microctos (hemates microcticos), es decir glbulos rojos que son ms pequeo de lo normal. Un incremento en el VGA se debe casi siempre a una policitemia que puede ser relativa (deshidratacin) o absoluta. Deshidratacin, disminucin de la cantidad de agua y por tanto en la cantidad de plasma de la sangre que da lugar a un aumento relativo del nmero de clulas. Es posible uno aumento real del nmero de glbulos rojos (policitemia vera) pero es extraordinariamente raro. 2- Alteraciones en el grosor del Buffy-Coat o costra flogstica o capa leucocitaria. Se refieren principalmente a las alteraciones del nmero de leucocitos, las plaquetas no contribuyen de manera importante al grosor de esta capa. Factores de conversin aproximados para utilizar con leucocitos a partir del VGA. Puede calcularse aproximadamente la concentracin de leucocitos midiendo el grosor de la costra flogstica. El grosor de la costra flogstica se expresa mejor como porcentaje de la altura total de la columna de sangre, lo mismo que el VGA (con el mtodo de Wintrobe cada mm de grosor = 1%) Segn Wintrobe cada 0,1 mm del primer mm equivalente a mil leucocitos de, mientras que cada 0,1 mm por debajo del primer mm es igual aproximadamente a dos mil leucocitos. Cada 0,1% del primer 1% de la columna de sangre ocupada por la costra flogstica es equivalente a mil leucocitos x mm cbico. Por tanto una costra flogstica que ocupe exactamente el 1% de la columna total = 10 mil leucocitos x mm cbico de sangre. Cada 0,1% sobre el 1% es equivalente a 2000 leucocitos x mm cbicos. En consecuencia si la costra flogstica ocupa el 1,2% de la columna total ser equivalente a 10 mil + 2 x 2000 = 14 mil leucocitos x mm cbico de sangre. Para llevarlo al sistema moderno solo tiene que multiplicarlo por 10 a la 6 que es un milln para pasar mm cbico a decmetros = 1 litro. Ej: 14 x 10 a la 3 c / mm cbicos de sangre = 14 x 10 a la 3 x 1000 000 = 14 x 10 a la 3 + 10 a la 6 = 14 x 10 a la 9 c / L. debido a que el nmero de leucocitos es variable y diferentes tipos de leucocitos no son del mismo tamao, no es posible anticipar con exactitud el nmero total de leucocitos en una muestra dada de sangre fundndose en la costra flogstica. Sin embargo en la clnica corriente una capa leucoctica menor de 0,5 milmetros indicar leucopenia, mientras que por encima de 1,5 milmetros denotar leucocitosis. Una disminucin del nmero de leucocitos, por debajo de las oscilaciones normales se denomina leucopenia y su presencia se supondr cuando se halle una costra flogstica que ocupe menos del 0,5% de la columna, es decir, que indica la presencia de menos de 5 mil leucocitos / mm cbico = 5 x 10 a la 9 c / L. Un incremento en el nmero de leucocitos por encima de la oscilacin normal se denomina leucocitosis y su presencia se supondr cuando se halle una costra flogstica que ocupa ms del 1,5% de la columna total, es decir, que indica la presencia de ms de 20 mil leucocitos / mm cbico de sangre = 20 x 10 a la 9 c / L. Alteraciones en el color de la capa flogstica. En las enfermedades crnicas se altera la eritrognesis, dando origen a la produccin de eritrocitos anormales. Estos as como las formas jvenes (reticulocitos) no participan en la formacin de pilas globulares y por este motivo tienden a acumularse en la en superior de la columna eritroctica, e incluso puede quedar incorporados en las porciones inferiores de la capa leucoctica a la que comunican un tinte rojo. La mezcla de los leucocitos y los eritrocitos anormales, con reticulocitos o sin ellos, en la capa 6

leucoctica aumenta cuando se realiza primero la prueba de sedimentacin para los eritrocitos antes de la centrifugacin para el estudio del VGA. La capa leucoctica teida de rojo indica que la eritrognesis ha sido afectada por el proceso patolgico. Cuando hay numerosos reticulocitos no solo producen una reaccin difsica en la prueba de sedimentacin, si no se pueden atrapar los leucocitos durante la centrifugacin, de modo que el tamao aparente de la capa leucoctica es mucho menor que el que podr calcularse por el recuento leucocitario total de la misma sangre. La observacin de que el nmero de leucocitos cae dentro de las variaciones normales no significa necesariamente que la distribucin de los leucocitos sea normal. Puede existir un incremento considerable del nmero de un tipo de leucocitos y una disminucin correspondiente del nmero de otro tipo. En consecuencia, la realizacin diferencial de leucocitos (frmula leucocitaria) se aconseja como la segunda prueba ms importante. Es aconsejable realizar un recuento total de leucocitos cuando: 1- el grosor de la capa leucoctica sea anormalmente grande o pequea (para confirmar esta observacin) 2- la frmula leucocitaria revele una distribucin anormal de los tipos de leucocitos (de forma que pueda calcularse la cifra absoluta de cada tipo) 3-- alteraciones en el color del plasma La parte superior del plasma es generalmente transparente y de color rojizo claro en la sangre, sin embargo puede presentar alteraciones en el color: a) un aspecto lechoso debido a la presencia de gotitas de grasa en la sangre (lipemia). Se presenta generalmente en animales que han sido alimentados dentro de las tres horas anteriores; cuando se halla en animales que han estado en ayuna (como se recomienda) sugiere la existencia de enfermedades del hgado. b) una coloracin rojiza debido a la hemlisis producida en el interior del organismo (anemia hemoltica grave) o ms generalmente por defecto de la recogida. C) una coloracin amarilla debido a la presencia de bilirrubina (ictericia) en grave lesin heptica u obstruccin de los conductos biliares. d) un aspecto blanquecino opaco debido a la presencia de jabn producido por cidos grasos libres, tanto los jabones como los cidos grasos actan como agentes hemolticos. Concentracin de hemoglobina La hemoglobina es un pigmento rojo contenido en los hemates, que es responsable de su color y del color de la sangre. Los mtodos para la medida de la concentracin de hemoglobina en la sangre, dependen de la medida de la intensidad de este color rojo o del grado de absorcin de la luz (es decir, intensidad ptica) que es proporcional a la intensidad, empleando algunas clases de colorimtricos o fotocolorimtricos. Cuanto sea la concentracin de hemoglobina en la sangre, mayor ser el aumento de la intensidad de color de la misma. El pigmento de hemoglobina, responsable del color rojo de la sangre, es el encargado del transporte de oxgeno de los pulmones a los tejidos y el CO2 de estos a los pulmones, por medio de la circulacin sangunea. La magnitud de este intercambio de gases es directamente proporcional a la concentracin de la hemoglobina en la sangre. Por consiguiente, el procedimiento ms directo para estimar la eficiencia de la circulacin sangunea en este aspecto es el de que terminar la hemoglobina. Sin embargo, dentro del organismo toda la hemoglobina est presente en la misma forma. Las sangre arterial contiene una mayor proporcin de oxihemoglobina que le da un 7

color rojo brillante. Por otra parte, las sangre venosa contiene poca cantidad de oxihemoglobina, pero tiene cantidades considerables de carbaminohemoglobina y es de un color rojo mucho ms oscuro. Frecuentemente hay una pequea cantidad de carboxihemoglobina y es posible, pero muy rara vez, que tambin haya metahemoglobina y sulfahemoglobina. Consecuentemente, para estandarizar la complicacin de muestras de sangre es necesario: 1-Convertir toda la hemoglobina de cada muestra en un compuesto hemoglobnico nico, con lo cual se proporciona un color nico a fines de comparacin. 2-Que este compuesto de hemoglobina sea tan estable como sea posible, es decir que no se transforme fcilmente en otros compuestos hemoglobnicos , de forma que no se debe alterar el color de cada muestra y en particular el color de la solucin de una solucin estndar, con la que se compara las muestras. Durante muchos aos la produccin de una solucin de hemoglobina estable, es decir que se pudiera mantener durante un tiempo razonable sin cambiar el color, proporcion un serio problema para la determinacin de la exactitud de las concentraciones de hemoglobina. En la actualidad el ms empleado como color estndar es un compuesto llamado cianometahemoglobina que es muy estable. Los principales mtodos de hemoglobinometra clnica son: 1- Colorimtrico. 2-Medicin fsica. 3-Anlisis qumico. 4-Gasometra. Explicacin 1-Colorimtrico a) Mtodo directo de Tallquist. Este mtodo es muy inseguro (esto es, que el error es del +/- 20-50%) y por tanto es usado solamente para detectar graves anemias. Este mtodo no puede ser recomendado para ninguna estimacin exacta, es rpido y sencillo de hacer e incluye la igualacin del color de la muestra de la sangre con una escala colorida. Tcnica 1- Recortar un cuadrado de papel de un libro de papel absorbente especial (Bair and Tatlock). 2-Poner una gota de sangre en el centro del cuadrado de papel y esperar a que el "brillo" desaparezca conforme lo humedece. 3-Dar la vuelta a la escala de colores que se encuentra al final del libro. Cada color tiene un gran orificio horadado. Se va deslizando el cuadrado del papel a lo largo de la parte de atrs de la escala, de forma que puede compararse su color, a travs de sus orificios, con cada uno de los colores de la escala. Se contiene una igualacin tan exacta como sea posible. Los colores en la escala representan sangre humana que contiene el 100%, 90%, 80%, etc., de hemoglobina. El 100% equivale generalmente a 13.8 g/litro de sangre, no obstante la cantidad exacta de hemoglobina viene determinada indicaba libro. b) Mtodos indirectos 1- Mtodo del cido hemtico utilizando un hemoglobinmetro (mtodo de la hematina cida o mtodo de Shali) Este mtodo no se emplea mucho hoy en da pues: 8

