inmunohistoquimica
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Sesion correspondiente al dia 28 de julio de 2010.TRANSCRIPT
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“Inmunohistoquímica aplicada al diagnostico histopatológico
Conceptos básicos”
Dr. César Lara Torres
Departamento de Patología
COE-ISSEMYM
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Manuel Toussaint Vargas
El uso del microscopio en el diagnóstico de enfermedades ha adquirido en nuestros días tal incremento, que no existe en el arsenal del médico otro recurso que tenga tan variada y múltiples aplicaciones… Unas veces nos revela , al primer golpe de vista, el agente patógeno de una enfermedad; otras hace accesible a nuestra mirada el mecanismo íntimo de un estado patológico… preciosos elementos para formular pronóstico y conducir tratamiento… 1898
Gac Med Mex 1898;373-378
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Técnicas adicionales de diagnóstico
• Tinciones especiales (PAS, Masson, ZN)• Cultivo de tejidos• Microscopía electrónica• Inmunofluorescencia• Inmunohistoquímica• Biología molecular
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Primer antecedente: inmnofluorescencia
Albert H Coons ,Hugh Creech, Norman Jones y Ernst Berlinier, en la Universidad de Harvard en 1941.
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Cesar Milstein Georges JF Köhler Niels K Jerne
Cambridge UK Basel Institute
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PREMIO NOBEL EN MEDICINA 1984Cesar Milstein GJF Köhler Niels K Jerne
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Célula TumoralInmunización
Cultivo de tejidos
Hibridomas
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Tipos de proteínas que se pueden detectar ?
• Proteínas estructurales – Citoesqueleto (FI – CK, GFAP)– Uniones intercelulares (E-cadherina, B-
catenina)• Proteínas asociadas a vesículas secretoras
– Cromogranina A, sinaptofisina, CD68• Receptores
– HER2, EGFR1, RE, RP,• Factores de transcripción /ciclo celular
– P53, Ki67, TTF1, PAX5, Miogenina
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Aplicaciones generales• Clasificación de neoplasias
linfoides/hematológicas• Identificación de primario desconocido• Identificación de sobre-expresión de
proteínas asociadas a translocaciones• Identificación de blancos terapéuticos• Infecciones• Caracterización de substancias
extracelulares
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Anticuerpos epiteliales
CKAE1/3 Antígeno carcinoembrionario
Tiroglobulina
Receptores de estrógeno
CK5/6 CK8
Receptores de progesterona
CK7 Hepar-1
P53 CD20
Her2/neu Calcitonina
Ki67 E-cadherina
Antígeno Epitelial de Membrana
CK34BE12
Antígeno prostático específico
TTF-1 CMV
Racemasa p504 Calrretinina HPV
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Linfoides
CD45 CD68 (KP-1) ALK-1
CD3 CD34 Bcl-6
CD20 CD138 LMP1 (EBV)
CD43 CD1a Mieloperoxidasa
CD15 CD21 PAX5
CD30 Kappa
CD23 Lambda
CD10 Bcl-2
CD56 Ciclina D1
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No Epiteliales
CD99 S-100 PLAP GFAP
CD117 HMB-45 Inhibina alfa PBM
CD31 Mart-1 HCG Neurofilamentos
Sinaptofisina Alfa-fetoproteína
Enolasa neuronal
Vimentina
Cromogranina A
Desmina
Actina músculo liso
Actina musculo específica
Miogenina
WT-1
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Anticuerpo primario
Anticuerpo secundario
EstreptavidinaFosfatasa alcalina
1)
2)
3)
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• Obtención de la muestra• Preservación (formol pH 7.4)• Técnica histológica (deshidratación-
