EVALUACION DE LA RESPUESTA EVALUACION DE LA RESPUESTA SUPEROVULATORIA UTILIZANDO LA ABLACION SUPEROVULATORIA UTILIZANDO LA ABLACION

FOLICULAR COMO ALTERNATIVA PARA LA FOLICULAR COMO ALTERNATIVA PARA LA INDUCCION DEL CRECIMIENTO DE UNA NUEVA INDUCCION DEL CRECIMIENTO DE UNA NUEVA ONDA FOLICULAR EN DONADORAS BRAHMAN.ONDA FOLICULAR EN DONADORAS BRAHMAN.

LEONARDO PÈREZ SANDOVAL MVZMVZ

Proyecto de tesis para obtener el grado académico d e:ESPECIALISTA EN REPRODUCCIÒN BOVINA

INSTITUTO DE REPRODUCCIÒN ANIMAL CÒRDOBA(IRAC)

YESCUELA PARA GRADUADOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÒRDOBA

(T.E) Y GANADO BRAHMAN EN COLOMBIA(T.E) Y GANADO BRAHMAN EN COLOMBIA

M.N 55 %I.A 38 %T.E 6 %FIV 1 %

ANIMALES BRAHMAN REGISTRADOS POR ASOCEBU 2009.

Año 2000 : 6 embriones viables / vaca / lavadoAño 2005 : 8 embriones viables / vaca / lavado500 vacas lavadas / año (2005)

Fuente: XIII Congreso mundial brahman, ASOCEBU, Colombia, 2006.

TOTAL 55.011

M.N. 43,32 % 23.829I.A. 37,5 % 20.626 T.E. 10,11 % 5.566FIV. 9,07 % 4.990

A partir del año 2005 se reporta un aumento signif icativo de la técnica de FIV.

Fuente: revista EL CEBU (ASOCEBU) Colombia,2010.

PATRON DE CRECIMIENTO FOLICULAR DURANTE PATRON DE CRECIMIENTO FOLICULAR DURANTE EL CICLO ESTRAL EN VACAS CEBUINASEL CICLO ESTRAL EN VACAS CEBUINAS

↑↑↑↑↑↑↑↑ P4; P4; ↓↓↓↓↓↓↓↓ LH LH ↑↑↑↑↑↑↑↑PGF2PGF2αα;;↓↓↓↓↓↓↓↓P4; P4; ↑↑↑↑↑↑↑↑ E2; E2; ↑↑↑↑↑↑↑↑LHLH

LHLH

P4P4E E E E S SS ST TT TR RR RO O O O

1ª ONDA 2ª ONDA 3ª ONDA1ª ONDA 2ª ONDA 3ª ONDA

DO D9 D16 D21....DO D9 D16 D21....Fuente: Dinámica folicular en bovinos, Pietro Sampa io Baruselli ..

↑↑↑↑↑↑↑↑ ↑↑↑↑↑↑↑↑ P4; P4; ↓↓↓↓↓↓↓↓ ↓↓↓↓↓↓↓↓ LH LH

FSHFSHSelecciónSelección

DominanciaDominancia

ReclutamientoReclutamiento

BENEFICIOS DE LA T.EBENEFICIOS DE LA T.E

-Comercio de genética superior.

-Multiplicar animales físicamente impedidos.

-Pruebas de progenie.

-Transporte de material genético.

-Conservar material genético

HORMONAS USADAS PARA SUPEROVULAR HORMONAS USADAS PARA SUPEROVULAR BOVINOSBOVINOS

FSHP - siux® - folltropin® –pluset®FSHO - ovagen®FSHB - bovina recombinante súper ovaFSHE - equina recombinantePMSG - ecg- folligon® – novormón® - antipmsgHMG - humana – pergovet®.HMG - humana – pergovet®.Mezcla FSH-P Y ECG

SUPEROVULACIONSUPEROVULACION

O.IO.I O.DO.D

FSHFSH

O.IO.I O.DO.D

FSHFSH

EVOLUCION DE LOS DIFERENTES PROTOCOLOS EVOLUCION DE LOS DIFERENTES PROTOCOLOS DE SPO EN BOVINOS, ATRAVES DEL TIEMPODE SPO EN BOVINOS, ATRAVES DEL TIEMPO

Fuente: Chávez Aldemar. Ovarios de una vaca brahm an superovulada con FSHp ( pluset ) .

