ÏÐÎÄÓÊÒÛ ÏÈÙÅÂÛÅ · ÃÎÑÒ 10444.1—84 Êîíñåðâû....

ÏÐÎÄÓÊÒÛ ÏÈÙÅÂÛÅ

Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ è îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâàêîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ

è Staphylococcus aureus

Èçäàíèå îôèöèàëüíîå

ÔÅÄÅÐÀËÜÍÎÅ ÀÃÅÍÒÑÒÂÎ

ÏÎ ÒÅÕÍÈ×ÅÑÊÎÌÓ ÐÅÃÓËÈÐÎÂÀÍÈÞ È ÌÅÒÐÎËÎÃÈÈ

ÁÇ

9—

2008/2

74

Í À Ö È Î Í À Ë Ü Í Û ÉÑ Ò À Í Ä À Ð Ò

Ð Î Ñ Ñ È É Ñ Ê Î ÉÔ Å Ä Å Ð À Ö È È

ÃÎÑÒ Ð52815—

2007

Ïðåäèñëîâèå

Öåëè è ïðèíöèïû ñòàíäàðòèçàöèè â Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè óñòàíîâëåíû Ôåäåðàëüíûì çàêîíîì îò27 äåêàáðÿ 2002 ã. ¹ 184-ÔÇ «Î òåõíè÷åñêîì ðåãóëèðîâàíèè», à ïðàâèëà ïðèìåíåíèÿ íàöèîíàëüíûõñòàíäàðòîâ Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè — ÃÎÑÒ Ð 1.0—2004 «Ñòàíäàðòèçàöèÿ â Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè.Îñíîâíûå ïîëîæåíèÿ»

Ñâåäåíèÿ î ñòàíäàðòå

1 ÐÀÇÐÀÁÎÒÀÍ Ãîñóäàðñòâåííûì íàó÷íûì ó÷ðåæäåíèåì «Âñåðîññèéñêèé íàó÷íî-èññëåäîâàòåëü-ñêèé èíñòèòóò êîíñåðâíîé è îâîùåñóøèëüíîé ïðîìûøëåííîñòè» (ÃÍÓ ÂÍÈÈÊÎÏ) íà îñíîâå àóòåíòè÷-íûõ ïåðåâîäîâ ñòàíäàðòîâ, óêàçàííûõ â ïóíêòå 4

2 ÂÍÅÑÅÍ Òåõíè÷åñêèì êîìèòåòîì ïî ñòàíäàðòèçàöèè ÒÊ 93 «Ïðîäóêòû ïåðåðàáîòêè ôðóêòîâ,îâîùåé è ãðèáîâ»

3 ÓÒÂÅÐÆÄÅÍ È ÂÂÅÄÅÍ Â ÄÅÉÑÒÂÈÅ Ïðèêàçîì Ôåäåðàëüíîãî àãåíòñòâà ïî òåõíè÷åñêîìó ðåãó-ëèðîâàíèþ è ìåòðîëîãèè îò 27 äåêàáðÿ 2007 ã. ¹ 442-ñò

4 Íàñòîÿùèé ñòàíäàðò ÿâëÿåòñÿ ìîäèôèöèðîâàííûì ïî îòíîøåíèþ ê ñëåäóþùèì ìåæäóíàðîä-íûì ñòàíäàðòàì:

- ÈÑÎ 6888-1:1999 «Ìèêðîáèîëîãèÿ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ è êîðìîâ äëÿ æèâîòíûõ. Ãîðèçîíòàëü-íûé ìåòîä ïîäñ÷åòà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ (Staphylococcus aureus è äðóãèå âèäû).×àñòü 1. Ìåòîä ñ ïðèìåíåíèåì àãàðîâîé ñðåäû Áàéðä-Ïàðêåðà» (ISO 6888-1:1999 «Microbiology offood and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positivestaphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 1: Technique using Baird-Parker agarmedium», MOD);

- ÈÑÎ 6888-2:1999 «Ìèêðîáèîëîãèÿ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ è êîðìîâ äëÿ æèâîòíûõ. Ãîðèçîíòàëüíûéìåòîä ïîäñ÷åòà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ (Staphylococcus aureus è äðóãèå âèäû.)×àñòü 2. Ìåòîä ñ ïðèìåíåíèåì àãàðîâîé ñðåäû ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì» (ISO6888-2:1999 «Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration ofcoagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 2: Technique using rabbitplasma fibrinogen agar medium», MOD);

- ÈÑÎ 6888-3:2003 «Ìèêðîáèîëîãèÿ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ è êîðìîâ äëÿ æèâîòíûõ. Ãîðèçîíòàëüíûéìåòîä ïîäñ÷åòà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ (Staphylococcus aureus è äðóãèå âèäû).×àñòü 3. Âûÿâëåíèå è ÍÂ× ìåòîä äëÿ ìàëûõ êîëè÷åñòâ» (ISO 6888-3:2003 «Microbiology of food andanimal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci(Staphylococcus aureus and other species) — Part 3: Detection and MPN technique for low numbers», MOD) â÷àñòè ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ. Ïðè ýòîì äîïîëíèòåëüíûå ïîëîæåíèÿ è òðåáîâàíèÿ, âêëþ÷åííûå â òåêñòñòàíäàðòà äëÿ ó÷åòà ïîòðåáíîñòåé íàöèîíàëüíîé ýêîíîìèêè Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè è îñîáåííîñòåéðîññèéñêîé íàöèîíàëüíîé ñòàíäàðòèçàöèè, âûäåëåíû â òåêñòå ñòàíäàðòà êóðñèâîì.

Íàèìåíîâàíèå íàñòîÿùåãî ñòàíäàðòà èçìåíåíî îòíîñèòåëüíî íàèìåíîâàíèÿ óêàçàííûõ ìåæäóíà-ðîäíûõ ñòàíäàðòîâ äëÿ ïðèâåäåíèÿ â ñîîòâåòñòâèå ñ ÃÎÑÒ 1.5—2004 (ïîäðàçäåë 3.5).

Ñðàâíåíèå ñòðóêòóðû íàñòîÿùåãî ñòàíäàðòà ñî ñòðóêòóðîé óêàçàííûõ ìåæäóíàðîäíûõ ñòàíäàðòîâïðèâåäåíî â äîïîëíèòåëüíîì ïðèëîæåíèè Á.

Ïðè ïðèìåíåíèè íàñòîÿùåãî ñòàíäàðòà ðåêîìåíäóåòñÿ èñïîëüçîâàòü ñâåäåíèÿ î ñîîòâåòñòâèèññûëî÷íûõ ìåæäóíàðîäíûõ ñòàíäàðòîâ íàöèîíàëüíûì ñòàíäàðòàì Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè, èñïîëüçî-âàííûì â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå â êà÷åñòâå íîðìàòèâíûõ ññûëîê, óêàçàííûì â ïðèëîæåíèè Â

5 ÂÂÅÄÅÍ ÂÏÅÐÂÛÅ

Èíôîðìàöèÿ îá èçìåíåíèÿõ ê íàñòîÿùåìó ñòàíäàðòó ïóáëèêóåòñÿ â åæåãîäíî èçäàâàåìîì èí-

ôîðìàöèîííîì óêàçàòåëå «Íàöèîíàëüíûå ñòàíäàðòû», à òåêñò èçìåíåíèé è ïîïðàâîê — â åæåìå-

ñÿ÷íî èçäàâàåìûõ èíôîðìàöèîííûõ óêàçàòåëÿõ «Íàöèîíàëüíûå ñòàíäàðòû». Â ñëó÷àå ïåðåñìîòðà

II

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

(çàìåíû) èëè îòìåíû íàñòîÿùåãî ñòàíäàðòà ñîîòâåòñòâóþùåå óâåäîìëåíèå áóäåò îïóáëèêîâàíî

â åæåìåñÿ÷íî èçäàâàåìîì óêàçàòåëå «Íàöèîíàëüíûå ñòàíäàðòû». Ñîîòâåòñòâóþùàÿ èíôîðìàöèÿ,

óâåäîìëåíèå è òåêñòû ðàçìåùàþòñÿ òàêæå â èíôîðìàöèîííîé ñèñòåìå îáùåãî ïîëüçîâàíèÿ — íà

îôèöèàëüíîì ñàéòå Ôåäåðàëüíîãî àãåíòñòâà ïî òåõíè÷åñêîìó ðåãóëèðîâàíèþ è ìåòðîëîãèè â ñåòè

Èíòåðíåò

© Ñòàíäàðòèíôîðì, 2009

Íàñòîÿùèé ñòàíäàðò íå ìîæåò áûòü ïîëíîñòüþ èëè ÷àñòè÷íî âîñïðîèçâåäåí, òèðàæèðîâàí è ðàñ-ïðîñòðàíåí â êà÷åñòâå îôèöèàëüíîãî èçäàíèÿ áåç ðàçðåøåíèÿ Ôåäåðàëüíîãî àãåíòñòâà ïî òåõíè÷åñêî-ìó ðåãóëèðîâàíèþ è ìåòðîëîãèè

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

III

Ñîäåðæàíèå

1 Îáëàñòü ïðèìåíåíèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 Íîðìàòèâíûå ññûëêè . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 Òåðìèíû è îïðåäåëåíèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24 Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ è îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ

è S. aureus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24.1 Ìåòîä âûÿâëåíèÿ è ìåòîä ÍÂ× — îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus ñ ïðåäâàðèòåëüíûì îáîãàùåíèåì . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24.2 Ìåòîäû îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus ïîñåâîìíà (â) àãàðèçîâàííûå ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêèå ñðåäû . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

5 Ïèòàòåëüíûå ñðåäû, ðàñòâîðû ðåàêòèâîâ, ýìóëüñèè è äåôèáðèíèðîâàííàÿ êðîâü . . . . . . . . . . 46 Àïïàðàòóðà, ïîñóäà, ìàòåðèàëû, ðåàêòèâû. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97 Îòáîð è ïîäãîòîâêà ïðîá . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108 Ïðîâåäåíèå èñïûòàíèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

8.1 Ìåòîä âûÿâëåíèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108.2 Ìåòîä ÍÂ× — îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ . . . . . . . 128.3 Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïîñåâîìíà àãàðèçîâàííóþ ñðåäó . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 128.4 Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïîñåâîìâ àãàðèçîâàííóþ ñðåäó . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

9 Ïîäòâåðæäåíèå ïðèíàäëåæíîñòè âûÿâëåííûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûìñòàôèëîêîêêàì . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 139.1 Îêðàñêà ïî Ãðàìó . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 139.2 Îïðåäåëåíèå êàòàëàçû . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 149.3 Îïðåäåëåíèå ñïîñîáíîñòè êîàãóëèðîâàòü ïëàçìó êðîâè êðîëèêà . . . . . . . . . . . . . . . . 149.4 Îöåíêà ðåçóëüòàòîâ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèíàäëåæíîñòè õàðàêòåðíûõ êîëîíèé ê êîàãóëàçîïîëî-æèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159.5 Ïîäòâåðæäåíèå ïðèíàäëåæíîñòè âûÿâëåííûõ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâê S. àureus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159.6 Îïðåäåëåíèå ñïîñîáíîñòè S. àureus îáðàçîâûâàòü òåðìîñòàáèëüíóþ íóêëåàçó è íàëè÷èÿó íåãî ãåìîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159.7 Îöåíêà ðåçóëüòàòîâ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèíàäëåæíîñòè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâê S. aureus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

10 Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1611 Ïðîòîêîë èñïûòàíèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18Ïðèëîæåíèå À (ñïðàâî÷íîå) Äèôôåðåíöèàöèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ âèäîâ è ïîäâèäîâ ñòàôèëî-

êîêêîâ ïî äâóì ïðèçíàêàì — îáðàçîâàíèþ àöåòîèíà è ôåðìåíòàöèè ìàëüòîçûâ àýðîáíûõ óñëîâèÿõ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

Ïðèëîæåíèå Á (ñïðàâî÷íîå) Ñîïîñòàâëåíèå ñòðóêòóðû íàñòîÿùåãî ñòàíäàðòà ñî ñòðóêòóðîéïðèìåíåííûõ â íåì ìåæäóíàðîäíûõ ñòàíäàðòîâ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20

Ïðèëîæåíèå Â (ñïðàâî÷íîå) Ñâåäåíèÿ î ñîîòâåòñòâèè ññûëî÷íûõ ìåæäóíàðîäíûõ ñòàíäàðòîâíàöèîíàëüíûì ñòàíäàðòàì Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè, èñïîëüçîâàííûì â íàñòîÿùåìñòàíäàðòå â êà÷åñòâå íîðìàòèâíûõ ññûëîê . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

IV

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

()

5�B'��8/(%� ��:3�K��=�5'��J�E*�B�P��*��7�E��*��*��@�� B'�� I�DE�� J��$�B��L�E��G�*H� DE��T[U\]^VX_X__`a�U`bZ`a

9�!�!#.�.�-"� �0��"��# �#&X�#�/�"7

��4 �&��8��#-&�0��'#%#��/4�3�

*

��+��%8$

�#0�-!��"-1� ,-0#&74#5'��,�� [�#.#%��[� -�� 0�� '��,"�&7�#%#� '�1'&�5�,1�!#&,��-"'��!#�%�&�4#50#&#X,"�&7��[� -"�2,&#5!#!!#'� ,� ]FENMLPBJBJJKHEKCIKH�'�.�-&#X,�#'#��0�#5 �!3,,8

5�B'��8/(%� ��:3�K��=�5'��J�E*�B�P��*��7�E��*��*��@��B'��I�DE��F��E�'�M��'JBB*��"�I�*H�B��I��O��@��',�*H�F��E�'�MQ

9�!�!#.�.�-"� �0��"��# �#&X�#�/�"7

��4 �&��8��#-&��"'��"#%#��/4�3�

*

Í À Ö È Î Í À Ë Ü Í Û É Ñ Ò À Í Ä À Ð Ò Ð Î Ñ Ñ È É Ñ Ê Î É Ô Å Ä Å Ð À Ö È È

ÏÐÎÄÓÊÒÛ ÏÈÙÅÂÛÅ

Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ è îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâàêîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è Staphylococcus aureus

Food products. Methods for detection and quantity determination of coagulase-positive staphylococciand Staphylococcus aureus

Äàòà ââåäåíèÿ — 2009—01—01

1 Îáëàñòü ïðèìåíåíèÿ

Íàñòîÿùèé ñòàíäàðò ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà ïèùåâûå ïðîäóêòû, êðîìå ìîëîêà è ìîëî÷íûõ ïðîäóê-

òîâ, è óñòàíàâëèâàåò ìåòîäû âûÿâëåíèÿ è îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëî-êîêêîâ è Staphylococcus aureus (S. aureus) ïîñåâîì: â æèäêóþ ñåëåêòèâíóþ ñðåäó (ñ ïðåäâàðèòåëüíûìîáîãàùåíèåì) è íà (â) àãàðèçîâàííûå ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêèå ñðåäû.

Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ íàèáîëåå âåðîÿòíîãî ÷èñëà (ÍÂ×) êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è

S. aureus ïîñåâîì â æèäêóþ ñåëåêòèâíóþ ñðåäó ïðåäíàçíà÷åí äëÿ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ, ñîäåðæàùèõ â 1 ãòâåðäîãî ïðîäóêòà ìåíåå 150 èëè â 1 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà ìåíåå 15 êîëîíèåîáðàçóþùèõ åäèíèö (ÊÎÅ)êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus.

Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus ïîñåâîì íààãàðèçîâàííûå ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêèå ñðåäû ïðåäíàçíà÷åí äëÿ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ, ñîäåðæàùèõâ 1 ã òâåðäîãî ïðîäóêòà áîëåå 1500 èëè â 1 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà áîëåå 150 êîëîíèåîáðàçóþùèõ åäèíèö(ÊÎÅ) êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus.

Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus ïîñåâîì âàãàðèçîâàííóþ ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêóþ ñðåäó ïðåäíàçíà÷åí äëÿ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ, ñîäåðæàùèõâ 1 ã òâåðäîãî ïðîäóêòà áîëåå 150 èëè â 1 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà áîëåå 15 êîëîíèåîáðàçóþùèõ åäèíèö(ÊÎÅ) êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus.