se tarda mucho tiempo en hacerlo, especialmente cuando hay un gran nmero de muestras. No tiene una exactitud mayor que la de los mtodos sencillos y rpidos por ejemplo, los mtodos de fotocolormetros visuales que utilizan oxihemoglobina. En general su exactitud es del orden de +/- 15%. Este mtodo utiliza un hemoglobinmetro visual de Shali, el cual es un tipo de comparador visual que contiene un tubo grado en el que se deposita la muestra de sangre diluida y un patrn de color. El tubo graduado tiene dos escalas una negra que es tanto por ciento que empieza el 10 y llega hasta 140% que y otra escala en rojo que va desde 2 hasta 22 gramos/%, de un gramo a otro slo los separan cinco rayitas por eso cada rayita de ese tubo vale dos dcimas, es decir si la lectura del tubo est en 8 y tiene una rayita es de 8,2 gramos% que se multiplica por 10 para llevarlo a litro y sera 82 gramos / litro de hemoglobina. La intensidad de color de la solucin problema y la de la solucin estndar se compara mirando frente a una pantalla iluminada por luz natural o luz artificial. En el mtodo de Shali se usa generalmente una pantalla de vidrio pardo, la cual est empotrada permanentemente en el compartimiento izquierdo del hemoglobinmetro. La hemoglobina es convertida primero en hematina cida. Tcnica 1- Colquese suficiente cido clorhdrico dcimo normal (HCN / 10) un desde un frasco provisto de cuenta gotas en el tubo graduado especial de Shali, para igualar la marca de 2 gramos% escala roja o 10% escala negra. 2- Succionar hasta la primera marca 0.02 ml la pipeta especial de Shali con sangre venosa oxalatada, bien mezclada (como mnimo 20 veces) y limpiar con un algodn por fuera la pipeta. 3- Descrguese el contenido de la pipeta en el tubo graduado especial por debajo de la superficie del cido que est ah, soplando suavemente sale la sangre de la pipeta y se deposita en el fondo del tubo. Lavar la pipeta por succin y expulsin del diluyente restante durante dos o tres veces y retrese la pipeta. 4- Mezclar completamente la sangre y el cido usando una varilla de vidrio que tiene el equipo. 5- Esprese 10 minutos a fin que la hemoglobina se convierta en hematina cida. 6- Dilyase cuidadosamente la mezcla de hematina cida con cido clorhdrico N/10 gota a gota y mezclando la solucin con la varilla de vidrio (puede usarse agua destilada). Colocar el tubo en el hemoglobinmetro y compararlo con el patrn hasta que el color sea igual al del patrn. No se tape el tubo con el dedo para realizar la mezcla por inversin, puesto que este causara discrepancia entre los resultados. 7- Lase la hemoglobina en gramos /% en el punto en que el fondo del menisco del lquido diluido cruce la escala graduada (escala roja en g/%. 8- El resultado se anotar as: 8,2 g/% se multiplica por 10 para llevarlo a gramos por litro, 8,2 x 10 =82 g/L sistema internacional de medidas. 2- Mtodo de la cianometahemoglobina usando un fotocolormetro. Hoy en da este es el mtodo de rutina ms usado para determinar la concentracin de hemoglobina, toda la hemoglobina de la muestra de sangre se transforma en compuesto de cianometahemoglobina (por adicin de una solucin de cianuro) y se compara despus con una solucin estndar de cianometahemoglobina. El mtodo proporciona un trmino medio aceptable entre rapidez y exactitud. La cianometahemoglobina es muy estable y las soluciones estndar no experimentan cambios de color, al menos durante un ao. La solucin que se usa esta de acuerdo generalmente con las normas 9

internacionales, incorporadas en el BS 3985. Contiene aproximadamente 60 mg de hemoglobina en 100 ml y la concentracin exacta siempre es especfica para cada lote. El mtodo bsico de la cianometahemoglobina implica: 1- Dilucin de la muestra de sangre y conversin de toda la hemoglobina en cianometahemoglobina . 2- Medida de la densidad ptica de esta solucin problema diluida en un fotmetro fotoelctrico generalmente de filtro, la densidad ptica se mide con una longitud de onda de 540 nm. 3- Comparacin con la solucin estndar de cianometahemoglobina. Esta comparacin se puede hacer por cualquiera de los mtodos: a) Directo, midiendo la intensidad ptica de la solucin estndar, despus de medir la solucin problema. b) Indirecto, utilizando la densidad ptica de la solucin problema para determinar la concentracin de hemoglobina de la muestra de sangre en una curva de calibracin preparada anteriormente (o una tabla de una curva calibrada. Tcnica: 1- Se mide 5 ml de solucin Drabkin con una pipeta de 5 ml descargar el contenido en un tubo de ensayo. 2-Succionar hasta la primera marca 0.02 ml de sangre de la pipeta de Shali con sangre venosa oxalatada, bien mezclada (mnimo 20 veces) y limpiar con algodn por fuera la pipeta. 3-Descargar el contenido de la pipeta en el tubo de ensayo que contiene los cinco ml de Drabkin por debajo de la superficie, es decir a la mitad de la del diluyente total que est ah, soplando suavemente sale la sangre de la pipeta y se deposita en el fondo del tubo. Lavar la pipeta por succin y expulsin del diluyente restante durante dos o tres veces y llevarla al fondo del tubo de ensayo soplando para mezclar el diluyente Drabkin con la sangre varias veces hasta secar la pipeta. 4-Se deja reposar la sangre diluida durante diez minutos para que se convierta en cianometahemoglobina. Espectro fotmetros fotoelctricos Son instrumentos que mide la intensidad de luz (los que miden las intensidades de luz como resultado de la absorcin tambin pueden describirse como absorbmetros) si se pasa luz a travs de una solucin coloreada, parte de ella ser absorbida, esto es que la intensidad de la luz despus de pasar a travs de una solucin coloreada puede ser menor que su intensidad antes de hacerlo. La cantidad de absorcin que se produce es proporcional a la concentracin de las partculas coloreadas en la solucin y si las partculas coloreadas derivan de la sustancia problema, la cantidad de absorcin tambin ser proporcional a la concentracin de esta sustancia (ley de Beer-Lambert) la intensidad de luz tambin se puede fijar por: 1-El ojo del operador (en los fotmetros visuales) 2-Con ms exactitud por una clula fotoelctrica (en los fotmetros fotoelctricos) Fotmetros elctricos (absorb metros fotoelctricos) Emplean bombillas como fuente de luz y clulas fotoelctricas para medir la intensidad de luz. La intensidad de luz se puede medir en trminos de: a) densidad ptica (DO) =log 10 intensidad de luz incidente . 10

intensidad de luz transmitida b) porcentaje de transmisin = intensidad de luz transmitida x 100 . Intensidad de luz incidente luz incidente es la luz antes de que llegue a la sustancia coloreada, y luz transmitida es la luz despus de que ha pasado a travs de la sustancia coloreada. Este equipo debe estar encendido como mnimo 20 minutos antes y para hacer la lectura de la hemoglobina tiene que tener una longitud de onda de 540 nm. Tcnica 1-llenar una cubeta (tamao apropiado) con la sangre diluida (muestra problema) 2-llenar una cubeta idntica solamente con el diluyente, esto es que no contenga sangre (reactivo en blanco), solamente necesita prepararse un reactivo en blanco por cada lote de solucin problema. 3-poner el reactivo en blanco en el fotocolormetro ajustando la rendija y poner la escala de lectura de la densidad ptica a 0. Cuando la palanca est en 0 la escala debe estar en 0, si no est se debe ajustar con el botn superior derecho de arriba que dice 0. despus bajar la palanca a 1,la escala debe estar en 100, si no est se debe de ajustar con el botn superior derecho de abajo que dice 100. 4-si alterar la posicin de la rendija, se reemplaza el reactivo blanco (Drabkin) por la solucin problema. Se realiza la lectura por encima de la escala que es la densidad ptica y va de la derecha hacia la izquierda (0 hasta dos), leer lo ms rpido posible porque si no la aguja va oscilando y esto trae como consecuencia una mal lectura. 5-la lectura que da una intensidad ptica debe buscarse en una tabla que relacionan la densidad ptica y el contenido de hemoglobina en gramos/litro. Cada raya larga vale 0,1 y la ms pequea vale el nmero anterior ms 0,005. Medicin fsica El mtodo de la solucin de sulfato de cobre est fundamentado en los principios del peso especfico de la sangre. Su determinacin tiene poca importancia desde el punto de vista diagnstico. Se prepara una solucin de sulfato de cobre en agua destinada con un peso especfico de 1020 (12 gramos de sulfato de cobre monohidratado de, el doble si es cristalino en 500 ml de agua destilada). Tcnica 1-se coge la sangre despus de mezclarla suavemente como mnimo 20 veces con un gotero. 2-Dejarla caer en una pipeta que contiene el sulfato de cobre. 3-se observa inmediatamente si la gota se queda en la superficie si va al fondo . 4-si se queda en la superficie hay anemia. 5-si va al fondo no hay anemia (puede estar dentro del rango o por encima policitemia. 6-si se queda la mitad de la gota en la superficie y la otra mitad de la sangre en el fondo hay una ligera anemia. Anlisis qumico Concentracin de hierro. Es un mtodo exacto, requiere mucho tiempo procedimiento de eleccin para fines de control y de calibracin, se supone que la cantidad de hierro no hemoglobnico es insuficiente. Gasometra 11

