universidad nacional de tumbes escuela de postgrado cultivo de microalgas ing. edgar lópez...
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Universidad Nacional de TumbesUniversidad Nacional de Tumbes
Escuela de PostgradoEscuela de Postgrado
CULTIVO DE MICROALGASCULTIVO DE MICROALGAS
Ing. Edgar López Landavery, MS.c
Criterios de SelecciónCriterios de Selección
Alimento
DisponibilidadCosto de producciónSimplicidadVersatilidad
FÍSICO PurezaDisponibilidadAceptabilidad
NUTRICIONAL Ingerible-Digerible Requerimientos energéticos Requerimientos nutritivos
CULTIVO PREDADOR
Cadena de alimentaciónCadena de alimentación
Clasificación de MicroalgasClasificación de Microalgas
CianophytaCianophyta = microalgas verde-azules = microalgas verde-azules Más primitivas Más primitivas
Procariontes Procariontes Pared celular posee cápsulas de proteína-Pared celular posee cápsulas de proteína-
polisacpolisacáriáridosdos Sólo poseen Clorofila a. Poseen ficobilinas y Sólo poseen Clorofila a. Poseen ficobilinas y
carotenoidescarotenoides No poseen flagelos No poseen flagelos Unicelulares, coloniales y filamentos (cianobacterias)Unicelulares, coloniales y filamentos (cianobacterias)
Spirulina, Oscillatoria, AnabaenaSpirulina, Oscillatoria, Anabaena
Bacterias
Microalgas
CYANOPHYTACYANOPHYTA
Clorophyta = Algas verdesClorophyta = Algas verdes
Grupo más avanzadoGrupo más avanzado EucariotesEucariotes Pared celular de celulosaPared celular de celulosa Algunas especies con flagelosAlgunas especies con flagelos Poseen clorofila a y b, algunos carotenoidesPoseen clorofila a y b, algunos carotenoides Formas unicelulares y filamentosFormas unicelulares y filamentos Tetraselmis, Dunaliella, Chlorella, Tetraselmis, Dunaliella, Chlorella,
ChlamydomonasChlamydomonas
CHLOROPHYTACHLOROPHYTA
Chlorella sp.
Bacillariophyta= DiatomeasBacillariophyta= Diatomeas
ÚÚnnicosicos con pared celular de sílice con pared celular de síliceEucariotesEucariotesNo poseen flagelosNo poseen flagelosClorofila a y c, algunos carotenoides Clorofila a y c, algunos carotenoides
=fucoxantina=fucoxantinaUnicelulares y filamentosUnicelulares y filamentosChaetoceros, Thalassiosira, Skeletonema, Chaetoceros, Thalassiosira, Skeletonema,
PhaeodactylumPhaeodactylum
BACILLARIOPHYTABACILLARIOPHYTA
Chrysophyta= algas pardasChrysophyta= algas pardas
Similares características que diatomeasSimilares características que diatomeasCarecen de pared con síliceCarecen de pared con síliceAlgunas especies con flagelos Algunas especies con flagelos Clorofila a y c, carotenoides = fucoxantinaClorofila a y c, carotenoides = fucoxantinaFormas unicelularesFormas unicelulares Isochrysis, Nannochloropsis, MonochrysisIsochrysis, Nannochloropsis, Monochrysis
Clases y Géneros de Clases y Géneros de MicroalgasMicroalgas
CLASE GENERO Bivalvos Crustáceos ZooplanctonLarvas Juveniles Larvas Post-larvas Rotíferos Artemia
Bacillarophyceae Skeletonema X X X XThalassiosira X X X XPhaeodactylum X X X XChaetoceros X X X X XCylindrotheca XNitzschia X XAmphora X
Haptophyceae Isochrysis X X X X XPseudoisochrysis X X
Crysophyceae Monochrysis X X X X
Prasynophyceae Tetraselmis X X X X X XPyramimonas X XMicromonas X
Clases y Géneros de Clases y Géneros de microalgasmicroalgas
CLASE GENERO Bivalvos Crustáceos ZooplanctonLarvas Juveniles Larvas Post-larvas Rotíferos Artemia
Cryptophyceae Chlamydomonas X X X XChlorococcum X
Xantophyceae Olisthodiscus X
Chlorophyceae Carteria XDunaliella X X X