2 Íîðìàòèâíûå ññûëêè

Â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå èñïîëüçîâàíû íîðìàòèâíûå ññûëêè íà ñëåäóþùèå ñòàíäàðòû:ÃÎÑÒ Ð 51446—99 (ÈÑÎ 7218—96) Ìèêðîáèîëîãèÿ. Ïðîäóêòû ïèùåâûå. Îáùèå ïðàâèëà ìèêðî-

áèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé

ÃÎÑÒ Ð 51652—2000 Ñïèðò ýòèëîâûé ðåêòèôèêîâàííûé èç ïèùåâîãî ñûðüÿ. Òåõíè÷åñêèå

óñëîâèÿ

ÃÎÑÒ 450—77 Êàëüöèé õëîðèñòûé òåõíè÷åñêèé. Òåõíè÷åñêèå óñëîâèÿ

ÃÎÑÒ 6672—75 Ñòåêëà ïîêðîâíûå äëÿ ìèêðîïðåïàðàòîâ. Òåõíè÷åñêèå óñëîâèÿ

ÃÎÑÒ 9284—75 Ñòåêëà ïðåäìåòíûå äëÿ ìèêðîïðåïàðàòîâ. Òåõíè÷åñêèå óñëîâèÿ

ÃÎÑÒ 10444.1—84 Êîíñåðâû. Ïðèãîòîâëåíèå ðàñòâîðîâ ðåàêòèâîâ, êðàñîê, èíäèêàòîðîâ è ïè-

òàòåëüíûõ ñðåä, ïðèìåíÿåìûõ â ìèêðîáèîëîãè÷åñêîì àíàëèçå

ÃÎÑÒ 24104—2001 Âåñû ëàáîðàòîðíûå. Îáùèå òåõíè÷åñêèå òðåáîâàíèÿ

ÃÎÑÒ 24363—80 Ðåàêòèâû. Êàëèÿ ãèäðîîêèñü. Òåõíè÷åñêèå óñëîâèÿ

1

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Èçäàíèå îôèöèàëüíîå

ÃÎÑÒ 26668—85 Ïðîäóêòû ïèùåâûå è âêóñîâûå. Ìåòîäû îòáîðà ïðîá äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ

àíàëèçîâ

ÃÎÑÒ 26669—85 Ïðîäóêòû ïèùåâûå è âêóñîâûå. Ïîäãîòîâêà ïðîá äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ àíà-

ëèçîâ

ÃÎÑÒ 26670—91 Ïðîäóêòû ïèùåâûå. Ìåòîäû êóëüòèâèðîâàíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ

ÃÎÑÒ 30425—97 Êîíñåðâû. Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ ïðîìûøëåííîé ñòåðèëüíîñòè

Ï ð è ì å ÷ à í è å — Ïðè ïîëüçîâàíèè íàñòîÿùèì ñòàíäàðòîì öåëåñîîáðàçíî ïðîâåðèòü äåéñòâèå ññûëî÷-íûõ ñòàíäàðòîâ â èíôîðìàöèîííîé ñèñòåìå îáùåãî ïîëüçîâàíèÿ — íà îôèöèàëüíîì ñàéòå Ôåäåðàëüíîãîàãåíòñòâà ïî òåõíè÷åñêîìó ðåãóëèðîâàíèþ è ìåòðîëîãèè â ñåòè Èíòåðíåò èëè ïî åæåãîäíî èçäàâàåìîìó èíôîðìà-öèîííîìó óêàçàòåëþ «Íàöèîíàëüíûå ñòàíäàðòû», êîòîðûé îïóáëèêîâàí ïî ñîñòîÿíèþ íà 1 ÿíâàðÿ òåêóùåãî ãîäà, èïî ñîîòâåòñòâóþùèì åæåìåñÿ÷íî èçäàâàåìûì èíôîðìàöèîííûì óêàçàòåëÿì, îïóáëèêîâàííûì â òåêóùåì ãîäó.Åñëè ññûëî÷íûé ñòàíäàðò çàìåíåí (èçìåíåí), òî ïðè ïîëüçîâàíèè íàñòîÿùèì ñòàíäàðòîì ñëåäóåò ðóêîâîäñòâî-âàòüñÿ çàìåíÿþùèì (èçìåíåííûì) ñòàíäàðòîì. Åñëè ññûëî÷íûé ñòàíäàðò îòìåíåí áåç çàìåíû, òî ïîëîæåíèå, â êî-òîðîì äàíà ññûëêà íà íåãî, ïðèìåíÿåòñÿ â ÷àñòè, íå çàòðàãèâàþùåé ýòó ññûëêó.

3 Òåðìèíû è îïðåäåëåíèÿ

Â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå ïðèìåíåíû ñëåäóþùèå òåðìèíû ñ ñîîòâåòñòâóþùèìè îïðåäåëåíèÿìè:

3.1 êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè: Ãðàìïîëîæèòåëüíûå, êàòàëàçîïîëîæèòåëüíûå

ìèêðîîðãàíèçìû, êîòîðûå îáðàçóþò òèïè÷íûå è/èëè àòèïè÷íûå êîëîíèè íà èëè â ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè-÷åñêîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå, äàþùèå ïîëîæèòåëüíóþ ðåàêöèþ íà êîàãóëàçó èëè ñïåöèôè÷íóþ äëÿ êðî-ëè÷üåé ïëàçìû ðåàêöèþ íà àãàðå ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è ôèáðèíîãåíîì ïðè îïðåäåëåíèè ïî ìåòîäàì,ïðèâåäåííûì â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå.

3.2 Staphylococcus aureus (S. àureus): Êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè, îáðàçóþùèå

àöåòîèí è ôåðìåíòèðóþùèå ìàëüòîçó â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ ïðè îïðåäåëåíèè ýòèõ áèîõèìè÷åñêèõ

òåñòîâ ïî ìåòîäàì, ïðèâåäåííûì â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå.

3.3 âûÿâëåíèå êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus: Îïðåäåëåíèå ïðèñóò-

ñòâèÿ èëè îòñóòñòâèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus â îïðåäåëåííîé ìàññå èëè

îáúåìå ïðîäóêòà ïî ìåòîäàì, ïðèâåäåííûì â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå.

3.4 îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus: Êîëè-

÷åñòâî êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. aureus, ñîäåðæàùååñÿ â 1 ñì3 èëè 1 ã ïðîäóê-

òà è îïðåäåëåííîå ïî ìåòîäàì, ïðèâåäåííûì â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå.

4 Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ è îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus

4.1 Ìåòîä âûÿâëåíèÿ è ìåòîä ÍÂ× — îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus ñ ïðåäâàðèòåëüíûì îáîãàùåíèåì

Ñóùíîñòü ìåòîäîâ

Ìåòîä âûÿâëåíèÿ è ìåòîä ÍÂ× — îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîê-êîâ è S. aureus ïîñåâîì ñ ïðåäâàðèòåëüíûì îáîãàùåíèåì îñíîâàíû íà âûñåâå íàâåñêè ïðîäóêòà è (èëè)ðàçâåäåíèé íàâåñêè ïðîäóêòà â æèäêóþ ñåëåêòèâíóþ ñðåäó, èíêóáèðîâàíèè ïîñåâîâ, ïåðåñåâå êóëüòó-ðàëüíîé æèäêîñòè íà ïîâåðõíîñòü àãàðèçîâàííîé ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêîé ñðåäû, ïîäòâåðæäåíèèïî áèîõèìè÷åñêèì ïðèçíàêàì ïðèíàäëåæíîñòè âûäåëåííûõ òèïè÷íûõ è (èëè) àòèïè÷íûõ êîëîíèé ê êîàãó-ëàçîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì è S. aureus.

Ïðè ïåðåñåâå íà àãàðèçîâàííóþ ñðåäó ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì âûðîñøèåòèïè÷íûå êîëîíèè áåç ïîäòâåðæäåíèÿ ïî áèîõèìè÷åñêèì ïðèçíàêàì îòíîñÿò ê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûìñòàôèëîêîêêàì.

4.1.1 Ìåòîä âûÿâëåíèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus

4.1.1.1 Îïðåäåëåííîå êîëè÷åñòâî æèäêîãî ïðîäóêòà èëè îïðåäåëåííîå êîëè÷åñòâî èñõîäíîé ñóñ-ïåíçèè ïðè èñïîëüçîâàíèè ïðîäóêòà äðóãîé êîíñèñòåíöèè âíîñÿò â æèäêóþ ñåëåêòèâíóþ ïèòàòåëüíóþñðåäó.

2

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Ïåðåä ïîñåâîì àíàýðîáíûå óñëîâèÿ â ñðåäå ñîçäàþò êèïÿ÷åíèåì ïðè (100 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí,íàñëîåíèåì àãàðà èëè ïàðàôèíà â êàæäóþ ïðîáèðêó ïîñëå ïîñåâà, à òàêæå ñ ïîìîùüþ àëüòåðíàòèâíîéïðîöåäóðû — èíêóáèðîâàíèÿ ïðîáèðîê â åìêîñòè èëè èíêóáàòîðå â àíàýðîáíûõ óñëîâèÿõ.

4.1.1.2 Ïðîáèðêè ñ ïîñåâàìè èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 24—48 ÷. Ïðåäïîëîæè-òåëüíîå ïðèñóòñòâèå êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ íà Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíå îïðåäåëÿ-åòñÿ ïî ðåäóêöèè òåëëóðèòà êàëèÿ, à íà ãëþêîçíîì èëè ñîëåâîì áóëüîíå — ïî ïîìóòíåíèþ ñðåäû.

4.1.1.3 Ïîâåðõíîñòü îäíîé èç àãàðèçîâàííûõ ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêèõ ñðåä (Áàéðä-Ïàðêåðàãàðà, ìîëî÷íî-ñîëåâîãî àãàðà, ÿè÷íî-æåëòî÷íî-àçèäíîãî àãàðà, ÿè÷íî-æåëòî÷íî-ñîëåâîãî àãàðà, àãà-ðà ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì) èíîêóëèðóþò èç ïðåäïîëîæèòåëüíî ïîëîæèòåëüíûõïðîáèðîê (ñì. 4.1.1.3) ïîñëå 24 ÷ è âñå îñòàâøååñÿ ïðîáèðêè ïîñëå 48 ÷.

4.1.1.4 ×àøêè Ïåòðè ñ ïîñåâàìè èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 24—48 ÷.Ïðåäïîëîæèòåëüíîå ïðèñóòñòâèå êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ îïðåäåëÿåòñÿ ïî ðå-

äóêöèè òåëëóðèòà êàëèÿ è ÿè÷íî-æåëòî÷íîé ðåàêöèè (ëåöèòèíàçíîé àêòèâíîñòè).Íà àãàðå ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ ïðèñóòñòâèå êîàãóëà-

çîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ îïðåäåëÿåòñÿ ïî òèïè÷íûì êîëîíèÿì, ïîêàçàâøèì ñïåöèôè÷íóþ ðå-àêöèþ (áû÷èé ôèáðèíîãåí/êðîëè÷üÿ ïëàçìà).

4.1.1.5 Ïîäòâåðæäåíèå ïðèíàäëåæíîñòè òèïè÷íûõ è (èëè) àòèïè÷íûõ êîëîíèé ê êîàãóëàçîïîëîæè-òåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì ïðîâîäÿò ïî èçó÷åíèþ îòíîøåíèÿ âûÿâëåííûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ê îêðàñêå ïî

Ãðàìó, îïðåäåëåíèþ ïðèñóòñòâèÿ ó íèõ êàòàëàçû è êîàãóëàçû.Ïîäòâåðæäåíèå ïðèíàäëåæíîñòè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ê S. aureus ïðîâî-

äÿò ïî îïðåäåëåíèþ îáðàçîâàíèÿ àöåòîèíà, îïðåäåëåíèþ ôåðìåíòàöèè â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ ìàëü-

òîçû è, ïðè íåîáõîäèìîñòè, îïðåäåëåíèþ òåðìîñòàáèëüíîé íóêëåàçû è ãåìîëèòè÷åñêîé àêòèâ-

íîñòè.

4.1.1.6 Ðåçóëüòàòû âûÿâëåíèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus âûðàæàþò:«îáíàðóæåíû» èëè «íå îáíàðóæåíû» â õ ñì3 èëè õ ãðàììàõ ïðîäóêòà.

4.1.2 Ìåòîä ÍÂ× — îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è

S.aureus

4.1.2.1 Íàâåñêè ïðîäóêòà è (èëè) ñåðèþ ðàçâåäåíèé íàâåñêè ïðîäóêòà âíîñÿò â æèäêóþ ñåëåêòèâ-íóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó. Èíêóáèðîâàíèå ïîñåâîâ è ïîäòâåðæäåíèå ïðèñóòñòâèÿ â íèõ êîàãóëàçîïîëî-

æèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus ïðîâîäÿò ïî 4.1.1.3— 4.1.1.6.

4.1.2.2 Íàèáîëåå âåðîÿòíîå ÷èñëî êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus â 1 ñì3

èëè â 1 ã ïðîäóêòà îïðåäåëÿþò äëÿ ïîäòâåðæäåííûõ ïîñåâîâ, ïîëüçóÿñü ÍÂ×-òàáëèöåé ïî ÃÎÑÒ 26670.

4.2 Ìåòîäû îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus

ïîñåâîì íà (â) àãàðèçîâàííûå ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêèå ñðåäû

Ñóùíîñòü ìåòîäîâÌåòîäû îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. aureus ïîñåâîì íà

(â) àãàðèçîâàííûå ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêèå ñðåäû îñíîâàíû íà âûñåâå íàâåñêè ïðîäóêòà è/èëè ðàç-âåäåíèÿ íàâåñêè ïðîäóêòà íà (â) àãàðèçîâàííóþ ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêóþ ñðåäó, èíêóáèðîâàíèè ïî-ñåâîâ, ïîäñ÷åòå òèïè÷íûõ è (èëè) àòèïè÷íûõ êîëîíèé, ïîäòâåðæäåíèè ïî áèîõèìè÷åñêèì ïðèçíàêàìïðèíàäëåæíîñòè âûäåëåííûõ êîëîíèé ê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì è S. aureus.

4.2.1 Ïðîâîäÿò ïîñåâ îïðåäåëåííîãî êîëè÷åñòâà æèäêîãî ïðîäóêòà èëè îïðåäåëåííîå êîëè÷åñòâîèñõîäíîé ñóñïåíçèè ïðè èñïîëüçîâàíèè ïðîäóêòà äðóãîé êîíñèñòåíöèè íà èëè â àãàðèçîâàííóþ ñåëåê-òèâíî-äèàãíîñòè÷åñêóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó íà äâå ïàðàëëåëüíûå ÷àøêè Ïåòðè.

Àíàëîãè÷íî ïðîâîäÿò ïîñåâ äåñÿòèêðàòíûõ ðàçâåäåíèé èñïûòóåìîãî ïðîäóêòà.4.2.2 Ïîñåâû â ÷àøêàõ Ïåòðè èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 24—48 ÷.4.2.3 Êîëè÷åñòâî êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ â 1 ñì3 èëè 1 ã ïðîäóêòà îïðåäåëÿþò ïî

÷èñëó òèïè÷íûõ è/èëè àòèïè÷íûõ êîëîíèé, âûðîñøèõ íà ÷àøêàõ Ïåòðè, ïðèíàäëåæíîñòü êîòîðûõ ê êîàãó-ëàçîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì ïîäòâåðæäåíà ïóòåì îïðåäåëåíèÿ îòíîøåíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ

èç ýòèõ êîëîíèé ê îêðàñêå ïî Ãðàìó, íàëè÷èÿ ó íèõ êàòàëàçû è êîàãóëàçû.Ïðè ïîñåâå â èëè íà àãàðèçîâàííóþ ñðåäó ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì îïðåäåëÿ-

þò òîëüêî òèïè÷íûå êîëîíèè è áåç ïîäòâåðæäåíèÿ ïî áèîõèìè÷åñêèì ïðèçíàêàì èõ îòíîñÿò ê êîàãóëàçî-ïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì.

3

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Êîëè÷åñòâî S. aureus â 1 ñì3 èëè 1 ã ïðîäóêòà îïðåäåëÿþò èñõîäÿ èç êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëî-æèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ, ïðèíàäëåæíîñòü êîòîðûõ ê S. aureus ïîäòâåðæäåíà ïî îáðàçîâàíèþ àöå-òîèíà, îïðåäåëåíèþ ôåðìåíòàöèè â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ ìàëüòîçû è, ïðè íåîáõîäèìîñòè, îïðåäåëå-

íèþ òåðìîñòàáèëüíîé íóêëåàçû è ãåìîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè.

5 Ïèòàòåëüíûå ñðåäû, ðàñòâîðû ðåàêòèâîâ, ýìóëüñèèè äåôèáðèíèðîâàííàÿ êðîâü

Õèìè÷åñêèå âåùåñòâà, èñïîëüçóåìûå äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ïèòàòåëüíûõ ñðåä, ðàñòâîðîâ ðåàê-òèâîâ, ýìóëüñèé, äîëæíû áûòü àíàëèòè÷åñêîãî êà÷åñòâà.

5.1 Àãàðèçîâàííàÿ ñðåäà Áàéðä-Ïàðêåðà5.1.1 Îñíîâà ñðåäû5.1.1.1 Ñîñòàâ:ôåðìåíòàòèâíûé ãèäðîëèçàò êàçåèíà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10,0 ã;äðîææåâîé ýêñòðàêò . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1,0 ã;ìÿñíîé ýêñòðàêò. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 ã;ïèðóâàò íàòðèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10,0 ã;L-ãëèöèí . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12,0 ã;õëîðèä ëèòèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 ã;àãàð . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . îò 12 äî 22 ã1);âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1000 ñì3.

5.1.1.2 ÏðèãîòîâëåíèåÏðè íàãðåâàíèè ðàñòâîðÿþò â âîäå âñå êîìïîíåíòû èëè äåãèäðàòèðîâàííóþ îñíîâó. Óñòàíàâëèâà-

þò ðÍ òàê, ÷òîáû ïîñëå ñòåðèëèçàöèè îí ñîñòàâëÿë (7,2 � 0,2) ïðè òåìïåðàòóðå 25 °Ñ.Ðàçëèâàþò ñðåäó ïî 100 ñì3 â êîëáû èëè ôëàêîíû ñîîòâåòñòâóþùåé âìåñòèìîñòè.Ñòåðèëèçóþò ñðåäó â àâòîêëàâå ïðè òåìïåðàòóðå (121 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí.5.1.2 Ðàñòâîð òåëëóðèòà êàëèÿ5.1.2.1 Ñîñòàâ:òåëëóðèò êàëèÿ (Ê2ÒåÎ3) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1,0 ã;âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 ñì3.

Ï ð è ì å ÷ à í è å — Íåîáõîäèìî ïðåäâàðèòåëüíî óáåäèòüñÿ, ÷òî èìåþùèéñÿ â íàëè÷èè òåëëóðèò êàëèÿïðèãîäåí äëÿ äàííîãî èñïûòàíèÿ.