1-capacidad de oxgeno. 2-capacidad de monxido de carbono. Es un mtodo exacto. Requiere equipo especial y mucho tiempo. Puede fallar en la medicin de los derivados de hemoglobina. Interpretacin de la concentracin de hemoglobina El valor ms importante de la determinacin de la concentracin de hemoglobina en sangre es como lo planteamos anteriormente en el hematocrito, comprobar la exactitud del volumen clular compacto (V.G.A) y permitir el clculo de los ndices hematolgicos (ndice de Wintrobe o V.G.M y C.M.H.G. Una disminucin de la hemoglobina por debajo del rango de valores normales indica la presencia de anemia y un incremento por encima del rango de valores normales, es generalmente el resultado de la policitemia (vera, hemoconcentracin, deshidratacin, etctera. Anemia La anemia es una disminucin por debajo del lmite inferior a la variacin normal, en el nmero de glbulos rojos, el V.G.A y de la concentracin de hemoglobina. Se necesita perder del 25-50% de los hemates antes de que se manifiesten los sntomas clnicos de la anemia (palidez de las mucosas aceleracin de los latidos cardiacos y respiracin superficial acelerada con mala tolerancia al ejercicio. Las causas de las anemias pueden clasificarse en tres grupos principales. a) Hemorrgica es decir que debida a la prdida de sangre de la circulacin. Puede ser una prdida aguda es decir que se presenta en un perodo de tiempo corto, como ocurre en la rotura de un baso sanguneo grande o crnica esto es en un perodo de tiempo largo, como el parasitismo . Las principales causas son: 1-trauma es decir que querida de un baso sanguneo en accidentes o durante una intervencin quirrgica. 2-para ciclos ya sea internos, ej: anquilostomas o coccideos u ocasionalmente externos ej: cargas intensas de garrapatas o pulgas. 3-insuficiencia de la coagulacin de la sangre debida a defectos de su mecanismo de coagulacin por ejemplo: debida a la intoxicacin por Warfarina o tombocitopenia. 4-temor de rganos internos, por lo general debida a ulceras( casi siempre del tubo digestivo ej: colitis ulcerativa) o neoplasma. b) Hemoltica La hemlisis da lugar generalmente a una anemia aguda. Las causas posibles son: 1-parsitos hemticos a) babesia, anaplasma, microfilaria, dirofilaria. b) en ocasiones, leptospira. 2-reacciones antgeno-anticuerpo a) anemia hemoltica por autoinmunidad y anemia hemoltica de los recin nacidos. b) transfusiones de sangre incompatibles. Todas las reacciones antgeno-anticuerpo producen "aglutinacin" de los glbulos rojos, que debe distinguirse de la formacin normal de cartuchos. La anemia Hemoltica por autoinmunidad se presenta cuando el organismo forma anticuerpos contra sus propios hemates y la globulina anticuerpo recubre los glbulos rojos mundo. Las formas de los glbulos rojos cambia de bicncavo a casi esfrica, es decir a la de los esferocitos. Estas clulas son eliminadas por el bazo con ms rapidez de lo normal. En la anemia Hemoltica de los recin nacidos se encuentran hemates nucleados, reticulocitos y esferocitos. La enfermedad por autoinmunidad puede no limitarse a la destruccin de los hemates, ya que puede afectar tambin a las plaquetas y leucocitos. Puede diagnosticarse positivamente descubriendo los anticuerpos contra los hemates, es decir mediante una reaccin de Coomb positiva. 12

3-intoxicacin, especialmente grave, la intoxicacin aguda por plomo. La formacin de cuerpos de Heinz es tambin una caracterstica en los casos de intoxicacin. 4- La anemia Hemoltica est asociada en ocasiones a la leucemia. Las anemias Hemolticas se caracterizan por hemoglobinemia (que da color rojizo al plasma en las primeras fases y por ictericia en las fases finales. Estas alteraciones pueden observarse al examen del plasma, cuando se realiza el Hematocrito. Hipoplstica. Son generalmente anemias crnicas debidas a una menor formacin de hemates por la mdula sea roja. (Si la formacin se ha anulado completamente, la anemia se denomina aplstica). Puede acompaarse por la disminucin del nmero del leucocitos granulosos y plaquetas. Puede producirse por: 1-carencia de sustancias bsicas para la formacin de hemates (anemias nutricionales) ej: carencia de protenas, hierro (que puede seguir a anemias hemorrgicas crnicas) del grupo B (B1, B2, B6, B12, cido flico, cido nicotnico o vitaminas C. 2-depresin de la actividad de la mdula sea (anemias depresivas) como consecuencia de: a) medicamentos ej: sulfonamidas y cloranfenicol. b) agentes infecciosos, virus ej: virus de la enteritis infecciosa , de la neumona, infecciones locales, bacterias asociadas especialmente con enfermedades crnicas con por la acumulacin de sustancias de desechos ej: productos nitrogenazos de desecho (incluso urea) en la insuficiencia renal crnica y posiblemente bilirrubina en la ictericia y enfermedad del hgado. 3- La destruccin de la mdula sea (anemia por destruccin) causadas por neoplasia o exceso de radiacin, ej: rayos X. notas: en la anemia hemorrgica o Hemoltica hay: a) un aumento del nmero de plaquetas b) un aumento en el nmero de leucocitos, principalmente neutrofilos (no asociados necesariamente con infeccin bacteriana) c) tras 3 o 4 das, una liberacin de hemates inmaduros, que alcanza su mximo despus de 4 a siete das y que declina despus gradualmente (y en la anemia grave, tambin de hemates nucleados) y de glbulos rojos presentando cuerpos de HowellJolly. d) generalmente un aumento del V. G. M. debido a la presencia de muchos reticulocitos macro cticos y una disminucin del C. M. H. G. y variacin del tamao de los hematies (anisocitosis) en todas las anemias es importante la evidencia de regeneracin es decir que la presencia de hematies inmaduros (reticulocitos y hematies nucleados) la ausencia de estos sntomas indica la presencia de anemia aplstica que conduce a un mal pronstico. El bazo puede afectar a las clulas sanguneas circulantes. Tras la esplenotomia es usual observar un incremento de las cantidades de: a) cuerpos de Howell-Jolly b) leptocitos. c) eosinofilos alrededor de un mes despus y si no se observa la presencia de Haemobartonella canis (en el perro) la multiplicacin rpida de este parsito, dando lugar a una grave anemia Hemoltica. El hipersplenismo (funcin excesiva del bazo) se presenta en raras ocasiones. El bazo elimina un sinnmero excesivo de clulas de la sangre, dando lugar a la anemia, neutropenia o a una combinacin cualquiera de ellas. Est generalmente asociado con esplenomegalia (bazo agrandado) Clasificacin etiologica de las anemias A) anemia por prdida de sangre. 1-hemorrgia crnica. 13

-lesiones gastrointestinales. Ulceras, enteritis, coccidiosis. -neoplasia con un hemorrgia en cavidad orgnica. -deficiencia de vitaminas C, K , protrombina. 2- parsitos que succionan sangre. -garrapatas, piojo y pulga. -anquilostomo. -hemoneosis 3- hemorragia aguda. -envenenamiento de los bovinos con helecho. -envenenamiento con trbol dulce en los bovinos (dicumarol). -envenenamiento con Warfarina. -envenenamiento con harina de torta de soya, que contiene tricloroetileno (bovinos), producido tambin experimentalmente en el caballo y la gallina. -traumatismo y operaciones quirrgicas. B) anemia Hemoltica. 1-tipos infecciosos. -anaplasmosis, piroplasmosis. -hemobartonelosis (anemia infecciosa de los felinos). -espiritrozoonosis en terneros y cerdos. -leptospirosis en perros y bovinos. -hemoglobinuria bacilar. -anemia infecciosa de los equinos. 2-tipos txicos -intoxicacin crnica por cobre en carneros, cerdos y terneros. -envenenamiento por plomo, compuestos fenoliticos, benceno, y compuestos afines. -sensibilidad a la fenotiazina,naftaleno en las bolas contra la polilla. -hemoglobinuria del parto. -resina (protenas de las semillas del resino) veneno de serpiente. -leucemia. -toxinas bacterianas, toxina Alfa del micricus piogenes en los corderos. 3-reaccin antigeno-anticuerpo -isoinmunizacion en potros y cerdos recin nacidos. -anemia Hemoltica adquirida, sntomatica e ideopatica. -sangre incompatible en las reacciones por transfusin. C) anemias secundarias (depresin selectiva de la eritrognesis 1-trastornos orgnicos o de los tejidos. -nefritis intersticial crnica con uremia, especialmente en los caminos. -hipoparatiroidismo. -tumores malignos. 2-enfermedades infecciosas. -todas las enfermedades infecciosas crnicas. La disminucin de los eritrocitos circulantes comienza a advertirse despus de un mes de duracin de la enfermedad. 3-enfermedades parasitarias -tricostrongilidosis. Los vermes que no succionan sangre y el estmago de los bovinos y del carnero pueden provocar anemia grave. D) anemia por deficiencias nutricionales -hipoproteinemia. -deficiencia de minerales: hierro, cobre, cobalto. -deficiencia de vitaminas: B12, cido folico, niacina, piridoxina, tiamina, riboflvina. 14