parafina)• Recuperación antigénica• Bloqueo de substancias endógenas (perox)• Aplicación de anticuerpos y cromógenos• Análisis histológico y diagnóstico
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Estandarización• Selección de controles • Bloqueadores (tipo y dilucion)• Anticuerpo primario (poli, mono, ratón,
conejo, cabra)• Anticuerpos secundarios (caballo, conejo,
cabra)• Amplificadores de señal (ABC, polímeros)• Tipo de cromógeno (DAB, FALK)
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GFAP
E-Cadherina
Her2/ neu
HHV-8
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Anti-Mitocondrias Oncocitoma RenalDiaminobencidina Nueva Fuscina
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HMB-45
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DOBLE INMUNOMARCACION
CD3 / CD20
Linfoma B rico en células T/H
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Oscar /CK5/6
Carcinoma Basal-Like
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INMUNOHISTOQUIMICA
• Especificidad / Sensibilidad• Aplicación en material de rutina• Correlación con la morfología• Compatible con fijadores de rutina• Material descalcificado• Material congelado
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CDX2
Ki-67
MARCACIÓN NUCLEAR
PAX-5
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CD30
E-Cadherina
MARCACIÓN MEMBRANA
Membrana y Golgi
Distrofina
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S-100
Mitocondrias
MARCACIÓN CITOPLASMICA
CD68
Citoplasma y núcleo
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INMUNOHISTOQUIMICA APLICADA AL DIAGNOSTICO
HISTOPATOLÓGICO
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Q-1028-10
• H 44 años tumor de base de lengua
• Dx: Neoplasia maligna poco diferenciada (carcinoma poco diferenciado vs linfoma)
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Neoplasia maligna poco diferenciada
Sarcoma
Linfoma Carcinoma
MelanomaVarios S-100,
HMB45, Melan-A
CKAE1/3CD20CD3
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CKAE1/3
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CD3
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CD20
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Q-1028-10
• Biopsia de tumor de base de lengua
• Linfoma No Hodgkin difuso de células grandes con inmunofenotipo B (CD20)
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Biopsia de Estómago. Gastritis xantomatosa vs Adeno Ca. poco dif Macrógafos? o Ca. con moco?
CD68 vs Citoquertina
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Queratina (AE1-3)
Dx: Adenocarcinoma poco diferenciado
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Mujer de 67 años de edad con lesión en duodeno. ¿Ca. Poco diferenciado ?
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CK AE1-3HMB-45
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Tumores Caracterizados por Inmunohistoquímica
• Tumores del estroma del tubo digestivo
• Tumor desmoplásico intra abdominal
• Linfomas • TNEP/ Sarcoma de
Ewing
• Tumor rabdoide• Tumor fibroso solitario• Tumor de células
granulares.• Neuroma Apendicular• Tumor adenomatoide
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Nódulo Gástrico
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CD34 CD-117 (c-kit)
Actina
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• Linfoma• TNEP/ Sarcoma de Ewing• Rabdomiosarcoma
“Tumor de Células Redondas, Pequeñas y Azules”
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Tumor de CélulasRedondas, Pequeñas y Azules.