5.1.2.2 ÏðèãîòîâëåíèåÏîëíîñòüþ ðàñòâîðÿþò òåëëóðèò êàëèÿ â âîäå ïðè ìèíèìàëüíîì íàãðåâàíèè.Òâåðäîå âåùåñòâî äîëæíî ëåãêî ðàñòâîðÿòüñÿ. Åñëè â âîäå ïðèñóòñòâóåò áåëûé íåðàñòâîðèìûé

îñàäîê, òî òàêîé ïîðîøîê íå èñïîëüçóþò.Ñòåðèëèçóþò ïðèãîòîâëåííûé ðàñòâîð òåëëóðèòà êàëèÿ ïóòåì ôèëüòðàöèè ÷åðåç ìåìáðàííûé

ôèëüòð ñ ðàçìåðîì ïîð 0,22 ìêì.Ðàñòâîð ìîæíî õðàíèòü íå áîëåå 1 ìåñ ïðè òåìïåðàòóðå (3 � 2) °Ñ.Åñëè ïðè õðàíåíèè ðàñòâîðà îáðàçóåòñÿ áåëûé îñàäîê, òî òàêîé ðàñòâîð íå èñïîëüçóþò.5.1.3 Ýìóëüñèÿ ÿè÷íîãî æåëòêà (ïðèáëèçèòåëüíî 20 %-íîé êîíöåíòðàöèè)Ñâåæèå êóðèíûå ÿéöà ñ íåïîâðåæäåííîé ñêîðëóïîé ìîþò ùåòêîé ñ ïðèìåíåíèåì æèäêèõ ìîþùèõ

ñðåäñòâ, îïîëàñêèâàþò ïðîòî÷íîé âîäîé, äåçèíôèöèðóþò ïîãðóæåíèåì íà 30 ñ â 70 %-íûé (îáúåì/îáú-åì) ýòèëîâûé ñïèðò ñ ïîñëåäóþùèì ïðîñóøèâàíèåì íà âîçäóõå èëè, ïîñëå òîãî êàê ðàñòâîð ñïèðòà ñòå-÷åò, ÿéöà ôëàìáèðóþò â ïëàìåíè ãîðåëêè. Ñ ñîáëþäåíèåì ïðàâèë àñåïòèêè ðàçáèâàþò ñêîðëóïó ÿéöà èîòäåëÿþò æåëòîê îò áåëêà, ïîî÷åðåäíî ïåðåíîñÿ æåëòîê èç îäíîé ïîëîâèíêè ñêîðëóïû â äðóãóþ. Æåëòêèïîìåùàþò â ñòåðèëüíóþ êîëáó è äîáàâëÿþò 4-êðàòíîå êîëè÷åñòâî (ïî îáúåìó) ñòåðèëüíîé âîäû. Ñìåñüòùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò, âûäåðæèâàþò íà âîäÿíîé áàíå ïðè òåìïåðàòóðå (47 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 2 ÷, à çà-òåì îñòàâëÿþò íà 18—24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå (3 � 2) °Ñ äëÿ îáðàçîâàíèÿ îñàäêà.

Äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ ñîáèðàþò â àñåïòè÷åñêèõ óñëîâèÿõ â ñòåðèëüíóþ êîëáó íàäîñàäî÷íóþ æèä-êîñòü. Ïðèãîòîâëåííóþ ýìóëüñèþ ìîæíî õðàíèòü ïðè òåìïåðàòóðå (3 � 2) °Ñ íå áîëåå 72 ÷.

Äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçîâàíèå ãîòîâîé ýìóëüñèè ïðîìûøëåííîãî ïðîèçâîäñòâà, â ýòîì ñëó÷àåýìóëüñèþ ïðèìåíÿþò â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóêöèåé èçãîòîâèòåëÿ.

Äîïóñêàåòñÿ ïðîâîäèòü ïðèãîòîâëåíèå æåëòî÷íîé ýìóëüñèè ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

1) Â çàâèñèìîñòè îò æåëèðóþùåé ñïîñîáíîñòè àãàðà.

4

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

5.1.4 Ðàñòâîð ñóëüôàìåòàçèíà (ñóëüôàìåçàòèíà, cóëüôàäèìèäèíà)Ðàñòâîð èñïîëüçóþò òîëüêî â ñëó÷àå ïîäîçðåíèÿ ïðèñóòñòâèÿ â èñïûòóåìîì ïðîäóêòå áàêòåðèé

ðîäà Proteus èëè ïðè èñïûòàíèè ñèëüíî îáñåìåíåííûõ ïðîäóêòîâ, íàïðèìåð, èç ñûðîãî ìÿñà.5.1.4.1 Ñîñòàâ:ñóëüôàìåòàçèí . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,2 ã;ðàñòâîð ãèäðîêñèäà íàòðèÿ, ñ (NaOH) = 0,1 ìîëü/ë . . . . . . . . . . . . . . 10 ñì3;âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90 ñì3.

5.1.4.2 ÏðèãîòîâëåíèåÐàñòâîðÿþò ñóëüôàìåòàçèí â ðàñòâîðå ãèäðîêñèäà íàòðèÿ. Äîâîäÿò îáúåì âîäîé äî 100 ñì3 .Ñòåðèëèçóþò ïóòåì ôèëüòðàöèè ÷åðåç ìåìáðàííûé ôèëüòð ñ ðàçìåðîì ïîð 0,22 ìêì.Ïðèãîòîâëåííûé ðàñòâîð äîïóñêàåòñÿ õðàíèòü íå áîëåå 1 ìåñ ïðè òåìïåðàòóðå (3 � 2) °Ñ.5.1.5 Ãîòîâàÿ ïèòàòåëüíàÿ ñðåäà5.1.5.1 Ñîñòàâ:îñíîâà ñðåäû (ñì. 5.1.1) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 ñì3;ðàñòâîð òåëëóðèòà êàëèÿ (ñì. 5.1.2). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1,0 ñì3;ýìóëüñèÿ ÿè÷íîãî æåëòêà (ñì. 5.1.3) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 ñì3;ðàñòâîð ñóëüôàìåòàçèíà (ñì. 5.1.4) (åñëè íåîáõîäèìî) . . . . . . . . . . . 2,5 ñì3 .

5.1.5.2 ÏðèãîòîâëåíèåÐàñïëàâëÿþò îñíîâó, çàòåì îõëàæäàþò äî òåìïåðàòóðû ïðèìåðíî 47 °Ñ íà âîäÿíîé áàíå. Â àñåïòè-

÷åñêèõ óñëîâèÿõ äîáàâëÿþò äâà äðóãèõ ðàñòâîðà è, åñëè íåîáõîäèìî, ðàñòâîð ñóëüôàìåòàçèíà (ñì.5.1.4). Ïðåäâàðèòåëüíî êàæäûé ðàñòâîð ïîäîãðåâàþò íà âîäÿíîé áàíå ïðè 47 °Ñ, òùàòåëüíî ïåðåìåøè-âàÿ ñðåäó ïîñëå êàæäîãî ïðèáàâëåíèÿ ðàñòâîðà.

5.1.6 Ïðèãîòîâëåíèå ÷àøåê Ïåòðè ñ àãàðèçîâàííîé ñðåäîé Áàéðä-ÏàðêåðàÐàçëèâàþò ñîîòâåòñòâóþùåå êîëè÷åñòâî ãîòîâîé ñðåäû (ñì. 5.1.5) â ñòåðèëüíûå ÷àøêè Ïåòðè, ÷òî-

áû ïîëó÷èòü àãàðîâûé ñëîé òîëùèíîé ïðèìåðíî 4 ìì, è äàþò çàñòûòü. Ïðèãîòîâëåííûå ÷àøêè ìîæíîõðàíèòü äî èñïîëüçîâàíèÿ 24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå (3 � 2) °Ñ.

Ïåðåä ïðèìåíåíèåì ñðåäó â ÷àøêàõ ïîäñóøèâàþò â ñóøèëüíîì øêàôó ïðè òåìïåðàòóðå îò 25 °Ñäî 50 °Ñ äî òåõ ïîð, ïîêà ñ ïîâåðõíîñòè ñðåäû íå èñ÷åçíóò êàïåëüêè âëàãè. Ïðåäïî÷òèòåëüíåé ïîäñóøè-âàòü ñðåäó ïðè ñíÿòûõ êðûøêàõ è ïîâåðõíîñòüþ ñðåäû âíèç.

5.2 Áóëüîí íà îñíîâå âûòÿæêè èç ñåðäöà è ìîçãà

5.2.1 Ñîñòàâ:ïðîäóêò ôåðìåíòàòèâíîãî ãèäðîëèçà æèâîòíûõ òêàíåé . . . . . . . . . . . . 10,0 ã;äåãèäðàòèðîâàííàÿ âûòÿæêà ìîçãà òåëåíêà . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12,5 ã;äåãèäðàòèðîâàííàÿ âûòÿæêà ñåðäöà òåëåíêà . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 ã;ãëþêîçà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2,0 ã;õëîðèä íàòðèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 ã;äâóçàìåùåííûé ôîñôîðíîêèñëûé íàòðèé, áåçâîäíûé (Na2HPO4) . . . . . . 2,5 ã;âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1000 ñì3.

5.2.2 ÏðèãîòîâëåíèåÏðè íàãðåâàíèè ðàñòâîðÿþò êîìïîíåíòû èëè äåãèäðàòèðîâàííóþ îñíîâó ñðåäû â âîäå.Óñòàíàâëèâàþò ðÍ òàêèì îáðàçîì, ÷òîáû ïîñëå ñòåðèëèçàöèè îí ñîñòàâëÿë ïðè òåìïåðàòóðå 25 °Ñ

(7,4 � 0,2).Ðàçëèâàþò ïèòàòåëüíóþ ñðåäó ïî 5—10 ñì3 â ïðîáèðêè. Ñòåðèëèçóþò ñðåäó â òå÷åíèå 15 ìèí ïðè

òåìïåðàòóðå (121 � 1) °Ñ.

5.3 Ïëàçìà êðîâè êðîëèêà

5.3.1 Ñâåæåïîëó÷åííóþ â àñåïòè÷åñêèõ óñëîâèÿõ èç ñåðäöà êðîëèêà êðîâü òùàòåëüíî ñìåøèâà-þò â ñîîòíîøåíèè 4:1 ñî ñòåðèëüíûì ðàñòâîðîì ëèìîííîêèñëîãî íàòðèÿ (öèòðàòà íàòðèÿ). Ïîëó-÷åííóþ ñìåñü öåíòðèôóãèðóþò â òå÷åíèå 15 ìèí ïðè 3000 îá/ìèí èëè îòñòàèâàþò íà õîëîäå ïðèòåìïåðàòóðå (3 � 2) °Ñ, çàòåì ïëàçìó îòñàñûâàþò ïèïåòêîé è ðàçâîäÿò åå èç ðàñ÷åòà 1 ñì3 ïëàçìûíà 4 ñì3 ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. Ðàçâåäåííóþ ïëàçìó ïî 0,5 ñì3 ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ïðî-áèðêè.

Åñëè â êà÷åñòâå àíòèêîàãóëÿíòà ïëàçìû èñïîëüçîâàëèñü öèòðàòû êàëèÿ èëè íàòðèÿ, òî ê ïëàçìå äî-áàâëÿþò ðàñòâîð ÝÄÒÀ (ýòèëåíäèàìèíòåòðàóêñóñíàÿ êèñëîòà) äî êîíöåíòðàöèè ÝÄÒÀ â ïëàçìå 0,1 %. Âïëàçìó, ñîäåðæàùóþ îêñàëàò èëè ãåïàðèí ÝÄÒÀ, íå äîáàâëÿåòñÿ.

5

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ àãàðà ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì ê ïëàçìå äîáàâëÿþò òðèï-ñèí èç ðàñ÷åòà 30 ìã òðèïñèíà íà 30 ñì3 ïëàçìû. Ïëàçìó ãîòîâÿò íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä ïðèìåíåíèåì.

Åñëè èñïîëüçóåòñÿ ãîòîâàÿ îáåçâîæåííàÿ ïëàçìà, òî âîññòàíîâëåíèå è èñïîëüçîâàíèå òàêîé ïëàç-ìû ïðîâîäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðèëàãàåìîé ê íåé èíñòðóêöèåé. Ïëàçìà ãîòîâèòñÿ íåïîñðåäñòâåííî ïå-ðåä ïðèìåíåíèåì.

Êà÷åñòâî ïëàçìû òåñòèðóåòñÿ ñ ïîìîùüþ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ è êîàãóëàçîîòðèöàòåëüíûõøòàììîâ ñòàôèëîêîêêîâ.

5.3.2 Ðàñòâîð ëèìîííîêèñëîãî íàòðèÿ

5.3.2.1 Ñîñòàâ:

ëèìîííîêèñëûé íàòðèé . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 ã;

âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 ñì3.

5.3.2.2 Ïðèãîòîâëåíèå

Ëèìîííîêèñëûé íàòðèé ïîìåùàþò â êîëáó, ðàñòâîðÿþò â âîäå. Ðàñòâîð äîâîäÿò äî ìåòêè,

ðàçëèâàþò ïî êîëáàì èëè ïðîáèðêàì è ñòåðèëèçóþò ïðè òåìïåðàòóðå (121 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí.

5.4 Àãàðèçîâàííàÿ ñðåäà ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì

Ñëåäóåò ó÷èòûâàòü îïûò èñïîëüçîâàíèÿ ãîòîâûõ ïàðòèé äîáàâîê. Ðåêîìåíäóåòñÿ êàæäóþ ïàðòèþðàñòâîðà áû÷èé ôèáðèíîãåí/êðîëè÷üÿ ïëàçìà ïîäâåðãàòü òåñòèðîâàíèþ ïóòåì ïîñòàíîâêè ïîëîæèòåëü-íîãî è îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëÿ.

5.4.1 Îñíîâà ñðåäûÎñíîâó ñðåäû ãîòîâÿò ïî 5.1, íî ïåðåä ñòåðèëèçàöèåé ñðåäó ðàçëèâàþò ïî 90 ñì3 â êîëáû èëè ôëà-

êîíû.5.4.2 Ðàñòâîð áû÷üåãî ôèáðèíîãåíà5.4.2.1 Ñîñòàâ:áû÷èé ôèáðèíîãåí . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5—7 ã1);ñòåðèëüíàÿ âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 ñì3.

5.4.2.2 ÏðèãîòîâëåíèåÑ ñîáëþäåíèåì ïðàâèë àñåïòèêè ðàñòâîðÿþò áû÷èé ôèáðèíîãåí â âîäå íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä

èñïîëüçîâàíèåì.5.4.3 Êðîëè÷üÿ ïëàçìà è òðèïñèí èíãèáèðóþùèé ðàñòâîð5.4.3.1 Ñîñòàâ:êðîëè÷üÿ ïëàçìà ñ ÝÄÒÀ äëÿ êîàãóëàçû (ÝÄÒÀ êîàãóëàçíàÿ ïëàçìà) . . . . 30 ñì3;òðèïñèí èíãèáèòîð . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30 ìã.

5.4.3.2 ÏðèãîòîâëåíèåÐàñòâîð ãîòîâÿò ñ ñîáëþäåíèåì ïðàâèë àñåïòèêè, ðàñòâîðÿþò êîìïîíåíòû â âîäå íåïîñðåäñòâåí-

íî ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì.Åñëè èñïîëüçóþò ãîòîâûé ðàñòâîð áû÷èé ôèáðèíîãåí/êðîëè÷üÿ ïëàçìà, òî íåîáõîäèìî ñîáëþäàòü

èíñòðóêöèþ ïî ïðèãîòîâëåíèþ äàííîãî ðàñòâîðà è ãîòîâîé ñðåäû. Îñîáåííî íàäî îáðàùàòü âíèìàíèåíà òåìïåðàòóðó îñíîâû ñðåäû. Ïðè íåñîáëþäåíèè òåìïåðàòóðû ñðåäà ìîæåò ïîòåðÿòü ñâîþ àêòèâ-íîñòü.

5.4.4 Ãîòîâàÿ ñðåäà5.4.4.1 Ñîñòàâ:îñíîâà ñðåäû (ñì. 5.4.1) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90 ñì3;ðàñòâîð òåëëóðèòà êàëèÿ (ñì. 5.1.2). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,25 ñì3;ðàñòâîð ôèáðèíîãåíà (ñì. 5.4.2) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7,5 ñì3;êðîëè÷üÿ ïëàçìà è òðèïñèí èíãèáèðóþùèé ðàñòâîð (ñì. 5.4.3) . . . . . . . . 2,5 ñì3.

5.4.4.2 ÏðèãîòîâëåíèåÐàñïëàâëÿþò îñíîâó ñðåäû, îõëàæäàþò â âîäÿíîé áàíå äî òåìïåðàòóðû (47 � 1) °Ñ. Ñ ñîáëþäåíè-

åì ïðàâèë àñåïòèêè ïðèáàâëÿþò òðè ðàñòâîðà, ïðåäâàðèòåëüíî ïîäîãðåòûõ äî (47 � 1) °Ñ â âîäÿíîéáàíå. Òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò ñðåäó âðàùåíèåì ïîñëå êàæäîãî ïðèáàâëåíèÿ, ìèíèìèçèðóÿ âñïåíè-âàíèå.

Èñïîëüçóþò ãîòîâóþ ñðåäó íåïîñðåäñòâåííî ïîñëå ïðèãîòîâëåíèÿ, òåì ñàìûì èçáåãàÿ ïðåöèïèòà-öèè ïëàçìû.

1) Çàâèñèò îò ÷èñòîòû áû÷üåãî ôèáðèíîãåíà.

6

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

5.5 Ìîäèôèöèðîâàííûé Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîí

5.5.1 Îñíîâà ñðåäû5.5.1.1 Ñîñòàâ ìîäèôèöèðîâàííîãî Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíà ïðèâåäåí â òàáëèöå 1.