E) anemias Hipoplsticas. (Tambin disminuyen los granulocitos y los trombocitos. -irradiacin. -helecho -harina de torta de soya, subproducto de la extraccin del aceite con tricloroetileno. -hpersensibilidad a las sulfamidas y al cloranfenicol. Resultados del laboratorio en las perturbaciones hemorrgicas la mayor parte de los trabajos sobre trastornos hemorrgicos que se han hecho en el perro. La alteracin ms conocida en la coagulacin es seguramente la hemoflia, la cual si la menor duda en formas caractersticas se presenta en todas las especies animales, en los cuales slo requiere que sea reconocida y diagnosticada. La hemoflia en efecto ha sido apreciada en caballos pura sangre y perros shetland, sabuesos, perdigueros, setters, labradores, etctera. Las dos hemoflias las clsicas (llamada A) y otros trastornos de la coagulacin conocido como la enfermedad de christmas (hemoflia B) se han repetidamente en el perro. Adems, mustar y colaboradores (1962) informaron de un defecto de factor VII en una raza de sabuesos. El de la hemoflia A hay anormalidad particular del sistema intrnseco de la coagulacin de la sangre, defecto que se considera debido a la falta de factor VIII. En estos animales el tiempo de coagulacin est prolongado, el consumo de protrombina es deficiente, aunque el tiempo de la protrombina puede ser normal. El recuento de plaquetas se halla dentro de las cifras normales, aunque el tiempo de aglutinamiento de estos elementos es que prolongado. En los perros este defecto parece ser patolgicamente similar a la hemoflia clsicas del hombre, tal vez tambin genticamente similar, aunque la prueba de este ltimo punto ha sido obtenido. Roswell y colaboradores (1960) informaron sobre casos de hemoflia B en grupos sanguneos de terrier cairn. Se completaron los estudios de coagulacin en cuatro animales. El tiempo de coagulacin estaba prolongado (ms de 60 minutos), el tiempo de protrombina era normal, el consumo de protrombina era anormal y tambin la generacin de tromboplastina . El defecto de la formacin de tromboplastina se revel como un factor de suero, corregido por suero de otro perro o de un hombre normal. El defecto del suero tambin fue corregido por adicin de partes iguales de suero de hemoflia A o tromboplastina plasmatica de suero deficiente, pero no se corregia con suero de un ser humano afectado de hemoflia B. este defecto de coagulacin se debe a la falta de factor IX. Mustar y Coll (1962) informaron sobre un tercer defecto de coagulacin en perros consanguneos de raza de sabuesos clasificados como defecto de factor VIII, todos los animales afectados presentaban como normales el tiempo de coagulacin, el recuento de plaquetas, la prueba de consumo de protrombina y el tiempo de aglutinacin de trombocitos, sin embargo el tiempo de la protrombina estaba prolongado. Esta prolongacin se redujo a la normalidad por la adicin de suero normal o humano, al 10 por ciento, pero no por sueros de perros tratados con hidrxido de aluminio, plasma humano que poco plasma de pacientes tratados con dicumarol. Los ensayos sobre el factor V fueron normales en todos los pacientes. Tambin resultaron las pruebas de generacin de la tromboplastina. No se saba el trastorno patolgico hemorrgico en ninguno de esos perros sin tampoco prueba clnica o de laboratorio de e enfermedades hepticas. sanger y colaboradores (1964) dieron a conocer un trastorno hemorrgico en un potro de pura sangre sin diferencia con la hemoflia clsica humana (hemoflia A). El tiempo de protrombina era normal, as como el recuento de plaquetas en cambio, el tiempo de coagulacin estaba netamente prolongado hasta ms de una hora por el mtodo del tubo capilar. Los resultados de la generacin de la tromboplastina sugieren la posibilidad de un defecto de factor VIII. 15

En el perro cido hallada la prpura trombocitopenica idiopatica .gowing inform sobre dos casos de lo que le pareci una enfermedad en dos perros, con el carcter de ambos de hemorragias espontneas, adems de ley que las extensiones estaban por completo ausente de trombocitos. El tiempo de coagulacin de un animal era de dos minutos por el mtodo de tubo capilar, sinque se completar en el otro. Dicho autor se convenci de que basta la tombocitopenia de otros cuadros ms comunes de hemorragia espontneas, como hepatitis infecciosa canina, intoxicacin por Warfarina y otros trastornos heptico. Es de lamentar que no se comprobaron otras pruebas. Coagulacin de la sangre En los aos recientes se ha perfeccionado considerablemente conocimientos respecto a los mecanismos homeostaticos , lo que ha servido en gran medida para el reconocimiento, asistencia y tratamiento de los efectos de la coagulacin en el hombre. El veterinario, por su parte, no ha participado tanto de dichas ventajas, sobre todo porque no ha visto el punto de aplicacin de las mismas a sus problemas clnicos. Estas circunstancias han persistido, no obstante que el hecho de que el veterinario debe contar bsicamente con el mecanismo homeostaticos para tener xito en sus operaciones. Adems el veterinario clnico encontrar enfermedades de los animales en las que el mecanismo de coagulacin no funciona adecuadamente. Los mtodos para revelar estos defectos y los conocimientos de varios factores que intervienen en la homeostasis le permitirn un diagnstico ms preciso de estas alteraciones patolgicas como el propsito correspondiente. Mecanismo de coagulacin en trminos generales, la coagulacin de la sangre es la simple conversin de un lquido en un slido, pero el cogulo no se forma en cualquier herida Hemorrgica se encierra un mecanismo el extremo complejo, con reacciones complicadas de varios factores dispuestos en sucesin normal. La coagulacin podra ser comparado con la construccin de un edificio, si los fundamentos son dbiles, cualquier accidente que aumente ms peso provocar un derrumbe. Puede haber particularmente animal cuyo mecanismo de coagulacin sea conveniente para su necesidad diaria, pero que al ser sometido a un procedimiento quirrgico mayor u otra experiencia traumtica sufra una hemorragia tan profusa que se ya difcil restaurar. Indudablemente esa hemorragia casi incontenible ser el resultado de un defecto en un simple factor especfico necesario para la coagulacin o una combinacin de otros defectos que en conjunto contribuyen al de dicho factor especfico. La coagulacin de la sangre significa la conversin de la protrombina con la sucesiva formacin de fibrina. Esta conversin est a la presencia de varios factores. Hay dos sistemas: uno intrnseco y otro extrnseco, este ltimo por efectos de la tromboplastina de los tejidos. La adicin de las cantidades ptimas de tromboplastina tisular a la sangre producir la coagulacin en 13 segundos. El sistema intrnseco representa la conversin del factor de la protrombina, la cual puede ser formada por factores encontrados en la sangre desprovista de cualquier elemento de los tejidos. La coagulacin de la sangre fundada en la interaccin del mecanismo intrnseco requiere de 5 a 10 minutos, en constante con la extrema rapidez con que se cogula la sangre en la presencia de la tromboplastina. Se conocen dos factores, el V y el X , e intervienen en los dos sistemas intrnseco. Un defecto, un factor de uno de los dos sistemas tendr por defecto la perturbacin en la coagulacin de la sangre. Ejemplo: un efecto en el factor VII demorar la reaccin del sistema extrnseco y de manera similar un defecto del factor VIII ser motivo de reaccin demorada en el sistema intrnseco extravascular.

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Recuento de celulas Suponen determinar el numero de celulas (hemates, leucocitos o plaquetas) en un mm cubico de sangre. El numero de glbulos rojos por mm cubico de sangre de un bovino es de 5-7 millones, de manera que es claramente imposible contar realmente todas las clulas del mm cbico, especialmente como mtodo de rutina. La simplificacin se hace de dos maneras: 1-diluyendo la sangre con lo que se reduce la concentracin de clulas 2-contando las clulas nicamente en un volumen muy pequeo de esta sangre diluida, utilizando una cmara de recuento especial. Estos mtodos de recuento pueden realizarse utilizando las pipetas hemocitometricas (THOMAS) o pipetas de glbulos rojos y blancos, para diluir la sangre, la cmara de recuento espacial y el cubre objetos. A) recuento de glbulos rojos lquido diluyente de glbulos rojos: es importante que el lquido diluyente de los glbulos rojos sea isotnico, para impedir que se presente hemlisis, que dara lugar a un recuento inexacto (bajo). No importa una ligera crenacin de clulas. El diluyente que vamos a utilizar es el de suero marcano ha llegado a emplearse extensamente en los ltimos aos, como consecuencia de que se conserva las clulas sin aglutinarlas, si es necesario se puede retrasar el recuento un tiempo considerable despus de hacer la dilucin. Dilucin la dilucin de hacerse preferentemente dentro de las cinco horas de tomar las sangre y mejor en las tres primeras horas. La dilucin estndar de la sangre para el recuento de glbulos rojos es de 1 en 200, es decir una parte de sangre en un volumen total de 200 partes. Utilizando una pipeta de dilucin de glbulos rojos (THOMAS). Cuando va a llenarse la pipeta es corriente fijar 1 a ella un tubo de goma de estrecho dimetro en el extremo superior y un tubo corto de vidrio de polietileno o boquilla en el otro extremo del tubo (aspirador). Esto permite al operador observar las seales de la pipeta mientras se aspira el lquido (suero marcano para los glbulos rojos) tcnica 1-se toma la pipetas de dilucin de los glbulos rojos (que contiene una escala de 0,5; 1 y 10 con una perla roja dentro del bulbo) y una vez que se comprueba que estn seca y libre de cualquier partcula de sangre deseada, se exija a ella el tubo de goma y la boquilla a este (si la pipeta est seca la perla se desplaza libremente de dentro del bulbo) 2-invirtase la muestra de sangre como mnimo 20 veces suavemente con el objetivo de mezclar 3-sostenga el frasco de sangre en la mano izquierda e inclinese hasta que su contenido alcance el borde del mismo. 4-tome la pipeta de glbulos rojos en la mano derecha, insertando su pico en la superficie de la sangre succione con cuidado por el tubo de hule hasta que la columna de sangre alcance la marca de 0,5 (la seal ms inferior) de las pipeta, se realiza mejor si se sostiene la pipeta no verticalmente si no con una inclinacin de unos 45 grados con la vertical. 5-retire inmediatamente la pipeta del frasco y coloquela horizontalmente para quitar el exceso de sangre que est por fuera de la misma mediante un papel de filtro, Gaza o algodn. Si la sangre sobrepasa en poco dicha seal se hace descender la columna de sangre hasta ella, tocando suavemente de la punta de la pipeta con una hoja de papel de filtro, se limpia la punta (si en la columna de sangre aparecen algunas burbujas, se expulsa inmediatamente la sangre y se limpia la pipeta por completo) 17

