trametes sp-diseño-5-alllnz

DETERMINACION DE LA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO

DE TRAMETES sp. A DIFERENTES CONDICIONES: pH

(ACIDO, DEL MEDIO Y BASICO), TEMPERATURA, Y MEDIO

DE CULTIVO (PDA Y YPD).

“DISEÑO DE EXPERIMENTOS”

PRESENTAN:

NOMBRE 1 2 3 4 5 6 PROMEDIO FIRMA

Azpeitia Neri Jesús 90 95 100 95 95 100 95.83 ENTERADO

Leyva Castro Rosalba 95 90 90 90 80 75 86.66 ENTERADA

López Gutiérrez Bihari

Nathanael 100 100 95 100 95 100 98.33 ENTERADO

Luna Ayala Miriam Ivette 85 90 90 90 85 70 85 ENTERADA

Nava García Bernabé 100 90 90 90 95 90 92.5 ENTERADO

Tovar Zúñiga Eliseo 85 90 85 85 85 85 85.83 ENTERADO

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Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

Universidad Politécnica de Pachuca Página 2

Zempoala Hgo. A 27 de Julio de 2013

MARCO TEORICO

1. HONGOS Y ANTECEDENTES HISTORICOS

Antes del desarrollo de los análisis moleculares de ARN y su aplicación en la dilucidación

de la filogenia del grupo, los taxónomos clasificaban a los hongos en el grupo de las plantas

debido a la semejanza entre sus formas de vida (fundamentalmente, la ausencia de locomoción y

una morfología y ecología similares). Como ellas, los hongos crecen en el suelo y, en el caso de

las setas, forman cuerpos fructíferos que en algunos casos guardan parecido con ejemplares de

plantas, como los musgos.(1)

Sin embargo, en 1969 Whitaker , fundamentó el nivel de organización celular y el tipo de

nutrición de los seres vivos, sirviendo así al sistema sostenido por Nolan y Margoliash (1968), en

el cual se contemplaban los cinco reinos en los que se clasificarían los seres vivos (Mónera,

Protista, Fungí, Plantae y Animalia), en donde los hongos fueron colocados en el reino Fungí

porque sus características morfológicas, fisiológicas y taxonómicas son diferentes a las

contempladas en el reino vegetal y animal. Por otro lado, los hongos se encuentran ampliamente

distribuidos por toda la tierra y viven en cualquier sitio que presente materia orgánica, agua y

temperaturas apropiadas, comprendidas generalmente entre 4 y 60°C. Los hongos se encuentran

clasificados como saprobios, parásitos y simbiontes.(3)

Los saprobios utilizan sustancias orgánicas inertes, muchas de ellas en descomposición,

que pueden ser reservas de otros organismos, productos de excreción y excrementos de los

mismos, o restos de vegetales y animales. Los hongos parásitos se desarrollan en otros

organismos vivos en los cuales son sus huéspedes y se nutren de las sustancias que hay en sus

células vivas. Por último, los simbiontes se asocian con otros seres, prestándose mutua ayuda en

sus funciones.

En la clasificación más simple de los hongos se divide en micromicetos y macromicetos,

estos últimos se diferencian de los micromicetes por presentar cuerpos fructíferos. Los hongos

http://www.esacademic.com/dic.nsf/eswiki/440448





producen micelio, el cual es un conjunto de filamentos, y cada filamento se denomina hifa. A

veces las células que forman el micelio pueden parecer falsos tejidos. Las células de los hongos

tienen una pared celular de quitina, sustancia propia de los animales artrópodos. Raramente

acumulan también celulosa (1,2).

Los hongos tienen alimentación heterótrofa, puesto que no pueden realizar la fotosíntesis

porque no tienen clorofila. Tienen digestión externa, pues vierten al exterior enzimas digestivas,

sustancias proteicas que actúan sobre los alimentos dividiéndolos en moléculas sencillas, que

atacan a los alimentos. Los hongos absorben los alimentos después de digerirlos. Su reproducción

puede ser asexual, por esporas, y sexual. Las hifas haploides pueden dar lugar por mitosis, es

decir, asexualmente, a unas esporas llamadas conidios o conidiosporas. Las hifas diploides

resultante de la unión de dos hifas haploides pueden dar lugar, por reproducción sexual, a esporas

en unas estructuras tipo asca o tipo basidio. Hay dos clases de hifas: hifas cenocíticas, sin

tabiques de separación entre células, e hifas tabicadas, con ellos.(1,6)

Figura 1. A) Estructura plasmodial de hongos inferiores dentro de una célula hospedadora. B) hifas conociticas. C)

Hifas septadas o tabicadas (1)

Los hongos se presentan bajo dos formas principales: hongos filamentosos (antiguamente

llamados "mohos") y hongos levaduriformes. El cuerpo de un hongo filamentoso tiene dos

porciones, una reproductiva y otra vegetativa. La parte vegetativa, que es haploide y

generalmente no presenta coloración, está compuesta por filamentos llamados hifas (usualmente





microscópicas); un conjunto de hifas conforma el micelio (usualmente visible). A menudo las

hifas están divididas por tabiques llamados septos.(5,8)

CARACTERISTICAS PARTICULARES DE LOS HONGOS

Los hongos en sentido estricto son unos organismos eucariotas heterótrofos (ya que carecen de

clorofila), que tienen digestión externa con absorción^ y que producen un micelio (salvo raras

excepciones ya que algunos son unicelulares), formado por hifas septadas o sifonales cuyas

paredes celulares están revestidas por quitina y glucanos. Muchos se reproducen de forma sexual

y asexual y sus células o compartimentos tienen por lo general varios núcleos haploides.(7)

Las levaduras, un grupo de hongos, presentan al menos una fase de su ciclo vital en forma

unicelular; durante ésta, se reproducen por gemación o bipartición. Se denominan hongos

dimórficos a las especies que alternan una fase unicelular (de levadura) con otra miceliar

(con hifas).

La pared celular de los hongos se compone de glucanos y quitina; los primeros se

presentan también en plantas, y los segundos, en el exoesqueleto de artrópodos; esta

combinación es única. Además, y a diferencia de las plantas y oomicetos, las paredes

celulares de los hongos carecen de celulosa.

La mayoría de los hongos carecen de un sistema eficiente de transporte a distancia de

sustancias (estructuras que en plantas conforman el xilema y floema. Algunas especies,

como Armillaria, desarrollan rizomorfos, estructuras que guardan una relación funcional

con las raíces de las plantas.

En cuanto a rutas metabólicas, los hongos poseen algunas vías biosintéticas comunes a las

plantas, como la ruta de síntesis de terpenos a través del ácido mevalónico y

elpirofosfato. No obstante, las plantas poseen una segunda vía metabólica para la

producción de estos isoprenoides que no se presenta en los hongos. Los metabolitos

secundarios de los hongos son idénticos o muy semejantes a los

vegetales. La secuencia de aminoácidos de los péptidos que conforman

las enzimas involucradas en estas rutas biosintéticas difieren no obstante de las de las

plantas, sugiriendo un origen y evolución distintos.




















Carecen de fases móviles, tales como formas flageladas, con la excepción de

los gametos masculinos y las esporas de algunas formas filogenéticamente “primitivas”

(los Chytridiomycota).

No poseen plasmodesmos.

CONDICIONES DE CULTIVO

Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos simples,

una fuente de carbono orgánico, generalmente en azúcar, y de nitrógeno suelen ser los elementos

suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte sólido, el agar, permite a

los hongos filamentosos el desarrollo del micelio aéreo, donde se localizan las estructuras

reproductoras y el desarrollo de colonias en el caso de las levaduras. El medio de cultivo más

utilizado para los hongos es el medio glucosado de Sabouraud. que reúne estas características y

un pH de 5'6, que dificulta el crecimiento bacteriano.(4,7)

Los medios de cultivo después de sembrados, se incuban en anaerobiosis y la temperatura

óptima suele ser 25-30°C para los agentes de micosis superficiales y los oportunistas y de 35-

37°C para los que producen infecciones profundas.