Ò à á ë è ö à 1

Íàèìåíîâàíèå êîìïîíåíòàÑðåäà äâîéíîéêîíöåíòðàöèè

Ñðåäà íîðìàëüíîéêîíöåíòðàöèè

Ôåðìåíòàòèâíûé ãèäðîëèçàò êàçåèíàÌÿñíîé ýêñòðàêòÄðîææåâîé ýêñòðàêòÕëîðèñòûé ëèòèéÌàííèòÕëîðèñòûé íàòðèéÃëèöèíÏèðóâàò íàòðèÿÏîëèîêñèýòèëåí ñîðáèòàí ìîíîîëåàò (òâèí-80)Âîäà

20,0 ã10,0 ã10,0 ã10,0 ã40,0 ã10,0 ã2,4 ã6,0 ã2,0 ã

1000 ñì3

10,0 ã5,0 ã5,0 ã5,0 ã20,0 ã5,0 ã1,2 ã3,0 ã1,0 ã

1000 ñì3

5.5.1.2 ÏðèãîòîâëåíèåÏðè íàãðåâàíèè è ïîìåøèâàíèè ðàñòâîðÿþò êîìïîíåíòû èëè äåãèäðàòèðîâàííóþ îñíîâó â âîäå.

Îõëàæäàþò äî êîìíàòíîé òåìïåðàòóðû è óñòàíàâëèâàþò ðÍ òàê, ÷òîáû ïîñëå ñòåðèëèçàöèè îí ñîñòàâ-ëÿë (6,9 � 0,2) ïðè òåìïåðàòóðå 25 °Ñ.

Ðàçëèâàþò ñðåäó â ñîîòâåòñòâóþùåì êîëè÷åñòâå â ïðîáèðêè ñîîòâåòñòâóþùåãî îáúåìà —16 �160 ìì äëÿ ñðåäû íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèè è 20 � 200 ìì — äëÿ ñðåäû äâîéíîé êîíöåíòðàöèè.

Ñòåðèëèçóþò â àâòîêëàâå ïðè òåìïåðàòóðå (121 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí.5.5.2 Ãîòîâàÿ ñðåäàÏåðåä èñïîëüçîâàíèåì â âîäÿíîé áàíå ïðîãðåâàþò îñíîâó ñðåäû 15 ìèí ïðè 100 °Ñ äëÿ óäàëåíèÿ

âîçäóõà.Îõëàæäàþò äî 44 °Ñ — 47 °Ñ, àñåïòè÷åñêè ïðèáàâëÿþò ðàñòâîð òåëëóðèòà êàëèÿ ïî 5.1.2, âíîñÿ

0,1 ñì3 íà ïðîáèðêó â ñðåäó íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèè è 0,2 ñì3 â ïðîáèðêó ñî ñðåäîé äâîéíîé êîíöåí-òðàöèè.

5.6 Ãîëîäíûé àãàð

Ãîëîäíûé àãàð ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

Ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì îõëàæäàþò äî 44 °Ñ — 47 °Ñ. Íàëèâàþò â ïðîáèðêè ñîîòâåòñòâóþùåãî

îáúåìà.

5.7 Ìîëî÷íî-ñîëåâîé àãàð

Ìîëî÷íî-ñîëåâîé àãàð ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

5.8 Ìÿñîïåïòîííûé àãàð (áóëüîí)

Ìÿñîïåïòîííûé àãàð (áóëüîí) ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

5.9 Ñîëåâîé èëè ñàõàðíûé áóëüîí

5.9.1 Ñîñòàâ:

ìÿñîïåïòîííûé áóëüîí ïî ÃÎÑÒ 10444.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 ñì3;

õëîðèñòûé íàòðèé. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6,0 ã;

èëè ãëþêîçà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1,0 ã.

5.9.2 Ïðèãîòîâëåíèå

Â ìÿñîïåïòîííîì áóëüîíå ðàñòâîðÿþò 6,0 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ èëè 1,0 ã ãëþêîçû, óñòàíàâëè-

âàþò ðÍ òàê, ÷òîáû ïîñëå ñòåðèëèçàöèè îí ñîñòàâëÿë ïðè òåìïåðàòóðå 25 °Ñ (6,9 � 0,1). Áóëüîí

ðàçëèâàþò â êîëáû èëè ïðîáèðêè è ñòåðèëèçóþò ïðè òåìïåðàòóðå (121 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí.

5.10 ÃÐÌ-àãàð (ñóõîé ïèòàòåëüíûé àãàð äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ íà îñíî-

âå ãèäðîëèçàòà ðûáíîé ìóêè)

Ñðåäó ãîòîâÿò ïî èíñòðóêöèè, óêàçàííîé íà ýòèêåòêå.

7

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

5.11 Ñðåäà ñ ÄÍÊ

5.11.1 Ñîñòàâ:

òðèñàìèíîìåòàí . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6,1 ã;

äåçîêñèðèáîíóêëåèíîâàÿ êèñëîòà (ÄÍÊ). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,3 ã;

õëîðèñòûé íàòðèé. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10,0 ã;

ðàñòâîð õëîðèñòîãî êàëüöèÿ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1,1 ñì3;

àãàð . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15,0 ã;

ðàñòâîð òîëóèäèíà ñèíåãî . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9,2 ñì3.


Â âîäå ðàñòâîðÿþò òðèñàìèíîìåòàí è äîâîäÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1 ðÍ ðàñòâîðà äî (9,0 � 0,1).

Ê ðàñòâîðó äîáàâëÿþò ÄÍÊ, õëîðèñòûé íàòðèé, ðàñòâîð õëîðèñòîãî êàëüöèÿ, àãàð íàãðåâàþò

äî ïîëíîãî ðàñïëàâëåíèÿ àãàðà. Ê îõëàæäåííîé äî òåìïåðàòóðû 65 °Ñ — 55 °Ñ ñðåäå äîáàâëÿþò ðàñ-

òâîð òîëóèäèíà ñèíåãî «Ñ», òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò è ðàçëèâàþò ïî ñòåðèëüíûì ÷àøêàì

Ïåòðè.

Äîïóñêàåòñÿ õðàíåíèå ñðåäû ïðè òåìïåðàòóðå (3 � 2) °Ñ íå áîëåå 7 ñóò.

5.11.3 Ðàñòâîð õëîðèñòîãî êàëüöèÿ

5.11.3.1 Ñîñòàâ:

õëîðèñòûé êàëüöèé (ÑàÑl2) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,1 ã;

âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 ñì3.


Õëîðèñòûé êàëüöèé ïåðåíîñÿò â êîëáó âìåñòèìîñòüþ 100 ñì3, ðàñòâîðÿþò â âîäå. Ðàñòâîð

äîâîäÿò âîäîé äî ìåòêè.

5.11.4 Ðàñòâîð òîëóèäèíà ñèíåãî «Ñ»

5.11.4.1 Ñîñòàâ

òîëóèäèí ñèíèé «Ñ» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1,0 ã;

âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 ñì3.


Òîëóèäèí ñèíèé «Ñ» ïåðåíîñÿò â êîëáó âìåñòèìîñòüþ 100 ñì3, ðàñòâîðÿþò â âîäå. Ðàñòâîð

äîâîäÿò âîäîé äî ìåòêè.

5.12 Ñïèðòîâîé ðàñòâîð �-íàôòîëà

Ñïèðòîâîé ðàñòâîð �-íàôòîëà ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

5.13 Ðàñòâîð ïåðåêèñè âîäîðîäà

Ðàñòâîð ñ îáúåìíîé äîëåé ïåðåêèñè âîäîðîäà 3 % ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

5.14 ßè÷íî-æåëòî÷íî-àçèäíûé àãàð

ßè÷íî-æåëòî÷íî-àçèäíûé àãàð ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

5.15 ßè÷íî-æåëòî÷íî-ñîëåâîé àãàð

ßè÷íî-æåëòî÷íî-ñîëåâîé àãàð ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

5.16 Êðîâÿíîé àãàð


ìÿñîïåïòîííûé àãàð . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 cì3;

äåôèáðèíèðîâàííàÿ êðîâü . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5—10 ñì3.


Ê ðàñïëàâëåííîìó è îõëàæäåííîìó äî 45 °Ñ — 50 °Ñ ìÿñîïåïòîííîìó àãàðó ïðèáàâëÿþò

5 % — 10 % äåôèáðèíèðîâàííîé êðîâè æèâîòíîãî (áàðàíà, êðîëèêà, êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà). Àãàð ñ

êðîâüþ òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò, èçáåãàÿ âñïåíèâàíèÿ, è ðàçëèâàþò ïî ÷àøêàì.

5.16.3 Äåôèáðèíèðîâàííàÿ êðîâü

Êðîâü æèâîòíûõ ñîáèðàþò â ñòåðèëüíóþ ïîñóäó ñî ñòåêëÿííûìè áóñàìè è äåôèáðèíèðóþò ïó-

òåì âñòðÿõèâàíèÿ â òå÷åíèå 10 —15 ìèí. Â ðåçóëüòàòå âñòðÿõèâàíèÿ íàõîäÿùèéñÿ â êðîâè ôèáðèí

âûïàäàåò â îñàäîê, îáâîëàêèâàÿ áóñû, à äåôèáðèíèðîâàííàÿ êðîâü, ñëèòàÿ â äðóãóþ êîëáó, óòðà÷èâà-

åò ñïîñîáíîñòü ñâåðòûâàòüñÿ.

5.17 Ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð

Ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

8

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

5.18 Ñðåäà Ãèññà ñ ìàëüòîçîé

Âûïóñêàåòñÿ â ñóõîì âèäå è ãîòîâèòñÿ ïî èíñòðóêöèè, óêàçàííîé íà ýòèêåòêå.

5.19 Ðàñòâîðû è ðåàêòèâû äëÿ îêðàñêè ïî Ãðàìó

Ðàñòâîðû è ðåàêòèâû äëÿ îêðàñêè ïî Ãðàìó ãîòîâÿò ïî ÃÎÑÒ 10444.1.

5.20 Ðàñòâîð ãèäðîîêèñè êàëèÿ (ÊÎÍ)


ãèäðîîêèñü êàëèÿ (ÊÎÍ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40,0 ã;

âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . äî 100 ñì3.


Ãèäðîîêèñü êàëèÿ ïåðåíîñÿò â ìåðíóþ êîëáó âìåñòèìîñòüþ 100 ñì3 è ðàñòâîðÿþò â âîäå. Ðàñ-

òâîð äîâîäÿò âîäîé äî ìåòêè.

5.21 Ñðåäà Êëàðêà


ïåïòîí . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 ã;

ãëþêîçà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 ã;

ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåùåííûé êàëèé (Ê2ÍÐÎ4) . . . . . . . . . . . . . . 5,1 ã;

âîäà . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1000 ñì3.


Ïðè íàãðåâàíèè ðàñòâîðÿþò êîìïîíåíòû â âîäå, çàòåì îõëàæäàþò äî 45 °Ñ — 47 °Ñ è óñòà-

íàâëèâàþò ðÍ òàêèì îáðàçîì, ÷òîáû ïîñëå ñòåðèëèçàöèè îí ñîñòàâëÿë ïðè òåìïåðàòóðå 25 °Ñ

(7,2 � 0,1). Ñðåäó ðàçëèâàþò ïî 5 —7 ñì3 â ïðîáèðêè è ñòåðèëèçóþò ïðè òåìïåðàòóðå (121 � 1) °Ñ â

òå÷åíèå 15 ìèí èëè äðîáíûì ìåòîäîì — òåêó÷èì ïàðîì ïî 30 ìèí òðè äíÿ ïîäðÿä.

5.22 Äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçîâàíèå ãîòîâûõ è äåãèäðàòèðîâàííûõ, â òîì ÷èñëå õðîìîãåííûõ, ïè-

òàòåëüíûõ ñðåä, çàðåãèñòðèðîâàííûõ â Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè.

6 Àïïàðàòóðà, ïîñóäà, ìàòåðèàëû, ðåàêòèâû

Äîïóñêàåòñÿ ïðèìåíÿòü îäíîðàçîâóþ ïîñóäó, åñëè îíà îòâå÷àåò ñîîòâåòñòâóþùèì òðåáîâà-

íèÿì.Îáû÷íîå ëàáîðàòîðíîå îáîðóäîâàíèå è ðåàêòèâû äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé ïî

ÃÎÑÒ Ð 51446, ÃÎÑÒ 10444.1 ñî ñëåäóþùèìè äîïîëíåíèÿìè:- âåñû ëàáîðàòîðíûå îáùåãî íàçíà÷åíèÿ ñ ìåòðîëîãè÷åñêèìè õàðàêòåðèñòèêàìè ïî

ÃÎÑÒ 24104 ñ íàèáîëüøèì ïðåäåëîì âçâåøèâàíèÿ 200 ã (äëÿ âçâåøèâàíèÿ ðåàêòèâîâ) ñ ïðåäåëîì äî-

ïóñêàåìîé àáñîëþòíîé ïîãðåøíîñòè îäíîêðàòíîãî âçâåøèâàíèÿ íå áîëåå � 0,01 ìã;

- âåñû ëàáîðàòîðíûå îáùåãî íàçíà÷åíèÿ ñ ìåòðîëîãè÷åñêèìè õàðàêòåðèñòèêàìè ïî

ÃÎÑÒ 24104 ñ íàèáîëüøèì ïðåäåëîì âçâåøèâàíèÿ 1 êã (äëÿ âçâåøèâàíèÿ ïðîäóêòà) ñ ïðåäåëîì äîïóñ-

êàåìîé àáñîëþòíîé ïîãðåøíîñòè îäíîêðàòíîãî âçâåøèâàíèÿ íå áîëåå � 20 ìã;

- ëóïà ñ óâåëè÷åíèåì 5� — 10�;

- ìèêðîñêîï áèîëîãè÷åñêèé, îáåñïå÷èâàþùèé ïðîñìîòð â ïðîõîäÿùåì ñâåòå, ñ óâåëè÷åíèåì

900� — 1000�;

- áàêòåðèîëîãè÷åñêàÿ ïåòëÿ äèàìåòðîì îêîëî 3 ìì;- ïðèáîð äëÿ ìåìáðàííîé ôèëüòðàöèè;- ñòåêëà ïðåäìåòíûå ïî ÃÎÑÒ 9284;

- ñòåêëà ïîêðîâíûå ïî ÃÎÑÒ 6672;

- òåðìîñòàò ñ äèàïàçîíîì ðàáî÷èõ òåìïåðàòóð 28 °Ñ — 55 °Ñ, ïîçâîëÿþùèé ïîääåðæèâàòü çàäàí-íóþ òåìïåðàòóðó ñ äîïóñòèìîé ïîãðåøíîñòüþ � 1 °Ñ;

- áû÷èé ôèáðèíîãåí;- äåçîêñèðèáîíóêëåèíîâàÿ êèñëîòà (ÄÍÊ);

- äåôèáðèíèðîâàííàÿ êðîâü;

- ñóõîé äðîææåâîé ýêñòðàêò;- êàëèÿ ãèäðîîêèñü ïî ÃÎÑÒ 24363;

- êàëüöèé õëîðèñòûé ïî ÃÎÑÒ 450;

- êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûé è êîàãóëàçîîòðèöàòåëüíûé øòàììû ñòàôèëîêîêêîâ;- ñóõîé ìÿñíîé ýêñòðàêò;

9

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

- ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò êàçåèíà;- ñóëüôàìåòàçèí;- ñóõàÿ âûòÿæêà ìîçãà òåëåíêà;- ñóõàÿ âûòÿæêà ñåðäöà òåëåíêà;- ñóõàÿ êðîëè÷üÿ ïëàçìà;- òâèí-80;- òîëóèäèí ñèíèé «Ñ»;- òðèñàìèíîìåòàí;- ôåðìåíòàòèâíûé ãèäðîëèçàò êàçåèíà;- ôåðìåíòàòèâíûé ãèäðîëèçàò æèâîòíûõ òêàíåé;- ýòèëåíäèàìèíòåòðàóêñóñíàÿ êèñëîòà (ÝÄÒÀ).

7 Îòáîð è ïîäãîòîâêà ïðîá

Îòáîð è ïîäãîòîâêà ïðîá — ïî ÃÎÑÒ 26668, ÃÎÑÒ 26669.

Âàæíî, ÷òîáû äëÿ èñïûòàíèÿ ïîñòóïèëà ïðåäñòàâèòåëüíàÿ ïðîáà ïðîäóêòà, íå ïîâðåæäåííàÿ

è íå èçìåíåííàÿ â õîäå òðàíñïîðòèðîâàíèÿ èëè õðàíåíèÿ.

8 Ïðîâåäåíèå èñïûòàíèÿ

8.1 Ìåòîä âûÿâëåíèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ

8.1.1 Ïðè âûÿâëåíèè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ â îïðåäåëåííîé íàâåñêå èññëåäóå-ìîãî ïðîäóêòà èëè åãî ýêâèâàëåíòíîì ðàçâåäåíèè ñ ïðåäâàðèòåëüíûì îáîãàùåíèåì ýòó íàâåñêó èëèðàçâåäåíèå âíîñÿò â îäíó èç ïèòàòåëüíûõ ñðåä, ïðèãîòîâëåííûõ ïî 5.5 èëè 5.9.

Ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîí ïðîãðåâàþò êèïÿ÷åíèåì ïðè (100 � 1) °Ñ â òå÷å-íèå 15 ìèí äëÿ óäàëåíèÿ âîçäóõà. Îõëàæäàþò äî 44 °Ñ — 47 °Ñ è ñ ñîáëþäåíèåì ïðàâèë àñåïòèêè ïðè-áàâëÿþò ðàñòâîð òåëëóðèòà êàëèÿ.