Cyanophyceae Spirulina X X X X X
Condiciones generales de Condiciones generales de cultivocultivo
PARAMETROS RANGO OPTIMO
Temperatura ºC 16.0 - 27.0 18.0 - 24.0
Salinidad (ups) 12.0 - 24.0 20.0 - 24.0
Intensidad de luz (lux) 1.000-10.000 2.500-5.000
Fotoperiodo 16:8 (mínimo)
(luz:oscuridad, horas) 24:0 (máximo)
pH 7.0 - 9.0 8.2-8.7
Dinámica de crecimientoDinámica de crecimientoC
reci
mie
nto
Pob
laci
onal
(Núm
. De
célu
las/
ml
I
II
IIIIV
V
I. Fase de inducción o retraso del crecimiento II. Fase ExponencialIII. Fase de declinación relativa al crecimientoIV. Fase estacionariaV. Fase de muerte
Días de cultivo
Fase deseada
Requerimientos químicosRequerimientos químicos
MacronutrientesMacronutrientesNitrato Nitrato Fosfato Fosfato Relación Relación 66:1:1
MicronutrientesMicronutrientesMetales trazas: Metales trazas: Co, Cu, Fe, Mn, ZnCo, Cu, Fe, Mn, ZnVitaminas:Vitaminas: BB11, B, B1212, Biotina, Biotina
Silicatos: Silicatos: específicos para diatomeasespecíficos para diatomeas
Tratamiento del Agua de CultivoTratamiento del Agua de Cultivo
Filtración y Esterilización Mecánica Filtración y Esterilización Mecánica Agua claras Agua claras filtros de cartucho diferentes filtros de cartucho diferentes
mmAgua cargadas de partículasAgua cargadas de partículasFiltro de arena + filtro de diatomeas Filtro de arena + filtro de diatomeas filtro filtro
de cartucho de cartucho ultravioleta ultravioleta
Sistema de FiltraciónSistema de Filtración< 20,000 galones< 20,000 galones
Bombas
Filtro de arenaFiltros
20 a 35 micrasFiltros
1 a 5 micras
FiltroUV
Tanque decultivo
Vía opcional
Sistema de Ultrafiltración Sistema de Ultrafiltración
1 micra 10 micrasCarbón
5 micrasCarbón
Ultrafiltración
OpcionalUV
Tanque de Cultivo
Tratamiento del Agua de CultivoTratamiento del Agua de Cultivo
Ultravioleta: flujo es elUltravioleta: flujo es el factor más factor más importanteimportanteCondición: previa filtración mecánica a Condición: previa filtración mecánica a
30-35 micras (30-35 micras (m)m)
Ozono: en concentraciones altas Ozono: en concentraciones altas cloraminascloraminas
Rule of thumbRule of thumb si se lo percibe, suficiente si se lo percibe, suficiente parapara
ocasionar daños a la saludocasionar daños a la salud
Tratamiento del Agua de CultivoTratamiento del Agua de Cultivo
Esterilización por calor : Esterilización por calor : AutoclaveAutoclave Método más efectivoMétodo más efectivo Involucra temperaturas de 120 Involucra temperaturas de 120 C y 20 psiC y 20 psi Tiempo dependiente del volumenTiempo dependiente del volumen
1 L1 L 15 min15 min 20 L 20 L 45 min45 min
Altas temperaturas COAltas temperaturas CO22 pH pH precipitación de precipitación de
nutrientes nutrientes
Microondas: 1 - 1.5 L Microondas: 1 - 1.5 L 84 84 C C 8-10 8-10 minmin
Costoso
Tratamiento del Agua de CultivoTratamiento del Agua de Cultivo Pasteurización Pasteurización Volúmenes < 1000LVolúmenes < 1000L
Temperatura de 73 Temperatura de 73 C C 10-15 min 10-15 minEnfriar durante la noche a T Enfriar durante la noche a T C ambienteC ambienteRepetir el proceso en 24 horasRepetir el proceso en 24 horasDisminuye la precipitación de nutrientesDisminuye la precipitación de nutrientesRelativamente baratoRelativamente barato
Energía solar Energía solar Volúmenes > 1,000 LVolúmenes > 1,000 L Tanques con material aislante Tanques con material aislante
(invernadero)(invernadero)
Tratamiento del Agua de CultivoTratamiento del Agua de Cultivo