Los hongos levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto y morfología

similar a las bacterianas. El desarrollo de las colonias de los hongos filamentosos es mucho más

variable: algunos crecen muy lentamente, pero sus colonias son muy características y en general

se diferencian fácilmente de las levaduras.

HONGOS FILAMENTOSOS

Los hongos filamentosos, designados más comúnmente como mohos, han sido de gran

importancia en la vida del género humano a lo largo de su historia, inicialmente en la parte

gastronómica y, a partir de este siglo, en la industria farmacéutica.(8)

Los hongos filamentosos se dividen en inferiores y superiores según las características de

sus hifas.

Los hongos inferiores poseen hifas anchas sin o con escasas tabicaciones, por lo que tiene

muchos núcleos para una misma unidad citoplasmática.







Los superiores están formados por hifas compartimentadas por septos transversales que

separan las células, pero que poseen poros que permiten una comunicación del citoplasma

Los hongos filamentosos se identifican a nivel de género especie por la morfología del

micelio, pero sobre todo por las características microscópicas de sus esporas asexuadas y los

elementos que las originan. Para conseguir la producción de esporas a veces se requieren medios

de cultivo especiales que facilitan la esporulación. Las estructuras reproductoras asexuadas

(conidióforos) son muy frágiles y para poder observarlas al microscopio sin distorsionarlas o

destruirlas se emplean técnicas especiales (microcultivo). (3)

PASOS PARA LA IDENTIFICACION DE LOS HONGOS

Aspecto macroscópico de la colonia

Tipo de hifa

Colocación del o los esporóforos

Presencia de esterigmatas (esporangióforo o conidióforo) y el orden que presentan

Forma tamaño y distribución de las esporas

Presencia o no de rizoides. Sólo se presentan en hongos de hifa no septada. Por

ejemplo: Rihizopus, Rhizomucor, Absidia

Practicar pruebas de identificación bioquímica.(6)

IMPORTANCIA DE LOS HONGOS

Los hongos tienen una gran importancia económica: las levaduras son las responsables de

la fermentación de la cerveza y el pan, y se da la recolección y el cultivo de setas como las trufas.

Desde 1940 se han empleado para producir industrialmente antibióticos, así

como enzimas (especialmente proteasas). Algunas especies son agentes de biocontrol de plagas.

Otras producen micotoxinas, compuestos bioactivos (como los alcaloides) que son tóxicos para

humanos y otros animales. Las enfermedades fúngicas afectan a humanos, otros animales y

plantas; en estas últimas, afecta a la seguridad alimentaria y al rendimiento de los cultivos.(1,3)
















CLASIFICACION ACTUAL

Quitridiomicetes (división Chytridiomycota).

Zigomicetes (división Zygomycota).

Glomeromicetes (división Glomeromycota).

Basidiomicetes (división Basidiomycota).

Ascomicetes (división Ascomycota).(5)

BASIDIOMICETOS

Los hongos basidiomicetos aparte de ser una extraordinaria fuente de proteína y una excelente

opción para la alimentación humana presentan características enzimáticas únicas. Su compleja

batería enzimática extracelular es la principal responsable del proceso de degradación y está

compuesta por lignina peroxidasa (I.iP). Manganeso peroxidasa (MnP). Lacasa. y otras enzimas

como glucosa oxidasa y glioxal oxidasa que generan el peróxido necesario para la actividad

catalítica de la LiP y MnP.(2,4)

La clase de los basidiomicetos pertenecen a la división Eucomycota (hongos verdaderos

con pared) en el reino Fungí, estos incluyen a las setas y los hongos, que forman cuerpos

fructíferos en forma de repisas sobre la madera; estas características también incluyen producción

de esporas sexuales en una célula especial llamada basidio y la reproducción asexual se realiza

por conidios o esporas cuando existen estos dos tipos de estructuras. Los basidiomicetos a su vez

se dividen en los siguientes órdenes: Auricular ales, Aphyllophorales, Agaricales y

Gasteromicetes.(4,5)

2. TRAMETES

Trametes como un género representativo de Polycoracae fue establecido por Elías Magnus

Fries in 1835.(9)






http://en.wikipedia.org/wiki/Elias_Magnus_Fries

http://en.wikipedia.org/wiki/Elias_Magnus_Fries



Fig. 1. Cuerpo fructífero silvestre de Trametes sp

CARACTERÍSTICAS

El hongo Trametes sp, en la actualidad se le adscribe dentro de esta clase de los

basidiomicetos en el orden Aphyllophorales y la familia Polyporaceae. Una de las propiedades

de los hongos del genero Trametes, es la degradación de la lignina para facilitar la digestión de la

celulosa y entre las enzimas que emplean estos hongos para ese fin se encuentran las llamadas

lacasas. Porque tienen la capacidad de oxidar a la lignina por medio de la acción de diversos

mediadores.(3)

Este hongo se encuentra dentro de los macromicetes, y como todos los de su orden gozan

de una mala reputación, ya que son considerados como hongos parásitos o patogénicos de los

bosques; crecen atacando a varias especies de árboles. Son imputrescibles, conservando su

integridad y algunos de ellos crecen en forma laminar sobre la madera, por lo cual son conocidos

como repisas de la madera. En el género Trametes frecuentemente su receptáculo es estacionario,

la trama espesa y clara; los tubos huecos son de dimensiones considerables, frecuentemente

lameladas, separados por tabiques algo espesos. Sus esporas son hialinas, lisas y sin cistides. Se

pueden clasificar este género según el color de su trama (3,4):

Rojo, siendo característico Trametes cinnabarium con los poros rojo bermellón, produce

una podredumbre blanca sobre numerosos árboles frondosos.



Leonado, de olor anisado, principalmente el Trametes odorata, cuyo sombrero velloso,

rojizo, pardo y con un margen de color vivo, este es de podredumbre parda, el cual

destruye abetos y alerces de la montaña.

Pardo-ocre, inodoro, involucra al Trametes trabea, con sombrero abollado y fomentoso,

leonado con himenio color gamuza común sobre todos los bosques muertos.

Blanco, este se encuentra en numerosas especies, entre las cuales se encuentran: Trametes

hispida con sombrero gris pardo, erizado, leonado, propio de bosques frondosos.

Trametes gibosa, muy común, el cual tiene sombrero pubescente, con zonas

blanquecinas, poros frecuentemente alargados.

Trametes rubescens que tiene su sombrero menos espeso y oscuro, lo que permite que se

distinga menos, se identifica bien por el color y la forma plana del sombrero con poros

encarnados rosas o rojizos propiamente se encuentran sobre sauces y alisos.

Los Lenzites son otro tipo de hongos que pertenecen a la familia de los polyporaceae y

tienen la apariencia muy semejante a Trametes sp. Lencitas tricolor se encuentran sobre

los cerezos, los poros son alargados, con desviaciones lamelados lineares, su sombrero es

pardo púrpura, frecuentemente con franjas más claras y triple carácter (hymenia, palique y

estacional) que lo distingue del Trametes rubescens, pero que muestra la proximidad

estrecha al género Trametes.

Lencitas zapearía cosmopolita y fuerte se encuentra comúnmente en los bosques de

confieras, producen una podredumbre parda y ceniza se reconoce por su bello color

azafranado o leonado, marrón y su sombrero erizado con algunas zonas desnudas, en sus

laminas rígidas, aserradas, dentadas, estriadas a lo ancho, azafranadas, su carne es

herrumbrosa, la distingue de su especie vecina L. abietina en las fructificaciones por otras

partes menos vivas y coloreadas, por la ausencia de cistides emergentes y al parecer

espesas que es lo último que revela.

El Trametes del roble (T. quercina) es una de los poli foros más comunes en los

robledales de Europa pero no daña los postes de las casas y los bosques. Son propios de

los bosques muertos y el castaños, es reconocido por sus almohadillas espesas, distones

ramificados y sus diversas formas, se puede colocar, ya sea en los Trametes o en los

Lencitas.