Â 10 ñì3 ìîäèôèöèðîâàííîãî Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíà íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèè èëè ñðåä(ñì. 5.9) âíîñÿò 1 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà èëè 1 ñì3 èñõîäíîé ñóñïåíçèè (ò.å. 0,1 ã èëè 0,1 ñì3 ïðîäóêòà) èëèâ 10 ñì3 Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíà äâîéíîé êîíöåíòðàöèè âíîñÿò 10 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà èëè 10 ñì3

èñõîäíîé ñóñïåíçèè (ò.å. 1 ã èëè 1 ñì3 ïðîäóêòà). Äëÿ ïîñåâà áîëüøèõ îáúåìîâ íàâåñêè èñïûòóåìîãîïðîäóêòà ïðèãîòàâëèâàþò èñõîäíóþ ñóñïåíçèþ, äëÿ ýòîãî õ ñì3 èëè õ ã ïðîäóêòà ïðèáàâëÿþò ê 9 � õ ñì3

ðàçáàâèòåëÿ. Çàòåì ïðèáàâëÿþò âñþ èñõîäíóþ ñóñïåíçèþ ê 9 � õ � 10 ñì3 ìîäèôèöèðîâàííîãî Æèîëèò-òè-Êàíòîíè áóëüîíà íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèè (íàïðèìåð, 5 ñì3 èëè 5 ã âíîñÿò â 45 ñì3 ðàçáàâèòåëÿ èçàòåì ýòó âñþ èñõîäíóþ ñóñïåíçèþ âíîñÿò â 450 ñì3 ìîäèôèöèðîâàííîãî Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíàíîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèè). Îñòàâëÿþò ìèíèìóì âîçäóøíîãî ïðîñòðàíñòâà â ïðîáèðêå èëè ôëàêîíå.

Ïîñëå ïîñåâà íàâåñêè ïðîäóêòà è (èëè) åãî ðàçâåäåíèé íà ïîâåðõíîñòü Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíàîñòîðîæíî íàñëàèâàþò ñëîé ñòåðèëüíîãî ãîëîäíîãî àãàðà èëè ñëîé ñòåðèëüíîãî ïàðàôèíà, ïðèãîòîâ-

ëåííûõ ïî ÃÎÑÒ 10444.1 è îõëàæäåííûõ äî òåìïåðàòóðû 44 °Ñ — 47 °Ñ, äàþò ïîëó÷åííîìó ñëîþ àãàðàèëè ïàðàôèíà çàñòûòü è ãåðìåòè÷íî çàêðûâàþò.

Ñîîòíîøåíèå ìåæäó êîëè÷åñòâîì âûñåâàåìîãî ïðîäóêòà èëè åãî ðàçâåäåíèåì è ïèòàòåëüíîé ñðå-äîé íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèè 1:10. Ïðè èñïîëüçîâàíèè ñðåäû äâîéíîé êîíöåíòðàöèè ñîîòíîøåíèåìåæäó êîëè÷åñòâîì âûñåâàåìîãî ïðîäóêòà èëè åãî ðàçâåäåíèåì è ïèòàòåëüíîé ñðåäîé 1:1.

Åñëè ïðè ïîñëåäóþùåì ïîäòâåðæäåíèè ïðèíàäëåæíîñòè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëî-

êîêêîâ ê S. aureus íå îïðåäåëÿþò íàëè÷èå òåðìîñòàáèëüíîé íóêëåàçû è ãåìîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñ-

òè, òî äîïóñêàåòñÿ ïðîâîäèòü ïîñåâ â Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîí áåç ïðîãðåâà ïåðåä ïîñåâîì è áåç

íàñëàèâàíèÿ ãîëîäíîãî àãàðà èëè ïàðàôèíà ïîñëå ïîñåâà.

Ïðè èñïûòàíèè âûñîêîêèñëîòíûõ ïðîäóêòîâ äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ ðåçêîãî ñíèæåíèÿ ðÍ (íà 0,5

è áîëåå) ïèòàòåëüíûõ ñðåä ðÍ ïèòàòåëüíûõ ñðåä ïîñëå âíåñåíèè â íèõ ïðîäóêòà èëè åãî ðàçâåäåíèé

äîâîäÿò äî äîïóñòèìûõ çíà÷åíèé ñ ïîìîùüþ ñòåðèëüíîãî ðàñòâîðà ãèäðîîêèñè íàòðèÿ, ïðèãîòîâ-

ëåííîãî ïî ÃÎÑÒ 10444.1, èëè ïðè ïðèãîòîâëåíèè ïèòàòåëüíûõ ñðåä ðÍ óñòàíàâëèâàþò âûøå çà-

äàííîãî ñ ó÷åòîì åãî ïîñëåäóþùåãî ñíèæåíèÿ ïðè âíåñåíèè ïðîäóêòà. Êîëè÷åñòâî äîáàâëÿåìîãî

ðàñòâîðà ãèäðîîêèñè íàòðèÿ èëè âåëè÷èíó, íà êîòîðóþ íåîáõîäèìî óâåëè÷èòü ðÍ ïðè ïðèãîòîâëå-

íèè ïèòàòåëüíûõ ñðåä, óñòàíàâëèâàþò îïûòíûì ïóòåì.

10

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Äîïóñêàåòñÿ äîâîäèòü ðÍ äî íåéòðàëüíîãî çíà÷åíèÿ ñ ïîìîùüþ ñòåðèëüíîãî ðàñòâîðà ãèäðî-

îêèñè íàòðèÿ â ñàìîì âûñîêîêèñëîòíîì ïðîäóêòå.

Ïðè àíàëèçå ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ ñ áîëüøèì ñîäåðæàíèåì õëîðèñòîãî íàòðèÿ (NàÑl) ïîñåâ èñ-

ñëåäóåìîãî ïðîäóêòà èëè åãî èñõîäíîãî ðàçâåäåíèÿ â ñîëåâîé áóëüîí íå ïðîâîäÿò. Ñîäåðæàíèå õëî-

ðèñòîãî íàòðèÿ (NàÑl) â ïîñåâàõ íå äîëæíî áûòü áîëåå 6,5 % — 7 %.

8.1.2 Ïîñåâû èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1) °Ñ â òå÷åíèå (24 � 2) ÷. Åñëè ïîÿâèëîñü ïî÷åð-íåíèå èëè ÷åðíûé îñàäîê â Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíå èëè ïîìóòíåíèå â ñîëåâîì èëè ñàõàðíîì áóëüî-íå, òî ïðîâîäÿò ïîäòâåðæäåíèå ïðèíàäëåæíîñòè âûðîñøèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ê êîàãóëàçîïîëîæèòåëü-íûì ñòàôèëîêîêêàì. Åñëè ïî÷åðíåíèÿ, ÷åðíîãî îñàäêà èëè ïîìóòíåíèÿ íåò, òî ïîñåâû èíêóáèðóþò åùå(24 � 2) ÷.

8.1.3 Äëÿ ïîëó÷åíèÿ èçîëèðîâàííûõ êîëîíèé ñòåðèëüíîé ïåòëåé äåëàþò ïåðåñåâû êóëüòóð èç êàæ-äîãî ïîñåâà (ñì. 8.1.2) íà ïîâåðõíîñòü ÷àøêè Ïåòðè ñ îäíîé èç àãàðèçîâàííûõ ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè-÷åñêèõ ñðåä: Áàéðä-Ïàðêåð àãàðà, Áàéðä-Ïàðêåð àãàðà ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì,

ìîëî÷íî-ñîëåâîãî àãàðà, ÿè÷íî-æåëòî÷íî-àçèäíîãî àãàðà èëè ÿè÷íî-æåëòî÷íî-ñîëåâîãî àãàðà

(ñì. ðàçäåë 5).

Ïåðåñåâû ïðîâîäÿò òàêæå èç ïðîáèðîê, â êîòîðûõ íåò âèäèìûõ ïðèçíàêîâ ðîñòà.Åñëè íà ïîâåðõíîñòü Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíà íàñëàèâàëè ãîëîäíûé àãàð èëè ïàðàôèí, òî ïå-

ðåä ïåðåñåâîì ñ ñîáëþäåíèåì ïðàâèë àñåïòèêè èõ óäàëÿþò, èñïîëüçóÿ äëÿ ýòîãî ñòåðèëüíûé øïàòåëü.Øïàòåëåì ðåæóò ñëîé àãàðà íà ÷åòûðå ÷àñòè âäîëü è, åñëè íåîáõîäèìî, âñòàâëÿþò øïàòåëü â ïðîáèðêóè ïðîâîäÿò ïî îêðóæíîñòè àãàðà äëÿ îñâîáîæäåíèÿ åãî îò ñòåêëà ïðîáèðêè. Âçáàëòûâàþò ïðîáèðêó, âû-çûâàÿ ðàçáèâàíèå ñëîÿ è âûïàäåíèÿ åãî íà äíî ïðîáèðêè äëÿ îáåñïå÷åíèÿ ðîâíîé ïîâåðõíîñòèêóëüòóðàëüíîé ñóñïåíçèè.

×àøêè Ïåòðè ñ ïåðåñåâàìè èíêóáèðóþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1) °Ñ â òå÷åíèå(24 � 2) ÷ èëè (48 � 2) ÷.

8.1.4 Ïîñëå 24 ÷ èíêóáèðîâàíèÿ ÷àøåê Ïåòðè ïî 8.1.3 îòìå÷àþò íà äíå ÷àøåê ïðèñóòñòâèå òèïè÷-íûõ è àòèïè÷íûõ äëÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ êîëîíèé.

Íà Áàéðä-Ïàðêåð àãàðå ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ â òå÷åíèå 24 ÷ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëî-êîêêè îáðàçóþò òèïè÷íûå êîëîíèè ÷åðíîãî èëè ñåðîãî öâåòà áëåñòÿùèå è âûïóêëûå, îêðóæåííûå ïðî-çðà÷íîé çîíîé, äèàìåòð êîëîíèé îêîëî 1,0—1,5 ìì è äî 1,5—2,5 ìì ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ â òå÷åíèå48 ÷. Ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ â òå÷åíèå 24 ÷ íåïîñðåäñòâåííî îêîëî êîëîíèè â ïðîçðà÷íîé çîíå ìîæåò ïî-ÿâèòüñÿ îïàëåñöèðóþùåå êîëüöî, îêðóæàþùåå êîëîíèþ.

Íà Áàéðä-Ïàðêåð àãàðå ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûåñòàôèëîêîêêè îáðàçóþò ÷åðíûå èëè ñåðûå, èëè ðîâíûå áåëûå ìåëêèå êîëîíèè, îêðóæåííûå çîíîé ïðå-öèïèòàöèè, óêàçûâàþùåé íà êîàãóëàçíóþ àêòèâíîñòü.

Áàêòåðèè ðîäà Proteus ìîãóò âûðàñòàòü è â íà÷àëå èíêóáèðîâàíèÿ áûòü ïîõîæèìè íà êîàãóëàçîïî-ëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè, íî ïîñëå 24 èëè 48 ÷ èíêóáèðîâàíèÿ ïîÿâëÿþòñÿ ñòåëþùèåñÿ êóëüòóðû ðàç-íîãî îòòåíêà êîðè÷íåâîãî öâåòà, ÷òî ïîçâîëÿåò îòëè÷èòü èõ îò ñòàôèëîêîêêîâ.

Íà ìîëî÷íî-ñîëåâîì àãàðå êîëîíèè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ êðóãëûå, ñëåãêà

âîçâûøàþùèåñÿ íàä ïîâåðõíîñòüþ àãàðà, ñ ðîâíûìè êðàÿìè, äèàìåòðîì 2,0—2,5 ìì, îêðàøåíû â

æåëòûé, çîëîòèñòûé, ëèìîííî-æåëòûé, êðåìîâûé, ïàëåâûé èëè áåëûé öâåò.

Íà ÿè÷íî-æåëòî÷íî-àçèäíîì è ÿè÷íî-æåëòî÷íî-ñîëåâîì àãàðå êîëîíèè êîàãóëàçîïîëîæèòåëü-

íûõ ñòàôèëîêîêêîâ îêðóæåíû çîíîé ëåöèòèíàçíîé àêòèâíîñòè.

Êðîìå òèïè÷íûõ, êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè ìîãóò îáðàçîâûâàòü àòèïè÷íûå êîëîíèè.Àòèïè÷íûå êîëîíèè íà Áàéðä-Ïàðêåð àãàðå ìîãóò ïðåäñòàâëÿòü îäíó èç ñëåäóþùèõ ìîðôîëîãèé:à) áëåñòÿùèå ÷åðíûå êîëîíèè ñ óçêîé áåëîé êðîìêîé èëè áåç íåå; ïðîçðà÷íàÿ çîíà îòñóòñòâóåò

èëè åäâà âèäèìà, à îïàëåñöèðóþùåå êîëüöî îòñóòñòâóåò èëè òðóäíî ðàçëè÷èìî;á) ñåðûå êîëîíèè áåç ïðîçðà÷íûõ çîí.Âñå êîëîíèè, âîçìîæíî ïðèñóòñòâóþùèå íà ÷àøêàõ Ïåòðè è íå ïîêàçàâøèå òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ

ïðèçíàêîâ, îòíîñÿòñÿ ê ôîíîâîé ôëîðå.Ìèêðîîðãàíèçìû, ïðèíàäëåæàùèå ê ðîäàì, îòëè÷íûì îò êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîê-

êîâ, ìîãóò îáðàçîâûâàòü êîëîíèè, êîòîðûå ïî âíåøíåìó âèäó ïîõîæè íà êîëîíèè êîàãóëàçîïîëîæèòåëü-íûõ ñòàôèëîêîêêîâ. Èññëåäîâàíèå ïîä ìèêðîñêîïîì ïðåïàðàòîâ, îêðàøåííûõ ïî Ãðàìó, è îïðåäåëåíèåíàëè÷èÿ êàòàëàçû îáëåã÷àåò îòëè÷èå ñòàôèëîêîêêîâ îò äðóãèõ ðîäîâ.

Ïîñëå äîïîëíèòåëüíîé èíêóáàöèè âñåõ ÷àøåê Ïåòðè ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå (24 � 2) ÷ôèêñèðóþò ïîÿâëåíèå íîâûõ òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ êîëîíèé.

11

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

8.1.5 Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèíàäëåæíîñòè òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ êîëîíèé ê êîàãóëàçîïîëîæè-òåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì îòáèðàþò íå ìåíåå ïÿòè òèïè÷íûõ è/èëè àòèïè÷íûõ êîëîíèé.

Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèíàäëåæíîñòè îòîáðàííûõ òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ êîëîíèé ê êîàãóëàçîïîëî-æèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì ïåðåñåâàþò êàæäóþ îòîáðàííóþ êîëîíèþ îòäåëüíî â æèäêóþ ñðåäó, ïðèãî-òîâëåííóþ ïî 5.2, è íà ïîâåðõíîñòü îäíîé èç ñêîøåííûõ ïèòàòåëüíûõ ñðåä — ìÿñîïåïòîííîãî àãàðà,ïðèãîòîâëåííîãî ïî 5.8, èëè ñðåäû, ïðèãîòîâëåííîé èç ñóõîãî ÃÐÌ-àãàðà ïî 5.10.

Ïîñåâû èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1)°Ñ â òå÷åíèå (24 � 3) ÷.

8.2 Ìåòîä ÍÂ× — îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ

8.2.1 Êàæäóþ íàâåñêó èññëåäóåìîãî ïðîäóêòà è (èëè) åãî ðàçâåäåíèå â òðåõêðàòíîé ïîâòîðíîñòèâûñåâàþò â ïðîáèðêè ñ îäíîé èç ñðåä, ïðèãîòîâëåííûõ ïî 5.5 èëè 5.9.

8.2.2 Ïðè îïðåäåëåíèè êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïî ìåòîäó ÍÂ× âûñå-âàþò íå ìåíåå òðåõ ïîñëåäîâàòåëüíûõ íàâåñîê èññëåäóåìîãî ïðîäóêòà è (èëè) åãî ðàçâåäåíèÿ, îòëè÷à-þùèåñÿ ïî êîëè÷åñòâó ïðîäóêòà â íèõ â 10 ðàç.

Â êàæäóþ èç òðåõ ïðîáèðîê ñî ñðåäîé äâîéíîé êîíöåíòðàöèè âíîñÿò ïî 10 ñì3 ïðîáû æèäêîãî ïðî-äóêòà èëè ïî 10 ñì3 ïåðâîãî ðàçâåäåíèÿ (ò.å. 1 ã ïðîáû) ïðîäóêòà äðóãîé êîíñèñòåíöèè.

Â êàæäóþ èç òðåõ ïðîáèðîê ñî ñðåäîé íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèè âíîñÿò ïî 1 ñì3 ïðîáû æèäêîãîïðîäóêòà èëè 1 ñì3 ïåðâîãî ðàçâåäåíèÿ (ò.å. 0,1 ã ïðîáû) äðóãèõ ïðîäóêòîâ.

Äëÿ êàæäîãî ïîñëåäóþùåãî ðàçâåäåíèÿ (ò.å. 10—1, 10—2, 10—3 — äëÿ æèäêèõ ïðîäóêòîâ èëè 10—2,10—3 èëè 10—4 äëÿ ïðîäóêòîâ äðóãîé êîíñèñòåíöèè), ïðîöåäóðó ïîâòîðÿþò, êàê óêàçàíî âûøå, èñïîëüçóÿñâåæóþ ñòåðèëüíóþ ïèïåòêó äëÿ êàæäîãî ðàçâåäåíèÿ.

Ãîòîâÿò òàêîå ÷èñëî ðàçâåäåíèé, ÷òîáû â êîíå÷íîì ðàçâåäåíèè ïîëó÷èòü òðè îòðèöàòåëüíûõ ðå-çóëüòàòà.

Îñòîðîæíî ïåðåìåøèâàþò èíîêóëÿò ñî ñðåäîé, èçáåãàÿ âíåñåíèÿ âîçäóõà.Ïîäãîòîâêà Æèîëèòòè-Êàíòîíè áóëüîíà ê ïîñåâó, ñîçäàíèå àíàýðîáíûõ óñëîâèé äëÿ ðîñòà ìèêðî-

îðãàíèçìîâ — ïî 8.1.1.8.2.3 Èíêóáèðîâàíèå ïðîáèðîê ñ ïîñåâàìè, ïåðåñåâ âûðîñøèõ êóëüòóð íà ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè-

÷åñêèå ñðåäû, îòáîð òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ êîëîíèé, èõ ïåðåñåâ äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèñóòñòâèÿ êîàãó-ëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïðîâîäÿò ïî 8.1.2— 8.1.5.