6-sostenga la pipetas con una inclinacin de 45 grados e introduzca su voluntad profundamente en el frasco que contiene el diluyente (suero marcano) haciendo simultneamente aspiracin por el tubo de hule de la pipeta. 7-al tiempo que se va llenando el bulbo, mezcle el contenido mediante el movimiento de rotacin y se va poniendo la pipeta en posicin vertical 8-se reduce la succion conforme se va llenando el bulbo y se trata de llenar el nivel del lquido hasta que quede y exactamente sobre la seal 101 por encima del bulbo. Alcanzando exactamente el nivel, algunos oprimen el tubo de goma para disminuir el vaco, mientras otros abren ligeramente sus labios. 9-en cuanto se ha alcanzado dicha marca, deje de succionar y extraiga inmediatamente la pipeta del lquido, colocando rpidamente el dedo ndice izquierdo en la punta de la misma para tapar la y se quita el tubo de goma. 10-sujete la pipeta colocando en un extremo el pulgar y el ndice en el otro, y agitar por espacio de dos minutos con el objetivo de lograr una distribucin correcta de las clulas en el lquido diluyente del bulbo (facilitado por los movimientos de la perla de vidrio rojo) se sostiene la pipeta horizontal, con el pulgar en un extremo y el ndice o medio en el otro y se agita de arriba abajo (no de un lado a otro) 11-se deja horizontalmente de reposo durante diez minutos para que acte el diluyente isotnico (suero marcano) para impedir que se presente hemlisis. Recuento de glbulos blancos para hacer el recuento de glbulos blancos es necesario eliminar primero los glbulos rojos, de otra forma el nmero preponderante de glbulos rojos podra hacer muy tediosa la bsqueda de leucocitos y dificultar su reconocimiento. Es posible slo la destruccin de los glbulos rojos por qu los leucocitos son ms resistentes a los efectos de los cidos diluidos. El nmero de leucocitos en un bovino es de 6-12 mil. Lquido diluyente de los globos blancos el ms empleado es una solucin de cido clorhdrico N/10 que lisa a los eritrocitos (hemlisis de los glbulos rojos) este puede prepararse por adicin de 1 ml de cido clorhdrico concentrado en 100 ml de agua destilada. Dilucin la dilucin debe hacerse preferentemente dentro de las cinco horas de tomar la sangre y mejor en las tres primeras horas. Puesto que hay muchos menos glbulos blancos que hematies, no es necesario diluir tanto la sangre. La dilucin estndar de la sangre para el recuento de los leucocitos es uno en 20 es decir una parte de sangre en un volumen total de 20 partes. Utilizando una pipeta de dilucin de glbulos blancos cuando va a llenarse la pipetas es corriente fijar a ella un tubo de goma de estrecho dimetro en el extremo superior y otro tubo corto de vidrio de polietileno o boquilla en el otro extremo del tubo (aspirador) esto permite al que operador observar las seales de la pipetas mientras se aspira el lquido (cido clorhdrico N/10) para los glbulos blancos tcnica 1-6 toma la pipeta de dilucin de los leucocitos (que contiene una escala de 0,5; 1 y 11 con una perla blanca dentro del bulbo) y una vez que se comprueba que est seca y libre de cualquier partcula de sangre, se fija a ella el tubo de goma y la boquilla a este. 2-invierta la muestra de sangre como mnimo 20 veces suavemente con el objetivo de mezclar 3-sostenga el frasco de sangre en la mano izquierda e inclinese hasta que su contenido alcance el borde del mismo. 4-tome la pipeta de glbulos blancos en la mano derecha insertando su pico en la superficie de las sangre y succionando con cuidado por el tubo de hule hasta que la columna de sangre alcance la marca de 0.5 (la seal ms inferior) de la pipeta. Se realiza 18

mejor si se sostiene la pipeta no verticalmente, si no con una inclinacin de unos 45 grados con la vertical. 5-retire inmediatamente la pipeta del frasco y coloquela horizontalmente para quitar el exceso de sangre que est por fuera de la misma mediante un papel de filtro, Gaza o algodn. Si la sangre sobrepasa un poco dicha seal, se hace descender la columna de sangre hasta ella, tocando suavemente la punta de la pipeta con una hoja de papel de filtro. Se limpia la punta (si en la columna de sangre aparece alguna burbuja, se expulsa inmediatamente la sangre y se limpia la pipeta por completo) 6-sostenga la pipeta con una inclinacin de 45 grados e introduzca la punta profundamente en el frasco que contiene el diluyente, haciendo simultneamente aspiracin por el tubo de hule de la pipeta. 7-al tiempo que se va llenando el bulbo, mezclar el contenido mediante movimiento de rotacin y se va poniendo la pipetas en posicin vertical. 8-se reduce la succion conforme se va llenando el bulbo y se trata de llenar el nivel del lquido hasta que quede exactamente sobre la seal por encima del bulbo. Alcanzando exactamente el nivel, algunos oprimen el tubo de goma para disminuir el vaco, mientras otros abren ligeramente sus labios. 9-se en cuanto se ha alcanzado dicha marca, deje de succionar y atraiga inmediatamente la pipetas del lquido, colocando rpidamente el dedo ndice izquierdo en la punta de la misma para taparla y se quita el tubo de goma. 10-sujete la pipeta colocando en un extremo el pulgar y el ndice en el otro, agite por espacio de dos minutos, con el objetivo de lograr una distribucin correcta de las clulas en el lquido diluyente del bulbo (facilitando por los movimientos de la perla de vidrio blanca). Se sostiene la pipetas horizontal, con el pulgar en un extremo y el ndice o medio en el otro y se agita de arriba abajo (no de un lado a otro). 11-se deja de reposo horizontalmente durante diez minutos para qu acte el diluyente, para realizar la hemlisis de los grupos rojos es decir lisa los eritrocitos. Camara de recuento del Hemocitometro La cmara de recuento del hemocitometro se emplean para los recuentos de los glbulos rojos, glbulos blancos y plaquetas. La cmara de neubawer mejorado es un bloque de vidrio rectangular, con na depresin central, es decir una zona ligeramente ms baja que las de ambos lados, de las que se separa por surcos. Cuando se utiliza un cubre objetos especial forma un puente sobre dicha presin. En la zona deprimida hay grabadas unas lneas finas que delimitan las pequeas reas en las que van a cortarse las clulas sanguneas. Generalmente en cada cmara de recuento hay grabadas dos reas halladas idnticas, separadas por un surco longitudinal. Una cmara de recuento doble, por lo tanto tiene surcos que se semejan una H sobre su superficie, hallndose por encima y por debajo de la barra transversal de la H las zonas rayadas para el recuento (tambin existen cmaras de Neubawer con slo un rea marcada o con 4). Se ha usado varios tipos de rayado entre ellos el que ms se usa frecuentemente es el de Neubawer mejorado. En este reticulo hay cuatro reas W,X,Y,Z, una en cada esquina (miden cada una 1 mm por 1 mm), estn divididas en 16 pequeos cuadros es decir, hay cuatro cuadrantes grandes dos superiores y dos inferiores que a su vez cada uno est dividido en 16 cuadros pequeos, por lo tanto 16 por 4 = 64 cuadrados que componen las cuatro reas. Estas reas se utilizan para el recuento de leucocitos. En el centro de la cmara hay una zona que est formada por 25 cuadrados dos separados entre s por triples lneas muy juntas, cada uno de ellos est subdividido a su vez en 16 cuadros pequeos, por lo tanto 25 por 16 = 400 cuadrados que componen el cuadrantes central se emplea para el recuento de glbulos rojos y plaquetas. Realmente se usan slo cinco de estos 25 cuadrados centrales, que componen 19