PGF2α Detección celo

Día 0 Día 10 Día 7Día 0Día 13

FSH

PGF2α Detección celo Colecta y T.E

Detección celo I.A Colecta y T.E

Progesterona

B.E + P4 PGF2αDetección celo

SPO CON SINCRONIZACIONCON DE CELO BASESPO CON SINCRONIZACIONCON DE CELO BASE

SPO CON SINCRONIZACION DE LA ONDA FOLICULARSPO CON SINCRONIZACION DE LA ONDA FOLICULAR

Día 0 Día 4 Día 15Día 8Día 7

FSH

I.AProgesterona

Día 0 Día 4 Día 15Día 8Día 7

FSH

Detección celo Colecta y T.EProgesterona

B.E + P4 PGF2α

IATFIATF

Detección celo

SPO CON SINCRONIZACION DE LA ONDA FOLICULAR Y LA OV ULACIONSPO CON SINCRONIZACION DE LA ONDA FOLICULAR Y LA OV ULACION

LH

HISTORIAL DE RESPUESTA SUPEROVULATORIA EN HISTORIAL DE RESPUESTA SUPEROVULATORIA EN VACAS BRAHMAN Y CALIDAD DE EMBRIONES DE VACAS BRAHMAN Y CALIDAD DE EMBRIONES DE ACUERDO A LA HORMONA UTILIZADA. COLOMBIA.ACUERDO A LA HORMONA UTILIZADA. COLOMBIA.

Tratamiento N° deVacas

EstructurasColectadas

EmbrionesCalidad 1

EmbrionesCalidad 2

EmbrionesCalidad 3 UFOS

Pluset ® 24.930 12.400 4.960 4.320 3.250Pluset ®( 333 - 500 UI ) 2480 24.930

(10/vaca)12.400

(5/vaca)4.960

(2 / vaca)4.320

(1.7/ vaca)3.250

(1,3/vaca)

Folltropin ®( 200 mg ) 1250 10.350

(8.3/vaca)5.175

(4,1/vaca)3.105

(2,5 vaca)1.242

(1/ vaca)828

(0,7/vaca)

Ovagen ®( 8.8mg ) 270 2.480

(9 /vaca)1.485

(5,5 vaca)661

(2,4/vaca)204

(0,7/vaca)80

(0,3 vaca)

total 4000 37.710(9.4/vaca)

19.060(4,7/vaca)

8.726(2,1/vaca)

5.766(1,4 /vaca)

4.158(1/vaca)

Fuente: Chávez Aldemar. Colombia 2000 - 2010

METODOS PARA LA INDUCCION DE UNA NUEVA METODOS PARA LA INDUCCION DE UNA NUEVA ONDA FOLICULAR EN BOVINOSONDA FOLICULAR EN BOVINOS

Métodos hormonales:

Sales de estradiol:

1717ββββββββ estradiolestradiol

Benzoato de estradiolBenzoato de estradiol

Valerato de estradiolValerato de estradiolE17β,B.E, V.E, C.E.

Análogos GNRH

Métodos físicos:

Punción o ablación folicular

1 2 3 4 5 6 7 8 9 101 2 3 4 5 6 7 8 9 10Días post tratamientoDías post tratamiento

Valerato de estradiolValerato de estradiol

Cipionato de estradiolCipionato de estradiol

PROBLEMÁTICA DE LAS DONADORAS BRAHMAN PROBLEMÁTICA DE LAS DONADORAS BRAHMAN PARA T.E EN LOS CAMPOS COLOMBIANOSPARA T.E EN LOS CAMPOS COLOMBIANOS

Existen vacas cebú de 2, 3, y en ocasiones 4 ondas foliculares .

La respuesta no depende de la hormona utilizada, pero si, eléxito de la respuesta depende de iniciar la superovulación, en elmomento adecuado.

A pesar de los diferentes protocolos usados a través de losaños, no se observa un aumento significativo en el total deembriones viables por donante (IETS 6 embriones).

Alta incidencia de quistes, sobre estimulación y folículospersistentes al momento de la selección de la donadora y almomento del lavado.