8.3 Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïîñåâîì íààãàðèçîâàííóþ ñðåäó

8.3.1 Èç íàâåñêè ïðîäóêòà ãîòîâÿò èñõîäíîå è ðÿä äåñÿòèêðàòíûõ ðàçâåäåíèé ïî ÃÎÑÒ 26669

òàêèõ, ÷òîáû ìîæíî áûëî îïðåäåëèòü â 1 ã (ñì3) ïðîäóêòà ïðåäïîëàãàåìîå êîëè÷åñòâî êîàãóëàçîïî-

ëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè èõ äîïóñêàåìîå êîëè÷åñòâî, óêàçàííîå â äîêóìåíòå íà èññëåäóå-

ìûé ïðîäóêò.

Ïåðåíîñÿò ñ ïîìîùüþ ñòåðèëüíîé ïèïåòêè 0,1 — 0,2 ñì3 ïðîäóêòà, åñëè ïðîäóêò æèäêèé, èëè0,1 — 0,2 ñì3 èñõîäíîé ñóñïåíçèè â ñëó÷àå ïðîäóêòîâ äðóãîé êîíñèñòåíöèè, íà ïîâåðõíîñòü îäíîé èçñðåä, óêàçàííûõ â 8.1.3.

Áàéðä-Ïàðêåð àãàð ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì èñïîëüçóþò äëÿ ïîñåâà ñèëüíîîáñåìåíåííûõ ïðîäóêòîâ, íàïðèìåð, ïðèãîòîâëåííûõ èç ñûðîãî ìÿñà.

Äëÿ ïîñåâà ïðîäóêòà èëè êàæäîãî åãî ðàçâåäåíèÿ èñïîëüçóþò äâå ïàðàëëåëüíûå ÷àøêè Ïåòðè ñîñðåäîé. Ïîäãîòîâêó ÷àøåê Ïåòðè ñî ñðåäîé ê ïîñåâó è ïîñåâ ïðîâîäÿò ïî ÃÎÑÒ 26670 è 5.1.6.

Åñëè íåîáõîäèìî, ïîâòîðÿþò ïðîöåäóðó äëÿ èñõîäíîãî ðàçâåäåíèÿ, åñëè ïðîäóêò æèäêèé, èëè äëÿäåñÿòèêðàòíîãî ðàçâåäåíèÿ äðóãèõ ïðîäóêòîâ, à òàêæå äëÿ ïîñëåäóþùèõ äåñÿòèêðàòíûõ ðàçâåäåíèé.

Äëÿ ïîñåâà â êà÷åñòâå àðáèòðàæíîé ñðåäû èñïîëüçóþò Áàéðä-Ïàðêåð àãàð.

8.3.2 Åñëè äëÿ íåêîòîðûõ ïðîäóêòîâ íåîáõîäèìî îïðåäåëèòü íåáîëüøîå êîëè÷åñòâî êîàãóëàçîïî-ëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ, òî ïðåäåëû îáíàðóæåíèÿ ìåòîäà ìîæíî ïîâûñèòü â 10 ðàç çà ñ÷åò ïîñåâà1 ñì3 ïðîäóêòà, åñëè ïðîäóêò æèäêèé, èëè 1 ñì3 èñõîäíîé ñóñïåíçèè â ñëó÷àå äðóãèõ ïðîäóêòîâ. Ïî 1 ñì3

âûñåâàþò íà ïîâåðõíîñòü ñðåäû â îäíîé áîëüøîé ÷àøêå Ïåòðè (äèàìåòðîì 140 ìì) ëèáî íà ïîâåð-õíîñòü ñðåäû â òðåõ ìàëåíüêèõ ÷àøêàõ Ïåòðè (äèàìåòðîì 90 ìì). Â îáîèõ ñëó÷àÿõ âûñåâàþò ïàðàëëåëü-íûå íàâåñêè, èñïîëüçóÿ äëÿ ýòîãî äâå áîëüøèå ÷àøêè Ïåòðè èëè øåñòü ìàëåíüêèõ.

8.3.3 Ñ ïîìîùüþ ñòåðèëüíîãî øïàòåëÿ îñòîðîæíî è áûñòðî ðàñïðåäåëÿþò ïîñåâíîé ìàòåðèàë ïîïîâåðõíîñòè àãàðèçîâàííîé ñðåäû â ÷àøêå Ïåòðè, ñòàðàÿñü íå êàñàòüñÿ ñòåíîê ÷àøêè. Ïðèìåðíî â òå÷å-íèå 15 ìèí äàþò ïîäñîõíóòü ïîâåðõíîñòè ñðåäû ïîä êðûøêàìè ïî ÃÎÑÒ 26670.

8.3.4 ×àøêè Ïåòðè ñ ïîñåâàìè ïåðåâîðà÷èâàþò êðûøêàìè âíèç è èíêóáèðóþò â òåðìîñòàòå ïðèòåìïåðàòóðå (37 � 1) °C â òå÷åíèå 24 — 48 ÷.

12

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

8.3.5 Ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ â òå÷åíèå (24 � 2) ÷ ÷àøêè Ïåòðè ñ ïîñåâàìè ïðîñìàòðèâàþò è îòìå÷à-þò íà îáðàòíîé ñòîðîíå ÷àøêè ïîëîæåíèå òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ äëÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôè-ëîêîêêîâ êîëîíèé.

Õàðàêòåðèñòèêà òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ êîëîíèé — ïî 8.1.4.8.3.6 Âñå ÷àøêè Ïåòðè ñ ïîñåâàìè ïî 8.3.5 ïðîäîëæàþò èíêóáèðîâàòü ïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1) °C

â òå÷åíèå åùå (24 � 2) ÷, ïîñëå ÷åãî îòìå÷àþò ïîÿâëåíèå íîâûõ òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ êîëîíèé.Äëÿ ïîäñ÷åòà áåðóò ÷àøêè Ïåòðè, íà êîòîðûõ âûðîñëî ìàêñèìóì 300 êîëîíèé, ïî 150 òèïè÷íûõ

è/èëè àòèïè÷íûõ êîëîíèé äëÿ äâóõ ïîñëåäîâàòåëüíûõ ðàçâåäåíèé. Â ïîñåâàõ íà ÷àøêàõ Ïåòðè íå äîë-æíî áûòü ìåíåå 15 êîëîíèé. Âûáèðàþò äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ íà êàæäîé ÷àøêå Ïåòðè ïÿòü òèïè÷íûõ êîëî-íèé, åñëè ïðèñóòñòâóþò òîëüêî òèïè÷íûå êîëîíèè, è ïÿòü àòèïè÷íûõ êîëîíèé, åñëè ïðèñóòñòâóþò òîëüêîàòèïè÷íûå êîëîíèè, èëè ïÿòü òèïè÷íûõ êîëîíèé è ïÿòü àòèïè÷íûõ, åñëè ïðèñóòñòâóþò îáà òèïà êîëîíèé.Åñëè íà ÷àøêàõ Ïåòðè, çàñåÿííûõ íåðàçáàâëåííûì æèäêèì ïðîäóêòîì èëè ñàìûì ìåíüøèì ðàçâåäåíè-åì äðóãèõ ïðîäóêòîâ, èìååòñÿ ìåíåå 15 òèïè÷íûõ è (èëè) àòèïè÷íûõ êîëîíèé, òî îòáèðàþò âñå ïàðàë-ëåëüíûå ÷àøêè Ïåòðè, íà êîòîðûõ èìåþòñÿ òèïè÷íûå èëè àòèïè÷íûå êîëîíèè. Îòáèðàþò êîëîíèè äëÿïîäòâåðæäåíèÿ â êîëè÷åñòâàõ, óêàçàííûõ âûøå.

8.3.7 Êàæäóþ îòîáðàííóþ êîëîíèþ îòäåëüíî ïåðåñåâàþò ïî 8.1.5. Ïîñåâû èíêóáèðóþò ïðè òåìïå-ðàòóðå (37 � 1) °Ñ â òå÷åíèå (24 � 3) ÷.

8.3.8 Åñëè 1 ñì3 ïîñåâíîãî ìàòåðèàëà ðàñïðåäåëèëè ïî òðåì ÷àøêàì ïî 8.3.2, òî ïðèíèìàþò ýòè÷àøêè Ïåòðè çà îäíó ïðè âñåõ ïîñëåäóþùèõ ïîäñ÷åòàõ è ïðîöåäóðàõ ïîäòâåðæäåíèÿ.

8.4 Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïîñåâîì âàãàðèçîâàííóþ ñðåäó

8.4.1 Â êàæäóþ èç äâóõ ÷àøåê Ïåòðè âíîñÿò ñ ïîìîùüþ ñòåðèëüíîé ïèïåòêè 1 ñì3 ïðîäóêòà, åñëèïðîäóêò æèäêèé èëè 1 ñì3 èñõîäíîé ñóñïåíçèè â ñëó÷àå ïðîäóêòîâ äðóãîé êîíñèñòåíöèè.

Â äâå äðóãèå ñòåðèëüíûå ÷àøêè Ïåòðè âíîñÿò ïî 1 ñì3 èñõîäíîé ñóñïåíçèè æèäêîãî èññëåäóåìîãîïðîäóêòà èëè ïåðâîãî äåñÿòèêðàòíîãî ðàçâåäåíèÿ â ñëó÷àå ïðîäóêòîâ äðóãîé êîíñèñòåíöèè.

Ïîâòîðÿþò ýòó ïðîöåäóðó äëÿ ïîñëåäóþùèõ ðàçâåäåíèé, èñïîëüçóÿ äëÿ êàæäîãî ðàçâåäåíèÿ íî-âóþ ñòåðèëüíóþ ïèïåòêó.

Ïîñåâû çàëèâàþò Áàéðä-Ïàðêåð àãàðîì ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì èëè îäíîé

èç àãàðèçîâàííûõ ñðåä, óêàçàííûõ â 8.1.1, ñëîåì ïðèáëèçèòåëüíî 3—4 ìì.

Îñòîðîæíî ïåðåìåøèâàþò èíîêóëÿò ñî ñðåäîé è äëÿ çàñòûâàíèÿ îñòàâëÿþò ÷àøêè Ïåòðè â ñïîêîé-íîì ñîñòîÿíèè íà õîëîäíîé ãîðèçîíòàëüíîé ïîâåðõíîñòè.

8.4.2 ×àøêè Ïåòðè ñ ïîñåâàìè ïîñëå çàñòûâàíèÿ ñðåäû ïåðåâîðà÷èâàþò è ïîìåùàþò â òåðìîñòàòïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1) °Ñ íà 18—24 ÷. Åñëè íåîáõîäèìî, ïðîäîëæàþò èíêóáèðîâàíèå åùå 18—24 ÷.

8.4.3 Ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ ïîäñ÷èòûâàþò òèïè÷íûå è àòèïè÷íûå äëÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõñòàôèëîêîêêîâ êîëîíèè â ñîîòâåòñòâèè ñ 8.1.5.

Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèíàäëåæíîñòè âûðîñøèõ òèïè÷íûõ è (èëè) àòèïè÷íûõ êîëîíèé ê êîàãóëàçî-ïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì îòáèðàþò êîëîíèè â ñîîòâåòñòâèè ñ 8.3.6.

8.4.4 Êàæäóþ îòîáðàííóþ êîëîíèþ îòäåëüíî ïåðåñåâàþò ïî 8.1.5.Ïîñåâû èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1) °Ñ â òå÷åíèå (24 � 3) ÷.8.4.5 Äîïóñêàåòñÿ òàêæå âûÿâëåíèå êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïðîâîäèòü ïî-

ñåâîì â èëè íà àãàðèçîâàííóþ ñðåäó ïðè óñëîâèè, ÷òî íàâåñêó ïðîäóêòà, â êîòîðîé ïðåäóñìàòðèâà-

åòñÿ âûÿâëåíèå, âîçìîæíî ïîñåÿòü ïî ýòîìó ìåòîäó.

Ïðè âûÿâëåíèè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïîñåâîì â èëè íà àãàðèçîâàííóþ ñðå-

äó ïîäñ÷åòà êîëè÷åñòâà êîëîíèé íå ïðîâîäÿò.

9 Ïîäòâåðæäåíèå ïðèíàäëåæíîñòè âûÿâëåííûõ ìèêðîîðãàíèçìîâê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì

Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèíàäëåæíîñòè ê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì ó âûðîñøèõ ìèê-ðîîðãàíèçìîâ è îòîáðàííûõ ïî 8.1.5, 8.2.3, 8.3.7 è 8.4.4 îïðåäåëÿþò îòíîøåíèå ê îêðàñêå ïî Ãðàìó, ñïî-ñîáíîñòü êîàãóëèðîâàòü ïëàçìó êðîâè êðîëèêà è ñïîñîáíîñòü îáðàçîâûâàòü êàòàëàçó.

9.1 Îêðàñêà ïî Ãðàìó

Èç êóëüòóð ãîòîâÿò ìàçêè, îêðàøèâàþò èõ ïî Ãðàìó ïî ÃÎÑÒ 30425 è ìèêðîñêîïèðóþò.

13

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè ïîëîæèòåëüíî îêðàøèâàþòñÿ ïî Ãðàìó, èìåþò øàðî-

îáðàçíóþ ôîðìó, êëåòêè äèàìåòðîì 0,6 — 1,0 ìêì, ðàñïîëàãàþùèåñÿ ÷àùå (íî íå âñåãäà) â âèäå ñêîï-

ëåíèé, íàïîìèíàþùèõ ãðîçäüÿ âèíîãðàäà.

9.2 Îïðåäåëåíèå êàòàëàçû

Ñïîñîáíîñòü âûðîñøèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ îáðàçîâûâàòü êàòàëàçó îïðåäåëÿþò ïî ÃÎÑÒ 30425.

Êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè îáðàçóþò êàòàëàçó.

9.3 Îïðåäåëåíèå ñïîñîáíîñòè êîàãóëèðîâàòü ïëàçìó êðîâè êðîëèêà

9.3.1 Ñïîñîáíîñòü êîàãóëèðîâàòü ïëàçìó êðîâè êðîëèêà îïðåäåëÿþò ó ìèêðîîðãàíèçìîâ, îêðà-

øèâàþùèõñÿ ïîëîæèòåëüíî è îáðàçóþùèõ êàòàëàçó.

9.3.2 Íà Áàéðä-Ïàðêåð àãàðå ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì ïîäñ÷èòûâàþò êîëè÷åñ-òâî òèïè÷íûõ êîëîíèé ñ çîíîé ïðåöèïèòàöèè, óêàçûâàþùåé íà êîàãóëàçíóþ àêòèâíîñòü, è ýòè êîëîíèè áåçäàëüíåéøåãî ïîäòâåðæäåíèÿ ñ÷èòàþò îòíîñÿùèìèñÿ ê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì.

9.3.3 Ñîáëþäàÿ ïðàâèëà àñåïòèêè, â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè ïîäõîäÿùåãî ðàçìåðà (íàïðèìåð,10 � 75 ìì) äîáàâëÿþò 0,1 ñì3 êàæäîé êóëüòóðû, âûðîñøåé íà ñðåäå (ñì. 5.2) ïî 8.1.5, 8.2.3, 8.3.7 è 8.4.4,è 0,3 ñì3 ïëàçìû êðîëèêà (åñëè èçãîòîâèòåëåì êðîëè÷üåé ïëàçìû íå óñòàíîâëåíû äðóãèå êîëè÷åñòâà) èèíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ.

Îïðîêèäûâàÿ ïðîáèðêó, èññëåäóþò ïëàçìó íà ñâåðòûâàíèå ïîñëå 4—6 ÷ èíêóáèðîâàíèÿ è, åñëèòåñò îòðèöàòåëüíûé, ïðîñìàòðèâàþò ÷åðåç 24 ÷ èíêóáèðîâàíèÿ èëè èññëåäóþò ïîñëå èíêóáàöèîííîãîïåðèîäà ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ, óñòàíîâëåííîé èçãîòîâèòåëåì êðîëè÷üåé ïëàçìû.

Òåñò íà êîàãóëàçó ñ÷èòàþò ïîëîæèòåëüíûì, åñëè êóëüòóðà ïîêàçàëà, ïî êðàéíåé ìåðå, 3+ — îöåí-êó êîàãóëàçíîé ðåàêöèè, îòìå÷åííîé íà ðèñóíêå 1. Ðåàêöèÿ íà 1+ èëè 2+ îöåíèâàþò êàê ïðîìåæóòî÷íóþ.

Äëÿ êîíòðîëÿ êà÷åñòâà êàæäîé ïàðòèè ïëàçìû äîáàâëÿþò 0,1 ñì3 ñòåðèëüíîãî áóëüîíà íà îñíîâåâûòÿæêè èç ñåðäöà è ìîçãà ê ðåêîìåíäóåìîìó êîëè÷åñòâó ïëàçìû êðîëèêà è èíêóáèðóþò áåç ïîñåâà êóëü-òóðû ìèêðîîðãàíèçìîâ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, ïðè ýòîì â êîíòðîëèðóåìîé ïëàçìå íå äîëæíî áûòü ïðè-çíàêîâ ñâåðòûâàíèÿ.

9.3.4 Äîïóñêàåòñÿ ê ïëàçìå êðîâè êðîëèêà, ïðèãîòîâëåííîé è ðàçëèòîé ïî ïðîáèðêàì, äîáàâëÿòüïî îäíîé ïåòëå èñïûòóåìûõ êóëüòóð ñ àãàðèçîâàííûõ ñðåä, îñòàâëÿÿ îäíó ïðîáèðêó ñ ðàçâåäåííîé ïëàç-ìîé â êà÷åñòâå êîíòðîëÿ íåçàñåÿííîé.

