keratinocyte differentiation in hyperproliferative epidermis: topical application of pparalpha...

7
Keratinocyte Differentiation in Hyperproliferative Epidermis: Topical Application of PPARa Activators Restores Tissue Homeostasis La Âszlo  G. Ko Èmu Èves,* Karen Hanley,* Mao-Qiang Man,* Peter M. Elias,Mary L. Williams,²³ and Kenneth R. Feingold²§¶ Departments of ²Dermatology, §Medicine, and ³Pediatrics, University of California San Francisco School of Medicine, and the *Dermatology and Medical Services, Department of Veterans Affairs Medical Center, San Francisco, California, U.S.A. We recently showed that topically applied PPARa activators promote epidermal differentiation in intact adult mouse skin. In this study we determined the effect of clo®brate and Wy-14,643, activators of PPARa, on hyperproliferative epidermis in hairless mice, induced either by repeated barrier abrogation (subacute model) or by essential fatty acid de®ciency (chronic model). The hyperproliferative epidermis was characterized by an increased number of prolif- erating cells expressing proliferating cell nuclear anti- gen. Topical treatment with PPARa activators resulted in a substantial decrease in epidermal hyper- plasia in both the subacute and chronic models of hyperproliferation. Following topical treatment, pro- liferating cell nuclear antigen-expressing cells were restricted to the basal layer, similar to normal epi- dermis. In hyperproliferative epidermis there was decreased expression of involucrin, pro®laggrin-®lag- grin, and loricrin as assayed by in situ hybridization and immunohistochemistry. Following topical treat- ment with PPAR activators staining for these mRNAs and proteins increased towards normal levels. Finally, topically applied clo®brate also increased apoptosis. This study demonstrates that topical PPAR activators have profound effects on epidermal gene expression in hyperproliferative skin disorders. Treatment with PPARa activators nor- malizes cell proliferation and promotes epidermal differentiation, correcting the cutaneous pathology. This study identi®es PPARa activators as potential skin therapeutic agents. Key words: clo®brate/epidermal hyperplasia/involucrin/loricrin/Wy-14,643. J Invest Dermatol 115:361±367, 2000 R egulation of keratinocyte differentiation is still not well understood (Fuchs, 1990; Eckert et al, 1997). Recently, however, it has become clear that ligands of certain nuclear hormone receptors (Mangelsdorf et al, 1995) that form heterodimers with retinoic- X-activated receptor (RXR) are regulators of keratinocyte differentiation. Treatment with ligands, i.e., activators of these receptors (such as vitamin D and retinoic acid), regulate keratinocyte differentiation (Eichner et al, 1996; Fisher and Voorhees, 1996; Kang et al, 1996; Hanley et al, 1997). Furthermore, transgenic mice expressing dominant-negative RXR or retinoic-acid-activated receptor in the epidermis display defective keratinocyte proliferation and differentiation (Imakado et al, 1995; Saitou et al, 1995; Feng et al, 1997). Peroxisome-proliferator-activated receptors (PPARs) are mem- bers of the nuclear hormone receptor superfamily that forms heterodimers with RXR (Isseman and Green, 1990; Schoonjans et al, 1996). The three PPAR isoforms, PPARa, PPARd, and PPARg, are expressed in cultured keratinocytes (Rivier et al, 1998). Moreover, PPARa and PPARd are expressed both in fetal and adult rodent epidermis (Braissant et al, 1996; Braissant and Wahli, 1998). Studies in our laboratory have demonstrated that ligands of PPARa (Schoonjans et al, 1996) stimulate differentiation and inhibit proliferation in cultured human keratinocytes (Hanley et al, 1997). We also showed that PPARa activators accelerate stratum corneum development when added to fetal rat skin explants (Hanley et al, 1997; Ko Èmu Èves et al, 1998). Moreover, we recently demonstrated that PPARa activators (clo®brate and Wy-14,643) modulate keratinocyte differentiation and gene expression in intact normal skin following topical application (Ko Èmu Èves et al, 2000). Topical treatment of adult mice with PPARa activators (clo®brate and Wy-14,643) resulted in a decrease in epidermal thickness and increased expression of structural proteins of the upper spinous/ granular layers (involucrin, pro®laggrin-®laggrin, loricrin). Furthermore, topically applied PPARa activators also increased apoptosis, decreased cell proliferation, and accelerated recovery of barrier function following acute barrier abrogation. PPARa activators did not elicit these epidermal responses in PPARa knockout mice, however (Lee et al, 1995), indicating that PPARa mediates these effects (Ko Èmu Èves et al, 2000). Furthermore, the epidermis of PPARa ±/± mice displayed slightly decreased expres- sion of involucrin, pro®laggrin-®laggrin, and loricrin, and also focal parakeratosis, indicative of impaired differentiation (Ko Èmu Èves et al, Manuscript received October 4, 1999; revised May 25, 2000; accepted for publication June 13, 2000. Reprint requests to: Dr. Kenneth R. Feingold, Metabolism Section (111F), Department of Veterans Affairs Medical Center, 4150 Clement Street, San Francisco, CA 94121. Email: [email protected] Abbreviations: EFAD, essential fatty acid de®ciency; PCNA, proliferat- ing cell nuclear antigen; PPAR, peroxisome-proliferator-activated recep- tor; RXR, retinoic X-activated receptor; TUNEL, TdT-mediated dUTP nick end-labeling. 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 361

Upload: kenneth-r

Post on 06-Jul-2016

213 views

Category:

Documents


1 download

TRANSCRIPT

���������� ��������������� �� ���������������� ���������������� ���������� �� ����� ��������� �������� ������ ����������

�������� � ��� ������ ���� �������� ��������� ����� ����� � �������� ���� � ����������� ��������� !����������"�#�������� �$ �"����������� �����%���� ��� ���������%�� &��������� �$ '���$����� (�� !���%��%� (%���� �$ ����%���� ��� ��� �"���������� ��������%�� (����%��� "�#������� �$ )������� *$$���� ����%�� '������ (�� !���%��%�� '���$������ &(*

�� ������ ������ ���� ������� ������� �������������� ������� ��������� ��������������� �� ���������� ����� ����� � ���� ���� �� ���������� �������� �� ��!"���� ��� �#$%&'%(& ��������� �������& �� ����������������� ��������� �� �����������& ������ ������ " �������� "������ �"��)�����*��"���� �����+ �� " ��������� ���� ��� ��!���*����� �����+� ��� ����������������� ������������ ��������,�� " �� �������� ���"�� �� ������#������) ���� �-�������) ������������) ��� ������ ����#)��� ������ ��������� ���� ����� ����������������� �� � ��"�������� ������� �� ��������� ����#������ �� "��� ��� ��"���� ��� ����� ������ �������������������� .�������) ������ ���������& ���#���������) ��� ������ ����)��#�-�������) ���� ������������� �� ��� "���� ����& ������� �� ������ ���#������� � ����������������� ��������� ����� ���

�������� �-�������� �� ���������& ���!��))���#!��)#)���& ��� ������� �� ������ " �� ���� �"����,�������� ������������������� .�������) ������ �����#���� ���� ���� ��������� �������) ��� �������/�� ��� �������� �������� ������� ������������� .�����& ������� ������� ��!"���� ������������ ���������� ���� ���� ������������ ���������� ���� ��������� ���� �������� ������ ����������� )��� �-�������� �� ����������������� �������������� ��������� ���� ����� ��������� ���#����,�� ��� ������������� ��� �������� ������������������������& �������) ��� �������� �������)����� ���� ������!�� ����� ��������� �� ������������� ���������� �)����� ��� ��� ���������������������������������������������������������� !����� "��������# ���$��%� &'''

�� ������ �$ +�������%��� ��$$����������� �� ����� ���,��� ��������� -! %��� .//01 �%+��� �� ��� .//23 �%������ ��,����� �� ��� 4�%��� %���� ���� ��������$ %������ � %���� ������� ��%�#���� -����������$�� ��� .//53 ���� $��� ������������ ,��� �������%�

6��%������� ��%�#��� - 6 3 ��� ��� ������ �$ +�������%�����$$����������� 7�������� ,��� �������� ��� �%�������� �$ �������%�#���� -� %� �� ������� " ��� �������% �%��3� ��� ����+�������%��� ��$$����������� -��%���� �� ��� .//81 !����� ���)�������� .//81 ��� �� ��� .//81 ������ �� ��� .//23! ���������� ���������% ��%� �9#������� ����������������� 6 �� �������%��%����%������� ��%�#��� �� ��� �#������� ���#�����$�%���� +�������%��� #����$������� ��� ��$$����������� -:��+����� ��� .//51 (���� �� ��� .//51 !��� �� ��� .//23����9������#����$��������%������� ��%�#���� -��* �3 ��� ����

4��� �$ ��� � %���� ������� ��%�#��� � #��$����� ���� $���������������� ,��� 6 -:������ ��� ������ .//01 (%����;���

�� ��� .//83� 7�� ����� ��* ���$����� ��* �� ��* �� �����* �� ��� �9#������ �� % �� ��� +�������%���� - ����� �� ��� .//<3��������� ��* � ��� ��* � ��� �9#������ 4��� �� $���� ����� �� ������ �#������� -=�������� �� ��� .//81 =�������� ��� ������.//<3 (� ���� �� � � ��4������� ���� ������������ ���� ������� �$��* � -(%����;��� �� ��� .//83 ���� ���� ��$$����������� �������4�� #����$������� �� % �� ��� � ��� +�������%���� -������ �� ���.//23 �� ���� ���,�� ���� ��* � �%�������� �%%������� ����� �%���� � ������#���� ,��� ����� �� $���� ��� �+�� �9#�����-������ �� ��� .//21 ��� ���� �� ��� .//<3 ��������� ,� ��%����������������� ���� ��* � �%�������� -%��>4���� ��� ���.?�8?@3��� ���� +�������%��� ��$$����������� ��� ���� �9#������� �� ����%������� �+�� $����,��� ��#�%�� �##��%����� -��� ���� �� ��� A00037�#�%�� ��������� �$ �� �� ��%� ,��� ��* � �%�������� -%��>4������� ���.?�8?@3 ��� ���� �� � ��%����� �� �#������� ���%+���� �����%������ �9#������� �$ ��� %� ��� #������� �$ ��� ##�� �#��� �B���� ��� ������ -����� %���� #��>��������>�������� ����%���3! ���������� ��#�%���� �##���� ��* � �%�������� ���� ��%�������#�#������ ��%������ %��� #����$�������� ��� �%%�������� ��%����� �$4������ $ �%���� $����,��� �% �� 4������ �4�������� ��* ��%�������� ��� ��� ���%�� ����� �#������� ���#����� �� ��* �+��%+� � ��%�� ��,���� -��� �� ��� .//53� ����%����� ���� ��* ��������� ����� �$$�%�� -��� ���� �� ��� A0003 ! ���������� ����#������� �$ ��* �CBC ��%� ���#����� �������� ��%������ �9#�������� �$ ����� %���� #��>��������>�������� ��� ����%���� ��� ���� $�%��#���+��������� ����%����� �$ ��#����� ��$$����������� -��� ���� �� ���

��� �%��#� ��%����� D%��4�� ?� .///1 ������� ��� A5� A0001 �%%�#���$�� # 4��%����� E �� .@� A000 �#���� ��F ���� ��G "� ������ !�������� ����4����� (�%����

-...!3� "�#������� �$ )������� *$$���� ����%�� '������ ?.50 '������(������ (�� !���%��%�� '* /?.A. �����G +$����H���� %�$�� *44����������G �!*"� ��������� $���� �%�� ��>%���%�1 �'I*� #����$�����

��� %��� � %���� �������1 ��* � #���9������#����$��������%������� ��%�#����1 6 � �������% 6��%������� ��%�#���1 7&I��� 7�7��������� �&7���%+ ������4�����

00AA�A0A6B00BJ.500 K '�#������ � A000 4� 7�� (�%���� $�� :������������ "����������� :�%

('$

A0003 7���� �4���������� � ����� ���� ��* � �%�������� �� ��� �$��� #���,��� ���� ��� ���� +�������%��� ��$$����������� �� �������#�������7�� ��� �$ ���� �� �� ,�� �� ��������� ,������ ��* �

�%�������� ��� ����� +�������%��� ��$$����������� �� #��������%�#�������� %����%������� 4� �4������ %��� ��$$����������� �����#��#����$������� �� ���, ���� ���� ��#�%�� �##��%������ �$��* � �%��������� %��>4���� ��� ���.?�8?@� ��� �� �� � �������������� �$ ���� �9#�������� �������� ,��� � ������������� �$ ����#������� ���#������� 4��� �� � 4�% �� ��� %�����% ������ �$��#��#����$������� �+�� 7���� ��� ��� � ����� ���� ��* � �%��������#��� � ���� �� ����������� ���� � ����������� 4� ��� ������ %���#����$�������� +�������%��� ��$$������������ ��� �#�#����� �� ����#�������

�*7� :*�( *I" ��7�D"(

���������� ��� ������ ����������� �� ��� �� �� ���� �������� ��%�-(�������� ������� '*� �� '������ ����� ����������� �*3 �� ���� �� ����������� $���� �%�� ��>%���%� -�!*"3 ��%� ,��� #��� %�� 4� $������ �����%�����% ��������� $���� �%�� $��� ���� -"����� =��������� �*3 �$��� ,������$�� A �� @�� -��� �� ��� .//@3 ( 4�% �� �#������� ��#��#����$������� ,����� %�� 4� ��#����� 4������ �4�������� ,��� �%����� ��������� -"���� �� ���.//83 *������ ,��� ������� �,�%� � ��� ,��� �%����� ���� ���������#������� ,���� ���� ���%��� <C.0�� #�� %�A #�� � -���� ��� ��$� � �� >�� ��$$����� �#���3 �� ���������� ,��� �� ���%�������% ,������������ -���%�� ����������� �*3� $�� 2 � -"���� �� ��� .//83 7� ���� ����$$�%� �$ ��* � �%�������� �� ��� ��#��#����$������� �+��� �!*" ���%������������� ��%� ,��� ������� �� ��� ���� �$ ��� L��+ ,��� ?0�� #��%�A �$ .�� %��>4���� -(����� (� �� ��� �D3 �� ,��� 05�� ���.?�8?@-(����3� ��������� �� #��#����� ���%��G������� -2G@ �����3 *������ ,���������� �,�%� � ���� $�� @ � '������ ������� ,��� ������� ,��� ����%�� ����7��� � ���#��� ,��� %����%��� $�� ���������� �� �� ��4����������� ����� �������%�������� �� ���%��4�� ������� -��� ���� �� ��� .//<3

����������������� *$>�����# ��>�� ��44�� ����4����� �#�%�>% $���� �� ����� %���� #��>��������>�������� ��� ����%��� ,��� $��� =�4'�- �%������ '*31 �$>�����# ��>�� 4����������� ���� ������44�� :�� ,��# �%����� $��� )�%��� -= ��������� '*3 7�� ��� �������%����%���������� ,�� ����%��� 4� *='�#���9����� -)�%���3 ��� �������4��������� 4������ -)�%���3 �� ���%��4�� ������� -��� ���� �� ��� .//<3 D������� �$

��� >��� ����4����� �� ��% 4����� ,��� ��� � 4������ ��� ���� ��� ���� �� ��������� ���,��� ��� �#�%�>%��� �$ ��� ����%����

�������� �� ������������) ���� 7�� 4����������� �����#����$������� %���� %���� ������� �� �� ����%����� ����4��� ,�� $��� '��7�� ��4���������-= ��������� '*3 7�� 4������ �$ ���� ����4��� ,�� ����%��� 4� *������*��9� -����% ��� ���4��� � ����� D 3� $����,�� 4� (���9 ����� � %����%� ��������� (�%����� ,��� �������� ,��� ���%� -"���>���� :�3 7'( �������%������ %��$�%�� ��%���%�#�

!� ���� �"����,����� "���9���������4���� I* #��4�� �� ����%�����%��� -@� ���%����� ������� A00 4����3 -������ �� ��� .//03 ���#��>������� -%����� ������� @00 4����3 -M �#� �� ��� ./</3 � I*� ,������� $��� ���������� %"I* ��F ��%�� -� ��$� $��� ( M �#�� I:�3 ������������ � ##���� 4� =������������������ -:������#����� :I3 �� ����4���������� ,�� #��$����� �� ���%��4�� ������� -��� ���� �� ��� .//<3��4���������� �$ ":����4���� #��4�� �� ��� �������� � � I* ,������%��� 4� �����":����+����� #���#������ -=������������������3� ����5�4�����?�%������@�������� #���#����B�������������� � 4� � � 4��������4���������� ,��� ":����4���� ����� %������ #��4��� �������� �$��������� #��4�� $��� ��� ��4����������� �� ��% 4����� ,��� � 4���������� ��� ���� �� �� ��������

�������� �� ��������� " ���#�������� �0�� ��� ���#��"����)*�0/�1+ ���� "�#���$>����� ��%����� ,��� ������� >��� ,��� 05N���� � �����4���������� $�� @0��� 7&I�� ����� ,�� %������ � � ������� �� �� %��� ����� ����%���� +�� $��� =������������������� $����,������ ����� %����� �$ ��� ��� $�%� ��� !����,��� ��� 7&I�� ���%���� �����%����� ,��� %� ����������� ,��� (���9 D����� -����% ��� ���4���� ����� D 3 � %���� ����� 7�� ��%��#������� �$ !:7'���4���� �&7� ,����� ������ ,��� � ���%� -"���>���� :�3 7'( �������%������ %��$�%����%���%�#�

2������ ��� ���)��) �#������� ���%+���� ,�� ���� ��� ��������9���� ��� ����� ������� ��%����� ���� � A0� �4;�%���� ��� ���% ��� ��%������� ->��� �����>%����� .00�3 �#������� ���%+���� ,����>��� �� ��� ������%� 4��,��� ��� 4������� ������ ��� ��� �#�%�� � �$�%��$ ��� ##������ � %������ +�������%����� ��� ��� 4����� 4��,��� �������� � ���� ��� � ��� ����� � %���� � ��������#�� ,��� ��+�� ,��� �O���� *9��#��� ��%���%�#� �� ���+ - �%������� IM3 ���� .00 #����>�� ������� ������ -?� 5 ��%���3 ,��� ��������� ,��� � L��4�� �%��������� �����4��� ���� ��������# @0 -*��4� (������� �� ����� )��,� '*3�� � ��%������ �@ #���$��� -*##��� ' #������� '*3

.�)��� $� ������ �� ������ ��!"���� �����#���� �� ��������� ��������)� �#���������#��#����$������� ,�� #��� %�� 4� �!*" ���� ��4� ��#����� 4������ ���� #���� �� �� �� ����������%� 7�� ������� ,��� ������� �,�%� � ��� ,�������%�� �� ,��� %��>4���� $�� @ � 7�� ������������ ���� �� � �����>%��� ��%����� �� �#����������%+���� -�� ��"�� $�� F ���������� ����3 �������9���� ��� ����� �������� � ��� ���G .0��

('3 D� �&� )�( �� �� 7�� ED& I*� D! :I)�(7:�*7:)� "� �*7D�D�M

4�������� "��� ��� #�������� �� ���� � (�� (�������%�� ��$$����%�� ,������������� 4� ��� (� ����P� � ���� ���� �9%�� -��%����$�� ������� �*3