las cuatro esquinas dos superiores (A,B) y dos inferiores (C,D) para hallar el quinto cuadrante (E) se parte del ltimo cuadrante contado (D) hacia arriba 3 cuadrantes contando a (D) que est enfocado hacia la derecha tres cuadrantes ms. Si no s cuenta los enfocados, es dos cuadrantes hacia arriba y dos cuadrantes hacia la derecha, ya estamos en el (E) por lo tanto, 16 por 5 = 80 cuadros; se escoge as para eliminar los errores debidos a una distribucin ligeramente desigual de los glbulos rojos. Las otras partes de la zona rayada no suelen utilizarse para los recuentos de clulas. El cubre objetos es un rectngulo de vidrio pticamente plano (mide 25 por 22 milmetros para una cmara de recuentos doble). Llenado de la cmara de recuentos (Neubawer) 1-Se comprueba que la cmara de Neubawer y que el cubre objetos estn secos y limpios de polvo y grasa; si no lo estn se limpia y se quita el polvo cuidadosamente con un pao o una toalla de papel de filtro estril. 2-se ponen el cubre objetos bien igualado sobre la presin central, es decir de manera que ocupe la mitad de la distancia entre los lados laterales de la cmara del recuento y se prolongue uniformemente por cada lado de los surcos largos. Para una cmara de recuentos doble el lado ligeramente ms largo del cubre objeto (25 milmetros) debe estar paralelo a los surcos largos. Se hace ligera presin (con un dedo protegido por una toalla de papel, para tener seguridad de que est aplicado firmemente a la cmara) seguidamente sin esperar se llena la cmara de recuento. 3-se mezcla en la pipeta de dilucin uniformemente la sangre y el diluyente durante dos minutos. Si la pipeta es la de los leucocitos se debe de controlar el lquido poniendo la yema de un dedo sobre el extremo superior. Si la pipeta es la de los eritrocitos se debe sacudir (porque el diluyente y obstruye momentneamente la salida del lquido), no se pone la yema del dedo sobre el extremo superior por la lenta salida del lquido de la pipeta. Se desecha las tres primeras gotas de su contenido (se realiza para eliminar del tallo de la pipeta el lquido de dilucin que no se ha mezclado como la sangre y se limpia la punta con una gaza, algodn o una toalla de papel. Teniendo en cuenta la lenta salida del lquido de la pipeta es a menudo conveniente dejar que se forme una pequea gota en la punta de la pipeta antes de realizar el contacto. Se sostiene la pipeta en un ngulo de 45 grados, se toca con la punta de la pipeta en la zona que central deprimida, en la parte en que el cubreobjeto forma puente que sobre ella. Debe llenarse completamente por capilaridad con la simple salida del lquido, una de las zonas marcadas con reticulo, limitada por los surcos. No debe formarse burbujas bajo el cubre que objetos y no debe derramarse el lquido dentro de los surcos que lo rodean, ya que si esto sucede la distribucin de las clulas en la cmara ser desigual. Si se produce cualquiera de que estos dos accidentes cuando se utilice cmara doble debe retirarse la tcnica utilizando la otra zona cuadriculada. Si tambin falla el segundo intento, ser necesario limpiar, secar y pulimentar el cubre objetos y la cmara de recuento antes de usarla de nuevo. Llevar con cuidado la cmara de recuento a la platina del microscopio que debe estar completamente horizontal y esperar dos o tres minutos para qu sedimenten los glbulos rojos o blancos, no deben contarse mientras todava estn arremolinados. Si se espera demasiado tiempo, desecacin determina la formacin de otras corrientes de lquido en consecuencia el movimiento de las clulas. Hoja 6 (dibujo) 20

Recuento del nmero de clulas el propsito es contar el nmero de clulas en los cinco cuadrados designados por A,B,C,D y E cada uno de los cuales est delimitado por una triple lnea y que contiene a su vez 16 cuadrados ms pequeos. Tcnica el recuento es llevado a cabo utilizando un fuerte aumento. No obstante es aconsejable localizar primero el rea central rayada de todos, con un aumento pequeo. Reduciendo la intensidad de iluminacin, se garantiza muchas veces, que tanto las clulas como las lneas rayadas se vean claramente en la cmara de recuento. Si el examen de la cmara de de recuento, a bajo aumento, muestra que las clulas estn desigual mente distribuidas, esto indica probablemente que el recuento puede ser extremadamente inexacto consiguiente debe hacerse una nueva preparacin (si fuera difcil enfocar las lneas rayadas usando un aumento bajo podra ser til establecer el nivel para el cual puede esperarse enfocar y moviendo la cmara de recuentos ligeramente del centro y enfocando uno de los surcos siendo asegure sus como son ms fcil es de detectar) si la distribucin de las clulas aparece uniforme, se cambia a un aumento mayor. Examinando el cuadrado A 1-mover la cmara de recuento alrededor de la triple lnea, hasta que aparece aprximadamente en nuestra vista. 2-recorrer la triple lnea hasta que sea alcanzada el rea central de los 25 cuadrados grandes. -mover hacia la izquierda esta rea central (ignorando el hecho de que esta es en realidad una imagen invertida) hasta que es alcanzada la ltima banda vertical de la triple lnea. A la derecha de la banda de esta triple lnea se aprecian claramente lneas verticales simples bastante prximas a la izquierda de esta banda, las lneas verticales simples que estn bastante espacidas. -ahora se mueve hacia arriba hasta que es encontrada la banda horizontal ms alta de la triple lnea por encima se aprecian claramente lneas horizontales simples bastante prximas y por debajo de las lneas horizontales estn bastante espaciadas. -refirindose a la cmara de recuentos, puede verse que el cuadrado grande que est delimitado por la triple lnea en la esquina superior izquierda, es el cuadrado A. de una forma similar pueden ser localizados los cuadrados B,C,D. el cuadrado E se encuentra contando tres cuadrados grandes hacia arriba desde el cuadrado D y 3 cuadrados a la derecha. 3-poner el cuadrado A en el centro del campo y contar las clulas en todos los cuadrados pequeos. Esto se realiza ms convenientemente, usando un contador de mano mecnico o elctrico para llevar la cuenta, por cada clula vista se aprieta una tecla y el contador marca una unidad, tambin se puede dibujar en un papel el grupo de los 16 cuadrados correspondientes al cuadrado A. cuando se busque el otro cuadrado (B) se cambia de tecla, es decir cada 16 cuadrados pequeos que forma un cuadrado grande se utiliza una tecla. Despus de haber sido contadas las clulas de cada cuadrado pequeo, se escribe su nmero en el correspondiente cuadrados de papel por las cuatro esquinas y uno del centro A,B,C,D y E. -convencionalmente los cuadrados se examinan en un orden fijo, empezando por el extremo superior izquierdo y corriendo la lnea superior hacia la derecha, cuando sta termina se pasa a la lnea siguiente y se recorre de derecha a izquierda (comenzando por la parte superior) continuando con esta forma de zig-zag hasta que han sido anotadas todas las clulas de los 16 cuadrados pequeos.

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Aunque muchas clulas se encuentran totalmente dentro de los cuadrados, algunas de ellas caen en las lneas. Contando una clula en ms de un cuadrado, se pueden producir obviamente, un incremento en la cuenta (y es ms inexacto) pero para no perder tiempo es necesario decidir en cual de los cuadrados pequeos pueden ser incluidos constantemente, se adapta una costumbre por la cual se ignoran las clulas que tocan dos lados adyacentes de 1 de los cuadrados pequeos y se incluyen las que tocan los dos lados restantes (izquierda superior hacia la derecha, derecha superior hacia la izquierda). Desgraciadamente, no todos los profesionales usan la misma costumbre. Esto puede resultar desconcertante, ya que en la lectura de un cierto nmero se libros se encuentran diferentes consejos. Algunos prefieren ignorar las clulas que tocan los lados superior izquierdo, otros ignoran las clulas que tocan los lados y superior derecho. El ltimo sistema referido (inferior derecho) parece ser el ms adaptado y por ello, es el nico recomendado aqu. Se ignora cualquier clulas que tocan los lados inferior derecho de un cuadrado grande y se incluye cualquier clula que tocan los lados superior e izquierdo de los cuadrados (comprendido que no toque tambin los lados inferior y derecho del mismo cuadrado que, lo que sucede si est en una esquina) cuando la lnea triple forma el lado del cuadrado, la lnea media de los 3, cuenta como lnea delimitante. 4-recorrer a su vez los cuadrados B,C,D,E y repetir este procedimiento de recuento. 5-obtener el nmero total de clulas en todos los espacios pequeos 5 por 16 = 80 cuadrados pequeos. Si los nmeros han sido anotados en un papel, contador mecnico o elctrico, es necesario sumarlos todos. Pagina. 9(dibujo) clculo de la cifra total la suma de los eritrocitos contados en los cinco cuadrados (A,B,C,D y E) multiplicada por 10 000 da la cifra total de eritrocitos por un litro de sangre. El 10 mil que es un nmero estndar, sale de 25 = 400 que son los cuadrantes que tienen el cuadrado central de la cmara dividido entre 5 = 80 que son los cuadrantes que se cuentan por 10 que es profundidad entre el cubreobjeto y la cmara y sale de 0,1 mm (1/10) por 10 para llevarlo a 1 mm por 2 00 la dilucin de la pipeta luego: 25 = 400 x 10 x 200 = 10 mil. 5 80 1 1 La unidad de medida es milmetros cbicos y esto sale del rea finamente graduada que se halla en el centro de la cmara mide 1 mm de largo por 1 mm de ancho por 1 milmetro de profundidad. Ejemplo: 145 + 152 + 130 + 162 + 146 = 735 x 10 000 = 7 350 000 mm cbicos. Luego 7.35 x 10 a la 6 (los eritrocitos se dan en millones) clulas en un milmetro cbico de sangre (sistema antiguo). Ahora se expresan millones de eritrocitos en un litro de sangre (sistema moderno internacional) milmetros cbicos o decimetros cbicos = litro (como es cbico aumenta o disminuye de mil por mil = 1 milln = 10 a las seis c/L o dm cbicos) por lo tanto 10 a las seis anterior ms 10 a las seis (bases iguales, se pone la misma base y se suman los exponentes) = 10 a la 12 clulas de eritrocitos en un litro de sangre. Interpretacin una reduccin en el nmero de glbulos rojos por debajo del valor normal se llama anemia, y un incremento por encima del valor normal se debe generalmente a una policitemia que puede ser vera (rara vez se muestra) o relativa (deshidratacin, hemorragia, adipsia, etctera) leer las clasificaciones de las anemias o policitemias que describimos anteriormente en la hemoglobina. Recuento del nmero de clulas 22

