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Universidad de CaraboboFacultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina“Dr. Witremundo Torrealba"
Departamento de Fisiología y Bioquímica
Tema 3
Técnicas en BioquímicaElectroforesis
Br. Pérez José Br. Pérez EleannyBr. Pérez Ana
Marzo, 2012
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Objetivos Específicos
Analizar los fundamentos teóricos de la electroforesis y su utilidad.
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ContenidoMovimiento iónico en un campo eléctrico.Proceso electroforético.Cámara electroforética.Materiales de soporte.Utilidad de cada una de ella:
Electroforesis en geles de acrilamida.Electroforesis en geles de acrilamida SDS.Electroforesis bidimensional.Electroforesis en geles de agarosa.
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Es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico
Electroforesis
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Desventajas
Afecta la estructura de las proteínas por lo tanto, también afecta a la función de la misma.
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Ventajas
Separación, visualización y cuantificación del numero de proteínas de una solución.
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Movimiento iónico en un campo electromagnético.
http://www.micruxfluidic.com/es/tecnologia.html
Las moléculas de soluto con carga neta positiva se desplazan hacia el cátodo y las moléculas con carga neta negativa se desplazan hacia el ánodo.
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La movilidad depende de la carga de la partícula que, a su vez, depende del pH del medio en el que se encuentre. Por esta razón es necesario indicar el electrolito o el pH utilizado para determinar la movilidad.
La movilidad μ expresada en cm2 por Volt-s de una molécula en un campo eléctrico, viene dada por la velocidad de emigración V expresada en cm/s, respecto de la fuerza del campo E, expresada en voltios/cm.
Movimiento iónico en un campo electromagnético.
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Proceso electroforético
En la electroforesis libre una disolución tamponada de la mezcla de proteínas se coloca en una célula de observación en forma de U mayúscula, depositando una capa de tampón (buffer) puro sobre la disolución de proteínas.
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Unidades Horizontales:
Unidades Horizontales:
Unidades Horizontales:
Cámaras electroforéticas.
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Tipos de electroforesis
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Es aquella en la cual las partículas se mueven de forma libre en el medio en que se encuentran dispersas.
Electroforesis de frente móvil
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La muestra esta obligada a desplazarse sobre un soporte
solido tal como el papel o ciertos geles.
ELECTROFORESIS DE ZONA
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¿Qué se necesita para realizar
una electroforesis de zona?
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FACTORES QUE EFECTAN LA
ELECTROFORESIS
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CARGA NETA
TAMAÑO Y FORMA
POTENCIAL DEL CAMPO ELÈCTRICO
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MECANISMOS DE SOPORTE
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NO RESTRICTIVOS
PAPEL
• Separación de sustancia de bajo peso molecular
ACETATO CELULOSA
• Se usa en análisis biológicos
• Débil resolución
AGARASO
• Es un polisacárido
• Se usa para la separación de ácidos nucleicos
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ELECTROFORESIS CON PAPEL
ELECTROFORESIS CON
AGAROSA
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RESTRICTIVOS
GELES DE ALMIDÒN
• Proviene de diversas fuentes naturales
POLIACRILAMIDA
• El mas usado en la electroforesis
• Son geles completamente inertes, estables y transparentes
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ELECTROFORESIS DE POLIACRILAMIDA
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Electroforesis en geles de acrilamida
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
Proteínas presentes en el extracto
celular
Enzima RNA polimerasa de la bacteria E coli
• Son químicamente inertes.
• Son transparentes • Son estables en un amplio
intervalo de valores de pH, temperatura y fuerza
iónica• Son resistentes a los
agentes desnaturalizantes.
• Pueden prepararse con tamaños de poro muy
variados.
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Electroforesis en geles de acrilamida SDS
Compuesto de gran carga negativa.
Utilizado para estimar la pureza y la masa molecular.
Se une a las proteínas en una cantidad proporcional a la masa molecular.
Confiere a todas las proteínas un cociente Carga/Masa similar.
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
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SDS - PAGE
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
• Separa a las proteínas casi exclusivamente en función de su masa molecular
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Electroforesis bidimensional
Es la combinación secuencial del enfoque isoeléctrico y la electroforesis en gel con SDS.
SDS - PAGE
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
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Electroforesis en geles de Agarosa
Los geles se comportan
como un tamiz molecular y
permiten separar
moléculas cargadas en
función de su tamaño y forma.
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Resumen Los procedimientos de fraccionamiento se usan
para purificar las proteínas sobre la base de sus solubilidades, cargas, tamaños y especificidades de unión.
La electroforesis separa las moléculas según su tamaño y su carga.
La SDS-PAGE las separa principalmente por su tamaño.
La electroforesis en gel con SDS y el Enfoque Isoeléctrico se pueden utilizar por separado o combinados para obtener una mayor resolución.
La electroforesis bidimensional (2D) puede separar cientos de proteínas.
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Bibliografía http://www.uco.es/organiza/departamentos/
bioquimica-biol-GELES%20AGAROSA.pdfhttp://idibam.blogspot.com/2008/09/
electroforesis-en-gel-de-agarosa.htmlLehninger. Principios de bioquímica Cuarta
Edición.Harold A .Harper .Manual de química
Fisiológica Sexta Edición.Biochemistry (3rd Edition) by Christopher K.
Mathews Kensal E. van Holde Kevin G. Ahern
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Las grandes obras no son hechas con
la fuerza, sino con la perseverancia.