Разведение и криоконсервация амфибий

Институт биофизики клетки РАНЛаборатория криоконсервации генетических ресурсов

Лаборатория криоконсервации

генетических ресурсов

В.К.Утешев

Н.В.Шишова

С.А.Каурова

Э.Н.Гахова

Западная Африка, Индия, Шри-Ланка, Новая Гринея. Создаются каталоги обитающих здесь видов амфибий и угрожающих им опасностей

Наибольший урон: более 80 процентов видов амфибий Карибского региона лишились естественной среды обитания или заболели

Численность почти половины из 5700 известных видов амфибий сокращается во всем мире. Около четверти всех видов амфибий находится под угрозой исчезновения, а часть из них уже вымерло

В Австралии так же заметно серьезное снижение численности амфибий из-за архимицетов, которые в настоящий момент угрожают 50 из 218 местных видов

Глобальные проблемыПотеря естественной среды обитания, болезни, чрезмерное использование природных ресурсов, изменения климата и другие факторы ударили по популяциям амфибий во всем

мире. Многие ученые трактуют снижение численности амфибий как предшественник грядущих экологических бед,

последствия которых неизвестны

Разведение в питомниках

Охрана природных биоценозов

Сохранение в криобанках

Два основных подхода к разведению:

• Воспроизведение природных факторов (в простейшем случае имитация зимовки)

• Применение гонадотропных гормонов

Схема гормональной регуляции размножения

ГипоталамусЛюлиберин

лютеинизирующий гормон-рилизинг гормон (LHRH) (сурфагон)

Гипофизгонадотропные гормоны:

фолликулостимулирующий гормон (ФСГ)лютеонизирующий гормон (ЛГ)Хорионический гонадотропин

ГонадыЯичники СеменникиЭстрогены Андрогены

Криобанки амфибий

Икра

Зародыши

Сперма Тестикулярная сперма

(Постмортальная тестикулярная сперма)

Уринальная сперма

Характеристики постмортальной спермы

Õðàí åí èå òóø åê, ñóò.0 2 4 6Ö

åë

îñò

íîñò

ü õð

îì

àòè

íà, %

.

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6

Îïë

îäîò

âîðå

íèå,

%.

0

20

40

60

80

100

Õðàí åí èå òóø åê, ñóò.

Õðàí åí èå òóø åê, ñóò.Õðàí åí èå òóø åê, ñóò.

Деградация хроматина постмортальных сперматозоидов в процессе хранения (COMET test)

контроль З суток

5 суток 14 суток

Криоконсервацияпостмортальной тестикулярной спермы

травяной лягушки Rana temporariaпосле 4 дней хранения при +4°С

• подвижность сперматозоидов 35,0 ± 4,2

• оплодотворение икры 25,3 ± 4,0

Получение уринальной спермы

Rana temporaria

Pelophylax lessonae

Общее количество сперматозоидов (миллионы), полученных за 24 часа после стимуляции гормонами:

Релизинг гормон (LHRHa), 50 мкг

Гипофиз

Релизинг гормон (LHRHa), 5 мкг

Хорионический гонадотропин (ХГ), 1000 ед

Хорионический гонадотропин (ХГ), 500 ед

650 ± 54

485 ± 23

444 ± 42

170 ± 11

39 ± 3

Гормон LH-RH 5 мкг Общее количество сперматозоидов

за 24 часа,*106, 443±52

Животное 1 248,8Животное 2 247,6Животное 3 931,5Животное 4 346,6

50 мкг Общее количество сперматозоидов за 24 часа,*106

650±48

Животное 1 292,0Животное 2 732,8Животное 3 1043,1Животное 4 532,5

Криоконсервированная

уринальная сперма

• Травяная лягушка

Rana temporaria

• Прудовая лягушка Pelophylax lessonae

• Серая жаба Bufo bufo

(A) гормонально-вызванная спермиация

(B) гормонально-вызванная овуляция

(C) Искуственное оплодотворение, развитие зародышей

(D) Полученные головастики (Kouba et al., 2009)

Современные технологии искуственной репродукции

Современные технологии искуственной репродукции

Rana temporaria

♀ ♂

Получение половых продуктов аксолотля

♀

♂

Получение половых продуктов иглистого тритона

Разведение в питомниках

Охрана природных биоценозов

Сохранение в криобанках