Experimentální diagnostické a terapeutické metody

MUDr. Jana KayserováÚstav imunologie 2.LF UK, Praha-Motol

Nové metody v imunologii• Screening onemocnění• Diagnóza• Upřesnění diagnózy (různé typy onemocnění)• Predikce onemocnění• Terapie – individuální podání nebo rozšíření spektra

indikací

• Primární imunodeficity• Alergická onemocnění• Autoimunitní onemocnění• Nádorová onemocnění

Genová úroveň• Mutace v genech zapojených do imunitních

pochodů • Gata-2 – MonoMac syndrom deficience dendritických buněk,

monocytů a B buněk a leukémie• TREC/KREC – screening SCID

TREC - T cell receptor excision circle KREC - kappa-deleting recombination excision circle

Cossu Italian Journal of Pediatrics 2010Borte Blood 2012

TREC/KREC

TREC

KREC

TREC - T cell receptor excision circle KREC - kappa-deleting recombination excision circle

• Sérum – autoprotilátky – vzácná autoimunitní onemocnění– CRD – komponentová diagnostika u alergických

onemocnění

• Buněčné subpopulace– Základní lymfocytární subpopulace– TH17, Tregs, podtypy B lymfocytů, specifické T

lymfocyty, DC

Autoprotilátky

• Stanovení v séru a dalších tekutinách (likvor,…)• Diagnostika a monitoring průběhu onemocnění

• Autoimunitní encefalitidy– Příběh Kačenky, která se po roce probudila (NMDA-R encefalitida)

– Nejdříve postupně všechny linie standardní léčby (IVIG, kortikosteroidy, cyklofosfamid, eliminační metody – plasmaferéza – bez efektu

– Použití experimentální biologické léčby (anti-CD52 – alemtuzumab)

Biologická léčba

• Monoklonální protilátky• Rozšíření spektra indikací

– Anti-CD20 (rituximab)• SLE, lymfomy, vaskulitidy x atopická dermatitida

– Anti-CD52 (alemtuzumab)• Chronická CLL, RS x autoimunitní encefalitida,

vaskulitida nezařazená

Komponentová diagnostika• Moderní „in vitro metoda“, umožňující stanovení přecitlivělosti časného typu vůči

přesně definovaným molekulám, které jsou v příčinné souvislosti s alergickým onemocněním

• Produkce specifických IgE protilátek proti 1 epitopu alergenu• Upřesnění a zkvalitnění diagnostiky alergie (nepracujeme se směsí, ale se známou

a přesně definovanou molekulou)• Konstantní kvalita• Amplifikovatelnost

Adam a Hana měli oba posledních 5 let těžkou pylovou alergii v období únor-červen

SPT ALERGEN ADAM HANA

bříza 5/10 5/11

trávy 5/10 5/10

IgE EXTRAKT ADAM HANA

bříza 15,0kU/l 8,5kU/l

trávy 6,3kU/l 11,3kU/l

Alergenové komponenty ADAM HANA

Bet v 1 (PRP 10) 10,1 < 0,1

Bet v 2 (profilin) < 0,1 6,3

Bet v 4 (polcalcin) 5,2 < 0,1

Phl p 1 < 0,1 7,3

Phl p 5 < 0,1 < 0,1

Phl p 7 (polcalcin) 5,8 < 0,1

Adam: alergie na pyl břízy - léčba SAIT na pyl břízyHana: alergie na pyl trav - léčba SAIT na pyl trav

Buněčná úroveň – kvantitativní deficity• Buněčné subpopulace

– Základní lymfocytární subpopulace– TH17, Tregs, podtypy T a B lymfocytů– Využití hlavně při diagnostice primárních imunodeficiencí

SSC

FSC

SSC

CD 3

CD 4

CD 8

CD 2

5

FoxP3

Regulační T lymfocyty

- Diagnostika - Nepřítomnost Treg u primárního imunodeficitu IPEX - mutace v genu pro FoxP3 (transkripční faktor pro Treg)

- Zvýšeny u nádorových onemocnění – stanovení se využívá při indikaci cyklosfosfamidu před imunoterapií v klinických studiích

- Experimentální stanovení u autoimunitních onemocněních - sníženy

CD4+25+FoxP3+lymfocyty

Th17 lymfocytyCytometrická analýza - Strategie „gatování“

- Diagnostika HyperIgE sy- mutace pro transkripční faktor STAT-3

- STAT-3 je hlavní transkripční faktor Th17 lymfocytů

- Vysoce zvýšené u chronické granulomatózy

CD4+IL-17+ lymfocyty

HyperIgE sy Zdravá kontrolaHyperIgE sy

0,1 0,7

Subtypy B lymfocytů CD19+ lymfocyty

- Diagnostika CVID a dalších B buněčných imunodeficitů

Vlková J Immunol 2010

• Nekontrolovatelná sekrece IL-1 autoinflamatorní sy– Stanovení IL-1beta v séru– Terapie: blokáda IL-1 =

antagonista IL-1 receptoru

(Anakinra)

Funkční poruchy

• Náchylnost k určitým infekčním agens

• Deficience TLR receptorů IRAK4, MyD88 – pneumokokové infekceTLR 3 – herpetické encefalitidy

Stanovení produkce prozánětlivých cytokinů (IL-1beta, IL-6, atd.) po stimulaci mononukleárních buněk agonistyjednotlivých TLR receptorů

– Deficience IFNgama nebo jeho receptoru• Mykobakteriální infekce• Stanovení produkce IFNgama, IL-12, IL-23

Aktivní buněčná imunoterapie• Dendritické buňky

– Terapie nádorových onemocnění (DCVAC – ca prostaty, ovarii)– Terapie autoimunitních onemocnění (tolerogenní DC) – T1D, RA

• CMV-specifické T lymfocyty– Pacienti se SCID jsou ohroženi CMV infekcemi– Reaktivace CMV po HSCT– Stanovení efektorových T lymfocytů, které zajišťují

dlouhodobou ochranu před CMV reaktivacemi– Adoptivní transfer od příbuzných Tx pacientů

Závěr

• + Experimentální metody vedou k přesnější (někdy i rychlejší) diagnostice onemocnění nebo jeho podtypu a k možnostem specifické léčby s minimálními nežádoucími příznaky

• - Postupy nejsou standardizované