Âíåñåííóþ êóëüòóðó òùàòåëüíî ðàçìåøèâàþò è ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå(37 � 1) °Ñ. Åñëè ÷åðåç 6 ÷ êîàãóëÿöèè ïëàçìû íå ïðîèçîøëî, òî ïðîáèðêè îñòàâëÿþò ïðè òåìïåðàòóðå(30 � 1) °Ñ íà 24 ÷. Åñëè è ÷åðåç 24 ÷ ïëàçìà íå ñêîàãóëèðîâàëà, òî èñïûòóåìóþ êóëüòóðó ñòàôèëîêîêêàîòíîñÿò ê êîàãóëàçîîòðèöàòåëüíîé. Îöåíêà ñòåïåíè êîàãóëèðîâàíèÿ ïëàçìû — ïî 9.3.3.

9.3.5 Ñ öåëüþ óñêîðåíèÿ âûÿâëåíèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ âìåñòî ñóòî÷íûõêóëüòóð, âûðîñøèõ íà àãàðèçîâàííûõ ñðåäàõ, äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçîâàòü êóëüòóðó, âûðàùåííóþ íà ìÿ-

14

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

— îòðèöàòåëüíàÿ îöåíêà: íå îòìå÷åíî îáðàçîâàíèÿ ôèáðèíà;1+ ïîëîæèòåëüíàÿ îöåíêà: íåáîëüøèå íåñôîðìèðîâàâøèåñÿ êîìî÷êè;2+ ïîëîæèòåëüíàÿ îöåíêà: íåáîëüøîé ñôîðìèðîâàâøèéñÿ êîìîê;3+ ïîëîæèòåëüíàÿ îöåíêà: áîëüøîé ñôîðìèðîâàâøèéñÿ êîìîê;4+ âñå ñîäåðæèìîå ïðîáèðêè ñêîàãóëèðîâàíî è íå ìåíÿåò ñâîåãî ïîëîæåíèÿïðè ïåðåâîðà÷èâàíèè ïðîáèðêè.

Ðèñóíîê 1 — Ðåçóëüòàòû êîàãóëàçíîãî òåñòà

ñîïåïòîííîì èëè ñåðäå÷íî-ìîçãîâîì áóëüîíå, è èñïîëüçîâàòü åå äëÿ ïîñòàíîâêè ðåàêöèè ïëàçìîêîàãó-ëÿöèè ñïóñòÿ 2 ÷ ïîñëå ïîÿâëåíèÿ âèäèìûõ ïðèçíàêîâ ðîñòà ìèêðîîðãàíèçìîâ. Ïðè ïîñòàíîâêå ðåàêöèèïëàçìîêîàãóëÿöèè ê 0,5 ñì3 ðàçâåäåííîé ïëàçìû äîáàâëÿþò äâå êàïëè áóëüîííîé êóëüòóðû. Ó÷åò ðå-çóëüòàòîâ êîàãóëÿöèè ïëàçìû â äàííîì ñëó÷àå ïðîâîäÿò â ñðîêè îò 30 ìèí äî 2—4 ÷. Îöåíêà ñòåïåíè êî-àãóëèðîâàíèÿ ïëàçìû — ïî 9.3.3.

9.4 Îöåíêà ðåçóëüòàòîâ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèíàäëåæíîñòè õàðàêòåðíûõ êîëîíèé ê êîàãóëà-çîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì

Åñëè ïðè èñïûòàíèè òèïè÷íûõ è àòèïè÷íûõ êîëîíèé â íèõ îáíàðóæåíû ãðàìïîëîæèòåëüíûå êîêêè,

îáðàçóþùèå êàòàëàçó, ñïîñîáíûå êîàãóëèðîâàòü ïëàçìó êðîâè, òî ñ÷èòàþò, ÷òî âûÿâëåííûå ìèêðîîð-ãàíèçìû îòíîñÿòñÿ ê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì.

9.5 Ïîäòâåðæäåíèå ïðèíàäëåæíîñòè âûÿâëåííûõ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëî-

êîêêîâ ê S. aureus

Ïðèíàäëåæíîñòü âûÿâëåííûõ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ ê S. àureus ïðîâîäÿò

ïî îïðåäåëåíèþ èõ ñïîñîáíîñòè îáðàçîâûâàòü àöåòîèí è ôåðìåíòèðîâàòü ìàëüòîçó â àýðîáíûõ

óñëîâèÿõ.

Äèôôåðåíöèàöèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ âèäîâ è ïîäâèäîâ ñòàôèëîêîêêîâ ïî äâóì ïðèçíà-

êàì — îáðàçîâàíèþ àöåòîèíà è ôåðìåíòàöèè ìàëüòîçû â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ ïðèâåäåíà â ïðèëîæå-

íèè À.

9.5.1 Îïðåäåëåíèå îáðàçîâàíèÿ àöåòîèíà (ðåàêöèÿ Ôîãåñ-Ïðîñêàóåðà)

Êóëüòóðó âûñåâàþò â ïðîáèðêè ñî ñðåäîé Êëàðêà. Ïîñåâû èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå

(37 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 48 ÷.

Ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ ïîñåâîâ ê 1 ñì3 îòîáðàííîé êóëüòóðàëüíîé æèäêîñòè ïðèáàâëÿþò 0,6 ñì3

ðàñòâîðà �-íàôòîëà, ïðèãîòîâëåííîãî ïî 5.12, è 0,2 ñì3 ðàñòâîðà ãèäðîîêèñè êàëèÿ, ïðèãîòîâëåí-

íîãî ïî 5.20.

Ïîñëå ïðèáàâëåíèÿ êàæäîãî ðåàêòèâà ïðîáèðêó âñòðÿõèâàþò. Ïîÿâëåíèå ðîçîâîãî îêðàøèâà-

íèÿ ÷åðåç 15—60 ìèí óêàçûâàåò íà ïîëîæèòåëüíóþ ðåàêöèþ.

S. aureus îáðàçóåò àöåòîèí.

9.5.2 Îïðåäåëåíèå ôåðìåíòàöèè ìàëüòîçû â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ

Ñïîñîáíîñòü ôåðìåíòàöèè ìàëüòîçû â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ îïðåäåëÿþò ñ öåëüþ äèôôåðåíöè-

àöèè S. aureus îò äðóãèõ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ âèäîâ S. intermedius è S. hyicus subsp hyicus.

Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ôåðìåíòàöèè ìàëüòîçû â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ êóëüòóðû, ïîäëåæàùèå èññëå-

äîâàíèþ, âûñåâàþò óêîëîì ïåòëåé â ñðåäó Ãèññà ñ ìàëüòîçîé.

Ïîñåâû èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 48 ÷.

Ïðè ôåðìåíòàöèè ìàëüòîçû â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ ñ îáðàçîâàíèåì êèñëîòû öâåò ñðåäû Ãèññà

èçìåíÿåòñÿ.

S. aureus ôåðìåíòèðóåò ìàëüòîçó â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ.

9.6 Îïðåäåëåíèå ñïîñîáíîñòè S. àureus îáðàçîâûâàòü òåðìîñòàáèëüíóþ íóêëåàçó è íà-

ëè÷èÿ ó íåãî ãåìîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè

Ñïîñîáíîñòü S. aureus îáðàçîâûâàòü òåðìîñòàáèëüíóþ íóêëåàçó è íàëè÷èå ó íåãî ãåìîëèòè-

÷åñêîé àêòèâíîñòè óñòàíàâëèâàþò ïðè íåîáõîäèìîñòè äëÿ îïðåäåëåíèÿ åãî ïîòåíöèàëüíîé ýíòå-

ðîòîêñèãåííîñòè ïî ýïèäïîêàçàíèÿì.

9.6.1 Îïðåäåëåíèå òåðìîñòàáèëüíîé íóêëåàçû

Äëÿ îïðåäåëåíèÿ òåðìîñòàáèëüíîé íóêëåàçû â ñðåäå (ñì. 5.11), ðàçëèòîé ïî ñòåðèëüíûì ÷àø-

êàì Ïåòðè, âûðåçàþò ñ ñîáëþäåíèåì ïðàâèë àñåïòèêè êîëîäöû äèàìåòðîì íå áîëåå 4 ìì, ðàññòîÿ-

íèå ìåæäó êîòîðûìè äîëæíî áûòü íå ìåíåå 7—8 ìì. Êóëüòóðû, âûðîñøèå íà ìÿñîïåïòîííîì

áóëüîíå ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ ïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 24 ÷, ïðîãðåâàþò â êèïÿùåé âî-

äÿíîé áàíå â òå÷åíèå 15 ìèí, îõëàæäàþò äî êîìíàòíîé òåìïåðàòóðû è âíîñÿò â ïðèãîòîâëåííûå â

ñðåäå êîëîäöû ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé ïî 1—2 êàïëè. Çàñåÿííûå ÷àøêè Ïåòðè ïîìåùàþò â òåðìîñ-

òàò ïðè òåìïåðàòóðå (37 � 1) °Ñ, ðåçóëüòàòû ó÷èòûâàþò ÷åðåç 1, 2 è 5 ÷. Ïðè íàëè÷èè òåðìîñòà-

áèëüíîé íóêëåàçû ïîÿâëÿåòñÿ ÿðêî-ðîçîâàÿ çîíà âîêðóã êîëîäöà íà ñèíåì ôîíå ñðåäû.

9.6.2 Îïðåäåëåíèå ãåìîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè

Êóëüòóðó âûñåâàþò íà ïîâåðõíîñòü êðîâÿíîãî àãàðà. Ïîñåâû èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå

(37 � 1) °Ñ â òå÷åíèå 24 ÷. Ïîñëå èíêóáèðîâàíèÿ ïîñåâîâ ÷àøêè Ïåòðè ïðîñìàòðèâàþò â ïðîõîäÿùåì

ñâåòå, îòìå÷àÿ íàëè÷èå çîí ãåìîëèçà.

15

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Íàëè÷èå òåðìîñòàáèëüíîé íóêëåàçû è ãåìîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïîäòâåðæäàåò ýíòåðî-òîêñèãåííûå ñâîéñòâà S. aureus.

9.7 Îöåíêà ðåçóëüòàòîâ ïîäòâåðæäåíèÿ ïðèíàäëåæíîñòè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ

ñòàôèëîêîêêîâ ê S. aureus

9.7.1 Åñëè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè îáðàçóþò àöåòîèí è ñáðàæèâàþò ìàëüòî-çó â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ, òî ñ÷èòàþò, ÷òî âûÿâëåííûå êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè îò-íîñÿòñÿ ê S. aureus.

9.7.2 Äëÿ áèîõèìè÷åñêîé èäåíòèôèêàöèè äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçîâàíèå òåñò-ñèñòåì ïðîìûø-ëåííîãî ïðîèçâîäñòâà, çàðåãèñòðèðîâàííûõ â Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè.

10 Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ

10.1 Ðåçóëüòàòû îöåíèâàþò ïî êàæäîé ïðîáå îòäåëüíî.

10.2 Îöåíêà ðåçóëüòàòîâ ïîñåâîâ â æèäêèå ñðåäû

Ïðè îïðåäåëåíèè ÍÂ× êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. aureus èëè ïðè èõ âûÿâëå-íèè â îïðåäåëåííîé íàâåñêå ïðîäóêòà ïîñåâû ñ÷èòàþò ïîëîæèòåëüíûìè (òî åñòü êîàãóëàçîïîëîæèòåëü-íûå ñòàôèëîêîêêè èëè S. aureus âûÿâëåíû â èñïûòóåìîé íàâåñêå ïðîäóêòà), åñëè ïðè ïîñëåäóþùåìïåðåñåâå íà àãàðèçîâàííûå ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêèå ñðåäû è ïîäòâåðæäåíèè òèïè÷íûõ è (èëè) àòè-ïè÷íûõ êîëîíèé, âûðîñøèõ íà ýòèõ ñðåäàõ, õîòÿ áû â îäíîé êîëîíèè áóäóò îáíàðóæåíû êîàãóëàçîïîëî-æèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè èëè S. aureus.

ÍÂ× êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. aureus â 1 ã (ñì3) ïðîäóêòà îïðåäåëÿþò èñõîäÿèç êîëè÷åñòâà ïîëîæèòåëüíûõ ïîñåâîâ ïî ÃÎÑÒ 26670.

Ðåçóëüòàòû âûÿâëåíèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus çàïèñûâàþò:îáíàðóæåíû (íå îáíàðóæåíû) â õ ã (ñì3) ïðîäóêòà;õ — ìàññà èëè îáúåì ïðîäóêòà, â êîòîðîì âûÿâëÿëè êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè èëè

S. àureus.

10.3 Îöåíêà ðåçóëüòàòîâ ïîñåâîâ íà èëè â àãàðèçîâàííûå ñåëåêòèâíî-äèàãíîñòè÷åñêèåñðåäû

×èñëî êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ äëÿ êàæäîé ÷àøêè Ïåòðè à, íà êîòîðîé ïîäñ÷èòû-âàëè êîëè÷åñòâî âûðîñøèõ êîëîíèé, ðàññ÷èòûâàþò ïî ôîðìóëå

a N Nb

B

b

B� �ò

ò

ò

àò

àò

àò, (1)

ãäå bò — ÷èñëî òèïè÷íûõ êîëîíèé, â êîòîðûõ ïîäòâåðæäåíî íàëè÷èå êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëî-êîêêîâ;

Âò — ÷èñëî òèïè÷íûõ êîëîíèé, îòîáðàííûõ äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ;Nò — îáùåå êîëè÷åñòâî òèïè÷íûõ êîëîíèé, ïîäñ÷èòàííîå íà ÷àøêå Ïåòðè;

bàò — ÷èñëî àòèïè÷íûõ êîëîíèé, â êîòîðûõ ïîäòâåðæäåíî íàëè÷èå êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôè-ëîêîêêîâ;

Bàò — ÷èñëî àòèïè÷íûõ êîëîíèé, îòîáðàííûõ äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ;Nàò — îáùåå êîëè÷åñòâî àòèïè÷íûõ êîëîíèé, ïîäñ÷èòàííîå íà ÷àøêå Ïåòðè.

Ðåçóëüòàò îêðóãëÿþò è çàïèñûâàþò ïî ÃÎÑÒ 26670.

Ïðè ïîñåâå â Áàéðä-Ïàðêåð àãàð ñ êðîëè÷üåé ïëàçìîé è áû÷üèì ôèáðèíîãåíîì ïîäòâåðæäåíèÿïðèíàäëåæíîñòè ê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûì ñòàôèëîêîêêàì íå ïðîâîäÿò. Â ýòîì ñëó÷àå êîàãóëàçîïîëî-æèòåëüíûìè ñòàôèëîêîêêàìè íà ÷àøêå Ïåòðè ñ÷èòàþò âñå òèïè÷íûå êîëîíèè.

Ôîðìóëà äëÿ ïîäñ÷åòà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ îòíîñèòñÿ è ê ïîäñ÷åòóS. àureus, íî ïðè ýòîì â ðàñ÷åò âíîñÿò ñëåäóþùèå äàííûå:

bò — ÷èñëî êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ, â êîòîðûõ ïîäòâåðæäåíî íàëè÷èåS. àureus;

Âò — ÷èñëî êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ, îòîáðàííûõ äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ;Nò — îáùåå êîëè÷åñòâî êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ, ïîäñ÷èòàííîå íà ÷àøêå

Ïåòðè;bàò — ÷èñëî àòèïè÷íûõ êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ, â êîòîðûõ ïîäòâåðæäåíî

íàëè÷èå S. àureus;

16

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Bàò — ÷èñëî àòèïè÷íûõ êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ, îòîáðàííûõ äëÿ ïîä-òâåðæäåíèÿ;

Nàò — îáùåå êîëè÷åñòâî àòèïè÷íûõ êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ, ïîäñ÷èòàí-íîå íà ÷àøêå Ïåòðè.

Ðàññ÷èòàííûå çíà÷åíèÿ à èñïîëüçóþò äëÿ ïîäñ÷åòà êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôè-ëîêîêêîâ èëè S. àureus â 1 ã èëè 1 ñì3 ïðîäóêòà ïî ôîðìóëå

Na

V n d�

�, (2)

ãäå a� — ñóììà êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus íà âñåõ ÷àøêàõ;V — îáúåì ïîñåâíîãî ìàòåðèàëà, âíåñåííîãî â êàæäóþ ÷àøêó Ïåòðè, ñì3;n — ÷èñëî ÷àøåê Ïåòðè â ðàçâåäåíèè, âûáðàííîì äëÿ ïîäñ÷åòà;d — ñòåïåíü ðàçâåäåíèÿ, ñîîòâåòñòâóþùàÿ ðàçâåäåíèþ, âûáðàííîìó äëÿ ïîäñ÷åòà.Ñîãëàñíî ÃÎÑÒ 26670 äëÿ ïîäñ÷åòà îòáèðàþò ÷àøêè, íà êîòîðûõ âûðîñëî íå áîëåå 300 êîëîíèé,

ïðè ýòîì ÷èñëî òèïè÷íûõ è (èëè) àòèïè÷íûõ êîëîíèé äîëæíî íàõîäèòüñÿ â ïðåäåëàõ 15—150 êîëîíèé.Åñëè â äâóõ ïîñëåäîâàòåëüíûõ ðàçâåäåíèÿõ êîëè÷åñòâî âûðîñøèõ òèïè÷íûõ è (èëè) àòèïè÷íûõ êîëîíèéíàõîäèòñÿ â ïðåäåëàõ 15—150, òî â ýòîì ñëó÷àå ðàñ÷åò êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëî-êîêêîâ èëè S. àureus ïðîâîäÿò ïî ôîðìóëå

Na

V n n d�

�

�( , ),

1 201(3)

ãäå a� — ñóììà êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus íà âñåõ ÷àøêàõ;V — îáúåì ïîñåâíîãî ìàòåðèàëà, âíåñåííîãî â êàæäóþ ÷àøêó Ïåòðè, ñì3;n1 — ÷èñëî ÷àøåê ñ ïîñåâàìè ïåðâîãî ðàçâåäåíèÿ;n2 — ÷èñëî ÷àøåê ñ ïîñåâàìè âòîðîãî ðàçâåäåíèÿ;d — ñòåïåíü ðàçâåäåíèÿ, ñîîòâåòñòâóþùàÿ ïåðâîìó ðàçâåäåíèþ (èñõîäíîå ðàçâåäåíèå òàêæå

ó÷èòûâàåòñÿ).Ðåçóëüòàòû îïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñòâà êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus íà 1 ã

(ñì3) ïðîäóêòà îêðóãëÿþò è çàïèñûâàþò ïî ÃÎÑÒ 26670.

