Testul de fragilitate osmotica

Solutia care are o presiune osmotica egala cu a plasmei (300mOsm/l) se numeste izoton. Hematiile pot fi pastrate intr-un mediu izoton mai multe ore, fara a se modifica. Mediul izoton folosit este serul fiziologic, o solutie de NaCl de concentratie 0.9g%. Solutia care are o presiune osmotica mai mare decat a plasmei se numeste mediu hiperton. Eritrocitele puse in mediu hiperton pierd apa, pentru ca apa trece prin membrana eritorcitara din mediul cu presiune osmotica mai mica (interiorul hematiei), in mediul extern hiperton. Hematiile se ratatineaza (se zbarcesc). Solutia care are o presiune osmotica mai mica decat a plasemi se numeste mediu hipoton. In mediu hipoton apa intra in hematie, volumul eritrocitar creste si cand atinge dimensiunea critica de 135 μ3 hemoglobina incepe sa iasa din hematii. A detemina rezistena globulara inseamna a afla care este concentratia solutiei hipotone de NaCl la care hemoglobina incepe sa paraseasca hematiile-rezistenta globulara minima, respectiv concentratia la care hemoliza este completa –rezistenta maxima. Materiale necesare: – 18 eprubete de hemoliza, numerotate, asezate stativ. – Ser fiziologic (solutie NaCl 0.9%) – apa distilata – sange proaspat recoltat pe anticoagulant. – Doua pipete de 2ml gradate – pipeta Pasteur

Tehnica In eprubetele de hemoliza se pipeteaza ser fiziologic: 1.8ml in prima, 1.7ml in a doua, 1.6ml in a treia s.a.m.d. Pana la ultima in care se pun 0.1ml. Se completeaza cu apa distilata pana la un volum total de 1.8ml: in prima eprubeta nu se adauga apa, in a doua se pun 0.1ml, in a trei 0.2ml .. etc. Concentratiile solutiilor de NaCl scad de la 0.9 g% in prima eprubeta la 0.85g% in a doua, 0.8g% in a trei s.a.m.d cu cate 0.05g% in fiecare eprubeta. Cu pipeta Pasteur se lasa cate o picatura de sange sa cada in solutia din fiecare eprubeta. Nu se agita. Se lasa in repaus timp de o ora. Rezultat. Interpretare:

In mod normal, daca hematiile nu prezinta modificari patologice, se observa – In primele 9 eprubete hematiile se depun la fund fromand un sediment rosu opac iar supernatantul este incolor. Aici nu exista hemoliza, hematiile rezista la conditiile de mediu. – Eprubetele 10,11,12,13 contin un sediment redus si supernatant colorat roz ceea ce indica prezenta hemolizei partiale. Concentratia solutiei de NaCl de 0.45g% din a 10 eprubeta (prima eprubeta la care apare hemoliza partiala) corespunde resistentei globulare minime. – Incepand cu a 14-a eprubeta pana la ultima, nu mai exista separare sediment/supernatant, solutia care culoare rosie, hemoliza este totala. Concentratia solutiei de NaCl de 0.3g% din a 13-a eprubeta (ultima eprubeta la care hemoliza este partiala) corespunde rezistentei globulare maxime.

Valori normale: – rezistenta globulara = 0.45% -concentratia de NaCl a primei eprubete in care se constata hemoliza. – Resistenta globulara maxima = 0.3% -concentratia de NaCl a ultimei eprubete in care se mai observa hematii nehemolizate. – Intre 0.45% si 0.3% este intinderea sau scara rezistentei globulare.

Variatii: 1. Deplasarea la stanga a scarii de rezistenta (exemplu: 0.50% -0.75%) arata ca hematiile au o rezistenta scazuta. Se intalneste in hemolize intense si este insotita de anemie si icter hemolitic. Cauza poate fi eritrocitara sau extraeritrocitara. Apare si dupa splenectomie indicand o populatie eritrocitara imbratranita. 2. Deplasarea la dreapta a scarii de rezistenta (exemplu: 0.1% -0.3%) indica prezenta unor hematii rezistente. Apare in hipersplenism, dar si dupa hemoragii importante odata cu refacerea volumului globular prin stimulare medulara si eliberarea unor hematii tinere in circulatie. 3. Apropierea celor doua valori ale rezistentei globulare (maxima si minima) indica o popiulatie eritrocitara omogena. 4. Diferenta mare intre cele doua valori ale rezistentei globulare (maxima si minima) indica o populatie eritrocitara heterogena.