Clorinación Clorinación Método más común y simpleMétodo más común y simple
Hipoclorito de Sodio Hipoclorito de Sodio 2.5 ppm 2.5 ppm estabilizadoresestabilizadoresHipoclorito de CalcioHipoclorito de Calcio 12-25 ppm12-25 ppm30 min 30 min 12-24 horas 12-24 horas
Desactivación: Tiosulfato de Sodio Desactivación: Tiosulfato de Sodio
Fuentes de contaminaciónFuentes de contaminaciónInsectos
Lluvia
Sistema de agua
Fuente de agua
Cultivo inicial
Fertilización
Piedra difusoras
Aire
Sistema de aire
Tanque de cultivo
Boca
Manos sucias
Vidriería
TIPOS DE CULTIVOSTIPOS DE CULTIVOS
Tipo de Cultivo Ventajas Desventajas
Interiores Predecibles CostosoExteriores Baratos Menos predeciblesCerrado Menor contaminaci—n CostosoAbierto Barato Mayor contaminaci—nAxˇnico Predecibles Costoso, dif’cilNo-Axˇnico Barato, M‡s f‡cil Suceptible a crashContinuo Eficiente Dif’cil
Automatizado Equipo costosoTasa de produccion alta
Semi-continuo F‡cil Calidad espor‡dicaM‡s o menos eficiente menos confiable
Batch o Recolecci—n completa F‡cil Menos eficienteM‡s confiable Calidad inconsistente
Tipos de CultivoTipos de Cultivo Cultivo Batch ó Recolección CompletaCultivo Batch ó Recolección Completa
Transferencia de microalgas (antes de la fase Transferencia de microalgas (antes de la fase estacionaria) a volúmenes mayores enriquecidosestacionaria) a volúmenes mayores enriquecidos
De acuerdo a la concentración de la microalga, el De acuerdo a la concentración de la microalga, el inóculo debe ser del 2-10% del final del cultivoinóculo debe ser del 2-10% del final del cultivo
Ampliamente utilizadoAmpliamente utilizado simplicidad simplicidad y flexibilidady flexibilidad Método confiable, pero no el más eficienteMétodo confiable, pero no el más eficiente Cosecha cuando se alcanza máxima densidadCosecha cuando se alcanza máxima densidad Calidad de las microalgas menos predecibleCalidad de las microalgas menos predecible
Tipos de CultivoTipos de Cultivo Cultivo Semi-continuoCultivo Semi-continuo
Mantenimiento del cultivo mediante cosechas Mantenimiento del cultivo mediante cosechas periódicas parciales, recuperando el volumen periódicas parciales, recuperando el volumen original y suplementando con nutrientesoriginal y suplementando con nutrientes
Pueden ser interiores o exterioresPueden ser interiores o exteriores Duración es impredecibleDuración es impredecible Contaminación con competidores, predadores y/o Contaminación con competidores, predadores y/o
contaminantes contaminantes no son útilesno son útiles Cosechas de volúmenes mayores que el cultivo Cosechas de volúmenes mayores que el cultivo
batchbatch
Tipos de CultivoTipos de Cultivo Cultivo ContinuoCultivo Continuo
Nutrientes y agua filtrada adicionados al mismo Nutrientes y agua filtrada adicionados al mismo tiempo que stiempo que see cosech cosechaa
Pueden ser operados de dos formas:Pueden ser operados de dos formas:Cultivo Turbidoestáticos.- concentración Cultivo Turbidoestáticos.- concentración
de las microalgas de las microalgas fijafija mediante adicimediante adicióón n automáticautomática dea de medio fresco medio fresco
Cultivo Quemostático.- Medio de cultivo Cultivo Quemostático.- Medio de cultivo fresco fresco SSuministruministroo a una tasa constante y a una tasa constante y predeterminadapredeterminada
Métodos de aislamiento y Métodos de aislamiento y mantenimientomantenimiento
Gota de muestra
1ra dilución
2da dilución
3ra dilución Agar nutritivo
Caja de Petri