CONDICIONES DE CRECIMIENTO DE Trametes sp

En cultivo líquido y sólido, para la producción de enzimas lignocelulolíticas por el género

Trametes, se ha estudiado principalmente el efecto de la fuente de nitrógeno y la fuente de

carbono, pero hay poca información sobre el efecto de la temperatura en la producción de sus

enzimas dado que este género sólo las produce a temperaturas entre 28 y 30 °C. Levin y

Forchiassin (1998) indicaron que la temperatura entre 30 y 37 °C tiene poco efecto en la

producción de xilanasas en medio líquido por Trametes gallica, incluso por arriba de este

intervalo, encontraron que el hongo fue incapaz de crecer y de producir enzimas.(10,11)

IMPORTANCIA BIOTECNOLOGICA Y APLICACIONES.

El género está ampliamente distribuido en la naturaleza y algunas especies de trametes han

sido utilizadas en la medicina tradicional china. Sin embargo es difícil identificar muchas

especies de trametes debido a sus similares características morfológicas. Por esto trametes es

considerado como uno de los más confusos géneros de Polyporaceae. (5)

El género trametes tiene 64 especies de las cuales se puede destacar las siguientes

aplicaciones. Por ejemplo Trametes hirsuta cepa SKU804 es capaz de producir celulasa y

también un método de sacarificación. Debido a que el método puede garantizar un alto

rendimiento de sacarificación, las celulasas producidas a partir de la cepa, encuentran

aplicaciones en diversas industrias, incluyendo la industria de la energía, la industria de la fibra,

la industria de la fabricación de papel, la industria de los forrajes y la industria alimentaria, donde

se encuentran aplicaciones en la producción de alimentos bajos en calorías bio-energía y la y la

fermentación de los residuos de alimentos. (6)

En general Trametes, ya sea el organismo intacto o enzimas aisladas del mismo, puede tener

una gran variedad de aplicaciones biotecnológicas. Por sus propiedades catalíticas de



oxidorreductasas lacasas purificadas, aplicaciones con bajos volúmenes y de alto costo como el

uso en biosensores se han desarrollado. (5,6)

Otro campo de aplicación es la bioremediación o para el tratamiento de residuos. Sin duda,

la presión para tratamientos de bajo costo es más pronunciada en estas aplicaciones de gran

volumen, lo que favorece el uso de todo el microorganismo o caldo de cultivo no purificado.

Como se ha demostrado en varios artículos de opinión, el ataque concertado de enzimas

ligninolíticas Trametes puede manejar sustancias que de otra manera serían difíciles de degradar.

Es bastante razonable proponer que, en base a las numerosas propiedades catalíticas de las

enzimas descritas, muchas nuevas aplicaciones se pueden encontrar en el futuro próximo,

poniendo de manifiesto un género versátil de los hongos de Trametes; Trametes pubescens MB89

ha sido estudiado por su producción de lacasas, una enzima que puede ser utilizada en procesos

de remediación (Fig. 2). (7,8)

JUSTIFICACIÓN

Actual mente existen un gran número de industrias textiles distribuidas por todo el mundo, estas

fábricas generan un gran número de desechos, los cuales ocasionan un gran impacto ambiental,

específicamente en los mantos acuíferos. Por tal motivo se han llevado a cabo distintas

investigaciones que ayuden a la remediación de agua con compuestos fenólicos.

Fig.2. decoloración de colorantes textiles por hongos basidiomicetos. Trametes sp.,

colorante verde placa control (A), y placa inoculada (B) con siete días de incubación

(42°C); colorante amarillo placa control (C), y placa inoculada (D) con 15 dias de

incubación (42°C).(9)



Una manera de degradar los compuestos fenólicos es mediante el empleo de enzimas generadas

por Trametes SP. Por lo cual se han evaluado su velocidad de crecimiento a diferentes

condiciones como: pH: 3.5-del medio-8.5, Temperatura (28 y 37 °C), Medio de cultivo (PDA y

YPD)

OBJETIVO GENERAL

Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp a diferentes condiciones (pH,

Temperatura y medio de cultivo).

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°c, pH del medio en PDA

Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°c, pH del medio en YPD

Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°C Y 37°C, pH 3.5 en PDA

Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°C Y 37°C, pH 8 en PDA

Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp .a 28°C Y 37°C, pH 3.5 en YPD

Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°C Y 37°C, pH 8 en YPD

Comparar las velocidades de crecimiento de los diferentes tratamientos mediante pruebas

estadísticas (ANOVA, ANOVA A 2 VIAS, TUKEY Y DMS)

MATERIALES Y METODOS

Manejo de cada tratamiento.

Se realizaron tratamientos a el hongo filamentoso Trametes sp bajo diferentes condiciones para

determinar su velocidad de crecimiento. Manejando los medio YPD constituido de 1% (masa /

volumen) de extracto de levadura, 2% de peptona, 2% de glucosa / dextrosa, 2% de agar, con el

resto siendo agua destilada; y medio PDA constituido de 39 g de polvo PDA Comercial. Se

sometieron a temperaturas de 28°C y 37°C, ajustando a pH acido de 3.5, sin ajustar con pH del

medio de cultivo y ajustando a un pH básico de 8. Se midió el crecimiento en placa, tomando la

longitud de expansión en del hongo en la placa, durante 5 días con dos mediciones por día.



El ajuste de pH en los tratamientos se hizo con soluciones de acido clorhídrico y Hidróxido de

Sodio, Agregándole HCl para acidificar el medio a pH 3.5 y monitoreando constantemente con

un potenciómetro. Para alcanzar pH de 8 de uso la solución de NaOH de igual manera con ayuda

de potenciómetro.

Materiales y equipos

Se utilizaron cajas Petri y material para prepara medios de cultivo( bascula analítica, probeta,

espátula y vaso de precipitado) para los inoculo, potenciómetro para ajustar pH, y olla de precio

para la esterilización de cajas Petri y medios de cultivo.

Diseño experimental y análisis estadístico.

El experimento fue realizado con 5 repeticiones (inoculos) por cada tratamiento, y el tiempo de

de monitoreo del crecimiento fue de 5 días. Al final de cada tratamiento se calculaba la media

aritmética y la desviación estándar de las cinco cajas del crecimiento de expansión en placa

por un intervalo de tiempo. Después de los 5 días y teniendo por lo menos 5 medias aritméticas

de diferentes intervalos de tiempo se armo una regresión lineal, calculando la pendiente de la

recta generada, siendo esta la velocidad de crecimiento del tratamiento. Los factores fueron: el

medio de cultivo(dos niveles: YPD y PDA), el pH (tres niveles: pH 3.5, pH del medio, pH 8) y

Temperatura (dos niveles: 28°C y 37°C). Los datos se analizaron con el método de análisis de

varianza ANOVA para aceptar o rechazar hipótesis estadísticas. Las medias de velocidad de

crecimiento por placa se utilizaron para la comparación por la prueba Tukey, DMS y análisis

factorial [12].



ESQUEMA

Preparar medio de

cultivo PDA o YPD

según el tratamiento

sembrar por picadura e incubar

según sea el tratamiento (28°C o

37°C)

Esterilizar cajas Petri

y medio de cultivo

Esperar a que baje la temperatura

del medio, vaciar en cajas (20 mL

aprox.) y esperar gelificación

Ajustar o medir el pH, según sea el caso:

pH del medio

pH acido: 3.5

pH básico: 8

Después de 24 horas monitorear

crecimiento por lo menos 2 veces al

día, hasta obtener por lo menos 5

datos y determinar velocidad de

crecimiento mediante la graficacion

de los datos

http://www.yarethquimicos.com/images/PRODUCTOS YARETH QUIMICOS/PHMETROS/PH7110 Inolab New WTW.png



RESULTADOS Y DISCUCIONES

A continuación presentamos las regresiones generadas a partir de cada tratamiento y los

obtenidos.