¡ Ablación folicular como alternativa !

(limitante en campo: equipo de aspiración, transduc tor convexo)

OBJETIVOOBJETIVOEvaluar la respuesta superovulatoria en donadoras de la raza

HIPOTESISHIPOTESIS

El uso de la aspiración folicular como inductor de la ondafolicular para iniciar el tratamiento superovulatorio endonadoras de embriones de la raza Brahmán, resulta ensimilares o mejores resultados de la respuesta superovulat oria.

Evaluar la respuesta superovulatoria en donadoras de la razaBrahmán, utilizando la aspiración folicular como alternat iva en lainducción de la onda folicular, frente a un tratamientoconvencional, utilizando benzoato de estradiol como induc tor de laonda folicular.

Guía de aspiración con transductor lineal, pie medi cal

Fuente: Chávez Aldemar. Colombia ,2009

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

PGF GnRHIATF

PROTOCOLO TRATAMIENTO TESTIGOPROTOCOLO TRATAMIENTO TESTIGO

P4 CIDR

FSH

2mg B.E Recolección de embriones

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

OPU

FSH

PGF

P4 CIDR

GnRHIATF Recolección embriones

PROTOCOLO TRATAMIENTO EXPERIMENTALPROTOCOLO TRATAMIENTO EXPERIMENTAL

P4P4

B.E PGF2α

FSH

4 días

2- 12h

GnRH

TRATAMIENTO CONVENCIONALTRATAMIENTO CONVENCIONAL

DIA 0 DIA 4 DIA 7 DIA 9

4 días

2- 12h

mmmmOPUOPU

TRATAMIENTO ALTERNATIVOTRATAMIENTO ALTERNATIVO

QuistesQuistes

P4

FSH

4 días

GnRHPGF2α

Seleccion

Dominância

2424--36 horas post OPU36 horas post OPU

4 días

2- 12h

55

HISTORIAL Y METODOLOGIA DEL TRABAJOHISTORIAL Y METODOLOGIA DEL TRABAJO

MATERIALESMATERIALES

ANIMALESANIMALES

EQUIPO DE ULTRASONIDOEQUIPO DE ULTRASONIDO

TRATAMIENTO DE LAS DONANTESTRATAMIENTO DE LAS DONANTES

DIA Tratamiento testigo Tratamiento experimental

0 - (am)Ultrasonido iniciar solo con CL – CIDR + 2mg

B.EUltrasonido iniciar solo con CL + OPU folículos ≥ 5mm +

CIDR

1 - (am) Folltropin 2 ml

1 - (pm) Folltropin 2 ml

2 - (am) Folltropin 1,5 ml

PROTOCOLOS USADOS EN EL ESTUDIOPROTOCOLOS USADOS EN EL ESTUDIO

2 - (am) Folltropin 1,5 ml

2 - (pm) Folltropin 1,5 ml

3 - (am) Folltropin 1ml + 7 cc lutalyse

3 - (pm) Folltropin 1 ml + Lutalyse 3 ml retirar dispositivo

4 - (am) Folltropin 2 ml Folltropin 0,5 ml

4 - (pm) Folltropin 2 ml Folltropin 0,5 ml

5 - (am) Folltropin 1,5 ml Primera I.A + conceptal 5 cc

5 - (pm) Folltropin 1,5 ml Segunda I.A

6 - (am) Folltropin 1ml + 7 cc lutalyse Tercera I.A

6 - (pm) Folltropin 1 ml + Lutalyse 3 ml retirar dispositivo

7 - (am) Folltropin 0,5 ml

7 - (pm) Folltropin 0,5 ml

LAVADO DE LAS DONANTESLAVADO DE LAS DONANTES

CALIFICACION DE LOS EMBRIONESCALIFICACION DE LOS EMBRIONESCALIDADCALIDAD 11:: Excelente, o bueno. El 85% del material celular debe estar intacto dentr o de la masa celular.

no hay defectos visibles, blastómeros de color y estructura uniformes y simétricos, ZP intacta.

CALIDADCALIDAD 22:: Regular, Por lo menos el 50% del material celular debe permanecer int acto dentro de lamasa embrionaria, irregularidades moderadas del MCI, o del tamaño y color de células individuales.