Esquema de producciónEsquema de producción
Cultivo bach
Cosecha
Fiola 2 L
10 a 14 días
5 a 7 días
Carboys óFundas plásticas
160 L7 días
Cilindro de fibra
Tanque 500 L
5,000 L 25,000 L
3 a 7 días
3 a 7 días
3 a 7 días
3 a 7 días
Cuantificación de MicroalgasCuantificación de Microalgas
Cuantificación directaCuantificación directaCámaras: Cámaras: Hematocitómetro Hematocitómetro 2-30 2-30
Sedgwick-Rafter Sedgwick-Rafter 50-100 50-100 Palmer Malony Palmer Malony 5-150 5-150 Speirs LevySpeirs Levy 5-75 5-75 Petroff HouserPetroff Houser 0.5-5 0.5-5
Peso seco: muestra representativa es Peso seco: muestra representativa es separada por centrifugación o filtración separada por centrifugación o filtración Resultados expresados en peso seco por Resultados expresados en peso seco por
volumen volumen
Cuantificación de MicroalgasCuantificación de MicroalgasCuantificación indirectaCuantificación indirecta
Coulter Counter:Coulter Counter: contador electrónico de contador electrónico de partículapartícula
EspectrofotometríaEspectrofotometría: : Clorofila a:Clorofila a: Pigmento puede ser examinado Pigmento puede ser examinado
por la luz absorbida a 664, 647 y 630 nmpor la luz absorbida a 664, 647 y 630 nmTurbidez: Turbidez: Medir absorbancia a 750 nmMedir absorbancia a 750 nm
Disco Secchi: Disco Secchi: medición de la turbidez que medición de la turbidez que las microalgas impartenlas microalgas imparten
Fluorometría: Fluorometría: mide clorofila mediante mide clorofila mediante exposición a la luz azulexposición a la luz azul
Material de CultivoMaterial de Cultivo
MaterialesMateriales VidrioVidrio PlásticoPlástico Polietileno transparentePolietileno transparente PolicarbonatosPolicarbonatos Fibra de vidrioFibra de vidrio Tanques de concretoTanques de concreto Tanques de madera (liners)Tanques de madera (liners) Tanques de tierra (liners)Tanques de tierra (liners)
Material puede ser tóxico!!!Material puede ser tóxico!!!
TiposTipos Cajas petriCajas petri ErlenmeyersErlenmeyers CarboysCarboys Tubos de ensayoTubos de ensayo FiolasFiolas Fundas plásticasFundas plásticas TanquesTanques PiscinasPiscinas EstanquesEstanques
Producción de microalgasProducción de microalgas Cultivo en piscinasCultivo en piscinas
Tierra, cemento, linersTierra, cemento, liners Fertilizante agrícolasFertilizante agrícolas Bloom naturalBloom natural Inóculos Inóculos
monoespecíficosmonoespecíficos Relativamente barataRelativamente barata Contaminación, Contaminación,
predaciónpredación Pobre consistencia y Pobre consistencia y
crashescrashes Taiwan: Taiwan: SkeletonemaSkeletonema
Cultivo algas bénticasCultivo algas bénticas Cultivo de Abalon Cultivo de Abalon
((HaliotisHaliotis sp), sp), P.vannameiP.vannamei
Plástico corrugado, Plástico corrugado, aquamats (sustratos)aquamats (sustratos)
Especies más Especies más cultivadas:cultivadas:
Navicula Navicula NitzschiaNitzschia AmphoraAmphora
Tiempo : 1-3 semanas Tiempo : 1-3 semanas 10 10 díasdías
Costos de ProducciónCostos de ProducciónCosto de Producción Notas Fuente(US $/ Kg peso seco)
Tetraselmis suecica Calculado de Helm 300 200 l batch culture et.al. (1979)
Diatomeas varias Calculado de Walsh167 Cultivo continuo et.al. (1987)
4 a 20 Cultivos exteriores De pauw y Persoone160-200 Cultivos interiores -1988
Cultivo continuo Dravers (1990)23-115 en fundas (8 ton) y 150(ton)
Tanque de cultivo Donaldson (1992)50 (450 ton)
50-400 Encuesta internacional Laboratorios de bivalvos Coutteau y Sorgeloos
1992