Medio de cultivo PDA a 28°C

Tabla 2. Velocidad de crecimiento de Medio de cultivo PDA a 28°C

VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)

1 2 3 4 5 MEDIA

0 0 0 0 0 0

0.01920424 0.01920424 0.02562169 0.02241296 0.02401733 0.02209209

0.03203915 0.02883042 0.03043478 0.03043478 0.03203915 0.03075566

0.03524787 0.03364351 0.03364351 0.0384566 0.0384566 0.03588962

0.04166533 0.04166533 0.03524787 0.03685224 0.0384566 0.03877747

Tabla 1. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviación

CRECIMIENTO (cm)

TIEMPO (h) caja 1 caja 2 caja 3 caja 4 caja 5 MEDIA DESV

ESTANDAR

0 0 0 0 0 0 0 0

27 0.7 0.7 1.1 0.9 1 0.85072428

2

0.178885438

43 1.5 1.3 1.4 1.4 1.5 1.41597510

4

0.083666003

48.5 1.7 1.6 1.6 1.9 1.9 1.72958500

7

0.151657509

71 2.1 2.1 1.7 1.8 1.9 1.90658671

4

0.178885438

93 3.1 2.9 2.8 2.8 2.9 2.89599631

8

0.122474487

97 3.1 3.1 2.9 3.1 3 3.03784636

2

0.089442719

PENDIENT

E

0.0302335

3



0.05770897 0.05450024 0.05289588 0.05289588 0.05450024 0.05450024

0.05770897 0.05770897 0.05450024 0.05770897 0.0561046 0.05674635


estándar del hongo trametes sp en condiciones de: YPD, 28°C, Ph del medio

CRECIMIENTO (cm)

TIEMPO CAJA1 CAJA2 CAJA3 CAJA4 CAJA5 MEDIA S

0 0 0 0 0 0 0 0

28 0.2 0 0 0.2 0 0.08 0.1095445

1

47 1.2 1.2 1.4 1.2 1.3 1.26 0.0894427

2

51 1.5 1.4 1.7 1.2 1.6 1.48 0.1923538

4

66 1.6 1.5 1.7 1.6 1.8 1.64 0.1140175

4

70 1.8 1.7 1.8 1.7 1.9 1.78 0.083666

96.5 2.4 2.3 2.3 2.5 2.8 2.46 0.2073644

1

PENDIENT

E

0.02785379

y = 0.6233x - 0.497 R² = 0.9778

-1.5

-1

-0.5

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

0 27 43 71 93 97

CR

ECIM

IEN

TO (

cm)

TIEMPO (h)

Figura 1. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones

de: medio de cultivo PDA, pH del medio y 28 °C



Tabla 4. Velocidad de crecimiento Medio en YPD a 28°C.


1 2 3 4 5 MEDIA

0 0 0 0 0 0

0.01383342 0.00881586 0.00881586 0.01383342 0.00881586 0.01082288

0.03892122 0.03892122 0.04393879 0.03892122 0.04143001 0.04042649

0.04644757 0.04393879 0.05146513 0.03892122 0.04895635 0.04594581

0.04895635 0.04644757 0.05146513 0.04895635 0.05397391 0.04995986

0.05397391 0.05146513 0.05397391 0.05146513 0.05648269 0.05347215

0.06902659 0.06651781 0.06651781 0.07153537 0.07906172 0.07053186

Medio PDA, 28°, pH 3.5.

Tabla 5.- valores de crecimiento con respecto al tiempo (h), y valores de media y desviación

estándar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 28°, pH 3.5.

CRECIMIENTO (cm) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)

tiem

po

(t)

1 2 3 4 5 Me

dia

s 1 2 3 4 5 Medi

a

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

25 0 0 0 0 0 0 0 0.017

5889

0.017

5889

0.017

5889

0.017

5889

0.017

5889

0.017

5889

y = 0.3986x - 0.3514 R² = 0.9113 -2

-1

0

1

2

3

0 28 47 51 66 70 96.5

CR

ECIM

IEN

TO (

cm)

TIEMPO(h)

Figura 2. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a

condiciones de: medio de cultivo YPD, pH del medio y 28 °C



4 4 4 4 4 4

51 0.5 0.

6

0.

6

0.9 0.7 0.6

6

0.15

1657

5

0.022

7298

0.023

7579

7

0.023

7579

7

0.026

8424

8

0.024

7861

4

0.024

3748

7

69 1.5 2 2.

5

1.5 2 1.9 0.41

833

0.033

0115

2

0.038

1523

8

0.043

2932

3

0.033

0115

2

0.038

1523

8

0.037

1242

76 2 3.

5

2.

7

2.4 2.4 2.6 0.56

1248

6

0.038

1523

8

0.053

5749

5

0.045

3495

8

0.042

2650

6

0.042

2650

6

0.044

3214

1

194 5 5 5 5 5 5 0 0.068

9975

3

0.068

9975

3

0.068

9975

3

0.068

9975

3

0.068

9975

3

0.068

9975

3

Pendi

ente

0.02

774

Medio PDA, 37°C, pH 3.5.

Tabla 6.- valores de crecimiento con respecto al tiempo (h), y valores de media y desviación

estándar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 37°C, pH 3.5

CRECIMIENTO

(cm)


tiemp

o (h) 1 2 3 4 5 me

dia

s 1 2 3 4 5 Media

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

25 0.6 0

.

7

0

.

8

0

.

8

0

.

5

0.6

8

0.1303

8405

0.015

4654

0.0161

4295

0.016

8205

0.0168

2046

0.0147

8794

0.0160

0745

56 3.4 3

.

3

2

.

9

3

.

2

2

.

3

3.0

2

0.4438

4682

0.034

4356

0.0337

5813

0.031

0481

0.0330

8062

0.0269

8306

0.0318

6111

y = 0.9726x - 1.7107 R² = 0.8899

-2

-1

0

1

2

3

4

5

6

00:00 25 51 69 76 194 CR

ECIM

IEN

TO (

cm)

TIEMPO(h)

Figura 3. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a

condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 3.5 y 28 °C



69 5 5 4 5 4 4.6 0.5477

2256

0.045

2757

0.0452

7575

0.038

5007

0.0452

7575

0.0385

0068

0.0425

6572

76 5.5 5

.

4

6

.

3

5

.

5

4

.

5

5.4

4

0.6387

4878

0.048

6633

0.0479

8577

0.054

0833

0.0486

6328

0.0418

8821

0.0482

5678

99 6.8 9 7

.

5

6

.

5

6 7.1

6

1.1631

8528

0.057

4709

0.0723

7602

0.062

2134

0.0554

3835

0.0520

5081

0.0599

0989

Pendi

ente

0.076

0168

Medio en PDA a 28°C, pH 8


estándar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 28°C, pH 8


tiemp

o (h) 1 2 3 4 5 × s 1 2 3 4 5 x

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

23 0.2 0 0.2 0.2 0.3 0.18 0.109

5445

1

0.015

9620

6

0.013

2520

3

0.015

9620

6

0.015

9620

6

0.017

3170

7

0.015

6910

6

53 1.7 1.3 1.1 1.3 1 1.28 0.268

3281

6

0.036

2872

6

0.030

8672

1

0.028

1571

8

0.030

8672

1

0.026

8021

7

0.030

5962

1

84 1.9 2.1 1.7 2 1.7 ×1.8

8

0.178

8854

4

0.038

9972

9

0.041

7073

2

0.036

2872

6

0.040

3523

0.036

2872

6

0.038

7262

9

118 2.5 3 2.5 3.4 2.8 2.84 0.378 0.047 0.053 0.047 0.059 0.051 0.051

y = 1.476x - 1.6827

R² = 0.9826

-2

0

2

4

6

8

10

0 25 56 69 76 99

CR

ECIM

IEN

TO (

cm)

TIEMPO (h)


de: medio de cultivo PDA, pH 3.5 y 37 °C



y = 0.738x - 0.978 R² = 0.967

-2

-1

0

1

2

3

4

0 23 53 84 118 CR

ECIM

IEN

TO (

cm)

tiempo (h)

Figura 5. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de Trametes Sp. a

condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 8 y 28 °C

1534

1

1273

7

9024

4

1273

7

3224

9

1924

1

7344

2

Medio PDA, 37°C, PH 8

Tabla 8. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviación estándar del hongo Trametes Sp en condiciones de: PDA, 37°C, pH 8


tiempo (h)