�(&�7(

������ ��������� ���� ����� ��������� ���������������� �������� �� ������ ������ �� ����#������������� ���� 7� ��������� ��� �$$�%�� �$ ��* ��%�������� �� ��#��#����$������� �+��� ,� ��#����� �,� ,����%����%������� � ���� ������ �$ �#������� ��#��#����$������� -����� ��� .//@1 "���� �� ��� .//83 :� ��� � 4�% �� ����� �$ �#���������#��#����$������� -"���� �� ��� .//83� ��#����� 4������ �4����������,�%� � ��� $�� 2 �� ��� �� �� <0N ��%����� �� �#������� ���%+����%��#���� ,��� ��������� %������ ������� -.�) $� ��"�� 3(��������� ,��� �������� ��%� ,��� +�#� �� �� ��������� $���� �%��$��� ���� $�� A�� -��� �� ��� .//@3� ��� �#������� ���%+���� �� 4���-.�) $� ��"�� 3 7�� �#������� �� 4��� �$ ����� ������ �������#����� �9������� �%�������� ��� ��#��+�������� -.�) $3!����,��� ��#�%�� ���������� ,��� %��>4���� -.�) $3 �� ���.?�8?@ -��� ���,�3 ,� ����� � � 4�������� ��%����� �� �#����������%+���� �� 4��� ������ �$ �#������� ��#��#����$������� I���%����% %���� ,��� ���� 4� ���������% ���� ����� �$ ��� ���� �����,����� $����,��� ����� ���������� ������� �� ��� � 4�% ������� � %��#���� ��%����� ,�� �4������ -��"�� 3� ��� �#��������� ��� �!*" ��%� �������� �������� ���%+�� ���� ��� ������

%������ ���#��� � 88N ��%����� �� �#������� ���%+���� -��"�� 3�#������� ���%+���� ��� ��� %����� �� ��� �������� ���� �$%��>4������������ ������� ��� �� ��� ��� ��$$�� $��� ����%������������ �������� ��#��#����$������� �+�� -��"�� 3� � �������� ����%��>4���� �9���� ��� �$$�%�� ��%����

������ ����� ��������� ������� ��� ������������� ������������������� ���� �� ��9� ���������� ,������ �����%����� �� �#������� ��#��#����� %� �� ��� �� $��� ��%������ %���#����$������� �����$������� %���� ,��� ������>�� ,��� �� ����4����#�%�>% $�� #����$������� %��� � %���� ������� -�'I*3 :� ������%������ �������� ��%� �+�� �'I*�#������� %���� ,��� %��>��� �� ���4���� ����� -.�) 3(3 :� %�������� �� �9#������ �$ #����$�������+�������%���� ,�� ���� �� 4��� � 4�% �� ��� �% ����#��#����$������� �#������� *��"�� � .�)� 3)� *3 :� 4�����#��#����$������� ������ ��#�%�� %��>4���� ��������� ��%��������� � �4�� �$ �'I*�#������� %���� -��"�� � .�)� 3+� ,3��������� �'I*�#������� %���� ,��� $� �� ������ �� ��� 4��������� $����,��� ��#�%�� %��>4���� ��������� -.�)� 3+� ,3 (��������� ��� ,��� ���� $����,��� ��#�%�� ���.?�8?@ ��������� -.�)� 3"�-3 7���� �4���������� ����%��� ���� ��#�%���� �##���� ��* ��%�������� ��,���� ���� %��� #����$������� �� ��#��#����$��������#������� ��� ������� � ������ %��� #����$������� #������ ���� ��������%��� �� ��� 4���� %��� �����

������ ����� �������� ��������� ��������� ��������#�� ��������������� �� ����������������� ���� 7�� �������������4 ���� �$ #����$������� %���� �� � ���� ��#��#����$��������#������� �4������ �� ���� �� �� � ������� ���� +�������%�����$$����������� %� �� 4� ���� �4�� 7����$���� ,� ��9����������� ��� �9#������� �$ ����� %����%�������% $�� ��������+�������%��� ��$$����������� -! %��� .//01 �%+��� �� ��� .//23:���� %���� >�������� ��� ����%��� � I* ��� #������ ��� ��%�������� ��� ##�� ������ �$ �#������� �� ������ �������� ��%� 7����9#������� ��� ������4 ���� #������� ��,����� ,�� ������� ����#��#����$������� �#������� ������� ����� %��� �������� ,������ �� ��� ##�� ������ -.�)� ((& -3� #��>��������>�������-.�)� ()& .3 ��� ����%��� -.�)� (+& !3 ������� ,��+�� �� �����#��#����$������� �#�������� ��#�%����� �� �!*" ��%� !����,�����#�%�� %��>4���� ��������� ����� %��� �������� ��%������ ����,����� ������� �� +�������%���� -.�)� ("& 3� ��� ��� ���� ��� ��� �� �$��� �������� ,�� ���� �4��� � ��������� �������� 4��� $��#��>��������>������� -.�)� (*& �3 ��� ����%��� -.�)� (,& /3��%������ �� ��� ���� ��� ����� $����,��� %��>4���� ���������� ������ �������� ��������� ,�� ������� �� ���� �4������ �� %������ ����������%� �#�������I�9� ,� ��� �� �� ��4���������� �� ������� ��� %������ ��

#��>������� ��� ����%��� ���� �9#������� ������� 4��� #��>����

.�)��� 3� ������ �� ������ ��* � �%���������������� �� %��� #����$������� �� ��#��#����$�������� �+�� �����$������� %���� ,��� ����%��� �� ������� %������ �������� ��%� -�3� �� ����#��#����$������� �+�� #��� %�� 4� �!*" ����-�� �� �3� �� 4� ��#����� 4������ ���� #���� -�� ���3 �� �� �� �������� ��%� 7�� ������� ,��� �������� �,�%� � ��� ,��� ����%�� -�� �3� %��>4���� -���3� �� ���.?�8?@ -�� �3 $�� @ � �����$�������%���� ,��� ������>�� 4� ��� �������%����%�� �����%���� �$ � %����#����$���������#�%�>% ���+����'I* 7�� ��%����� ,��� %� ����������� ,���(���9 ����� �� ����%� � %��� -����� %����3 �����$�������� %���� ��� ������>�� 4� �����, � %���� � ���� �� �$ �������� ����� ��� ��� ������� � ��� ���G50��

��"�� � ������ ���������� �� � ����� ��������*��!"����+ �������� ��������� �������� ��

����������������� ���������

*������ 7�������� �#������� ���%+���� -��3�

I����� &�������� -� Q 53 .?� A�!*" &�������� -� Q @3 50� 5

)���%�� -� Q ?3 5@� ? .00N'��>4���� -� Q 83 AA� 5� ??N&�������� ���� -� Q 83 50� A

�#����� 4���������� #���� &�������� -� Q @3 @.� @

)���%�� -� Q ?3 @@� A .00N'��>4���� -� Q ?3 4.8� 8� 5AN&�������� ���� -� Q ?3 @0� 5

�"��� ��� #�������� �� ���� � (�� 7�� ����� ������ �$ ��� �#������� �������������� 4��,��� 8 ��� .5�� $�� ��%� ���#��

�(����>%����� ��$$����� -#R 000.3 �� %��#���� ,��� ��� ����%���������� ��%�

)D� ..5� ID @ (��7��=� A000 ��*� *'7:)*7D ( �(7D � 7:((&� �D��D(7*(:( ('(

���� � I* -.�)� %(& *3 ��� ����%��� � I* -.�)� %)& ,3 ,���#������ �� ��� ##�� ������ �$ ��� ����� � ���� ��� � ����#��#����$������� �#�������� ���� �������� ,�� ,��+� #����% �����$�� ����%���� %��#���� ,��� ������ �#������� !����,��� ��#�%��%��>4���� ��������� � ���� #��9���� �9#������� �$ ����� ����� ,���4������ -.�)� %+� "& -� .3 7�� �������� ��������� �� ������� ��%���� ,�� ���� ��%������ �������� ��#�%����� $�� #��>������� � I*-.�) %( � %+� ��� %* � %-3� � �������� ��%������ �9#������� �$����� ����� 7���� ��� ��� ���, ���� ��#�%�� %��>4���� ������������������� ��� ������4 ���� �$ ����� %���� #��>��������>�������� �������%��� #�������� ��� ��%������ #��>������� ��� ����%��� �����9#������� �� 4��� ������ �$ �#������� ��#��#����$�������

������ ����� ��������� ������� ��������� �� ����#������������� ��������� *#�#����� #���� � ��;�� ���� �� ���

����������� �$ ��; ��� �� �4������ %���� �� ����� ���� �� �� ,��� �� ����� �#������� -���+� ��� ����+�,�+�� .//@3 �� ��� ���7&I�� ������� ,��%� ����%�� "I* $������������� � �������+ �$�#�#������ �� ������$� �#�#����% %���� �� ��� ��#��#����$������� �+���� ��� ������ :� ��� �#������� �$ �������� ������ �������� ��%��#�#����% %���� ,��� �%%��������� ��%� ������ -.�) 5(3 ��+�,�����#�#����% %���� ,��� $� �� �� ��� ����� � ���� ��� ������� �%���� � �����$�%� �� ��� ��#��#����$������� �#������� �$ �!*"��%� -.�) 5)3 �� $����,��� ��#����� 4������ �4�������� -.�) 5*37�� � �4�� �$ 7&I���#������� %���� ��%������ $����,��� ��#�%��%��>4���� -.�)� 5+& ,3 �� ���.?�8?@ -.�)� 5"& -3 �������������,���� ��������� �#�#����% %���� ��� ���� �%% ���� �� �������� � ���� ��� ������� � %���� � �����$�%�� 4 � ,�����%� ������ �� ��� ���#�� �#������� ������ -.�)� 5+& "3 ��� ����� ������ 7���� �4���������� ����%��� � ������ ��%����� ���#�#����� $����,��� ��#�%�� %��>4���� ��������� �$ �% �� ���%�����% ��#��#����$������� �+��

":('&((:DI

(������ �� ���� ���� ���,� ���� ��� #������ �$ +�������%�����$$����������� �� �4������ �� ��#��#����$������� �#������� ��� ��� �+�� :� #��������� � ��#��#����$������� �+�� �������� %���#����$������� �� ��%������ ,������ ��� ����� �$ �#������� ��$$������������ �� ������� -=������ �� ��� .//A3 7�� � I* ��� #������������ $�� ������� ����� -� %� �� +������ .5� >�������� ��� ����%���3�,��%� ��� �������� �9#������ �� ���������� ��$$����������� ���� ���+�������%����� ��� ��%������ -������4� �� ��� .//.1 =������ �� ���.//A3 ��������� ��� ���� �9#������� #������ �$ ������� �������� .-I���� �� �� ��� .//@3 ��� ����� %��� -:������M������� ���:� +�� .//53 �� ���� ���� �4��� ��� ����� �� �4������ %����>��������#� $�������� -:������M������� ��� :� +�� .//53! ���������� �� ���������% ��%� �9#������� � � ���� ����������%�������� ,��%� �9��4�� �#������� ��#��#������ ��� �9#������� �$>������� ��� ����%��� ��%������ -*���� �� ��� .//83 *� ,� ����

��"�� � ������ ���������� �� � ����� ��������*��!"����+ �������� ��� ������������� �� �����������������

���������

*������ 7�������� �'I*�#������� %���� #�� ���

I����� &�������� -� Q 53 <0� .A�!*" )���%�� -� Q ?3 .8?� .. .00N

'��>4���� -� Q 83 22� .5�� ?2N �#����� 4���������� #���� )���%�� -� Q ?3 .50� A. .00N

'��>4���� -� Q ?3 /<� .8�� 85N

�"��� ��� #�������� �� ���� � �4�� �$ �'I*�#������� %���� � (�� #�� ��7�� ����� ������ �$ ��� �#������� �������� ������ 4��,��� .0 ��� .8�� $�� ��%����#��

�(����>%����� ��$$����� -#R 000.3 �� %��#���� �� ����%���������� %������ I� �����>%��� ��$$����%� -# S 00.3 �� %��#���� �� ������ �������� %������

.�)��� (� ������ �� ������ ��!"���� �����#���� �� ��� �����,����� �� ���������& ���!#��))���#!��))���& ��� ������� �������� ������������������� ����� �#������� ��#��#�����$������� ,�� #��� %�� 4� �!*" ���� -���3 �� 4���#����� 4������ ���� #���� -���3 �� �� �� ����������%� 7�� ������� ,��� ���� ������� �,�%� � ���,��� ����%�� -���� ���3 �� ,��� %��>4���� -�������3 $�� @ � �� �� ����� %��� -�� �� �� �3� #��>���������>������� -�� �� �� �3� ��� ����%��� -�� ���� �3 ,��� ����%��� ���� �#�%�>% ����4����� !��������� �$ ��� ��� ����%��������� ��� �������� ������ !� � ��� ���G A0��

('% D� �&� )�( �� �� 7�� ED& I*� D! :I)�(7:�*7:)� "� �*7D�D�M

���%��4�� �� ���� �� ��� �� �,� �� �� ������ �$ #��������%�#������� ��#��#����$�������� ��� ��� %�� 4� �!*" �� 4� ��#�����4������ �4��������� ������� $��� ��� �$ �4������ �#������� +��������%��� ��$$����������� -��%������ %��� #����$�������� ��%������� I* ������ $�� #��>������� ��� ����%���3 ���� �%% � *� �����$��� ��� ��� �������+� �$ � ��� ��#��#����$������� �+�� ��������� %� �� #��������� ����� � ���� ������ ��� 4� ��$ � �� �������#��������% ��%������� �� ��#��#����$������� �+�� ��������� :���� �� 4� ��%�������� ��,����� ���� ����� � ���� ������ �� ���#��$�%��� ����% #�������� �� ����� � ��� ��������� :� ����� �� ����,� ���� ���%��� �� �� �,� ������ ������ ���� ��� ��+��� �� ������#�#������� ��#��#����$������� 4� ��$$����� ��%������� :� �� ��#������ 4� �� ����� �,� ��$$����� #��������% ������ ��� �4������������#����� �� ���� #�#�� ,��� 4� ���� ��+��� �� 4� �##��%�4�� �� � ������������7��� �� �� �9#���� ��� ���� �$ ��* � �� �+�� 4������ �� ,�

����������� ���� ���� �#������� ��#��#����$������� %�� 4�%����%��� 4� ��#�%�� �##��%����� �$ %��>4���� �� �M.?�8?@���* � �%�������� -:������ ��� ������ .//01 (%����;��� �� ���.//83 7�#�%�� ��������� ,��� ��* � �%�������� ��� ����

��%������ %��� #����$������� �� ��#��#����$������� �#������� 4 ���%������ �����$�������� �$ ��� ���������� ��$$���������� +��������%���� ���� %�����%����� �� ,�������� 4� ��� �������� �9#������� �$����� %���� >�������� ��� ����%��� ����� ��� 4� �� ��%��������%����%� �$ �#�#����� *#�#����� ,�� ��� %�� �� ��� ������ �$ ����#������� 4� ��#�%�� ��������� ,��� ��* � �%�������� ������������ #��� �$ #����$������� %���� ��� ���� �� ������� ��� $����,�����#�%�� ��* � �%������� ���������� �'I*�#������� %���� ,��������� �9%� ������ ������%��� �� 4���� +�������%���� 7���� #����� �%�� %������ �� �'I* ��� ���������� ��� #��4�4�� � � ����� ����� ���$���$� �$ ����� #������� '�%���� -��%������� 4� ����'I* ����4���3 ��� ��#���� �������� �� %���� %���� #����$�������-��� �� ��� .//83 '��>4���� ��������� ���� ��%������ ����9#������� �$ ����� ��F ���� $�� �������� +�������%��� ��$$������������ -����� %���� #��>�������� ��� ����%���3 :������������� ��,�������� %��>4�������� %�� %������ ,��� ���� #���� �%�� �� � I*������ ���� �� #������ ������ 7���� �4���������� ����%��� ����%��������� ��� ������ �$ � ��� �$ ����� -��%� ���� ����� %����>�������� ��� ����%���3 �� �#�%�>%���� ��� ����� ,��� ��* ��%�������� 7���� >������ ���� � ����� ���� ��� %������ ��� %�� 4�

.�)��� %� ������ �� ������ ��!"���� �����#���� �� ��� �-�������� �� ���!��))��� ���������� )���� ������� " �� ���� �"����,�#����� �#������� ��#��#����$������� ,�� #��� %��4� �!*" ���� -���3 �� 4� ��#����� 4������ ����� #���� -���3 7�� ������� ,��� ���� ��������,�%� � ��� ,��� ����%�� -�� �� �� �3 �� ,��� %���>4���� -�� �� �� �3 $�� @ � ���>������� -�� ���� �3 ��� ����%��� � I* -�� �� �� �3 ,�� �����%��� ,��� ����9���������4���� ��4�#��4�� � ������G A0��

)D� ..5� ID @ (��7��=� A000 ��*� *'7:)*7D ( �(7D � 7:((&� �D��D(7*(:( ('5

��* � �%�������� ��� #��4�4�� ��� � � �� ����#�%�>%� ����4���%�$$�%��� 4 � ��� �������� 4� ��� ��� ������>�� ��* �����#������������ 7�� %��>4�������� %�� %������ �� ���� �9#�������%� #��� ,��� ��� ��%������ �#�#����� ��� ���� �� � ���+�� ��%������� �#������� ���%+���� �� � %����F ��%� �$ ��%������ %��� ���� ������!���� �%���� #����% ����� #��� ���� ����� $���� �%���� ��� ������� �$

��* � -(%����;��� �� ��� .//83 D�� %� �� �����$��� #��� �������� � ��%����� �� ��������� $���� �%��� �� ��� �!*" ��%� ��� ��� �� ���� %���� �$ ������� $�� ��* �� �����4� ������� �� ��#��#����$�������� 7��� �� ���� ���+��� �� 4� ��� %���� ��,����� 4�%� �� � ��� ���� �$ ��* ����>%���� ��%� ���� ��� ������������ ���#��#����$������� #������#� -��� ���� �� ��� A0003 *���������������� ��>%���%� �$ $���� �%��� %� �� ��� �9#���� ��� �$$�%� �$ ��* ��%�������� �� ����������� ��� �#������� �$ ������� �� ,��%� ���#�������� ,�� ��� %�� 4� ��#����� 4������ �4��������:� �� ������� �� �� -��� ���� �� ��� A0003 ,� $� �� ���� ��#�%��

%��>4���� ��������� ��%������ %��� #����$������� ��� ��%�������#�#����� �� ������ �#������� ��������� ��* � ������� ����4��%��� #����$������� �� � ��� % �� ��� +�������%���� -������ �� ���.//<3 ��� 4����� %��%�� %���� -������� �� ��� .//<3 7����$���� ���������� $���� �%��� ��� ����� ��* � ������� ���� � %��������% �$$�%�-����� �� ��� .//81 )�� ��� �� ���� .///3� ��� ��� %� �#�#�����-'������� �� ��� .//<3 :� �9������#���% ���� �� -��%� ���� ����#�������3 ��* � �%�������� ��� ����� ���� � ����������� :�%�������� �� ������ ����� #�������� ��������� ,��� ��* ��%�������� ��� ��� �� ��#���% %��%���������� �� � %����F ��%� �$��%������ %��� #����$������� ��� � ##������ �#�#����� -=���� �� ���.//?1 �������� �� ��� .//<3 7���� �##����� �$$�%�� �$ ��* �������� �� ��#���% ��� �����#���% ���� �� � ����� ��� �9�����%� �$���� ���#�%�>% ��* �����#���� ��������� ,��%� ��� ���� %���#����$������� ��� �#�#����� �� � %���� ���B�� ��$$�������������#�%�>%������7�� �#������� �� � %����� � ��� ����,��� ���� � �� ,��%�

����������� �� ���������� 4� � ������� ��� ����� 4����%� 4��,���%��� #����$�������� %��� ��$$������������ ��� #��������� %��� ����������$������� %����� ���������� ��$$����������� %����� ��� �#�#����%%���� ��� �#������� ��� ���#������ ��#������ �� ��� �#������� :� ��������� �#������� #����$������� %���� ��� %��>��� �� ��� 4���� ������,������ �#�#����� �%% �� �� ��� 4����� �$ ��� ����� � ���� ��� ���� ����� � %���� � -���+� ��� ����+�,�+�� .//@1 (�������.//53 :� � #������� �$ �+�� �������� -'����� .//<3� � %� �� ��%������4����� �#������� � ���� -+����������� �#������� �����3� ��#�#������� -����� ,����� ���� �% � %�������� �3� ��� �� %��������%������ ��L�������� %��������� -#�������� ��� ��%��� #��� �3������ ���� � ����������� �� ���� �4��� ��� ����� �� �#���������#��#����$������� 7�� ���� #�������� ���� ���, ���� ��* ��%�������� �� �4�� �� %� �����%� �#������� ��#��#����$��������

� �������� ���� ��* � �%�������� %� �� 4� ��� �$$�%������ �������#� ��%� �� ����� � ������� �$ �+�� %��������� ��� �+�� ��������

"� � ��# ��� �� $%� &'��(� ) ! %�!����� %�!*��++��� ��� �!�� ��� �'��

� � )!�# )� %%!���� �, '�� +���� �� -./01� �2 3.13.� �2 -./01�

��� 45 03.667� ��� �, 8� 2���� 9����+�

�!� �I'�(

*���� �� M ��'� ! %�� �G ��%� �9#������� � � ���� ���������� %������� �9��4���4����������� �� ����������� #����$�������� ��� �#������� ��$$����������� ����� ��!� .@@G.@82C.@<A� .//8

=���� *'� �4���� *� "��� 'G ( ##������� �$ ����� %��� �#�#����� �� ����! 4� �������������9�% ��#���%��%������ ��� #���9����� #����$������ ��$���#�� � ������!� .A5G./2CA0@� .//?

=������ !� �������� 7� "����� �G "������ ����� �$ �#������� ��$$����������� ��#�������� � ����� ���:��!� /<G/0AC/.0� .//A

=�������� D� ����� �G "�$$�������� �9#������� �$ #���9����� #����$������ �%���������%�#������ ��� ��� �� � ���� ��� ��4�����% ������#���� ���! ���!�!+,.@/GA2?<CA25?� .//<

=�������� D� !� ����� !� (%���� '� �� ��G "�$$�������� �9#������� �$ #���9�����#����$��������%������� ��%�#���� ��* �� 7��� � ������4 ���� �$ ��* ��� ������ �� �� ��� �� �� ��� ���! ���!�!+, .@2G@5?C@88� .//8

'���� G �����#�������� �$ ��� �+��G ������� #���%�#��� :�G '���#��� �� = ����E�� = ��� "*� =�������%� (� -���3 ��;��!!# !9 ���:��!�!+, ������G=��%+,��� (%���%�� .//<G.5/CA0@

'������� �� ������� (� *���� %%� �� �� ��G *%�������� �$ #���9����� #����$��������%������� ��%�#���� ��� ��� �� ��� %�� �#�#����� �$ � ��� ����%�������������%��#����� � ��!� � �: A2@GA552@CA55<0� .//<

"���� �� ���� �'� ����� (� �� ��G 7�� �#������� ��#��#����� ����%����� ,�����#����� 4������ ���� #���� 4� �%����� ��������� �� ��#� ����##��� %����� 4������4 ��� �� ��%������ ,���� ���� �� ���:��!� 2� A<<GA@0CA@<� .//8

�%+��� �� '���� E!� �4����� I*G 7�� �#������� +�������%��� �� � ����� $�� ����� �� �$ ���� ��� ������ ��� $ �%���� 4 ,�!� 2�� 22G@/2C?A?� .//2

��%���� � ���������%� �E� ��� �� �� ��G �$$�%�� �$ ��������� �������% �%����������� �� �#������� ��$$����������� �� ���!� �#�%�>% ����>%����� �� ���#������ �$ �������� ��$$����������� �� � ���:��!� .@5G8<2C8/5� .//8

������� �� � ���� '� ����� +� � �� ��G ������� $�� #���9������#����$��������%������� ��%�#��� ��� �������% �%�� ��%�#��� ����4�� ���,�� ��� ��� %��#�#����� �$ � ��� 4����� %��%�� %��� �� ����! ��� �� =I6 ��%� 4�! '��� � ��� � /5G<<08C<<..� .//<

!��� 6� ���� O�� "� �� �� ��G ( #��4���� �9#������� �$ � ����������������� 6 �� ���� �� ���������% �� �� �#������� ��#���� ��� ������ �$ ���� �����%��#������� 4���� +�������%��� #����$������� 4� * �����%���� ��������� ���� ���..G5/C2.� .//2

!����� �E� )������� EEG ����% ��� ��%������� �$ �������� �%����� �� �+�� ����� �.0G.00AC.0.@� .//8

! %�� �G �#������� ��$$����������� 7�� 4��� ���������� � ���� ��!� ...GA<02CA<.?�.//0

�������� !E� ������ E�� '������ 'G ��%������ �$ �%���� �$ ��� ���������9�%#���9����� #����$�������G ���� �$ ��� #���9����� #����$��������%������� ��%�#���� � '��� ��� �� ��� /0G.20AC.20/� .//<