Valor NutricionalValor Nutricional
Valor nutricional depende:Valor nutricional depende:TamañoTamañoDigestibilidadDigestibilidadProducción de compuestos tóxicosProducción de compuestos tóxicosComposición bioquímicaComposición bioquímica
Proteínas Proteínas 12 - 35% 12 - 35% Lípidos Lípidos 7.2 - 23% 7.2 - 23% Carbohidratos Carbohidratos 4.6 - 23% 4.6 - 23%
Contenido de HUFAS, EPA, ARA, DHA, Contenido de HUFAS, EPA, ARA, DHA, importantes para organismos marinosimportantes para organismos marinos
Valor NutricionalValor Nutricional
Concentraciones significativas de EPAConcentraciones significativas de EPA Diatomeas: Diatomeas: Chaetoceros calcitrans, C. gracilis, S. constatum, Chaetoceros calcitrans, C. gracilis, S. constatum,
T. pseudonanaT. pseudonana Concentraciones significativas de DHAConcentraciones significativas de DHA
Prymnesiophyta: Prymnesiophyta: Isochrysis Isochrysis spsp., P. lutheri, Chroomonas salina., P. lutheri, Chroomonas salina
Microalgas ricas en ácido ascórbico:Microalgas ricas en ácido ascórbico: 0.11-1.62%0.11-1.62% Valor nutricional varía de acuerdo a condiciones Valor nutricional varía de acuerdo a condiciones
cultivocultivo Alimentación con diferentes microalgas es superior Alimentación con diferentes microalgas es superior
Uso de microalgas en Uso de microalgas en AcuiculturaAcuicultura
Moluscos BivalvosMoluscos Bivalvos 30% del costo operacional30% del costo operacional Requerimiento depende de la producciónRequerimiento depende de la producción
SemillaSemilla Talla comercialTalla comercial
Juveniles mayores consumidoresJuveniles mayores consumidores Algas utilizadas: Algas utilizadas: Isochrysis sp. , T-Iso, I. Galbana, Isochrysis sp. , T-Iso, I. Galbana,
Chaetoceros gracilis, C. calcitrans, Tetraselmis Chaetoceros gracilis, C. calcitrans, Tetraselmis suecica, Thalasiossira pseudonana, P. lutheri, suecica, Thalasiossira pseudonana, P. lutheri, Skeletonema costatumSkeletonema costatum
Uso de microalgas en Uso de microalgas en AcuiculturaAcuicultura
Moluscos BivalvosMoluscos BivalvosCombinaciones de flagelados y diatomeas Combinaciones de flagelados y diatomeas
estimulan la metamorfosisestimulan la metamorfosisCantidad dependiente de densidad de larvas Cantidad dependiente de densidad de larvas
(cel.µl (cel.µl -1-1))I. galbanaI. galbana 50 50C. calcitransC. calcitrans 250 250I. galbana/ C. calcitransI. galbana/ C. calcitrans 28/125 28/125I. g/C. cal/T. suecicaI. g/C. cal/T. suecica 33/83/33 33/83/33
Uso de microalgas en Uso de microalgas en AcuiculturaAcuicultura
Preferencia de cria juevniles en exteriorPreferencia de cria juevniles en exterior
Crecimiento influenciado por la ración de Crecimiento influenciado por la ración de alimentoalimento
EspecieEspecie Condiciones de cultivo de las microalgasCondiciones de cultivo de las microalgas Condiciones de cultivo de los bivalvosCondiciones de cultivo de los bivalvos
Condiciones prácticas utilizan altas tasas de Condiciones prácticas utilizan altas tasas de alimento 5-6% (peso seco de algas/peso vivo de alimento 5-6% (peso seco de algas/peso vivo de semilla/día)semilla/día)
Uso de microalgas en Uso de microalgas en AcuiculturaAcuicultura
CAMARONES PENAEIDOSCAMARONES PENAEIDOS Se alimenta a partir de NSe alimenta a partir de N55
Algas más utilizadas:Algas más utilizadas: Chaetoceros gracilisChaetoceros gracilis Skeletonema costatumSkeletonema costatum TetraselmisTetraselmis spp. spp. ThalasiossiraThalasiossira spp. spp.
