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Laboratorio # 3Tinción Gram, simple, negativa, cápsula, catalasa y oxidasa Identificación de cocos

Vilmarie Figueroa NievesVictor TorresTania N. Pérez Del Río

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Tinción Gram y Tinción Simple

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Materiales:◦ Un cultivo de 24

horas de cualquier bacteria

◦ Azul de metilo◦ Cristal violeta◦ Carbol fuchsin

◦ Mechero◦ “Loop” de

inoculación ◦ Bandeja de

tinción ◦ Microscopio◦ Papel de lente◦ Porta objeto

Tinción Simple

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Conceptos Básicos de Tinción

• Visualización de los microorganismos se

dificulta por:― Tamaño

― Transparencia

― Decoloración

Conceptos Básicos de Tinción

• Químicamente la tinción es un compuesto

orgánico:

Benceno

Compuesto orgánico sin color

Cromóforo

Auxocrómo

Imparte color al Benceno

Grupo químico que permite la ionización al grupo

cromógeno

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Conceptos Básicos de Tinción

Técnicas de tinción

Tinción Simple Tinción Gram

Morfología: cocos, bacilos y espirilos.

Arreglo: cadenas, agrupaciones, pares y tétradas.

Grupos: gram+ y gram-Visualización: flagelados,

cápsulados, esporas y núcleos.

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Conceptos Básicos de Tinción

1.Coloque una o dos  gotas de el agua en el centro de la laminilla.

• Fijación de las bacterias

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Conceptos Básicos de Tinción

2.Con un movimiento circular, riega la suspensión en la laminilla aproximadamente del tamaño de 10¢.

• Fijación de las bacterias

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Conceptos Básicos de Tinción

3.Transfiere una pequeña cantidad del inóculo bacterial del cultivo a la gota de agua. Riega el mismo de forma circular aproximadamente del tamaño de 5¢.

• Fijación de las bacterias

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Conceptos Básicos de Tinción

4.Dejar que se seque el frotis. Aguantando la laminilla por un extremó, rápidamente pásala por el mechero de dos a tres veces.

• Fijación de las bacterias

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Tinción Simple

Procedimiento:◦Preparar el frotis de la bacteria.

◦Poner una laminilla en la bandeja de tinción e inundar el frotis con los indicadores de tinción.

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Tinción Simple

• Se utiliza un sólo reactivo colorante:― Carbón fuchsin: 15 a 30 segundos

― Cristal Violeta: 20 a 60 segundos

― Metíl Azul: 1 a 2 minutos

Bacillus cereus Staphylococcus aureusEcherichia coli

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Tinción Simple

• ResultadosMetil Azul Cristal Violeta Carbón

Fuchsin

Dibujo

Organismo

Morfología

celular:

-Forma

-Arreglo

Color

____________

________________________

____________

____________

________________________

____________

____________

________________________

____________

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Tinción Simple

• Resultados

Cilíndrico

Esférico

Espiral

Helicoidal

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Tinción Gram

La mas importante tinción utilizada en bacteriología es la tinción Gram, nombrado por el Dr. Christian Gram. Este divide las células bacterianas en dos grandes grupos, Gram positivo (+) y Gram negativo (–), el cual es un gran instrumento para la clasificación y diferenciación de los microorganismos.

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Tinción Gram

Objetivos:◦ Demostrar las bases químicas y teóricas

para diferencial el procedimiento de tinciones.

◦ Demostrar las bases químicas de una tinción.

◦ Diferenciar entre dos principales grupos de bacterias: Gram + y Gram -

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Tinción Gram

Principios:

Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas:

Gram Negativas

Gram Positivas

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Principios:

Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas:

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Principios:

• Peptidoglucano:• Copolímero formado por

secuencias de:

• N-acetil-glucosamina

• Acido N-

acetilmurámico

• Por enlaces β-1,4

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Bacillus anthracis

Bacterias Gram Positivas

Principios:

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Bacterias Gram Negativas

Observaciones

Escherichia coli

Tinción Gram

• Se utiliza un sólo reactivo colorante:1) Cristal Violeta: 1 minuto

2) Iodo: 1 minuto

3) Alcohol: 10 a 15 segundos

4) Safranina: 45 segundos

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2

3

4567

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Tinción Gram

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Tinción Gram

• ResultadosE. Coli B. Cereus S. aureus

Dibujo

Organismo

Morfología

celular:

-Forma

-Arreglo

Color

____________

________________________

____________

____________

________________________

____________

____________

________________________

____________

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Bacterias Gram Negativas

Observaciones

Proteus vulgaris

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Serratia marcescens

GRAM -

Bacterias Gram Positivas

Observaciones

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Micrococcus luteus

GRAM +

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Spirillum

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Spirillum