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ESPECTROFOTOMETRÍA Química Biológica. Departamento de Bqca. FCN y CS. UNPSJB 2017

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Page 1: ESPECTROFOTOMETRÍA...Acondicionar el material de vidrio. Realizar el espectro de absorción con la solución madre de Dicromato de potasio al 0,5 x 10-3 M. ( 340 nm a 600 nm). Realizar

ESPECTROFOTOMETRÍA

Química Biológica.

Departamento de Bqca.

FCN y CS.

UNPSJB

2017

Page 2: ESPECTROFOTOMETRÍA...Acondicionar el material de vidrio. Realizar el espectro de absorción con la solución madre de Dicromato de potasio al 0,5 x 10-3 M. ( 340 nm a 600 nm). Realizar

¿Construimos una definición

de espectrofotometría?

Método

Analítico

Óptico

Cualitativo

Cuantitativo

Medición de propiedades físicas y

químicas.

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Interrogantes para la definición

de conceptos importantes

¿Cómo se describe una radiación electromagnética?

¿ Cómo está formado el espectro electromagnético? Si la solución es coloreada ¿ que parte del espectro esta involucrado? ¿ por qué?

¿Cómo se define absorbancia¿ ¿y transmitancia?¿con que se mide?

¿Qué es un espectro de absorción? ¿ como se construye ?¿para qué se utiliza?

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¿Qué es la ley de Lambert y Beer? ?para

que se utiliza?

¿Qué es una curva de

calibración?¿como se

construye?¿presenta limitaciones?

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Teoría ondulatoria Campo eléctrico y

Campo magnético z

La energía de un fotón: E = h ϑ •E = energía del cuanto de radiación: Cal mol-1

•ϑ = frecuencia de la radiación : hertzio (Hz) = ciclos s-1

•h = constante de Planck = 6,624 • 10-27 erg s

Energía de un fotón: E = h ϑ = h c /λ

λ

µm = 10-6 m

nm = 10-9 m

Å = 10-10 m

Teoría corpuscular

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Región UV- Visible

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Absorbancia y Transmitancia

C

b

% T = I/I0 x 100

A = log 1/T= - log T= -log I/I0

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El espectrofotómetro

UV: Sílice

Visible: vidrio o

plastico

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Haz sencillo

Doble haz

Fuente de radiación

Sistema selector de

λ

Cubeta de muestra

Fotodetector

Fotocelda 1

Fotocelda 2 Cubeta de referencia

Amplificador

Sistema selector de

λ

Amplificador diferencial

Cubeta de muestra

Cubeta de referencia

Fuente de radiación

Registrador o PC

Registrador o PC

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300 500 700 900

Lámpara de

Deuterio

Lámpara de

Tungsteno o Wolframio

longitud de onda (nm)

inte

nsid

ad

lum

ínic

a

1100

Fuente de energía radiante

Continua. Estable. Intensa

Para λ en

el Visible

Para λ en el

Ultravioleta

Características

13

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Espectro de Absorción

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Ley de Lambert y Beer

cbA ··

a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades L/cm·g,

si c=g/L)

b: longitud del camino que recorre la radiación a través del medio

absorbente.

c: concentración expresada en g/L (mg/L, ...).

Si la concentración c viene expresada en mol/L, la cte de

proporcionalidad se denomina absortividad molar y se representa por

(unidades L/cm·mol).

cbaA ··

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Al - log I

I0

= b c

Concentración

molar de las

especies

absorbentes

camino

óptico

Potencia del haz

después de

atravesar la

muestra

Potencia del

haz antes de

atravesar la

muestra

I

I0

= Transmitancia (T)

A = -logT

Absortividad

molar

A = b c

Ley de Lambert- Beer 16

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A

concentración

Para la aplicación cuantitativa, las medidas de A de la muestra deben estar

incluidas en el intervalo lineal

respuesta debida

a la autoabsorción

o a la luz escasa

que

atraviesa la

cubeta respuesta del blanco,

interferencias o escasa

sensibilidad

A= εbc

Interval

o lineal

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Manos a la obra……… Calibrar el espectrofotómetro.

Acondicionar el material de vidrio.

Realizar el espectro de absorción con

la solución madre de Dicromato de

potasio al 0,5 x 10-3 M. ( 340 nm a 600

nm).

Realizar la curva de calibración con

diluciones : ½, ¼, 1/6, 1/8, 1/10, 1/20.

Determinar si se cumple o no la ley de

Lambert y Beer.

Encontrar la concentración de la

muestra problema.


Estudio acerca de la reacción entre el anión dicromato y

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