aunque se usa la misma cmara de recuento hemocitometrica, el recuento total de leucocitos se hace en los cuatro cuadrados grandes de las esquinas W,X,Y,Z cada uno de los cuales contienen 16 cuadrados ms pequeos. Tcnica 1- usando un aumento bajo (a seco dbil) ejemplo: ocular por 10 y objetivo por 10 halla el cuadrado W en la esquina superior izquierda. 2- con este aumento (no un aumento mayor) se cuentan las clulas en los 16 cuadrados ms pequeos que contienen el cuadrado W. 3- ajuste la eliminacin de tal modo que las lneas divisoria se vean plenamente y los ncleos de los leucocitos aparezcan opacos. 4- cuente los leucocitos que se encuentran en el primer cuadro pequeo y a continuacin en el segundo progresando de izquierda a derecha por la hilera superior. En la segunda hilera proceder de derecha a izquierda. Continuar en la misma forma hasta cubrir la totalidad del rea del cuadrado grande. Nota: cuente aquellas clulas que estn en contacto con cualquier parte de las lneas divisoria superior e izquierda. Prescindir de las que toque en las lneas inferior y derecha estas sern contadas en la hilera prxima. 5- cuente los leucocitos existentes en los cuadros restantes por el mismo procedimiento (X,Y,Z) 6- anote el total de cada cuadro grande en una hoja de papel, contador mecnico o elctrico es necesario sumarlos todos. Clculo de la cifra total la suma de los leucocitos contados en los cuatro cuadrantes grandes (W,X,Y,Z) multiplicado por 50 de la cifra total de leucocitos por un litro de sangre. El 50 que es un nmero estndar, sale de 20 de la dilucin de la pipeta, dividido entre 4 cuadrantes grandes de las esquinas de la cmara (16 pequeos cuadrados cada uno) que son los cuadrantes que se cuentan por 10 que es la profundidad entre el cubreobjeto y la cmara, que sale de 0.1 mm (1/10) X 10 para llevarlo a un mm luego: 20 X 10 = 50. 4 la unidad de medida es milmetros cbicos y esto sale que cada cuadrado grande de la esquina tiene un rea de un mm de largo por un mm de ancho por un mm de profundidad. Ejemplo: 80 + 90 + 67 + 54 = 291 x 50 = 14.550 mm luego 14.55 x 10 a la 3 (los leucocitos se dan en miles de clulas en un mm cbico de sangre "sistema antiguo" ahora se expresan miles de leucocitos en un litro de sangre "sistema moderno internacional" milmetros cbicos a dm cbicos = litro (como es cbico aumenta o disminuye de mil x mil = 1 milln = 10 a la seis c/litro o dm cbico) por lo tanto, 10 a la 3 anterior ms 10 a la seis (bases iguales se pone la misma base y se suman los exponentes 10 a la 9 clulas de leucocitos en un litro de sangre. Interpretacin una disminucin del nmero de glbulos blancos (leucopenia) se debe generalmente a una neutropenia acentuada, an que pueden hallarse implicados en menor grado otros tipos de leucocitos, por ejemplo: una infeccin irresistible de origen bacteriano. Los neutrofilos pueden presentar alteraciones txicas (granulacin basfilas, vacuolas, cuerpos de Dhole) descritos ms adelante. La leucopenia es tambin un aspecto de muchos de los cuales producen anemias depresivas y destructivas (ver tipos de anemia hipoplstica) otra posibilidad que puede encontrarse una disminucin en el nmero de todos los tipos de glbulos blancos (panleucopenia) en las enfermedades vricas, generalmente en fases iniciales. Ejemplo: En el estado inicial de la hepatitis infecciosa canina, sin embargo es la enfermedad conocida como panleucopenia felina (enteritis infecciosa felina) la leucopenia se observa a lo largo de toda la enfermedad. Como la panleucopenia puede o 23

no observarse alteracin ninguna en las proporciones relativas de glbulos blancos mediante una frmula a leucocitaria, aunque el recuento total de leucocitos seala una disminucin acusada, es decir hay una disminucin en el nmero absoluto de cada tipo. Un aumento en el nmero de leucocitos (leucocitosis) se debe generalmente a una acusada neutrofilia. En general se presenta en infecciones bacterianas agudas (piometra, septicemia,peritonitis) aunque puede presentarse en las formas aleucemicas de la leucosis linfoide. Menos corrientemente una linfocitosis marcada (quizs ms correctamente una linfoblastosis) en la forma leucemica de la leucosis linfoide, es responsable de la leucosis. Variaciones de la reaccin leucocitaria total a la enfermedad segn especies el perro y el gato reaccionan vigorosamente a la infeccin, son frecuentes las cuentas de 30 mil y no son raras las de 50 mil a cien mil. El el cerdo no son raras las cuentas de leucocitos totales de 20 mil a 40 mil. En el caballo, el nivel general de reaccin leucocitaria a la infeccin est comprendido entre 15 mil y 25 mil. En el caballo se estima que hay leucocitosis con 25 mil a 30 mil y en casos extremos, de ms de 35 mil. La vaca reacciona todava menos que el caballo a la infeccin. Con frecuencia la cuenta total permanece en el intervalo normal de cuatro mil a 12 mil, pero hay neutrofilia de 50 o ms por ciento y tal vez desviacin a la izquierda. Se considera leucocitosis intensas las cuentas de 15 mil a 25 mil, y en casos extremos las mayores de 25 mil. Se han encontrado valores de 40 mil a 50 mil en infracciones de las vacas, pero son casos raros. En los bovinos la neutrofilia de ms del 50% y la aparicin de clulas en banda de ms de 20% indican situacin de esfuerzo esto puede aplicarse en parte por la cuenta diferencial normal de leucocitos en los bovinos, en el carnero y la cabra. Los dos tipos de clulas, eosinofilos y linfocitos, que disminuyen por influencia crtico-suprarrenal en el esfuerzo, constituyen 65 a 70% de los leucocitos en circulacin y los neutrofilos, que aumentan de nmero en iguales circunstancias, representan menos de 30 por cierto. Por consiguiente al comienzo la disminucin de los eosinofilos y de los linfocitos circulantes puede ser de mayor magnitud que el aumento de los neutrofilos, de lo que resulta una disminucin efectiva del nmero total de leucocitos al desplazarse los neutrofilos desde la sangre a los tejidos afectados. En como actan los leucocitos frente a los procesos infecciosos en las diferentes especies? -Perros -Cerdos -caballos -bovinos Porque en situaciones de stress frente a los procesos infecciosos se liberan crticosteroides, stos lisan a los linfocitos y los eosinofilos, los caninos tienen ms neutrofilos que linfocitos por lo tanto actan ms vigorosamente, sin embargo el bovino tiene ms linfocitos que neutrofilos por lo tanto reaccionan todava menos que cualquiera de las especies es decir se ven ms afectados que ninguna especie porque disminuyen los linfocitos relativa o absolutamente en las fases iniciales de la infeccin. Preparacin del frotis sanguneo Las extensiones pueden hacerse de: a) sangre tomada directamente de la vena, es decir sin adicin de anticoagulante. b) sangre que lleva aadido anticoagulante (son preferible la heparina,EDTA, pero son ms caros, la mezcla de oxalatos amnico y potasico (Wintrobe) que es el ms barato. 24

El frotis sanguneo debe hacerse lo ms pronto posible. Esta fase debe emprenderse antes de los procedimientos restantes para evitar la ruptura de la serie roja, blanca y plaquetas. Tcnica 1-Seleccin de varias lminas o portaobjetos limpias, libres de grasa, cuyos extremos estn lisos no rotos. Frotelos como un pao seco y limpio para quitar cualquier polvo u otro material que haya cado. 2-coloquela en una de gradilla horizontal. 3-mezcla la muestra suavemente por inversin como mnimo 20 de veces. 4-coloquela una gota de tamao medio a unos 2 centmetros del extremo derecho de la lmina, equidistando de los bordes largos de la misma. 5-sostenga dicha lmina por su extremo izquierdo mediante el pulgar y el ndice de la mano izquierda, presionado hacia abajo. 6-tome con la mano derecha otra lmina, para con ella extender la sangre, sosteniendola por su extremidad derecha y colocandola sobre la otra a modo de formar un ngulo agudo entre ambas. 7-deslice la lmina encargada de extender hasta que entre en contacto con la gota de sangre. Detengase en este punto dejando que la sangre difunda por dicho ngulo, por capilaridad. Antes de que la gota alcance los bordes de la lmina horizontal desplace la lmina extensora hacia la izquierda en un movimiento rpido. Los frotis deben ser delgados y uniformes. Su espesor est determinado por: a) el tamao de la gota b) ngulo de la lmina extensora. Un ngulo agudo produce una extensin delgada. 8-cuando se ha verificado dicha extensin, es conveniente acelerar el secado mediante una corriente de aire o un poco de calor. El secado rpido de la pelcula evita la creacin (arrugamiento) y fragmentacin de los eritrocitos. 9-identifique la preparacin por la numeracin progresiva del laboratorio o por el nombre del cliente. Anotar en el extremo de la lmina (cabeza) mediante un lpiz grafito (tambin se puede identificar por medio de un lpiz diamante en el extremo superior o inferior de la lmina) estas partes de la extensin se denominan cabeza, cuerpo y cola. 10-es necesario "fijarla" cubrindola (o sumergiendola) con metanol absoluto durante cinco o 10 minutos, la tincin puede que as posponerse hasta tres das. Sin embargo, los mejores resultados se contienen si esta se realiza inmediatamente despus. Para teir la preparacin el colorante de Giensa consta de eosina-azur 1 y eosina-azur 2 en relacin 15: 4 azur 1 y 2 son nombres registrados; en el primero predomina azur b y en el segundo es una mezcla a partes iguales de azur 1 y azul de metileno. Los azures son colorantes bsicos y por lo tanto son atrados por la acidez nuclear (cido nucleico) mientras que la eosina es un colorante cido y es atrada por el citoplasma alcalino. Esta combinacin de colorantes bsicos y cidos, en forma de cloruros de los colorantes bsicos y sales de sodio o potasio de los colorantes cidos, se conoce como "colorantes neutros". La serie no granular (linfocitos y monocitos) tienen afinidad por el colorante bsico. La serie granular (neutrofilos segmentado, neutrofilos en banda (juveniles,stabb, eosinofilos, basfilos) tienen afinidad por el colorante cido. Coloracin de Giemsa. 1-llenar el vaso de coplin con colorantes de Giemsa, que se prepara cmo sigue: en cada ml de agua destilada neutra agregar una gota de colorantes lquido de Giemsa. El vaso de coplin grande contienen aprximadamente 60 ml y por lo tanto, a 60 ml de agua se agregan 60 gotas de colorantes. Tambin se puede preparar a 2 gotas por ml de agua neutra. 25