1 2 3 4 5 X s 1 2 3 4 5 X

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

23 1.6 1.2 1.2 1.4 2 1.48

0.3346640

1

0.0175587

3

0.0155158

3

0.0155158

3

0.0165372

8

0.0196016

3

0.0169458

6

53 4.7 4.9 5.3 5.1 5.3 5.06

0.2607681

0.0333912

2

0.0344126

7

0.0364555

7

0.0354341

2

0.0364555

7

0.0352298

3

84 6.1 5.7 6.5 6.4 6.4 6.22

0.3271085

4

0.0405413

7

0.0384984

7

0.0425842

7

0.0420735

4

0.0420735

4

0.0411542

4



118 6.8 6.4 7.4 8.1 8.4 7.42

0.8438009

2

0.0441164

5

0.0420735

4

0.0471808

0.0507558

7

0.0522880

5

0.0472829

4

PENDIENTE

0.0652566

2

Medio YPD, 28°C, pH 3.5

Tabla 9. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviacion estandar del hongo trametes sp en condicions de: YPD, 28°C, pH 3.5

CRECIMIENTO (cm) VELOCIAD DE CRECIMIENTO (mm/h)

tiempo (h)

1 2 3 4 5 MEDIA

s 1 2 3 4 5 MEDIA

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

21 0.5 0.3 0.5 0.7 0.5 0.5 0.1414213

6

0.0171058

8

0.0147529

4

0.0171058

8

0.0194588

2

0.0171058

8

0.0171058

8

51 1.4 1.9 2.3 1.5 1.3 1.68

0.4147288

3

0.0276941

2

0.0335764

7

0.0382823

5

0.0288705

9

0.0265176

5

0.0309882

4

105 1.7 2.7 3.3 2.7 2.6 2.6 0.5744562

6

0.0312235

3

0.0429882

4

0.0500470

6

0.0429882

4

0.0418117

6

0.0418117

6

y = 1.958x - 1.838 R² = 0.9562

-2

0

2

4

6

8

10

0 23 53 84 118

CR

ECIM

IEN

TO (

cm)

tiempo (h)

Figura 6. Evaluación de la velocidad de crecimiento de Trametes Sp. a

condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 8 y 37 °C



120 2.6 3.6 3.6 3.2 3 3.2 0.4242640

7

0.0418117

6

0.0535764

7

0.0535764

7

0.0488705

9

0.0465176

5

0.0488705

9

PENDIENTE

0.0257887

2

Medio YPD, 37°C, pH 3.5

Tabla 10. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviación estándar del hongo trametes sp en condicions de: YPD, 37°C, pH 3.5


tiempo (h)

1 2 3 4 5 MEDIA

s 1 2 3 4 5 MEDIA

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

21 2 1.4 1.8 1.6 1.8 1.72

0.2280350

9

0.0281677

9

0.0214110

4

0.0259155

4

0.0236632

9

0.0259155

4

0.0250146

4

45 2.4 2.2 2.2 2.6 2 2.28

0.2280350

9

0.0326723

0.0304200

5

0.0304200

5

0.0349245

5

0.0281677

9

0.0313209

5

51 3.3 2.5 2.8 3 3 2.92

0.2949576

2

0.0428074

3

0.0337984

2

0.0371768

0.0394290

5

0.0394290

5

0.0385281

5

66 4.1 3.7 4.2 3.9 4.1 4 0.2 0.0518164

4

0.0473119

4

0.0529425

7

0.0495641

9

0.0518164

4

0.0506903

2

71 4.7 4.3 4.9 4.8 4.9 4.7 0.248 0.058 0.054 0.060 0.059 0.060 0.058

y = 0.85x - 0.954 R² = 0.9848

-2

-1

0

1

2

3

4

0 21 51 105 120 CR

ECIM

IEN

TO (

cm)

tiempo (h)


de: medio de cultivo YPD, pH 3.5 y 28 °C



2 99799

5732 06869

82545

69932

82545

79842

PENDIEN

TE

0.0605353

y = 0.888x - 0.5013 R² = 0.9723

-2

-1

0

1

2

3

4

5

6

0 21 45 51 66 71

CR

ECIM

IEN

TO (

cm)

tiempo (h)


de: medio de cultivo YPD, pH 3.5 y 37 °C



ANALISIS DE VARIANZA ANOVA

A continuación presentamos análisis de varianza entre los tratamientos del experimento:

ANOVA 1

Se realizó ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de

Trametes sp a condiciones de: pH de medio y 28°C

Tabla 11.- Anova de tratamientos con pH del medio a 28°C

Fuente de

variación

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Cuadrados

medios

Valor F

Tratamientos 0.000075 1 0.000075 0.150928

Error 0.005961 12 0.00049675

Total 0.006036 13

Ho:Hi= µ 2 µ 3 µ 4 µ 5

Ha Se acepta

Regla de

decisión

No se rechaza si Fexp ≤ 4.75

Se rechaza si Fexp > 4.75

Conclusión con

respecto a F

Se acepta Ho debido a que .150928 < 4.75 a un L.C 95%. La

velocidad de crecimiento no se se ve afectado por el medio de

cultivo.

Discusión de ANOVA1



En anova realizada a dos tratamientos diferentes para ver el efecto que logran tener en la

velocidad de crecimiento de Trametes sp utilizando medios PDA a 28ºC cuando la temperatura

aumenta, las velocidades de las reacciones químicas, que ocurren en el interior de las células de

los microorganismos, se vuelven cada vez más rápidas, podemos ver que en nuestras mediciones

existe una variación no muy considerable en cuanto al crecimiento es algo más constante en el

cual es un poco más inestable, se puede notar que en un comienzo el crecimiento es menos por la

temperatura pero posteriormente este aumenta su tamaño considerablemente esto podría darse por

que el medio le es más favorable ya que la temperatura está dentro de sus estándares al

crecimiento o su adaptación a este es mejor.[13,14]

Conclusiones ANOVA 1

En la anova realizada a este dos diferente tratamiento pudimos darnos cuenta que el desarrollo de

Trametes sp no se ve afectado totalmente ya que en ambos medios su desarrollo es óptimo en

ninguno de los medios se puede decir que no hubo variación de crecimiento ambos crecieron de

forma normal a que el pH del cultivo sólido está por abajo de 5 ó por arriba de 7 y esto lo

podemos corroborar con los datos de nuestra anova ya que nuestras hipótesis son aceptadas al ver

que nuestro valor de F experimental es menor que al F de tablas a un L.C de 95% teniendo en

cuenta todas estas variables descritas en la anova podemos concluir que la velocidad de

crecimiento de Trametes sp no se ve afectado drásticamente cuando el pH es acido del medio de

cultivo en el que se desarrolla.[15]

ANOVA 2

Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento

de Trametes sp a condiciones de: pH 3.5, en medio PDA.

Tabla 11. Velocidad de crecimiento con respecto a su temperatura.

Velocidad de crecimiento (mm/h). Velocidad de crecimiento (mm/h).

28° 37°

0 0



0.01758894 0.01600745

0.02437487 0.03186111

0.0371242 0.04256572

0.04432141 0.04825678

0.06899753 0.05990989

Tabla 12. Tabla de ANOVA de los tratamientos a pH 3.5, en medio PDA.

Fuente de variación Suma de cuadrados Grados de libertad Cuadrados medios Valor F

Tratamientos 0.000003 1 0.000003

Error 0.005264 10 0.0005264 0.00607

Total 0.005267 11

Discusión ANOVA 2

Con respecto en los datos se muestra que en las temperaturas de 28°C y 37°C, se tiene que en los

dos tratamientos presentan y se observa un efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes sp

a condiciones de: pH 3.5, en medio PDA. En el desarrollo de las anovas con respecto a la

temperatura como análisis de varianza la utilizamos para comprobar si existe o tenemos

Ho: µ1=µ2

Ha: Todas son diferentes

Regla de decisión : Si F experimental ≤ F tablas, no se rechaza la

Ho

Si F experimental>F tablas, se rechaza la Ho

Conclusión con respecto a F

experimental:

No se rechaza Ho ya que el valor de F

experimental es menor 0.00607 a F de tablas

de 4.96 teniendo un límite de confianza del

95% es entonces que en el medio de PDA no

presenta diferencia en las temperaturas de

28°C y 37°C sobre la velocidad de

crecimiento son diferentes.



estadísticamente alguna diferencia significativa característica para tener entre las medias

obtenidas las cuales son de (F experimental de 0.00607 mientras que en F de tablas se obtiene un

valor de 4.96) esto se determina cuando en el análisis experimental se cuenta con dos o más

tratamientos [6].