Hábitos alimenticios cambian, disminuyendo consumo Hábitos alimenticios cambian, disminuyendo consumo de algasde algas
Estabilización del aguaEstabilización del agua- “Método del mismo tanque” Algas cultivadas en el - “Método del mismo tanque” Algas cultivadas en el
mismo tanque, suministro de fertilizantes y uso de mismo tanque, suministro de fertilizantes y uso de energía solar. Japón - energía solar. Japón - Penaeus japonicusPenaeus japonicus
Uso de microalgas en Uso de microalgas en AcuiculturaAcuicultura
PECES MARINOSPECES MARINOS “ “ Técnica del agua verde ”Técnica del agua verde ” Efectos de las microalgas en el cultivo no es Efectos de las microalgas en el cultivo no es
completamente entendido:completamente entendido: Estabilizan calidad de agua (OEstabilizan calidad de agua (O2 2 y remoción de y remoción de
produuctos metabólicos)produuctos metabólicos) Fuente directa de alimento. Polisacaridos estimulan Fuente directa de alimento. Polisacaridos estimulan
sistema inmunesistema inmune Fuente indirecta de alimento (rotíferos y Fuente indirecta de alimento (rotíferos y ArtemiaArtemia)) Incremento en la incidencia de alimentación (contraste Incremento en la incidencia de alimentación (contraste
y dispersión de luz)y dispersión de luz) Control microbiano (alga exudado en agua y/o larva)Control microbiano (alga exudado en agua y/o larva)
Sustitutos de las microalgasSustitutos de las microalgasSustituto Ventajas Desventajas
Disponibilidad Tiempo de vidaMicroalgas preservadas Concentración Alto costo
Disminuye contaminación
Microalgas heterotróficas Altas densidades Pocas especiesBajo costo Cambios en composición
bioquímica
Ingredientes pueden ser Degradación bacterianaDietas Microencapsuladas encapsulados Poca flotabilidad
Acumulaciones
Alta estabilidad Levaduras Tamaño apropiado Pared celular poco digerible
Producción a bajo costo Bajo valor nutricional
InfraestructuraInfraestructura
Ambientes internosAmbientes internos Cepario: Cepario: TemperatuTemperatura : 16 -18º Cra : 16 -18º C Volúmen de producción : 20 mL - 3LVolúmen de producción : 20 mL - 3L
Sala de carboysSala de carboys TemperatuTemperatura : 18 - 24º Cra : 18 - 24º C Volúmen de producción : 30LVolúmen de producción : 30L
Sala de lavado y esterilizadoSala de lavado y esterilizado Agua de mar y agua dulceAgua de mar y agua dulce
InfraestructuraInfraestructura Ambientes externosAmbientes externos
Plataforma acondicionada con aireaciónPlataforma acondicionada con aireación Cilindros de fibra de vidrio de 1 tCilindros de fibra de vidrio de 1 tnn Tanques rectangulares de concreto de 2 tnTanques rectangulares de concreto de 2 tn
Sistema de aireSistema de aire Blower de 1,5 HP para cultivos externos Blower de 1,5 HP para cultivos externos Blower de 1 HP para cultivos internosBlower de 1 HP para cultivos internos
Sistema de abastecimiento de agua de marSistema de abastecimiento de agua de mar Agua directa del mar con bomba de 2 HPAgua directa del mar con bomba de 2 HP Filtros de piola y carbón activadoFiltros de piola y carbón activado
MetodologíaMetodología Desinfección de línea de aguaDesinfección de línea de agua
Cloro activo 800 – 1000 ppm/2 díasCloro activo 800 – 1000 ppm/2 días Enjuagar con agua de mar durante 24 horasEnjuagar con agua de mar durante 24 horas Lavado carbón activado Lavado carbón activado
Desinfección de línea de aireDesinfección de línea de aire 100 -300 mL formol en blower, drenar por 30 – 40 minutos 100 -300 mL formol en blower, drenar por 30 – 40 minutos Enjuagar con agua dulceEnjuagar con agua dulce 100 – 200 mL de alcohol/1 hora100 – 200 mL de alcohol/1 hora