• Linfoma CD45 / CD20 / CD3• TNEP/ Sarc de Ewing
CD99 / CD56 / Sinaptofisina• Rabdomiosarcoma Desmina / Miogenina / MyoD1
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TdTCD10
INMUNOFENOTIPO CD45 Positivo CD20 Negativo CD3 Positivo TdT Positivo CD10 PositivoDx: Linfoma linfoblástico de precursores T
CD45
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INMUNOHISTOQUIMICA EN LA METASTASIS DEL
PRIMARIO DESCONOCIDO
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Nódulo pulmonar en una mujer de 45 años de edad
Queratina Positivo = carcinoma
![Page 54: Inmunohistoquimica](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022020122/556b3ce8d8b42adc248b4a9d/html5/thumbnails/54.jpg)
Dx. Metastasis de Ca. Papilar del tiroides
TIROGLOBULINA
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Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+Ca UrotelialCa PáncreasCa mucinosos de ovario
Ca HepatocelularCa PróstataCa EscamosoCa NeuroendocrínoCarcinoide pulmonar
Ca MamarioCa Pulmón ( No células pequeñas)Ca BronquioloalveolarCa seroso de OvarioCa EndometrialMesotelioma
Ca de ColonCa de célula de MerkelCa Gástrico 60%
QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido
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CK7
CK20
Tumor Pulmonar
CDX-2
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Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+Ca UrotelialCa PáncreasCa mucinosos de ovario
Ca HepatocelularCa PróstataCa EscamosoCa NeuroendocrínoCarcinoide pulmonar
Ca MamarioCa Pulmón ( No células pequeñas)Ca BronquioloalveolarCa seroso de OvarioCa EndometrialMesotelioma
Ca de ColonCa de célula de MerkelCa Gástrico 60%
QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido
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CK7 (-)
CK20 (-)
Hombre de 56 años de con lesiones lítica en vértebras
AE1-3
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Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+Ca UrotelialCa PáncreasCa mucinosos de ovario
Ca HepatocelularCa PróstataCa EscamosoCa NeuroendocrínoCarcinoide pulmonar
Ca MamarioCa Pulmón ( No células pequeñas)Ca BronquioloalveolarCa seroso de OvarioCa EndometrialMesotelioma
Ca de ColonCa de célula de MerkelCa Gástrico 60%
QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido
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CK7
CK20PSA
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CK7
CK20
Ganglio linfático axilar, mujer de 68 años
![Page 62: Inmunohistoquimica](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022020122/556b3ce8d8b42adc248b4a9d/html5/thumbnails/62.jpg)
Q7 + / Q20+
Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+
Ca UrotelialCa PáncreasCa mucinosos de ovario
Ca HepatocelularCa PróstataCa EscamosoCa NeuroendocrínoCarcinoide pulmonar
Ca MamarioCa Pulmón ( No células pequeñas)Ca BronquioloalveolarCa seroso de OvarioCa EndometrialMesotelioma
Ca de ColonCa de célula de MerkelCa Gástrico 60%
QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido
![Page 63: Inmunohistoquimica](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022020122/556b3ce8d8b42adc248b4a9d/html5/thumbnails/63.jpg)
CK7
CK20RE
![Page 64: Inmunohistoquimica](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022020122/556b3ce8d8b42adc248b4a9d/html5/thumbnails/64.jpg)
IHQ. Predicción al TxHerceptinHer2/neu
VEGF Avastin
EGFR IresaTarceva
CD117
LMC
GIST
Gleevec
CD20
Rituximab
![Page 65: Inmunohistoquimica](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022020122/556b3ce8d8b42adc248b4a9d/html5/thumbnails/65.jpg)
Resumen• Proceso de estandarización es muy
importante• Selección de controles adecuados• Personal entrenado – constante revisión y
ajuste• Saber por qué, para qué • Correlación morfológica imprescindible
IHQ es una técnica complementaria
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INMUNOHISTOQUIMICA CON FACTOR
PRONÓSTICO Y PREDICTIVO
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![Page 68: Inmunohistoquimica](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022020122/556b3ce8d8b42adc248b4a9d/html5/thumbnails/68.jpg)
Johns Hopkins 1884 William Halsted
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Factores Pronósticos en Carcinoma de la Glándula Mamaria
MORFOLOGÍA• Pronóstica favorable: Ca Tubular, Ca
Cribiforme, Ca Medular Ca. Mucinoso, Ca Papilar, Ca Adenoideo quístico, Ca Juvenil secretor
• Pronóstico desfavorable Ca de células con anillo de sello, Ca Escamoso, Ca metaplásico, Ca neuroendocríno
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Inmunohistoquímica como factor pronóstico y predictivo
• Receptores de Estrógenos y Progesterona
• Gen supresor p53• Ki-67• Her2/neu (cerbB2)• Angiogénesis• Fascina / Bcl-2 / Ciclina D1 / otros
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RESPUESTA A TX. HORMONAL
RECEPTORES RESPUESTA A TX RE+ /RP+ 75%RE+ / RP+/- 50%RE+ / RP- 25%RE- / RP- 10-25%
RE RP
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* E+RE+DNAc-myc, c-jun,c-fos
RNA m
Estrógeno Prot Membrana
Ribosomas Factores de crecimiento EGF / IGF
E
E
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* E+RE+DNAc-myc, c-jun,c-fos
RNA m
Estrógeno Prot Membrana
Ribosomas Factores de crecimiento EGF / IGF
Anti-estrógeno
DISMINUCION• Síntesis de DNA• Timidina cinasa• DNA Polimerasa• Proliferación celular
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HER2/neuHuman Epidermal Growth Factor Receptor 2 Gen neu (ratón / neuroblastoma)
• Proteína transmembrana 185 kD / Tirosina-cinasa cromosoma 17q21
• Factor de crecimiento Epidérmico :
- EGFR (Her1) / Her2 / Her3 / Her4• Movilidad, adhesión celular
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HERCEPTIN Baselga J, Tripathy D, Mendelsohn J, Baughman S, Benz CC, Dantis L, Sklarin NT, Seidman AD, Hudis CA, Moore J, Rosen PP, Twaddell T, Henderson IC, Norton L.