Es entonces que para el desarrollo de esta ANOVA teniendo como variable las diferentes

temperaturas que se están utilizando las cuales son de 28°C y 37°C en medio de cultivo PDA con

un pH de 3.5 la ANOVA obtenida anteriormente se muestra que la Ho no se rechaza porque

tenemos una diferencia de medias obtenidas en el análisis experimental que se realizo en la anova

anterior y que empleando las medias obtenidas de los resultados en los tratamientos, es por esta

razón que al analizar los tratamientos no se afecta su crecimiento pero el crecimiento en cada

temperatura es diferente significativamente en el medio de cultivo PDA y nuestro hongo

Trametes sp presenta un mejor crecimiento en pH de 3.5, en medio PDA a 37°C que se considera

que son condiciones optimas para su crecimiento[16,17].

Conclusión ANOVA 2

La anova nos hace concluir que a pH 3.5 en medio PDA, la temperatura no es un factor que

afecte significativamente el crecimiento del hongo Trametes sp.

ANOVA 3

Se realizó la ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento

de Trametes Sp a condiciones de: pH 8 y PDA.

Tabla 13.- Velocidad de crecimiento de los tratamientos a pH 8 en medio PDA.


28°C 37°C

0 0

0.01569106 0.01694586

0.03059621 0.03522983

0.03872629 0.04115424

0.05173442 0.04728294



Tabla 14.- ANOVA 3 entre tratamientos a pH 8 en medio PDA

Fuente de

variación

Suma de cuadrados Grados de

libertad

Cuadrados

medios

Valor F

Tratamientos 0.000001 1 0.000001 0.003828

Error 0.003122 8 0.00039025

Total 0.003123 9

Ho:Hi= µ1=µ2=µ3=µ4=µ5

Ha Los tratamientos no son

iguales

Regla de

decisión

No rechazar HO si Fexp ≤ 0.003828

Rechazar sí Fexp >0.003828

Conclusión con

respecto a F

La H no se rechaza porque Fexp

Discusiones ANOVA 3

La velocidad de crecimiento a temperatura de 37°C es más elevada que a 28 °C, pues presenta

un buen crecimiento a esta temperatura con respecto al tiempo por lo cual se establece que el

hongo Trametes Sp bajo estas condiciones presenta una buena velocidad de crecimiento en el

medio de cultivo PDA.

Se realizaron mediciones dos veces al día durante una semana en los tratamientos y se concluye

que son diferentes, por lo cual se pudo observar la diferencia en el crecimiento del hongo

Trametes sp a las temperaturas de 28° C y 37 °C. Favoreciendo el crecimiento a Trametes Sp



a 28 °C ya que no se ve afectada puesto que se encuentra en el intervalo de su temperatura

óptima de entre los 28 y 30 °C para favorecer su crecimiento.

Conclusión ANOVA 3

La Anova nos permite concluir que a pH 8 en medio PDA, la temperatura no es un factor que

haga variar significativamente la velocidad de crecimiento de Trametes sp.

ANOVA 4

Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de

Trametes sp a condiciones de: pH 3.5 y YPD

Tabla 15. Velocidades de crecimiento en los dos tratamientos a pH 3.5 en medio YPD.


28°C 37°C

0 0

0.01710588 0.02501464

0.03098824 0.03132095

0.04181176 0.03852815

0.04887059 0.05069032

0.05879842

Tabla 16.- ANOVA tratamientos a pH 3.5 en medio YPD.

Fuente de

variación

Suma de cuadrados Grados de libertad Cuadrados medios Valor F

Tratamientos 0.000108 1 0.000108 0.263903

Error 0.003696 9 0.000410667

Total 0.003804 10

Ho:Hi= µ1=µ2

Ha Todas son diferentes

Regla de

decisión

Si F experimental ≤ F tablas, no se rechaza la Ho

Si F experimental >F tablas, se rechaza la Ho



Conclusión

con respecto a

F

la Ho se rechaza porque el valor de f experimental (0.263903) es menor al de f

de tablas (F= 5.12) con un intervalo de confianza de 95%

DISCUSIÓN

Los Medios de cultivo afectarán la morfología de la colonia y el color, pueden afectar incluso el

crecimiento del hongo en el cultivo, la mayoría de los hongos crecen en agar de dextrosa de papa

(PDA), pero esta puede ser demasiado rica para muchos hongos.

Otro aspecto que puede crear un ambiente desfavorable en el medio de aislamiento, es un pH

elevado e incluso la temperatura.[20]

Al comparar dos tratamientos para determinar la velocidad de crecimiento del hongo trametes

sp. Se puede apreciar en la tabla 1, que la velocidad de crecimiento fue mayor a una temperatura

de 37°C: pH 3.5 y medio de cultivo YPD. Aun así no son las condiciones óptimas para el

desarrollo del hongo, por lo tanto no tubo diferencias significativas es decir que la temperatura no

influye de manera muy notable en el crecimiento de este hongo en un medio de cultivo YPD.

Con el análisis de varianza (ANOVA) comprobamos si existe una diferencia estadísticamente

significativa entre tratamientos.[24]

Para el desarrollo de esta ANOVA se tuvieron coma variables en un medio de cultivo YPD, la

temperatura, PH 3.5. se pudo determinar que la velocidad de crecimiento es favorable en una

temperatura de 37°C, para poder tener las condiciones óptimas de crecimiento es necesario

realizar el monitoreo del crecimiento en el medio de cultivo PDA.[23]

CONCLUCIÓN

Al trabajar y comparar los tratamientos realizados : (pH 3.5, YPD, 28°C y 37°C) se llegó a la

conclusión de que el hongo Trametes sp tiene mayor desarrollo bajo las circunstancias de pH

ácido (3.5) con una temperatura de 37°C en un medio de cultivo solido (PDA), porque estas

condiciones son óptimas para el desarrollo del hongo, se estima que tiene un crecimiento



prolongado en pocos días, el motivo de por qué se menciona su pH es porque actúa con su acidez

o alcalinidad del medio [23, 24].

La Ho se acepta porque el valor de f experimental es menor al de f de tablas con un intervalo de

confianza de 95%. [20]

ANOVA 5

Se realizo ANOVA a los tratamientos para ver efectos en la velocidad de crecimiento de

Trametes sp a condiciones de temperatura de 28°C.

Tabla17.-Tratamientos a 28°C


PDA YPD PDA pH 3.5 PDA pH 8 YPD pH 3.5

0 0 0 0 0

0.02209209 0.01082288 0.01758894 0.01569106 0.01710588

0.03075566 0.04042649 0.02437487 0.03059621 0.03098824

0.03588962 0.04594581 0.0371242 0.03872629 0.04181176

0.03877747 0.04995986 0.04432141 0.05173442 0.04887059

0.05450024 0.05347215 0.06899753

0.05674635 0.07053186

Tabla 18.- ANOVA de tratamientos a 28°C

Fuente de

variación

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Cuadrados

medios

Valor F

Tratamientos 0.000536 4 0.000134 0.28049

Error 0.011954 25 0.00047816

Total 0.01249 29

Ho:Hi= PDA =YPD =PDA pH 3.5 =PDA pH 8= YPD pH 3.5

Ha Son diferentes todos los tratamientos

Regla de

decisión

No rechazar si F experimenta </= 2.74*

Rechazar si F experimental >2.74



Conclusion con

respecto a F

Ya que el valor de F experimental es menor a F de tablas (2.74)

teniendo un límite de confianza del 95% es entonces que no hay

diferencia entre los tratamientos.