Lavado y esterilización de materialLavado y esterilización de material Solución de ácido (500 mL HNOSolución de ácido (500 mL HNO33/25 L de agua) por 30 minutos/25 L de agua) por 30 minutos Enjuagar con agua de mar filtrada y potable esterilizada Enjuagar con agua de mar filtrada y potable esterilizada Carboys, cilindros y masivos: 5000 ppm cloro activo y enjuagarCarboys, cilindros y masivos: 5000 ppm cloro activo y enjuagar
MetodologíaMetodología Preparación de nutrientesPreparación de nutrientes
Cultivos purosCultivos puros S1: 75 g S1: 75 g NaNONaNO33 + 5 g + 5 g NaHNaH22POPO44.H.H22OO
S2: 22 g S2: 22 g NaNa22SiOSiO33.5H.5H22OO
S3: 4.2 g EDTA disódico + 3 g S3: 4.2 g EDTA disódico + 3 g FeClFeCl33.6H.6H22OO S4: 0.1 g de Biotina + 0.1 g de Cianocobalimina + 0.5 g de Tiamina S4: 0.1 g de Biotina + 0.1 g de Cianocobalimina + 0.5 g de Tiamina CarboysCarboys S1: S1: 150g de Nitrato de Sodio y 10g de Fosfato de Sodio industrial150g de Nitrato de Sodio y 10g de Fosfato de Sodio industrial S2: 60g de Metasilicato de Sodio industrial S2: 60g de Metasilicato de Sodio industrial S3: 20g de EDTA disódico + 10g de Cloruro férrico S3: 20g de EDTA disódico + 10g de Cloruro férrico Exteriores Exteriores S1: S1: 600g de Nitrato de Sodio y 40g de Fosfato de Sodio industrial 600g de Nitrato de Sodio y 40g de Fosfato de Sodio industrial S2:150g de Metasilicato de Sodio industrial S2:150g de Metasilicato de Sodio industrial S3: 20g de EDTA industrial y 10g de Cloruro Férrico S3: 20g de EDTA industrial y 10g de Cloruro Férrico
MetodologíaMetodología
APLICACIONES
SOLUCIONES
OBSERVACIONESS1 S2 S3 S4
Cultivos puros (0.5- 3L) 1 ml/L 1ml/L 1ml/L 1ml/L Para los tubos agregar 0,8ml/L de la S2
Cultivos en Carboys (30L) 1ml/L 1ml/L 1ml/L ------ La S3 se prepara en 1gl y se esteriliza a 1L
Cultivos exteriores (cilindros y masivo) 100ml/TN 80ml/TN 30ml/TN ------ Las soluciones no se esterilizan
Fertilización de los cultivos
MetodologíaMetodología
producción
Cepa 3-4 días
Nueva cepa
0.5 L 3 L
30 L
1 tn5 tn
X 7
2 días
200 mL
2 días
2 días
X 3
2 días0.5-1 tn
agar
cosecha
Siembra
2 días2-3 días
MetodologíaMetodología
Preparación del agarPreparación del agar Bactoagar al 2 - 2.5 % en agua de mar filtrada y autoclavarBactoagar al 2 - 2.5 % en agua de mar filtrada y autoclavar Agregar 0.3 mL de las soluciones S1, S2, S3 y S4Agregar 0.3 mL de las soluciones S1, S2, S3 y S4 Llenar placas con 15-20 mL Llenar placas con 15-20 mL
Siembra en placasSiembra en placas Seleccionar la cepa más adecuada Seleccionar la cepa más adecuada Colocar 2 gotas de la cepa y rayar en estríasColocar 2 gotas de la cepa y rayar en estrías Incubar de 10 – 15 días: 18-24º C y luz constanteIncubar de 10 – 15 días: 18-24º C y luz constante
Extracción de coloniasExtracción de colonias Colonias libres de bacteriasColonias libres de bacterias Colocar en medo de cultivo Colocar en medo de cultivo 3-5 días con iluminación 3-5 días con iluminación
Mantenimiento de cepas
MetodologíaMetodología Limpieza de cepasLimpieza de cepas
Diluciones sucesivas hasta Diluciones sucesivas hasta 1010-4-4 Mantener a 18º C con iluminaciónMantener a 18º C con iluminación Dejar crecer de 5 a 10 díasDejar crecer de 5 a 10 días
Conteo celularConteo celular Hematocitómetro Hematocitómetro N (Cél/mL) = C*2500 ó N (Cél/mL) = C*50000 N (Cél/mL) = C*2500 ó N (Cél/mL) = C*50000
Alimentación larvariaAlimentación larvaria Ecuación de dilución Ecuación de dilución (C(C11VV11=C=C22VV22)) Incognita = volumen de alga a ser retirado de masivosIncognita = volumen de alga a ser retirado de masivos
GRACIAS