a plastic colorimetric resonant optical biosensor for multiparallel detection of label-free...
TRANSCRIPT
� ������� �������� �� � � ������ ���� � � ������������������� � ��������� ���������� � ������ �
��� �� � ������ � �� � ��� ���� ���� ��� �� � ������ �� �� ������� �������� � � ���� ��� ������� �� ������ ���
��������
� ���� �� �������� ������� ���� � ����� ������� � ��� ��� � ������ �� ���� ��� ������ � � � �� � ���� ������ ���
�� � � !��� �� ��� ������" #�� � ������� ����������� � ������ �� � ������ ������� � �� ��� ������ � ������� !��� ���
�� � �� �� ������ � �$�� ������ �� ���� ������ ����" % ���� &� ��� �� � ������� �� � ������ � � ��� ��� '(� ���
������� ������ � � ���� � ���� � ���� )���� ��! ��� �����" � ������ ����� �������*��� ���� ��� ����� � �
�����!� �� �� � �� ���� � ������ � � ����� ��� +", - �� ��������" �� ������ � ��� &� ���� � ������ � � ���� )���� �� �� �
��� ������� ����� �� ������ � �� ���� �� ��� ��! ��� �� �� � � ��� � �� �� .���&�� ������ ��" � /00/ 1������ 2��� �� �"3" ���
����� ������"
�������� 4������ ���� �5 -���������� 5 6�� � � !���5 7� ����5 �������5 8��� �����
� ���� ������
9 ��� ��:��� � ������ ��� ��� ������ � �� �
����� �������� ������������� ���� � ���� � �� � �
��� ���� ���� ���� ��������� �� ;����� � ��������
�������� ������ �� ��� �� �������� � ��� ��������
� �� ����� � ���� ��� �� ������ �������*�� <=),>"
������� �������� � � � ����� ������ ������ � ������ �����
�����$��� � � ������� ����� ��� �� ��� ����� � ����
����� ����� � ����� �� ���!���� ������ ���&�
� �� ����� ��������� ���� � ���� ����� ���� ������"
��������� ������� ��� �� ����� � ����� ������ �
��� ��� � ���� <?>� ��� ��� �� ������ �� � ������
�������� <@>� ����� ������ ��;���� <(>� ������ �� ����
<A�+> �� � ������ ���� �� ��������� ��� � ����� ����
���� ��� ���� ��! ��� � � �������� �������" B�� ����
����� �������� ������� �� � ��������� ���� �
���� ����� ��� ��� ������� �� ���� ������� � �����
���� ������� �� �������� � � ���� ������� ���������� � �
���� ���� �� � �$�� ���� � �� ������� � � ���&���" 9
�$������ ���� �� ��������� �� ����� ���� �����
���� � ����� ������������C����C������� �������
�� ����� � ����� � � ���&��� �� ��� �� � ��� �� � ��
���� � ��� � � ��� ���� ����� � ������� ������"
2�������� ��� �.����� � � ��&� � ��������� � ���� �
� � �������� ���� �� � � ��� ���� ���!���� ������ ���
� ���� � ���&��� ��� � � ������������ ��� �$���� �
��� �� � � ;����"
% ������ &� � ���� �������� � ��� ���� ���
����� �� � � �� � ���� ������ ��� �� � � !���
������� ���� ��� ��� �����*�� � ���� �� � ���� �
<'>" B�� �� � �����*�� � ���� ����� ��� ���� � ��������
������� � ����� � ������ ����� �� ������ ���� ���
���� ����� �� ��� � ���� ��� �;���� �� � ��� �
D�� � �E �� � � ����� ����" B�� �� � ��� �;�����
����� ��� �� ���!�� �� ��� �������� � � ����������
� ��� ��������� � ���� ����� ��� ��� � ������ ������
�� ���� �� �� .�� ��!�� ����� �������� � � � �����
� ��� �������� ���������" # ��&� ������ �������
�������� ���� ��� �� � ������ � �������� ��������
��� � ��� ���� � ���� ��� ������� ��� �� � ����
& �������� ���� ����� ��� ��������� � � ����� ��
����� � � �� � � ������ ��� �� ������ �� �� � ��� ��
� � ��� �� ������ ��� ��" 9���� ���� ����� � ��� �� �
������ �� ���� ��� �� � � �;����� ��� �� �� ���������
��� ��� �� � ����� �� ������� � ��.���� � � ���
���������� � ��� �� ���� �$������ C������� � ����
�� ���� " B�� �� � �������� �� ��������� � �����
��������� ��� ������ ������ �� �� � �� �������� �
?�/� =0�=, �C��/" ������ �� ������ ���� ��� ������� ��� ������� � ���� � ���� )���� �� �� � �����
��� � �� �������� � 0"0=(A - � ���������� � � � ���
������� � ������ �������� �C�������� � � �������� ���
������� ����� � =,0 8� �� ��� ������" �������
������� �� � ������ ��! ��� � � ������ � ��
2� �� � � ������� � +@ D/00/E /=')//(
� ���� �� � ����" B��"F �=�A+A�',,�A/@@"� �!�� !������ ��� � ����G�����������"�� D�" �� � ����E"
0'/@�?00@C0/CH ) ��� � � ����� � /00/ 1������ 2��� �� �"3" ��� ����� ������"
�%%F 2 0 ' / @ � ? 0 0 @ D 0 / E 0 0 = = = � '
������ ����� ���� � ����� �������� ��� �� �
������� �� ������� � ��� ��� � � ���� ���������
��������� �� ���� �� ������� ������ ������ ������"
% ���� &� � ��� ��� ����� � �������� � � �
�������� � � �.������ � �� � ������� ���� �� ���������
� � ������ � ������� !��" 6���� ��� ���� �������
��! ��� � ���� � ������� ��� � ������������ ���
�� � ������� � ����� ��� �� ������ � ����� ���� �� ����
�� � �������� � ����� � ��� �� � ������� ������� �� �
�������! ��� ����������� �����" B�� ��� � � � �� �
��� ������� �� � ��� �� � �������� � ����� ��� ��
������� ���� �� ��������� ��� !�� ���� � � � ������
�������� � � �� ������ � � ������ ������ �� ��!��� �
�� �" -�� ����� ���� ��� ������� � ����� � �����
�� �������� ���� � � ������� �� ���� ������ ���� � �����
� ����� � ��� �� � � � ���� ��� ��������� �����
����� ���� �� ������� ������ � � ������ ������" % ����
&� � ��� ����� � ����� � ��� ������� �� � � �
��� ����� � �������� '(� ��� ������� ������� � � ���
������� � ��� ��� �� � ����� � ���� �������� ���� )
���� �� �� � ������ � �������" B�� ������� �� ��������
� ��� ���������������� �� � �� �� � � �� �.������ � �
�������� ����� �������������� �� ��"
� ��������� �� ����� �
"#�# ����� ���$� !�� %!���&!���
B�� �� � ������� �.���� � ���� � ��� � ���� � �
��� ��� ����� ��� � ��� �� � ��� �;����� ����� <=0�==>"
�� �� � 9��" =� ��� ���� � ������� �� ��������� �� �
� �������� � ��$ ������� ���� �� ������� ��� � ���
!�� � ����� �������� � ��$ �������" B�� ���� � �����
��� �� ������������ ���� � ���� � ���� ��$�� ��
�������� ��� "
9���� � + � " ������� ����� ����� ��� �� ��
�����" B�� @@0 � ���� �� �� ���� � ������� ��
��! �� � �������� ��� � �����#3 ������������ ��
������ � � � ������ � ��� �$���� � � ' �� �������
������ ���� � ������ �� ��� ������ � � ���������
����� ����� ���" B�� �$���� ����C����� ������
������ ����� � � � ��� ��� ���� '(� ��� ����
���� ������ ��� ����� � � � =/ ���� � ����" B��
�$���� �������� �� ��������� � � ��� ���� � �������
�� ���� � ��� �� ����� � ��� ����� ��� ��� � �
������� � ���� ��� � ����� ��/00 �" ���� ����� �� ����������� �� �����"
B�� ���� � ������� �� ��������� � � 0"00@ � " ����&
����� � ������ ��� �� ��������� � � ��� ���� � ��$�
��� �� ��� ����� ����� ��� � � � ����� � ���
������ ��� �����" B�� ��.��� ��$� � ��� � ��� �����
� ��� ����� ���� �� � � �� �����.�� ��� ���� �� �$����
� ��������� �����" B�� ���� ��$� ����� ������ ������
� ��� ������ ��� ������ � � �� ������ � �� �� ���
����� ���" 2� � �������� �� �������� �� ������
������� � =/0 � ����� ����� ��� ���� ��$�
���� � ������" 9�� � � ����� ����� ������� �
, � �� @ � " ������� ����� ����� � �� ��� �� ���
�� � ������ ��������� ��� ��� � �� ��� �� ���� D��� �
��� ���� ��! �� �����E � � �������� � ��� ����� �
�������� '(� ��� ������� ������ D���� � � 7�� �E
��� ��$�"
"#"# ���%!& !&�'!��� !�� !!&��� �% �&(��
���&��
���� ����� ����� ������� � ��� �� �� �� ���������
��� ��� � �� ��� �� ���� � � ���� ����� ���� ��� ��
�� &� �������� � �� �������� � ��� ������ � � &
�� ���� " ��� � �������� �� ������ �� ������
� ��� �� � � =0I ,���� ���������$����� � D�����E
����� � ���� � D������E � = �� � ��� �� �� � ����
���� � � ��" ��������� �� �� �� ��� ���� �� A0 �� �=0 �� "
� ������� �������� ����� ��� � � ���!�� ����
�� ����� �� ���� � ������ � ��� �� ���� � ��� �
���� ��� ������ <=/>" B�� ��� ����������� �� � ��
������� � 0"= �- � ���������� �������?�4�D?�?��������$������E�������� D��28B�� �����E� ����� ����
� @0 �- ����� ����� ��� D�� +"@E� � � ���&� ����
���� � ,0 �� " B�� �� � �� ��� ����� ��� ����
�*�� ��� � � �����.�� ��� ������ ��� ,0I �������
���� D2����E" B�� ����� �� �� � �� �� ��� �� �
�� ��� ����������� ���� �� ������ ��� ���" B���
����� � ������� ���� ��� ������ �� ���� � ��� ��� �
���� �� �/� =0=? ����C��/"
9��" =" 9������� ����� ���� � ����� ��� �� �" 9��� D�E ��� �����
����� ��� �� ���� � �������� ��� �� � ������� � � � ��� ���� �
��$� ��� �� ��� ����� � � � ����� � ������� ����" ���� ��� ��$� ��
����� ��� ������� ����� �� ������ � ��" B ������� �� � �������� D�E�
� ��� ���� � ����� ����� �� �������� �� ��� �������"
//0 �# )�����$�!� !�# * ������ !�� �&�!��� � �+ ,"��"- "�./""0
B�� ����� � ���� & �� � ��� ����� ��� ��� � ���
������� ���� � � ��� ������� � � ������������*��
���� )���� �� �� � � ������ " B�� ���� )����
������ �������� � ���� ����� �� ������� � � �������
%�7 � ����� ��� � ���� �������*�� ��� �� � ������
�� � ����� �������" B������ � ���� � ������
��*��� � ���� ��� �� � ������ �� �������� ����
�����*�� � ���� ��� �� ��������� �������1��������� ��
���� DJ�2)�17E �� &� ������� D2��� ��� ������
% �"E � ��� �� � � �������� ��� �� ��� ��� � ������
��� � � ��� ���� " B�� J�2)�17 ������� �� ����� ��
�����!����� � � ���� J�2 � ����� ������ �� � � ���
��� ����������� ������� ����� � ��� �17 ��� � ���
������� �� ��� � �� �� ��� ������" B�� J�2)�17
�� &� ������� ����� � ������� ��� ���� ������� ��
��� �� � ������ �� � ��� ����� �� � �� ��� ���� ���
� ����� � � � ���� ��� ��! ��� � ��� ��������" B��
�17 ��� ����� � ���� � �����!� �� �� � � ���� � �
��� �� �"
���� �������� � � ��� ����������� �� � ������ � � ���
���� � ������� ������� � �������� ������� ���� ��
������ ��� ���� ������ � ������ �� ��� �� ���� �
�� � ����� ���!��� � �$����� ��� � ��� � ���
������� � � ������� %�7" 9���� ��� ����������� �������
�� ������� ����� ������ �� ���!���� " B�� ��� ��
��������� ������ �� �$������ � �� � ���� � �����!�
������ ��� � ��� ���� ��! ���" 2�� �� ������� ����
��� ��� J�2)�17 ���� ��� �� �� &� ������� �� ���
����" B�� J�2)�17 ������� �� �$������ � ����� �
������ ���� ��� � �� � ���� " B���� ������� ����
��� � J�2)�17)���� �� &� ������� �� ������"
B�� J�2)�17)���� ������� �� �$������ � �� � �� ���
� � ������� %�7"
B �������� � ��� ������� �� � ��� ���� � / �� �
J�2)�17)���� D2��� ���E ����� � B��2 D� ����
� �� ����� ����� � 0"0=I B �� /0 � �������� �����
����� � �� +E �� ="0 ��C�� � �� ���� �� ����� � ���
�� � ������� � � � ������� �� ,A �� � = �" � ��� ����������� �� ���� � �������� � � ��� J�2)�17 D2����
���E ������� ����� ���� " ��� �������� ���� �� ��
���� �� ���&����"
"#2# .0 ��� (�! �&!��� �������
� ��������� ������ � ��� ������ ���� � ������ ��� ���
�� � � � � ������ ��� �;����� ��� �� �� �� � 9��" /" %
�� � ������ ��� �;����� �� � ��� � ���� ����� ����
������ ���� � �= �� ������� ��� � ��� ���� � ����������� � =00 �� ������� !�� ���� � � � �������� � �� ��� �� ���� ��� � ���� �� ����� ��� ���� � ���
������� �����" � ������� !�� �� �� ���� ��� ���
������ ��� !�� � ������ � �;����� ����� � � ������
��� � ��������� D4��� 4�����E" � ����� � �����
������ ��� C������� ����� �� �� ��� � � �� �� ����� �
� ���� �;���� ������ �� ������� �� ��� ����� ���� �
� ������� ����� ���� �� ��" B�� ������� ����� ����
�� � ��� ����� � ���� ���� ���� �� �� �������� �
��.�� ��" B�� � ����� � �� ��� ��� ������� � ������ �
��� '( ���� � �=@ �� ������� �� ��� ��� � ��� ��� �����"
� �������
2#�# �%�&� ����!�& ��$�!� !�� ��(��� ���%�����
K��� ��� � ��� ������� ����� ���� ��� (�����*��
�;����� �� � �� ������� �� �� � 9��" ," B�� ����
���� ���& ����� ��� ����� D�K3E �� +@A �� � � ��� �����
���� �� �������$���� D9K�-E � ��� �� � � ���& ��
="+ �" B�� ������� � ��� �� � � ������ ������ � ������
�� ���� ��� ������ ��� �� ��������� �� ������ � ���
�� � �K3 �� � ����� � ��� & ��������
� ��$ ������ �� ����� � ��� ������� ����� ����� � �
�� ��������� � ��� �K3 ����� D��K3E ��� �� ��� �
9��" /" % ����� ���� ���� � ������ ��� � � ��� ��� ����� � ��� �� � �������" 1���� ������� ��� ����� �� �� ��� � ��� � � ��� ���� � �
������� ����� �� ��" 1��� ��� ���� � ��� � � ������ �����" B�� ���� ���� �� � ����� � � ���� ����� ���� � ���� � ����� ��� � ��������� �����
��� �� � ������" B�� ��� � ���� ������� �������� ����� � � ������ �� � ���������"
�# )�����$�!� !�# * ������ !�� �&�!��� � �+ ,"��"- "�./""0 //=
����� �" B ������ �� � ��� �� � ������ ���� �
������ ��� �K3 � ��� '( ���� �� ������� � ���
D� � =�,,,E � � �����.�� ��� � ������ D� � =�?A/E" K���! � ��� ����� ���!��� �� � � ��K3C��� � �� � !��� �
���� � ����� � ��� ��� �� � �� �� ��� ������ �
����� � �������� �������" B�� ������ ����� � �K3
�� ��� � ������ ���� ��� ���� �� =@"@A ��
����� � � ����� ���!��� � � � � ==/ �" B��� ����� ��
����� ��� ��� ����� ���!��� � � �������������� �� ��
D� � ++ �E ����� ��������� � ������ � ������ �� �
�������� � ������ �� ���� ��� ��� ��� �� � ������" B��
��� ��� ������� � � ���� '( �� � ���� �� ="0A ��� ������ � � ��� ���� ����� � �� � � ������ ���� �
���� ������ ���"
2#"# 3����/(���� ������$ !��!�
� ���� )� ����� ��! ��� ����� �� ������ �
��� ����� ����� � ��� ������� ���� �" � ����$
� ���� ������� �� � ������ ������ DJ�/� J�2)�17�
J�2)�17)���� E �� ������ � � �$���� � ����
� �� ���� � � ��� � ������� %�7 D2����E" 1��� ����$
����� �� ������� ���� � ������� ������� �����
���� � � ���� � /= ���� ������� ������� �����"
������� ��� J�2)�17 ���� �� � �$������ � �� �
���� � ���� ����� � ���� �� � �� ���� � ���
��� ������� ���� �� ��� ������ � ��� �������� � ��$ � ���
���� ������ � � � �� �� ��� ��������� ������ ��� �
��� ���� � � �����" 8��� �� ����� ��� ����� ��� ���
� � � ������������ ����� "
9��" ? ���� ��� �K3 �����L���� ��� � � �� � ���
�������� �� ��� �� ���� �������*��� ����� ��� �
�������� � � J�/� J�/ � �J�2��17�� � � J�/��J�2��17����� � �������� � ��� �� � ������" B��� ��� � ������ ��� ��� ��� ������� � ��� �����
�K3 ����� �� ���� ������� ����� ����" B�� ����
� ������� ���� ��� �� � �� ������ ����� ��� �� � ����
������� � � � ��� �������*�� J�/� �� ��� �� ������
������� � ��� ������ � ��� J�2)�17 D-K � /000 8�E
�������" B�� ������ �� ��� �� ������ �������*��
J�2)�17 � � J�2)�17)���� D-K � ,?00 8�E �� ���
���������"
9��" @ �� � ��� �K3 ����� ��� �� �� � �� ��� � ����
� ��� �� � ���� �� �$���� � ����� � �� ���� �
� � ������� %�7 D0)+0 ��C��E � � ��� �� � � ������ �/0 �� " B�� J�2)�17 ������ D9��" @�E ������ ��� � ���
��� ��� ���� ��� ��� ����������� ������ D9��" @�E
��� ������ � � ����� � �����!� � ������ ���
��� � ������� %�7 �� ���� � �� ���� �" B�� J�2)�17)
���� ������ D9��" @�E ������ ��� ������ �� � �����!�
� ������ ��� ��� � ������� %�7L����� � �� � �K3
������ � ���� � ��� � �� ���� � �$���� � ���
���� %�7"
B�� �K3 ����� ��� ������ ���� /0 �� �� 9��" (� ��
������ �� � �� ��� � � ������� %�7 � �� ���� �
9��" (" � ����� �� �� ������ ��� �� ��� %�7 � �
�� ���� � � ��� ������� �K3 ����� �� ������� � � ���
� ��� � �� ���� %�7 ����� D="/@ ��C��� +",, -E �������� ��������� �� ��� ������� � �� �2� ����� "
2#2# )�!�!&��4!��� �% �����'�� ����$ (�����
�����!���
% �� � ����� ��� �� �������� ���� �� ��� � ��$� � �
��������� �����L ���� �� ���:��� � ��� ������� � ���
���� ��������� �� �� � � ���� �� � � ������� �� ���
�� L� �$����� � �� ������ � ���� � �����
��������� � ��! �� ����& ��� � � �������� � ��$ �� �����
��� ������" � ������ � ������� � � ��.�� �� �
��������� � � ��������� ������ ������������ !��� ���
9��" ," 6�������� � �� ���� �� � �� ��� � ����� ��� � ��� �� � ������� ���� � ������� ����� ��� ������ ��� ���"
/// �# )�����$�!� !�# * ������ !�� �&�!��� � �+ ,"��"- "�./""0
��� ��� ������ �� � ��� � � ������� �������� � � �
����� � ��� ��� �� � ����� ������ ���� �� <=,>"
B�� ������������ ���������� ������ �� ���� ��� � �
������ � ������ ���� ���������� ��� ���� � ��
�$������ � ���� �� �����$ �������� � ��$ �!���"
B�� ������������� ���� � ���� ����� �� � � ��
���D����� ?����� ����� ���E D�22� -K � (0�000E�
���� �� ���D�������� � ���������E D���� -K �A0�000E � � ���� �� ���D������ ���� �E D�1%� -K �(0�000E" B�� ������ �� �������� �� ������ � �
���� ����� ����� ���!���� " B�� ������������� ��
�������� � 0"' - J��� � ���� ��� D!����� ���� ���E
�� � � �� ���� � @ ��C��" B�� 0"' - J��� ����� ��
��� ���� �� �����C� �� ����� � ��� �$����� �" B��
������� � ��� ������������ ���������� !�� �� ���
����*�� �� ��� ��� � � ��.�� �� � ������ ��� � ����
��� �K3 � ��� �� � �� � ���� �� =0 � � ������F
D�E �� ��� �������� � 0"' - J��� ����� �� ��������
� � � �%J8 ������� ���� � � ��� �� � � ������
9��" ?" ���& ����� ��� ����� ������� � � ���� �� � ������ � ���� �� � ������ �������� ������" B�� � ��� � ������ ��� ��� ��� ������� � ���
����� �� ���� ������� �� � ����"
9��" @" 1$���� � J�/� �17� � � �17)���� ��������� ������� � ���� � �� ���� � � � ������� %�7" B�� J�/ ������ �������� � ������ �
�������� ���� �� �� � �� ���� ���� �$���� � �� ���� �� ���� ��� �17 ������ �������� � ������ � �������� �� �� �" B�� �17)����
������ ��� � �� � �� �� � � ������ ��� ��� � ������� %�7"
�# )�����$�!� !�# * ������ !�� �&�!��� � �+ ,"��"- "�./""0 //,
��� �� � ������ � @ �� � ��������� � ���������
������ �"
D��E B�� ����� �� ������ � � =00 �� � �1% ����� ������� � ��� ������� ���� � � ��� �� � � ������
� @ �� "
D���E B�� �1% ����� �� ������ � � ��� ��� �� � ���
��� �����" B�� �� � �� � ���� ��� ����� �
@ �� "
D��E �22 � � ��� �� ���� ����� ������ ��� �1%
������ ��� � ��� ���� ������ �� �������� �
�1%" � ����� � �� �� ���� ���� ���� �22 � � ���
� ������ � ����������� � ������ � � ����� � ��
�K3 ������ ����� ���& ����� �������" �����
������� � �1%)D�22)���E� ������ �� ��������" � ����
� =0 ����� ����� �� �������� � ��.�� ��"
B�� ������� � ��� �1%)D�22)���E� ���������� �� � �
���� �� ��� �� �� �� �� � 9��" A" B�� ���� ���� �
��� ��� � ������ ����� �� ��� ������ ���� ���
���� ��� ������ � �� �� ����� ���� ��� �� �����
���� � ����& ���� � � �� � ��� �� <=,>" ������� ���
� �� � ���� ���� � ��� ��������� ����& �� ����������� ��
������ ������ ��� ������ �� ���� ��� ����& ��� � ����
���� �� ���$������� @0 �M � � � ���� ��� �������� � ��$ �
9��" (" ���& ����� ��� ����� ����� �� � �� ��� � � ������� %�7 � �� ���� � ��� �17)���� ��������� ���� ���� � /0 �� � ������ " B�� ������
�� � � ������� � �������.���� ��� �� �� �� ��� "
9��" A" �K3 ����� ��� �� ���� �� ��� � ��� � ����� ������� � � ������������ �1%)D�22)���E� ���������" B�� ����& ��� � ���� ���� ��� � ���������
������ � � ��������� ������ ����� �� ����������� � � � ����& ��� � �@0 �M C ����"
//? �# )�����$�!� !�# * ������ !�� �&�!��� � �+ ,"��"- "�./""0
��� !�� �� ���$������� � � =�?'" #�� � ��� ����� ��������� � ���� �1% � :���� �� � ���� �� ������ �� ���
�K3 ����� � ���� �����.�� � ����� �������� � �� ��
������ �� � �� ��� � ���� ��������� ����& ���� �� ��
� 9��" +" � �� �� ����� ���� �� ���� �� � ��� !��
�@00 �M � ��������� �������� �� �������� �� �����
������ �����" #�� � ��� � �� ��� ����� � ����� �
���� � � � ��� �� ������ � ��������� �K3 ������ � ��
������ �� 0"00, � �� �� ������� ������ �� <'>" #�� � ���
����� ���� ������ � 9��" +� � �K3 ����� � 0"00, �
��� ���� � � � ����� ����& ��� ����� � 0"// �M "
� ����������
�� �������� � � ���� �� �������� ���� � � � ����
� �� ��� ������ � �������� � �� ������� � ������ ��
��� ������ ���� ��� � ���� �� �� � �� � �$�� ������
� ������ � � ��������� ������ ����� ���� �� ����
���� ������ � � ������ ������" ����� ����� ���� ��
����� �� ������ ��������� ��� ��� ��.��� ����� �� � � �
���� �� ��� � � ��������� ���� �� ��� ��� �� ����
� �������� ������� � � ��� ������ ����� � �������
����� ���� �� ��������� ��� ��� ���� � �������� ����
��� � ���� � ���� ����� � ������� � ������ �"
B�� �$����� �� �������� � ���� ��� �$������� �
��� ������� ���� � ������� �� �� ���� � ������ ����� �
���� )���� �� �� � � ������ " % ���� ����� ��� ������
������� � �������� ������� �� �� � ����� � ����� �
�������� ������� � � ������� � ��� � ������ � �� �� �
� ������ ��� ����������� ����� ��� ���� ���� �
�����!� ���� �� �� � � � � �� �� ��� �����"
B�� ���������� ������ �� ���� ������ ��� ��� � ����
�� � ������ � ���� )���� � ������ � � �� �������
������� �����"
%� �� � ��������� ���� ��� ������� � � �� ���� �����
� ���������� � ������ � � ������� ����� ��� ��� �
;����� � ���� ��� �� �� ���� ����� ����� � � ������
������ !����" 9 ���� �������� � ���������� � ���
�������� ������� ��� ��� ��� � �� ������� � �� ��
���� �� � � ��� ���� ���� �� ����� �� ��� ���
��������� ������ �����" B�� �� � ��������
������ �������� �����*�� � ����� ����� ��� ����
� ��� � ��� ������� �� � ������ �������" K����
���� ��� ���� �� ��&� � ��� �������� � ��� �����
�������� � � ����������� ���� �.��� ���� �� �����#3
������������ �� �.���� � ����� ��� ��� ��� � ���
����� ��� �� ����� �� �� � ����� �� � �� �� ����
�� �� ������ �� � �� ��� ��" K���� ��� ��� � &
�����*�� ��� ����� ����� �� � �� � ����������� � �� ��
��� ������� � ��� ��� ����� ����� � ����� �������
��� �� ������ ���� �� ���������� � � ��&�� �������"
2��� ���� �.��� �� ��� �� ������� � ��� �� �����
��� � ������ ���&�" B�� ����������� ���� �.��
����� � ���� & ��� �� ����� �� �� ��.�� ������
����� � �������� ���� � � �� ��� ����� � �������
!�� ���� �� ���� ��� ���� ��� ��" ��&� ���� ������� �
��������� ��� !�� ���� �� ��� ��� �� � �$�� ������
������ � �� ��� ������ � ������� ���� ���������
��!���� ������ ������� �������" #�� � � � �� ���
!�� ������ � �� � �������� � � �� ��� =000 �� �� �
������� �� � ��� ������ ����� � �� ��� ������ �
���� ��� ��� ���� ����� ������ � ����� ��������
�������� ��� ��� �� ���� � ��� ����������� "
4 � � ��� ��� ��� �!�� � ���� ����� � ��� ��������
�� � � ���� � �� ��� ����� �� ���� �� �� ��
9��" +" 1����� � ��� ������������ ���� ����& ��� ��� � ��� ������ � ����� � ��� �1%)D�22)���E� ���� �������"
�# )�����$�!� !�# * ������ !�� �&�!��� � �+ ,"��"- "�./""0 //@
�� ������" 2� � �$������ �.���� ������ ��� ���
��������� ���� ����� ������ ����� ��� ��� � � !��
���� ��� ������ �� � ������ �� ������� � �� �� ���
�� � ������" 2� � ����� �� ������ �� ������� �
����� ����� � ��� � ������ !�� ���� �� �� ���� ��� ���
������ ��� ���" B��� �� ������ ������� �������
�.���� ��������� � ���� � � ��������� ��� �
��������� �� � �� �� ���&��� �� � � � ������ � �$�� ��
�������" ��&� ���� ����� � ����� ��� ��������� � ��$
������ � ;���� �� �.���� � � ���� ��� �� � � � � ��"
B�� ������� � �$���� � � ��� ��� �� � � ���� �� � �����
������!�� � ����� � ��� ������� � � ��� �����
����� ���� �� ������� ������� ���� � ���� � � ������
� � ����� ���� ��� ������� ����� �����" ��������
� ��� �� � ������� � � ��� ����� ���� �� ������
������ � � ���;��� ; ��� ��� �� � ���������"
B�� ���� )���� �� �� � ����� ���� ��� �� ��� ��
�������� � ��� ����� ��� ��� � �������� ����� ��� ��� �
�17 ������� � � �� �����!� �� �� �� � � ��� �������
� ������ �� &� �������� ��� ���� �� ���� " B��
��� ��� ������� � ��� �K3 �������� � �� ��� ���
0"00= �� ������� � �� ���� �������� ��� �� �� ��
��! �� �� � ��� � ������ � � � ����� � 0"00, �" �����
�� � 0"00, � �� ���� ��� ��� � �� �������� ����� �
0"(= - �� ���������� � ��� ���� )���� �� �� � �����
��� � ��� ��! �� ����" B�� �� �������� ����� �� ��
����� � �� ��� ����� ��� � ����� �� �� � ��������
������ �������� D���� �� ������� � � ������E � �
� �� ����� � ������ ����"
� ����������
� ���� �� �������� ������� ���� � ����� ������� �
��� ��� � ������ �� ���� ��� ������ � � �
�� � ���� ������ ��� �� � � !��� �� ��� ������"
#�� � ������� ����������� � � ����� �� � ���
���� ������� � �� ��� ������ � ������� !��� ��� �� �
�� �� ������ � �$�� ������ �� ���� ������ ����" B��
�� � ������� �� � ������ � � ��� ��� '(� ���
������� ������ � � ���� � ���� � ���� )����
��! ��� �����" � ������ ����� �������*��� ����
��� ����� � � �����!� �� �� � �� ���� � ������ �
� ����� ��� +", - �� ��������" %� �� � ��������� ���� ���
�� � ��� �� � ������ � � ��������� ������ �����
����� � � ���� ��������� ������� � ������� � �
������� �� �� � � ������ � � ��� !���� � �� �����
�������� � � ������� ���� �����"
����������
<=> �"�" �� ���� -" -� � ������� � ����� �� �� � � �� ����
J���� ?0@ D/000E +,A)+?("
</> J" ����� � ��� � �"8" -����� � 2" 2��� �� �������F
��������� � � ����� � � ������� ������ ��" 4�� " ������ �"
== D/000E ?0+)?=/"
<,> 7" -�������� 2"�" 2������� �� �� � ���� � �� ������� �
������������� �� ��� ������ ��� � 2��� �� /+' D/000E =A(0)
=A(,"
<?> 9" ����� 1" 6���� 8"J" 9�� �� N" J�:&��� O" 4&������ ����*
������ ������� �� ����� � � � �������*��� � � ������*���
� ������ ���� �� � �������� �� � ��" ����" (' D=''AE /0?,)
/0?'"
<@> �" ������ �" �� � �" N���� 2� ������ ������� ����� � ���������
������� � � �.���������� ��������� � ���������� �����
���� ��� � ��� ��� ���������� ����" ����" ����" A@ D='''E
=+0/"
<(> 7" K�� 6"�" 8���� N"-" �� �� � B" B�� ���� 6"�" ���� �"
-�:����� ������� � ��������������� � ���� D�2�E ��� �
����� �������� J��" ������ �" =' D/00=E +@()+(0"
<A> K" ����� 6" �� �� �" 9���� ��� �" �������� �" N���� 9" -�����
8" 2�������� K" ��&�*� 8���� ������ ���� �� �� � D�� ��������
� � �����������E� 2� �" ������� � ( D=''/E =//)=/("
<+> �" ������ 7" 7������*� 4������ ���� � � �� ������� ���� �"
������� " =0 D=''@E '/,)',("
<'> �"B" �� � ����� �" ��� �" �� � �" ������ �������� �� � �
������� �� � ����� ���������� ����� ���� �.��� 2� �" ������� �
+= D/00/E ,=(),/+"
<=0> 6" -�� ��� � 2"2" K� �� J� �� ����� � ������ ������� ����"
����" ����" (= D'E D=''/E =0//"
<==> 2" �� �� 7"-" -��� 6�� � � ������� � �� � ����� �� ��
���� ��� �" 4��" 2�" ��" � =, D@E D=''(E '',"
<=/> 7" -�������� �" N����� 2"�" 2������� ����FCC ��������"���
��"�����"���C���C�����C2-�"����"
<=,> �" ������ 7" ������ �" 2� ��� �"��" 3����� �" 2������ 9"�"7"
����� ��� �" 7������ 8����� ��� � �������� ��������
��������*� � ��� ����� �� ������ ������F � ������ ��� ��
��� � � � ��� ���������� � � ������ �������� ��������
���������� �" ����" ����" ==@ D/E D/00=E =0+()=0'?"
//( �# )�����$�!� !�# * ������ !�� �&�!��� � �+ ,"��"- "�./""0