Discusión ANOVA 5

Los medios de cultivo generalmente contienen una fuente de carbono, nitrógeno y vitaminas. La

glucosa (dextrosa) es la fuente de carbono más ampliamente utilizable, y por lo tanto es el más

comúnmente utilizado en los medios de crecimiento [18]. Ambos medios de cultivo utilizados en

los tratamientos tienen como fuente de carbono la dextrosa. Así se explica que el crecimiento sea

similar en los tratamientos a la temperatura de 28°C.

El pH puede ser inhibidor de otros microorganismos que compitan con el hongo Trametes sp

[19]. Por lo que el pH acido y básico puede que sea beneficioso en algunos casos, siendo así que

no se note una diferencia significativa entre la velocidad de crecimiento a pH del medio de un pH

básico o acido, todo eso en la temperatura 28°C.

Conclusión ANOVA 5:

Nuestro análisis de varianza indica que son similares nuestros tratamientos a 28°C por lo que el

pH del medio y el medio de cultivo no son factores que causen diferencias significativas en el

crecimiento de Trametes sp.

ANOVA 6

Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de

Trametes sp a condiciones de: temperatura 37°C.



Tabla 20.- Tratamientos a temperatura de 37°C


PDA pH 3.5 PDA pH 8 YPD pH 3.5

0 0 0

0.01600745 0.01694586 0.02501464

0.03186111 0.03522983 0.03132095

0.04256572 0.04115424 0.03852815

0.04825678 0.04728294 0.05069032

0.05990989 0.05879842

Tabla 20.- ANOVA de los tratamientos a 37°C. Fuente de variación

Suma de cuadrados

Grados de libertad

Cuadrados medios Valor F

Tratamientos 0.000108 2 0.000054 0.123999

Error 0.006089 14 0.000434929

Total 0.006197 16

Ho:Hi= PDA pH 3.5 = PDA pH8 = YPD pH 3.5

Ha Son diferentes

Regla de decisión No rechazar si F experimenta </= 3.81

Rechazar si F experimental >3.81


Ya que el valor de F experimental es menor a F de tablas (3.81) teniendo un límite de confianza del 95% es entonces que no hay diferencia entre

los tratamientos.

Discusión ANOVA 6.

El pH ha de ser ligeramente ácido para facilitar el crecimiento de los hongos e inhibir al mismo

tiempo el desarrollo de otros microorganismos.[20] Pero en nuestra anova observamos que no

hay diferencias significativas entre medio y pH usando una misma temperatura de 37°C. Asi



podemos observar que Trametes sp. Se adapta bien al pH de 3.5 y el de 8, además que el cambio

de cultivo no afecta considerablemente.

Conclusiones ANOVA 6.

La anova muestra que no hay diferencias significativas entre usar un pH de 3.5, pH del medio o

usar pH 8 cuando se tiene una temperatura de 37°C. y que tampoco el factor del medio afecta

significativamente la velocidad de crecimiento de Trametes sp.

ANOVA 7

Se realizo ANOVA a los tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de

Trametes sp a condiciones de las variables: temperatura, pH, medio de cultivo.

Tabla 21. Medias con respecto a la velocidad de crecimiento en los tratamientos del hongo Trametes sp


PDA 28°C YPD 28°C PDA, pH 3.5, 28°C

PDA, pH 8, 28°C

YPD, pH 3.5, 28°C

PDA, pH 3.5, 37°C

PDA, pH 8, 37°C

YPD, pH 3.5, 37°C

0 0 0 0 0 0 0 0

0.02209209

0.01082288

0.01758894

0.01569106

0.01710588

0.01600745

0.01694586

0.02501464

0.03075566

0.04042649

0.02437487

0.03059621

0.03098824

0.03186111

0.03522983

0.03132095

0.03588962

0.04594581

0.0371242 0.03872629

0.04181176

0.04256572

0.04115424

0.03852815

0.03877747

0.04995986

0.04432141

0.05173442

0.04887059

0.04825678

0.04728294

0.05069032

0.05450024

0.05347215

0.06899753

0.05990989

0.05879842

0.05674635

0.07053186

Tabla 22. ANOVA 7 de todos los tratamientos.



Fuente de

variación

Suma de cuadrados Grados de libertad Cuadrados medios Valor F

Tratamientos 0.000648 7 9.25714x10-5

Error 0.018042 39 0.000462615 0.200254

Total 0.01869 46

Discusión

En los tratamientos que analizan de acuerdo a las medias obtenidas y utilizando como variables al

medio de cultivo, pH y temperatura para la determinación de velocidad de crecimiento con

respecto a los datos obtenidos en el hongo Trametes sp. Se realiza un análisis de varianza en

tratamientos (mostrados en la tabla 22). Y se tiene que (F experimental es de 0.200254 y F de

tablas es de 2.25) Con respecto a los análisis obtenidos se muestra que las variables (medio de

cultivo YPD, PDA, pH, temperatura), que son las determinantes para el crecimiento con respecto

al tiempo de incubación son diferentes entre sí porque se muestran que en los medios de cultivo

YPD y PDA con respecto a una temperatura de 37°C con un pH de 3.5 son similares a diferencia

del resto de los tratamientos donde varia su velocidad de crecimiento demostrando que en su

Ho: µ1=µ2=µ3

Ha: Todas son diferentes

Regla de decisión : Si F experimental ≤ F tablas, no se rechaza la Ho

Si F experimental >F tablas, se rechaza la Ho


experimental:

Se acepta la Ho porque en el análisis estadístico

tenemos que F experimental ≤ F tablas, no se

rechaza la Ho, porque en la F experimental es de

0.200254 y F de tablas es de 2.25 en el análisis

estadístico se encuentra que en los medios YPD,

PDA a los diferentes factores pH, temperatura y

medios de cultivo son diferentes

significativamente.



análisis de varianza el crecimiento del hongo Trametes sp es mas favorecedor con las

condiciones optimas que ya se establecieron anteriormente en la (tabla 22). Los hongos crecen

muy rápido en ocasiones va de 2 a 3 días y conforme van creciendo llegan a cubrir en las cajas

petri donde se encuentran inoculados es cuando estos crecen, así se puede realizar la

determinación de la velocidad de crecimiento, puede ser la medida más útil cuando se examina el

cultivo del hongo pero es posible que tenga un valor limitado por que la velocidad de

crecimiento de ciertos hongos varían en función de la cantidad de medio de cultivo en donde se

encuentran (PDA, YPD). En resultado, la velocidad de crecimiento de un hongo es importante

pero debe utilizarse junto con otras características o registros en el monitoreo de su crecimiento

que se realiza por el tiempo que se desee antes de realizar una identificación definitiva, es por

eso que el hongo Trametes sp. Se someterá a diferentes tratamientos, para identificar como es el

comportamiento en cada uno de ellos [14,21].

Conclusiones

Al trabajar con los tratamientos realizados que fueron sometidos a un análisis estadístico se

concluye que el hongo Trametes sp tiene mayor efecto cuando se localiza a circunstancias de pH

ácido (3.5) con una temperatura de 37°C en un medio de cultivo solido agar de dextrosa y papa

(PDA). El agar de dextrosa y papa es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras a

partir de muestras de alimentos, derivados de leche y productos cosméticos [22].

El agar de dextrosa y papa puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para inhibir el

crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial. También

puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clínica.

La base del medio es altamente nutritiva y permite la esporulación y la producción de pigmentos

en algunos dermatofitos. Algunas ocasiones es recomendable disminuir el pH del medio a 3.5 ±

0.1 con ácido tartárico al 10 %, para inhibir el crecimiento bacteriano. La infusión de papa

promueve un crecimiento abundante de los hongos y levaduras y el medio de cultivo (PDA) agar

de dextrosa y papa es adicionado como agente solidificarte. Una de las propiedades de los

hongos del genero Trametes sp es la degradación de la lignina para facilitar la digestión de la

celulosa y entre las enzimas que emplean estos hongos para ese fin se encuentran las llamadas



lacasas; estas son glicoproteínas producidas por algunos hongos y bacterias, que catalizan la

oxidación de diferentes compuestos fenólicos. Son enzimas excepcionalmente versátiles, que

pueden ser empleadas en diversos procesos industriales (bioblanqueo y depuración de los

efluentes de industrias papeleras, degradación de compuestos fenólicos contaminantes, etc.).