2-coloque el portaobjetos en el vaso de coplin con el colorantes y deje que ste acte 30 minutos (si son dos gotas), 60 minutos (si es una gota). Para todas las especies a excepcin de los caninos que son 20 minutos, pues el citoplasma de los neutrofilos y eosinofilos se tien oscuros y no se puede diferenciar bien. 3-lavar con agua corriente por espacio de 30 segundos por lo menos que el chorro de en la mano y se deslice hacia el portaobjetos, se escurre y se deja secar verticalmente (lavar con agua destilada neutra durante 30 segundos y dejar secar al aire verticalmente). 4-esperar a que seque completamente. 5-colocar sobre la platina del microscopio y examinar mediante el objetivo a seco dbil para ver si los leucocitos estn distribuidos correctamente y si la intensidad de la coloracin es adecuada. En la preparacin correctamente teida se aprecian fcilmente, tanto los eritrocitos como los ncleos de los leucocitos. Si la distribucin del colorante no es satisfactoria, se desecha la preparacin y se efecta otra nueva, variando la tcnica para subsanar el error. Examen microscopio del frotis sanguneo el examen de los glbulos sanguneos y su distribucin se inicia con objetivo de gran aumento. Los frotis sanguneos en portaobjetos deben recubrirse con una delgada pelcula de aceite de inmersin antes de que pueda hacerse un examen satisfactorio (1 gota de aceite de cedro, aceite de microscopia, etctera). El aceite se quita limpiando el portaobjetos con un papel o lienzo fino. Empleando el gran aumento, observe: a) grado de variacin del tamao, forma, color y la presencia de hemoparsitos (serie roja). b) nmero excesivamente elevado o bajo de leucocitos. c) presencia y distribucin de las plaquetas (los trombocitos). Es preferible hacer el recuento leucocitario con el objetivo de inmersin a gran aumento (100). Sin embargo, los lentes de inmersin son muy necesarios para observar los granulos azurofilo en los monocitos, las granulaciones txicas en los neutrofilos y ciertos parsitos sanguneos, como la babesia, anaplasma, theileria, etctera. Existen tres mtodos para seleccionar las zonas de cuenta diferencial de leucocitos en frotis sanguneos. El mtodo almacenado (c) da a los resultados ms exactos. Cuando se extiende la sangre en un portaobjetos, los neutrofilos tienden a correrse hacia los bordes del frotis, y los linfocitos a permanecer principalmente en el centro de este, en tanto que los monocitos y los eosinofilos tienden a repartirse uniformemente. El mtodo de almacenado para recuento de valores comparables a los del recuento leucocitario realizado por examen de todo el frotis sanguneo. Este mtodo consiste en hacer un recuento de tres campos horizontales en el borde, seguido de 2 campos hacia el centro (de modo que se observen tres campos verticales) luego de dos campos horizontales y despus de dos campos ms en direccin vertical para alcanzar el nuevo borde. Dibujo A) mtodo del borde recto b) mtodo de zig-zag c) mtodo de las almenas Diagrama de 1 de los sistemas ms correctos para analizar un frotis sanguneo. El mtodo de las almenas, asegura la visualizacin de una porcin representativa de la preparacin y de los resultados ms exactos. El frotis sanguneo es la valoracin de la serie roja, blanca y plaquetas (trombocitos). Valoracin de la serie roja. 1-tamao: normocitico, eritrocito cuyo dimetro est dentro de ms o menos el doble de la desviacin normal respecto al valor normal medio, determinado por el mismo mtodo en sangre de animales sanos de la misma especie. Bovino dimetro 4,5-8,0; perro 6.77.2; carnero 3.2-6.6 y Caballo 4.0-8.0. 26

microcitico, eritrocito cuyo dimetro es inferior al normal medio en ms del doble de la desviacin normal, determinada por el mismo mtodo en sangre de animales sanos de la misma especie. Macrocitico, eritrocitos cuyo dimetro excede del normal medio en ms del doble de la desviacin normal, determinada por el mismo mtodo en sangre de animales sanos de la misma especie. Est asociada con la carencia de vitamina B12, cido Folico o nicotinico. Anisocitosis, desigualdad en el tamao de las clulas especialmente de los glbulos rojos (en la sangre de los bovinos puede haber cierto grado de anisocitosis normal). Se llama as a la variacin del tamao de los hematies, mayor de la que debe esperarse, es decir algunos macrocitos y microcitos estn presentes junto a las clulas de tamao normal (normocitos). Se presentan cuando la mdula roja osea est liberando glbulos rojos en la sangre muy rpidamente al objeto de corregir la anemia. 2-forma: los hematies normales son biconcavos, es decir tienen una ligera depresin en cada lado. poiquilocitosis: cuando glbulos rojos (hematies) presentan variacin de su forma circular (biconcavos) usualmente recibe el nombre de poiquilocitosis. Dichas clulas tienen a menudo forma de pera (pesario). Se deben a: 1-produccin de hematies anormales en las anemias depresivas, ejemplo: debidas a leucemia, e insuficiencia renal crnica e intoxicacin crnica por plomo y 2-alteracin de los hematies circulantes (anemia hemolitica), (= crenacin) por hemoparsitos (babesia, anaplasma, theileria, ehrlichia, etctera) ejemplo: debido a la intoxicacin aguda por plomo. Acmulo de cartucho: puede verse en muchas extensiones sanguneas que los hematies tienden a agruparse en cartuchos. Cada cartucho se presenta como una pila de monedas. Leptocitos: 1-clulas de Diana de forma que nicamente el borde de las clulas se tie claramente, con el centro perforado. 2-cuerpos de inclusin: los llamados cuerpos de inclusin (Howell-Joli) son residuos de ADN del ncleo que aparecen como granulos esfricos de color azul-negro, de alrededor de un um de dimetro, por lo general cerca de la periferia de la clula. Se observa cuando la anemia est siendo corregida (es decir, una remisin) y tambin despus de la esplenectomia. La presencia de leptocitos, en ausencias de produccin activa de hematies, indica un proceso crnico de enfermedad. Se ven en las anemias depresivas (debidas a medicamentos o agentes infecciosos) y frecuentemente en las enfermedades hepticas, ejemplos: hepatitis e ictericia, y tras la esplenectomia (extraccin del baso). 3-color: los hematies en todas las especies son de color rosado y muestran frecuentemente un rea plida en el centro que representan la parte ms delgada de su biconcavidad. ste color es el resultado de la afinidad de la hemoglobina por la eosina en la tincin y que es denominado normocromacia. normocromacia: trminos que, aplicados al aspecto microscopico de las clulas de la serie eritrocitica, indica que las clulas estn completas de hemoglobina y no tienen material basfilo residual en el citoplasma, esto es que muestran caracteres normales de coloracin. hipocromacia: trminos relativos a clulas de la serie eritrocitica, que en el microscopio muestran disminucin importante en la densidad del color caracterstico de la hemoglobina, ya est la clula teida o no. Esto puede deberse a la delgadez de la clula, a disminucin en la concentracin de la hemoglobina o las dos causas como consecuencia de una capa ms delgada de hemoglobina teida, debido a una produccin deficiente de hemoglobina. Esto se debe a su vez generalmente a la deficiencia de hierro, pero puede deberse en ocasiones a la falta de vitamina B6 necesaria para la utilizacin del hierro. policromacia: trminos que, se aplican a las clulas de la serie eritrocitica que en el microscopio muestran colores caractersticos de la hemoglobina y del citoplasma 27

eritrocitico o basfilos. Somos clulas jvenes de la serie eritrocitica . La produccin intensificada de glbulos rojos se refleja en la aparicin de eritrocitos policromatofilos en la sangre perifrica. Basfilia: trminos que aplicados a clulas de la serie eritrocitica, observados en el microscopio, indica que la clula descrita no tiene el color caracterstico de la hemoglobina y su citoplasma muestra intensa afinidad por los colorantes bsicos (tinte azulado, de color humo azul, verde o gris azulado. 4-hemoparsitos: A) los piroplasmas (babesia, theileria) son protozoos redondeados, de forma de anillo, pera o bastoncillos como un ncleo. En preparaciones teida aparecen uniformemente azules oscuro, con el centro ms claro, o presentan 1 o varios granulos de cromatina en el plasma uniformemente teido de azul (especialmente por el mtodo de Giemsa). Suelen hallarse incluidos en hematies, a menudo en parejas (los piriformes, juntos por sus extremos afilados). Segn las formas y el tamao, especialmente segn sus propiedades biolgicas, se distinguen dos gneros: babesias y theileria, cuyas mltiples especies son transmitidas por las garrapatas. Los principales son: Babesia bovis (causante de la piroplasmosis bovina europea, pardo rojo, hematuria), B.bigemina (fiebre de tejas, hematuria), B. divergeus, B. daballi, B. (mutallia) equis (piroplasmosis equina),B. ovis, B. sergenti ( piroplasmosi