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ESPECTROFOTOMETRÍA
Química Biológica.
Departamento de Bqca.
FCN y CS.
UNPSJB
2017
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¿Construimos una definición
de espectrofotometría?
Método
Analítico
Óptico
Cualitativo
Cuantitativo
Medición de propiedades físicas y
químicas.
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Interrogantes para la definición
de conceptos importantes
¿Cómo se describe una radiación electromagnética?
¿ Cómo está formado el espectro electromagnético? Si la solución es coloreada ¿ que parte del espectro esta involucrado? ¿ por qué?
¿Cómo se define absorbancia¿ ¿y transmitancia?¿con que se mide?
¿Qué es un espectro de absorción? ¿ como se construye ?¿para qué se utiliza?
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¿Qué es la ley de Lambert y Beer? ?para
que se utiliza?
¿Qué es una curva de
calibración?¿como se
construye?¿presenta limitaciones?
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Teoría ondulatoria Campo eléctrico y
Campo magnético z
La energía de un fotón: E = h ϑ •E = energía del cuanto de radiación: Cal mol-1
•ϑ = frecuencia de la radiación : hertzio (Hz) = ciclos s-1
•h = constante de Planck = 6,624 • 10-27 erg s
Energía de un fotón: E = h ϑ = h c /λ
λ
µm = 10-6 m
nm = 10-9 m
Å = 10-10 m
Teoría corpuscular
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Región UV- Visible
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Absorbancia y Transmitancia
C
b
% T = I/I0 x 100
A = log 1/T= - log T= -log I/I0
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El espectrofotómetro
UV: Sílice
Visible: vidrio o
plastico
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Haz sencillo
Doble haz
Fuente de radiación
Sistema selector de
λ
Cubeta de muestra
Fotodetector
Fotocelda 1
Fotocelda 2 Cubeta de referencia
Amplificador
Sistema selector de
λ
Amplificador diferencial
Cubeta de muestra
Cubeta de referencia
Fuente de radiación
Registrador o PC
Registrador o PC
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300 500 700 900
Lámpara de
Deuterio
Lámpara de
Tungsteno o Wolframio
longitud de onda (nm)
inte
nsid
ad
lum
ínic
a
1100
Fuente de energía radiante
Continua. Estable. Intensa
Para λ en
el Visible
Para λ en el
Ultravioleta
Características
13
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Espectro de Absorción
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Ley de Lambert y Beer
cbA ··
a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades L/cm·g,
si c=g/L)
b: longitud del camino que recorre la radiación a través del medio
absorbente.
c: concentración expresada en g/L (mg/L, ...).
Si la concentración c viene expresada en mol/L, la cte de
proporcionalidad se denomina absortividad molar y se representa por
(unidades L/cm·mol).
cbaA ··
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Al - log I
I0
= b c
Concentración
molar de las
especies
absorbentes
camino
óptico
Potencia del haz
después de
atravesar la
muestra
Potencia del
haz antes de
atravesar la
muestra
I
I0
= Transmitancia (T)
A = -logT
Absortividad
molar
A = b c
Ley de Lambert- Beer 16
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A
concentración
Para la aplicación cuantitativa, las medidas de A de la muestra deben estar
incluidas en el intervalo lineal
respuesta debida
a la autoabsorción
o a la luz escasa
que
atraviesa la
cubeta respuesta del blanco,
interferencias o escasa
sensibilidad
A= εbc
Interval
o lineal
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Manos a la obra……… Calibrar el espectrofotómetro.
Acondicionar el material de vidrio.
Realizar el espectro de absorción con
la solución madre de Dicromato de
potasio al 0,5 x 10-3 M. ( 340 nm a 600
nm).
Realizar la curva de calibración con
diluciones : ½, ¼, 1/6, 1/8, 1/10, 1/20.
Determinar si se cumple o no la ley de
Lambert y Beer.
Encontrar la concentración de la
muestra problema.