Porque tienen la capacidad de oxidar a la lignina por medio de la acción de diversos mediadores,

porque bajo estas condiciones optimas dicho hongo tiene una mayor actividad y se estima que

tiene un crecimiento prolongado en pocos días y es así como se puede utilizar para las

perspectivas que se propongan en el uso del hongo filamentoso Trametes sp por tal motivo se

menciona que con respecto a su pH es porque actúa con su acidez o alcalinidad del medio que lo

contiene y es como actúa en donde se cuenta con poblaciones de microorganismo para que el

hongo crezca en el medio de cultivo adecuadamente debe contar con algunas condiciones como

son temperatura, pH, la humedad la presencia de O2 en este la concentración de iones hidrógeno

afecta directamente a los microorganismos que influyen en la disociación y solubilidad de

moléculas que requiera de agente como pH es por eso que algunos microorganismos se han

adaptado a las diferentes condiciones de alcalinidad y acidez, como Trametes sp que crece a pH

ácidos cada microorganismo tiene un rango de temperatura y pH en el cual pueden crecer, de tal

manera que al modificarse estos factores se puede alterar la velocidad de crecimiento y en

algunas ocasiones causar la muerte de los mismos, por lo que se puede utilizar como factores de

control de crecimiento en el hongo Trametes sp para su disposición de N2, P, Ca y Mg [16,

17,18].

PRUEBA TUKEY Y DMS

Se realizo prueba Tukey y DMS [12] entre los tratamientos para observar que tratamientos eran

similares y cuales tenían diferencias significativas. El análisis se hizo a partir de las velocidades

de crecimiento de cada caja de cada uno de los tratamientos. Se obtuvo la siguiente tabla:

Tabla 23.- Velocidades de crecimiento por caja para prueba Tukey y DMS.

28 °C 37°C

Unidad Experimental

PDA YPD PDA 3.5 PDA8 YPD 3.5 PDA 3.5 PDA 8 YPD 3.5

Caja 1 0.03253361

0.026911

0.02769353

0.02245971

0.018856

0.07511355

0.06017018

0.06038261

Caja 2 0.03187058

0.02635577

0.02806145

0.02747483

0.02898792

0.08948651

0.05748431

0.05617927



Caja 3 0.02769117

0.02703288

0.0278169

0.02199476

0.03049551

0.07931176

0.06697287

0.06240345

Caja 4 0.02956433

0.02737883

0.02749378

0.02923532

0.02564017

0.07208807

0.07090462

0.06162206

Caja 5 0.02922036

0.03159048

0.0276502

0.02376879

0.02496397

0.06408427

0.07075114

0.0620891

MEDIAS 0.03017601

0.02785379

0.02774317

0.02498668

0.02578872

0.07601683

0.06525662

0.0605353

A partir de los datos de la tabla 23 obtuvimos los valores teóricos de comparación para los

tratamientos:

Tabla 24.- Datos teóricos calculados para prueba Tukey y DMS

nc= 28

R= 5

CME= 0.000021

T= 4.58

DMS= 2.037

T= 0.00938621

DMS= 0.00590379

A partir de los datos de la tabla 24 se genero la siguiente tabla de comparación entre los

tratamientos:

Tabla 25.- Tabla de comparación con los métodos Tukey y DMS de los tratamientos del experimento.

Comparación Diferencia TUKEY DMS

X1-X2= 0.00232222 A A

X1-X3= 0.00243284 A A

X1-X4= 0.00518933 A A

X1-X5= 0.0043873 A A

X1-X6= 0.04584082 R R

X1-X7= 0.03508061 R R

X1-X8= 0.03035929 R R

X2-X3= 0.00011062 A A

X2-X3= 0.00286711 A A

X2-X5= 0.00206508 A A

X2-X6= 0.04816304 R A

X2-X7= 0.03740283 R R



X2-X8= 0.03268151 R R

X3-X4= 0.00275649 A A

X3-X5= 0.00195446 A A

X3-X6= 0.04827366 R R

X3-X7= 0.03751345 R R

X3-X8= 0.03279213 R R

X4-X5= 0.00080203 A A

X4-X6= 0.05103015 R R

X4-X7= 0.04026994 R R

X4-X8= 0.03554861 R R

X5-X6= 0.05022812 R R

X5-X7= 0.03946791 R R

X5-X8= 0.03474658 R R

X6-X7= 0.01076021 R R

X6-X8= 0.01548153 R R

X7-X8= 0.00472133 A A

*A= comparación aceptada por el método. R=comparación rechazada por el método.

ANALISIS FACTORIAL.

Se realizo análisis factoriales comparando lo siguiente:

Tabla 26. Velocidades de crecimiento por placa de cada tratamiento par análisis factorial con factor A (pH) y factor B (temperatura).

FACTOR A (Ph 3.5)

FAC

TOR

B (T 2

8°C

)

PDA 3.5 YPD 3.5

0.02769353 0.018856

0.02806145 0.02898792

0.0278169 0.03049551

0.02749378 0.02564017

0.0276502 0.02496397

MEDIAS 0.02774317 0.02578872

FAC

TOR

B (T 3

7°C

)

PDA 3.5 YPD 3.5

0.07511355 0.06038261

0.08948651 0.05617927

0.07931176 0.06240345

0.07208807 0.06162206

0.06408427 0.0620891

MEDIAS 0.07601683 0.0605353



Figura 9. Grafico del análisis factorial de pH y Temperatura.

Tabla 27.- Velocidades de crecimiento por placa de cada tratamiento par análisis factorial con factor A (pH) y factor B (temperatura)

FACTOR A PH

FAC

TOR

B (T 2

8°C

)

YPD PDA 3.5 PDA8 YPD 3.5 PDA

0.026911 0.02769353 0.02245971 0.018856 0.03253361

0.02635577 0.02806145 0.02747483 0.02898792 0.03187058

0.02703288 0.0278169 0.02199476 0.03049551 0.02769117

0.02737883 0.02749378 0.02923532 0.02564017 0.02956433

0.03159048 0.0276502 0.02376879 0.02496397 0.02922036

MEDIAS 0.02785379 0.02774317 0.02498668 0.02578872 0.03017601

FAC

TO

R B

(T

37

°C)

PDA 3.5 PDA 8 YPD 3.5

0.07511355 0.06017018 0.06038261

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

1 2

MED

IAS

FACTOR A

Analisis Factorial

FACTOR B (37°C)

FACTOR B (28°C)



0.08948651 0.05748431 0.05617927

0.07931176 0.06697287 0.06240345

0.07208807 0.07090462 0.06162206

0.06408427 0.07075114 0.0620891

MEDIAS 0.07601683 0.06525662 0.0605353

Figura 11. Grafico del análisis factorial de la tabla 27

Conclusión del análisis factorial.

A partir del análisis factorial podemos ver que los tratamientos a 28°C y 37°C son diferentes.

PERSAPECTIVAS

Es así como con el estudio de dichos hongos si se establece las condiciones de crecimiento es

posible tener una relación de que nos indique cuales son los niveles de producción de enzimas

producidas por el hongo Trametes sp. De acuerdo al estudio que se ha realizado a los hongos

filamentosos y estos por lo normal son degradadores de la madera Trametes sp es capaz de

degradar la lignina y se puede emplear para el uso de fabricas textiles para la pigmentación del

algodón, hilo, telas para el desarrollo de prendas de vestir o colores versátiles empleados en las

pinturas textiles utilizadas en la comunidad para el arte de pintar la ropa en el hogar o lugares de

manejo industrial.

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

1 2 3 4 5

MED

IAS

FACTOR A

Analisis Factorial

FACTOR B (28°C)

FACTOR B (37°C)



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