CALIDADCALIDAD 33:: Malo, Por lo menos el 25% del material celular debe permanecer int acto dentro de lamasa embrionaria. irregularidades mayores del MCI, o del ta maño, color y densidad de célulasindividuales.

CALIDADCALIDAD 44:: Degenerados, son embriones de una célula, muertos o no viables, embrione sretardados asimétricos de hasta 8 células, con tendencia a l a desintegración como vacuolización y claradegeneración

ESTADO DE DESARROLLO EMBRIONARIO

N° ESTADO

1 NO FECUNDADO2 APARTIR DE 2 CELULAS3 MORULA TEMPRANA4 MORULA5 BLASTOCISTO INICIAL6 BLASTOCISTO7 BLASTOCISTO EXPANDIDO8 BLASTOCISTO ECLOSIONADO9 BLASTOCISTO ECLOSIONADO EXPANDIDO

RESULTADOS Y DISCUSIONRESULTADOS Y DISCUSION

Numero de animales: 20 Tratamiento testigo Tratamiento experimental

totales 235 233

promedio 11,7 11,6

Cantidad de estructuras colectadas durante el estud io para el tratamiento testigo y experimental.

Cantidad

Numero de animales: 20 Tratamiento testigo Tratamient o experimental

totales promedio totales promedio

Infértil 15 0.7 7 0.6Degenerado 43 2.1 25 1.2

Calidad 1 93 4.6 145 7.2Calidad 2 83 4.1 56 2.8Calidad 3 2 0.1 0 0

Transferibles * 176 8.8 201 10

Cantidad de estructuras colectadas durante el estudio, seg ún su calidad, para eltratamiento testigo y experimental.

114

147

180 E

CD

CD

DE

ABC

E

CD

CD

DE

ABC

ESTADISTICAESTADISTICA

Variable Calidad Trat N Medias D.E. Median as H p Y Cal 1 exp 20 0,70 0,26 0,72 86,00 <0,0001 Y Cal 1 Tes 20 0,36 0,37 0,30 Y Cal 2 exp 20 0,20 0,19 0,19 Y Cal 2 Tes 20 0,44 0,35 0,42 Y Cal 3 exp 20 0,00 0,00 0,00 Y Cal 3 Tes 20 0,01 0,04 0,00 Y Deg exp 20 0,07 0,12 0,00 Y Deg Tes 20 0,14 0,17 0,09 Y Inf exp 20 0,03 0,06 0,00 Y Inf Tes 20 0,04 0,07 0,00

Prueba de Kruskal Wallis

Gráfico de barras de los rangos medios del análisis de varianza

Cal3:expCal3:Tes

Inf:expInf:Tes

Deg:expDeg:Tes

Cal2:expCal1:Tes

Cal2:TesCal1:exp

48

81

AA

AB

ABC

A

AB

AA

AB

ABC

A

AB

Y Inf Tes 20 0,04 0,07 0,00

Se presentan las comparaciones de a pares de todas las combinaciones. Trat. Ranks Cal 3:exp 54,50 A Cal 3:Tes 58,50 A Inf:exp 65,83 A Inf:Tes 75,53 A B Deg:exp 82,05 A B Deg:Tes 104,53 B C Cal 2:exp 119,25 C D Cal 1:Tes 128,40 C D Cal 2:Tes 141,63 D E Cal 1:exp 174,80 E Medias con una letra común no son significativament e diferentes (p<= 0,05)

Se observo que hay diferencias significativascon un p � 0,0001 entre las diferentescombinaciones de tratamientos y calidades.

N° animales % Embriones transferibles Diferencias

20 Tratamiento testigo Tratamiento experimental Numéri ca %

Infértiles 8.5 3.4 8 5.1

PORCENTAJES DE VIABILIDAD, SEGÚN LA CALIDAD PORCENTAJES DE VIABILIDAD, SEGÚN LA CALIDAD DE LOS EMBRIONES Y SUS DIFERENCIAS DE LOS EMBRIONES Y SUS DIFERENCIAS

NUMERICAS Y DE % PARA LOS TRATAMIENTOSNUMERICAS Y DE % PARA LOS TRATAMIENTOS .