Phase II study of weekly intravenous recombinant humanized anti-p185HER2 monoclonal antibody in patients with HER2/neu-overexpressing metastatic breast cancer. J Clin Oncol 1996 Mar;14(3):737-44
MSKCC
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Lab Invest 2007;87;403-408
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Biopsia nodulo cervial en paciente de 25 años
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• La paciente mas probablemente es una mujer y tiene un carcinoma metástasico• El tumor primario está localizado en la tiroides, lo mas probable en el lóbulo ipsilateral y muy posiblemente sea pequeño y no detectable clínicamente pero… créanme ahí está!• El tumor está formado por células foliculares, y seguramente hay tumor en diversos focos de la glándula y si la paciente recibió radioterapia de niña, podemos asumir una relación causal con el tumor.
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• Otros ganglios cervicales, muy probablemente estén afectados y,… cuidado con el pulmón de esta paciente por que es en este sitio donde se pueden encontrar metástasis• Estas células tienen la capacidad de incorpora yodo por lo que si se encontrara algún otro foco tumoral, con una dosis grande de yodo radioacivo, puede haber regresión.•Y, a pesar de que estas células son malignas, muy probablemente la paciente estará viva y bien los siguientes 10 años.
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Biopsia nodulo cervial en paciente de 25 años
Metástasis de ca papilar del tiroides
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Manuel Toussaint Vargas
El uso del microscopio en el diagnóstico de enfermedades ha adquirido en nuestros días tal incremento, que no existe en el arsenal del médico otro recurso que tenga tan variada y múltiples aplicaciones… Unas veces nos revela , al primer golpe de vista, el agente patógeno de una enfermedad; otras hace accesible a nuestra mirada el mecanismo íntimo de un estado patológico… preciosos elementos para formular pronóstico y conducir tratamiento… 1898
Gac Med Mex 1898;373-378
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Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+Ca UrotelialCa PáncreasCa mucinosos de ovario
Ca HepatocelularCa PróstataCa EscamosoCa NeuroendocrínoCarcinoide pulmonar
Ca MamarioCa Pulmón ( No células pequeñas)Ca BronquioloalveolarCa seroso de OvarioCa EndometrialMesotelioma
Ca de ColonCa de célula de Merkel (Sinaptofisina)Ca Gástrico 60%
QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido
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Cortesía Dr. Schnider
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Diagnóstico diferencialLinfoma cutáneo vs Células de Merkel
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Diagnóstico diferencialLinfoma cutáneo vs. Células de Merkel
CD45 QUERATINA
Linfoma + -
Ca de células de Merkel
- +
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CK 20 AE1-3
Cromogranina A Sinaptofisina
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Juan Rosai
INMUNOHISTOQUÍMICA
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MiogeninaRE
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Q7
Q5/6 Trombomodulina
Mesotelioma
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TdT
CD10
Leucémia Linfoblástica Aguda
Líquido Cerfalorraquídeo