���+� * � ����+�,�+� G '��� ����� 4� �#�#����� �� �#������� 4������ � ��������:��!� .0.G.02C..A� .//@

������ � E���� M� '� ����� "� �� ��G *%�������� �$ ��� � %���� ������� ��%�#����

.�)��� 5� ������ �� ������ ��* � �%���������������� �� �#�#����� *#�#����� ,�� ����%��� �������� %������ �������� ��%� -�3� �� �� ��#��#�����$������� �+�� #��� %�� 4� �!*" ���� -�� �� �3��� 4� ��#����� 4������ ���� #���� -�� �� �3 ���� �� �������� ��%� 7�� ������� ,��� ��������,�%� � ��� ,��� ����%�� -�� �3� %��>4���� -�� �3��� ���.?�8?@ -�� �3 $�� @ � *#�#����% %����,��� ����%��� 4� ��� 7&I�� ������ ��� ���!:7'� ������ ��4�� ,�� ��� ������ 4� %��$�%�� ���%���%�#� 7�� ��%����� ,��� %� ����������� ,���(���9 D����� �� ����%� � %��� -��� %����3 *#�#�����% %���� ��� ������>�� 4� �����,������ � %���� ��� ���G 50��

('' D� �&� )�( �� �� 7�� ED& I*� D! :I)�(7:�*7:)� "� �*7D�D�M

��* � ��� !6 �%%������� ��� ������#���� �$ ��� $���� �#�������#�����4����� 4������ � ���� ����� .00G205C2.A� .//2

������ � E���� M� �� ((� �� ��G �������%��� ��$$����������� �� ���� ����� 4��%�������� �$ ��� � %���� ������� ��%�#��� ��* � � ����� ���:��!� ..0G@8<C@25� .//<

:��+��� (� =�%+��4�%� E � = ���� "(� �� ��G 7�������� �9#������� �$ � ����������������� �������% �%�� ��%�#��� � ���� �� ��� �#������� �$ ���������% ��%���� ��� �� ���� �$ 4������ $ �%���� ���� ��� /[email protected]@A/� .//5

:������M������� *� :� +� �G "�$$����%�� �� ����� %��� ��� ����4����� ,�����%����>�� %��� ������#�� �� ������ ��� #�������% �#������� � ����� ���:��!�.0?G@/.C@/5� .//5

:������ :� ����� (G *%�������� �$ � ���4�� �$ ��� ������� ������� ��%�#���� #��$����� 4� #���9����� #����$������� '���� @?2G8?5C850� .//0

��� (� �� 6�M� )������� EEG ������%����� ��� ����% ��� �%���� �$ ��������� ���������� " �� �+��� � ����� ���:��!� �,:% 4�! .G.5CA.� .//8

��� �� "������� E� ������ E��� ���%���� ��G ��, #���������� ������ ��� %���%�%�� � ��� � A2?G.85AC.85/� .//8

��� ���� ��� ��,��� � E���� M� �� ��G ������� ��� �%�������� �$ � %���� ���������%�#���� ��� ���� �#������� ��$$����������� � ���� $���� ��� �+�� ������#���� ������ ���:��!� ...G?A/C?@@� .//<

��� ���� ��� ������ � ��$�4��� *��� �� ��G (��� ������ �$ ��* � #��������#������� +�������%��� ��$$����������� �� ���!� � ����� ���:��!� ..5G@5@C@80�A000

��� ((� ����� 7� "����� E� �� ��G 7������� ���� #���� �$ ��� ��#�� ���$��� �$ ���#���9������#����$��������%������� ��%�#��� ���� �� ��%� ��� ��� �� �4����������$ ��� #�������#�% �$$�%�� �$ #���9����� #����$������� �!�� ���� ��!� [email protected]@0AA� .//5

��� ��� ����� ��� !������� G !���� �%��� ��� ��F ���� $�� �#������� 4������$ �%���� � ���� ����� /AG2/.C2/<� .//@

����������$ "E� 7� ���� '� =����� �� �� ��G 7�� � %���� ��%�#��� � #��$������ �����%��� ��%��� ���� <@G<@5C<@/� .//5

������ 7� ���� "� �������� E*� ������� �*� = ����� "G :�����>%����� �$ ���;�� +�������%��� %��� ������#� #������� ����%��� ���� [email protected]� .//0

I���� �� � M�������� � ����+�,� M� �� ��G ��%��������� �$ ������� �������� .� I* �� ������ ��� #�������% �#������� 4� ����������%���� �� ����4���������� �� � ���:��!� .A<GA@CA<� .//@

����� 7� � ����� � � �� �� �� ��G *%�������� �$ � � ��� #���9����� #����$��������%������� ��%�#��� 4� ��� ����� ��� ����� #������%����� ��� ��� ������� ��! �:4 ��:� !� 5AG85/C882� .//8

����� �� (������� :� ��4� � �� �� ��G "�$$�������� �9#������� �$ #���9�����#����$��������%������� ��%�#��� � 4��#�� � ���� ��� ��$$����������� �$ � ���+�������%���� � ����� ���:��!� ...G...8C..A.� .//<

(���� �� ( ��� (� 7�,�+� 7� �� ��G :���4����� �$ �+�� ������#���� 4� ���������9#������� �$ � ����������������� �������% �%�� ��%�#��� '���� @2?G.5/C.8A�.//5

(%����;��� � (����� =� * ,��9 EG ��� �$ ��� #���9����� #����$��������%���������%�#��� �� ��������� ��� �$$�%�� �$ >4����� ��� $���� �%��� �� ���� �9#������� ���%�� 2� @2G/02C/A5� .//8

(������� ��� �����+�� �IG :���� %��� �� �� ��#������ ����� %��#����� �� ��������4�� �$ ��� �#������� %����>�� %��� ������#� � ��!� � �: A2AGA0A.CA0@0�.//2

)�� ��� �� ��� E�G ����9����� #����$������ �%������� ��%�#����G � %����%�� ���+ �����$���� �%���� ���� �9#������� ��� %��%���������� � '�� .A/G525(C5<0(� .///

������4� (� ������ �� � :%��+�,� �� 7�+������ �G *4������ ������4 ���� �$�#������� #������ �������� �� #�������% �#������� � ���:��!� .<[email protected].� .//.

M �#� (�� ��+���� *�� (������� ��� ��# " G �9#������� �$ � ���� �#���������$$����������� ���+��� �� ������� ��� ����� 4� ������%��� �9���%��� ��� %��%� �%��%���������� �� ����! � ���� ��!� .0/G.A02C.A.2� ./</

)D� ..5� ID @ (��7��=� A000 ��*� *'7:)*7D ( �(7D � 7:((&� �D��D(7*(:( ('6