Degenerados 24.4 12.4 18 12

Calidad 1 52.8 72.1 52 19.3

Calidad 2 47.1 27.8 27 19.3

Calidad 3 1.1 0 2 1.1

Transferibles 74.8 86.2 25 11.4

Los valores numéricos y porcentuales, favorecen al tratamiento experimental

CONCLUCIONESCONCLUCIONES

El uso de la ablación folicular es tan efectiva como el B.Epara inducir el crecimiento de una nueva onda folicular.

La respuesta superovulatoria en vacas Brahmán resulta sermás constante, cuando se procede a la remoción física de losfolículos ≥ a 5mm de diámetro, dentro de un periodo de 24horas antes del inicio de la aplicación de la FSH.

El uso de la ablación folicular resulta en una mejora de lacantidad y calidad del total de estructuras viables, transf eriblescolectadas.

Se observo a nivel de campo una mejoría en la respuestaSPO, en especial en aquellos animales que en su historialreproductivo, presentaban una alta incidencia de quistesfoliculares.

VENTAJASVENTAJASAl mejorar la calidad de los embriones, se podrán mejorar los

porcentajes de preñez en programas comerciales de transfer encia deembriones.

Mejor tasa de aprovechamiento de los embriones de mayor cali dad,para realizar programas de crió preservación y almacenamien to deembriones congelados.

Posibilidad de iniciar el tratamiento superovulatorio, 24 horasdespués de realizada la ablación en el periodo de 8 a 12 días pos testro, o en cualquier momento del ciclo estral, suministran do unafuente extra de progesterona

No se requiere la utilización de un transductor convexo para O PU

Se puede hacer la ablación folicular con elementos rudiment ariosque permitan remover solo los folículos de mayor tamaño palp ables,sin la necesidad de ultrasonido.

EQUIPOS RUDIMENTARIOS ABLACION EQUIPOS RUDIMENTARIOS ABLACION

Fuente: Chávez Aldemar. Colombia ,2009

Fuente : Wagner Marques de lima, universidade feder al do rio grande do sul, 2007

RECOMENDACIONESRECOMENDACIONES

Seria de mucho beneficio al momento de realizar trabajossimilares usar semen de un mismo toro, o por lo menos con unamisma vaca en los 2 tratamientos, para eliminar la variabilidadmisma vaca en los 2 tratamientos, para eliminar la variabilidaddel toro, así como iniciar los dos tratamientos al mismo tiem po,alternando todos los animales en ambos tratamientos.

GRACIAS POR SU GRACIAS POR SU ATENCIONATENCION

N : 20 animales TESTIGO ABLACION

RESULTADOSRESULTADOS PROTOCOLOPROTOCOLO ABLACIONABLACION VsVsPROTOCOLOPROTOCOLO CONVENCIONAL,CONVENCIONAL, USANDOUSANDOHCGHCG COMOCOMO INDUCTORINDUCTOR DEDE OVULACIONOVULACION..

Embriones viables 10 12

Embriones calidad 1 4.6 6.8

% viabilidad 72% 89%

Total embriones viables 199 240

Fuente, Chaves, A. Colombia .2010

Numero de animales Tratamiento testigo Tratamiento experimental

5592/3 12 15

987/8 10 8

75/1 13 13

1164/04 15 13

125/5 3 4

274/21 3 10

908/5 8 5

Cantidad de estructuras colectadas durante el Cantidad de estructuras colectadas durante el estudio por animal para el tratamiento testigo y estudio por animal para el tratamiento testigo y experimental.experimental. CantidadCantidad

908/5 8 5

753/21 10 22

187/5 38 30

158/2 26 16

35/2 2 8

858/23 18 5

964/0 15 19

470/26 10 13

257/4 10 8

225/9 11 11

268 14 12

228 4 5

017/3 4 8

546/4 9 8

total 235 233

promedio 11,75 11,65

Infértil Degenerados Calidad 1 Calidad 2 Calidad 3 Trans feribles

Cantidad de estructuras colectadas durante el Cantidad de estructuras colectadas durante el estudio por animal, según su calidad, para el estudio por animal, según su calidad, para el

tratamiento testigo y experimental.tratamiento testigo y experimental.