10.4 ÏðèìåðÏîäñ÷åò êîëè÷åñòâà êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus ïðè ïîñåâå

0,1 ñì3 èññëåäóåìîãî ïðîäóêòà äàë ñëåäóþùèå ðåçóëüòàòû:- äëÿ ïåðâîãî âûáðàííîãî ðàçâåäåíèÿ (102): 140 òèïè÷íûõ êîëîíèé è 125 òèïè÷íûõ êîëîíèé, àòè-

ïè÷íûõ êîëîíèé íåò;- äëÿ âòîðîãî âûáðàííîãî ðàçâåäåíèÿ (103): 16 òèïè÷íûõ êîëîíèé è 14 òèïè÷íûõ êîëîíèé, àòèïè÷-

íûõ êîëîíèé íåò.Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ áûëî îòîáðàíî ñëåäóþùåå ÷èñëî êîëîíèé:- èç 140 êîëîíèé áûëî âçÿòî ïÿòü êîëîíèé, è âñå ïÿòü ïîäòâåðæäåíû êàê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå

ñòàôèëîêîêêè, äàâ à =140;- èç 125 êîëîíèé áûëî âçÿòî ïÿòü êîëîíèé, òðè èç êîòîðûõ ïîäòâåðæäåíû êàê êîàãóëàçîïîëîæè-

òåëüíûå ñòàôèëîêîêêè, äàâ à = 75;- èç 16 êîëîíèé áûëî âçÿòî ïÿòü êîëîíèé, è âñå îíè ïîäòâåðæäåíû êàê êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå

ñòàôèëîêîêêè, äàâ à = 16;- èç 15 êîëîíèé áûëî âçÿòî ïÿòü êîëîíèé, òðè èç êîòîðûõ ïîäòâåðæäåíû êàê êîàãóëàçîïîëîæèòåëü-

íûå ñòàôèëîêîêêè, äàâ à = 9.

N � ��

� � � �

140 75 16 9

01 2 01 2 10 2109091

, ( , ).

Ðåçóëüòàò ïîñëå îêðóãëåíèÿ áóäåò 1,1 � 105.

10.5 Îöåíêà ìàëûõ êîëè÷åñòâ âûðîñøèõ êîëîíèé10.5.1 Åñëè íà êàæäîé èç äâóõ ÷àøåê Ïåòðè, ñîîòâåòñòâóþùèõ ïîñåâó íàâåñêè èññëåäóåìîé ïðîáû

(æèäêèå ïðîäóêòû) èëè èñõîäíîé ñóñïåíçèè (ïðîäóêòû äðóãîé êîíñèñòåíöèè), îáíàðóæåíî ìåíåå 15 êîëî-íèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus, òî ðåçóëüòàò ðàññ÷èòûâàþò è âûðàæàþò ñëå-äóþùèì îáðàçîì:

17

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

à) ïðè ïîñåâå æèäêèõ ïðîäóêòîâ êîëè÷åñòâî êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè

S. àureus íà ñì3 ðàññ÷èòûâàþò ïî ôîðìóëå

Na

V�

�

2, (4)

ãäå a� — ñóììà êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus íà äâóõ ÷àøêàõ Ïåòðè;V — îáúåì ïîñåâíîãî ìàòåðèàëà, âíåñåííîãî â êàæäóþ ÷àøêó Ïåòðè;á) ïðè ïîñåâå ïðîäóêòîâ äðóãîé êîíñèñòåíöèè êîëè÷åñòâî êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîê-

êîâ èëè S. àureus íà ã ðàññ÷èòûâàþò ïî ôîðìóëå

Na

Vd�

�

2, (5)

ãäå a� — ñóììà êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è S. àureus íà äâóõ ÷àøêàõ Ïåòðè;V — îáúåì ïîñåâíîãî ìàòåðèàëà, âíåñåííîãî â êàæäóþ ÷àøêó Ïåòðè;d — ñòåïåíü ðàçâåäåíèÿ èñõîäíîé ñóñïåíçèè.10.5.2 Åñëè íà äâóõ ÷àøêàõ Ïåòðè ïðè ïîñåâå 0,1 ñì3 èññëåäóåìîé ïðîáû æèäêîãî ïðîäóêòà èëè

èñõîäíîé ñóñïåíçèè ïðîäóêòà äðóãîé êîíñèñòåíöèè íå îáíàðóæåíî êîëîíèé êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus, òî ðåçóëüòàò âûðàæàþò ñëåäóþùèì îáðàçîì:

- ìåíåå 10 ÊÎÅ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus â 1 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà;- ìåíåå 10/d ÊÎÅ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus â 1 ã ïðîäóêòà äðóãîé êîí-

ñèñòåíöèè (d — ñòåïåíü ðàçáàâëåíèÿ èñõîäíîé ñóñïåíçèè).Åñëè âûñåâàëè 1 ñì3 ïðîáû, òî ðåçóëüòàò âûðàæàþò ñëåäóþùèì îáðàçîì:- ìåíåå 1 ÊÎÅ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus â 1 ñì3 æèäêîãî ïðîäóêòà);- ìåíåå 1/d ÊÎÅ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ èëè S. àureus â 1 ã ïðîäóêòà äðóãîé êîí-

ñèñòåíöèè.

11 Ïðîòîêîë èñïûòàíèÿ

Ðåçóëüòàòû îöåíèâàþò ïî êàæäîé ïðîáå îòäåëüíî.

Ïðîòîêîë èñïûòàíèÿ äîëæåí âêëþ÷àòü:- âñþ èíôîðìàöèþ, íåîáõîäèìóþ äëÿ ïîëíîé èäåíòèôèêàöèè èñïûòóåìîãî ïðîäóêòà;- èñïîëüçóåìûé ìåòîä îòáîðà ïðîá;- èñïîëüçóåìûé ìåòîä èñïûòàíèÿ â ñîîòâåòñòâèè ñ íàñòîÿùèì ñòàíäàðòîì;- âñå äåòàëè îïåðàöèé, íå óñòàíîâëåííûõ íàñòîÿùèì ñòàíäàðòîì;- ïîëó÷åííûé(å) ðåçóëüòàò(û).

18

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Ïðèëîæåíèå À(ñïðàâî÷íîå)

Äèôôåðåíöèàöèÿ êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûõ âèäîâ è ïîäâèäîâ ñòàôèëîêîêêîâïî äâóì ïðèçíàêàì — îáðàçîâàíèþ àöåòîèíà è ôåðìåíòàöèè ìàëüòîçû

â àýðîáíûõ óñëîâèÿõ

Ò à á ë è ö à À.1

Íàèìåíîâàíèåòåñòîâ

S. aureus

S. delphini S. hyicusS. interme-

dius

S. schleiferisubsp.

coagulanssubsp.anaerobius

subsp.aureus

Îáðàçîâàíèå àöåòîèíà — + — — — +

Ôåðìåíòàöèÿ ìàëüòîçû âàýðîáíûõ óñëîâèÿõ

+ + — w —

Ï ð è ì å ÷ à í è å — «+» îçíà÷àåò, ÷òî 90 % èëè áîëåå øòàììîâ ïîëîæèòåëüíûå; «—» îçíà÷àåò, ÷òî 90 %èëè áîëåå øòàììîâ îòðèöàòåëüíûå; «w» îçíà÷àåò, ÷òî ðåàêöèÿ ñëàáàÿ; «îòñóòñòâèå îáîçíà÷åíèÿ» îçíà÷àåò, ÷òîîïðåäåëåíèå ïîêàçàòåëÿ íå ïðîâîäèëîñü.

19

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Ïðèëîæåíèå Á(ñïðàâî÷íîå)

Ñîïîñòàâëåíèå ñòðóêòóðû íàñòîÿùåãî ñòàíäàðòà ñî ñòðóêòóðîé ïðèìåíåííûõ â íåììåæäóíàðîäíûõ ñòàíäàðòîâ

Á.1 Ñîïîñòàâëåíèå ñòðóêòóðû íàñòîÿùåãî ñòàíäàðòà ñî ñòðóêòóðîé ÈÑÎ 6888-1:1999 ïðèâåäåíî â òàáëèöå Á.1.

Ò à á ë è ö à Á.1

Ñòðóêòóðà ìåæäóíàðîäíîãî ñòàíäàðòàÈÑÎ 6888-1:2003

Ñòðóêòóðà íàñòîÿùåãî ñòàíäàðòà

Ðàçäåë Ïóíêòû Ïîäïóíêòû Ðàçäåë Ïóíêòû Ïîäïóíêòû

1 Îáëàñòü ðàñïðîñòðà-íåíèÿ 1 —

1 Îáëàñòü ïðèìåíåíèÿ 1 —

2 Íîðìàòèâíûå ññûëêè 2 — 2 Íîðìàòèâíûå ññûëêè 2 —

3 Òåðìèíû è îïðåäåëå-íèÿ 3 3.1, 3.2


4 Ñóùíîñòü ìåòîäà 4 4.1—4.3 4 Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ èîïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñ-òâà êîàãóëàçîïîëîæè-òåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâè S.aureus 4.1, 4.3 4.1.1—4.3.2

5 Ïèòàòåëüíûå ñðåäû èðàçâåäåíèÿ 5 —

5 Ïèòàòåëüíûå ñðåäû,ðàñòâîðû, ýìóëüñèè, ðå-àêòèâû è ôèáðèíèðî-âàííàÿ êðîâü 5 5.1.1—5.21.1

6 Àïïàðàòóðà è ïîñóäà 6 — 6 Àïïàðàòóðà, ïîñóäà,ìàòåðèàëû, ðåàêòèâû 6 —

7 Îòáîð ïðîá 7 7 Îòáîð è ïîäãîòîâêàïðîá 7 —

8 Ïðèãîòîâëåíèå ïðîá 8

9 Èñïûòàíèå 9 9.1—9.5 8 Ïðîâåäåíèå èñïûòà-íèÿ 8.1—8.4 8.1.1—8.4.3

10 Ïîäñ÷åò è âûðàæå-íèå ðåçóëüòàòîâ 10 10.1, 10.2

9 Ïîäòâåðæäåíèå ïðè-íàäëåæíîñòè âûÿâëåí-íûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ êêîàãóëàçîïîëîæèòåëü-íûì ñòàôèëîêîêêàì 9.1—9.7 9.1.1 — 9.7.1

11 Òî÷íîñòü 11 — 10 Îáðàáîòêà ðåçóëüòà-òîâ 10.1—10.4 —

12 Ïðîòîêîë èñïûòàíèÿ 12 — 11 Ïðîòîêîë èñïûòàíèÿ 11 —

— — — Ïðèëîæåíèå À — —

20

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007











4 Ñóùíîñòü ìåòîäà 4 4.1—4.3 4 Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ èîïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñ-òâà êîàãóëàçîïîëîæè-òåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâè S. aureus 4.1—4.3 4.1.1—4.3.2


5 Ïèòàòåëüíûå ñðåäû,ðàñòâîðû, ýìóëüñèè, ðå-àêòèâû è äèôèáðèíèðî-âàííàÿ êðîâü 5 5.1.1—5.21.1


7 Îòáîð ïðîá 7 — 7 Îòáîð è ïîäãîòîâêàïðîá 7 —




9 Ïîäòâåðæäåíèå ïðè-íàäëåæíîñòè âûÿâëåí-íûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ êêîàãóëàçîïîëîæèòåëü-íûì ñòàôèëîêîêêàì 9.1—9.7 9.1.1—9.7.2




21

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007









3 Òåðìèíû è îïðåäåëå-íèÿ 3 —


4 Ñóùíîñòü ìåòîäà 4 4.1—4.3 4 Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ èîïðåäåëåíèÿ êîëè÷åñ-òâà êîàãóëàçîïîëîæè-òåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâè S. aureus 4.1—4.3 4.1.1—4.3.2


5 Ïèòàòåëüíûå ñðåäû,ðàñòâîðû, ýìóëüñèè, ðå-àêòèâû è äèôèáðèíèðî-âàííàÿ êðîâü 5 5.1.1—5.21.1


7 Îòáîð ïðîá 7 — 7 Îòáîð è ïîäãîòîâêàïðîá 7 —




9 Ïîäòâåðæäåíèå ïðè-íàäëåæíîñòè âûÿâëåí-íûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ êêîàãóëàçîïîëîæèòåëü-íûì ñòàôèëîêîêêàì 9.1—9.7 9.1.1—9.7.2




22

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Ïðèëîæåíèå Â(ñïðàâî÷íîå)

Ñâåäåíèÿ î ñîîòâåòñòâèè ññûëî÷íûõ ìåæäóíàðîäíûõ ñòàíäàðòîâ íàöèîíàëüíûì ñòàíäàðòàìÐîññèéñêîé Ôåäåðàöèè, èñïîëüçîâàííûì â íàñòîÿùåì ñòàíäàðòå â êà÷åñòâå

íîðìàòèâíûõ ññûëîê

Ò à á ë è ö à Â.1

Îáîçíà÷åíèå ññûëî÷íîãîìåæãîñóäàðñòâåííîãî è íàöèîíàëüíîãî

ñòàíäàðòà Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè

Îáîçíà÷åíèå è íàèìåíîâàíèå ññûëî÷íîãî ìåæäóíàðîäíîãî ñòàíäàðòà è óñëîâíîåîáîçíà÷åíèå ñòåïåíè åãî ñîîòâåòñòâèÿ ññûëî÷íîìó íàöèîíàëüíîìó ñòàíäàðòó

ÃÎÑÒ Ð 51446—99 (ÈÑÎ 7218—96) ÈÑÎ 7218:1996 «Ìèêðîáèîëîãèÿ ïðîäóêòîâ ïèòàíèÿ è êîðìîâûõ ïðîäóê-òîâ. Îáùèå ïðàâèëà ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé» (ÌÎD)

ÃÎÑÒ Ð 51652—2000 —

ÃÎÑÒ 470—77 —

ÃÎÑÒ 6672—75 —

ÃÎÑÒ 9284—75 —

ÃÎÑÒ 10444.1—84 —

ÃÎÑÒ 24104—2001 —

ÃÎÑÒ 24363—80 —

ÃÎÑÒ 26668—85 —

ÃÎÑÒ 26669—85 —

ÃÎÑÒ 26670—91 —

ÃÎÑÒ 30425—97 —

Ï ð è ì å ÷ à í è å — Â íàñòîÿùåé òàáëèöå èñïîëüçîâàíî ñëåäóþùåå óñëîâíîå îáîçíà÷åíèå ñòåïåíè ñîîòâå-òñòâèÿ ñòàíäàðòîâ:

- ÌÎD — ìîäèôèöèðîâàííûé ñòàíäàðò.

23

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

ÓÄÊ 663.664.001.4:006.354 ÎÊÑ 07.100.30 Í09 ÎÊÑÒÓ 9109

Êëþ÷åâûå ñëîâà: êîàãóëàçîïîëîæèòåëüíûå ñòàôèëîêîêêè è S. aureus, êîëîíèåîáðàçóþùèå åäèíèöû

(ÊÎÅ), òèïè÷íûå è àòèïè÷íûå êîëîíèè, ïèòàòåëüíûå ñðåäû, èíêóáèðîâàíèå ïîñåâîâ, ðåàêöèÿ Ôî-ãåñ-Ïðîñêàóåðà, òåðìîñòàáèëüíàÿ íóêëåàçà, îêðàñêà ïî Ãðàìó, íàëè÷èå êàòàëàçû è êîàãóëàçû, íàèáî-ëåå âåðîÿòíîå ÷èñëî (ÍÂ×)

ÃÎÑÒ Ð 52815—2007

Ðåäàêòîð Ë.Â. Êîðåòíèêîâà

Òåõíè÷åñêèé ðåäàêòîð Í.Ñ. Ãðèøàíîâà

Êîððåêòîð Ì.Â. Áó÷íàÿ

Êîìïüþòåðíàÿ âåðñòêà Â.È. Ãðèùåíêî

Ñäàíî â íàáîð 23.03.2009. Ïîäïèñàíî â ïå÷àòü 30.03.2009. Ôîðìàò 60õ841/8. Áóìàãà îôñåòíàÿ. Ãàðíèòóðà Àðèàë.Ïå÷àòü îôñåòíàÿ. Óñë. ïå÷. ë. 3,26. Ó÷.-èçä. ë. 2,70. Òèðàæ 448 ýêç. Çàê. 164.

________________________________________________________________________________________________________

ÔÃÓÏ «ÑÒÀÍÄÀÐÒÈÍÔÎÐÌ», 123995 Ìîñêâà, Ãðàíàòíûé ïåð., 4.www.gostinfo.ru [email protected]

Íàáðàíî âî ÔÃÓÏ «ÑÒÀÍÄÀÐÒÈÍÔÎÐÌ» íà ÏÝÂÌÎòïå÷àòàíî â ôèëèàëå ÔÃÓÏ «ÑÒÀÍÄÀÐÒÈÍÔÎÐÌ» — òèï. «Ìîñêîâñêèé ïå÷àòíèê», 105062 Ìîñêâà, Ëÿëèí ïåð., 6

ÏÐÎÄÓÊÒÛ ÏÈÙÅÂÛÅ · ÃÎÑÒ 10444.1—84 Êîíñåðâû....

Documents