tÉcnicas para visualizaciÓn de cromosomas
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7/16/2019 TÉCNICAS PARA VISUALIZACIÓN DE CROMOSOMAS
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TÉCNICAS PARAVISUALIZACIÓN DE
CROMOSOMAS.
El bandeo cromosómico consiste
en someter los cromosomas a
desnaturalización, digestión
enzimática o ambos, seguido de la
incorporación de un colorante
específico de DNA, que origina que
los cromosomas se tiñan como una
serie de bandas claras y obscuras.
Las técnicas más comunes son:
BANDAS GMétodo más común. Primero se
tratan los cromosomas con tripsina
y luego se tiñen con la técnica de
Giemsa, obteniéndose el patrón
característico de bandas claras y
oscuras que distinguen zonas de
DNA con alto contenido de paresde bases de adenina –timina (A-T).
BANDAS Q.Tinción con mostaza de quinacrina.
Las preparaciones se ven con
microscopia de fluorescencia. Los
cromosomas se tiñen con un patrón
específico de bandas brillantes y
oscuras. Las bandas Q brillantes se
corresponden casi exactamente conlas Bandas G oscuras. Las Bandas
Q, así como las Bandas C, son
particularmente útiles para detectar
variantes ocasionales de la
morfología o la tinción de los
cromosomas denominadas
heteromorfismos. Estas variantes
son generalmente benignas y
reflejan diferencias en la cantidad o
el tipo de secuencia de DNA satélite
en una determinada localización del
cromosoma.
BANDAS R.Los cromosomas reciben un
tratamiento con calor antes de la
tinción, las bandas oscuras y claras
resultantes son las inversas de la
obtenidas mediante el método de
bandas G o Q, ya que las bandas R
ofrecen un patrón más fácil de
analizar cuando se examinan
regiones que se tiñen mal con otros
métodos
BANDAS C
Esta técnica tiñe específicamente la
región centromérica de cada
cromosoma y otras regiones que
contienen heterocromatina
constitutiva, es decir, las secciones
de los cromosomas 1q, 9q, 16q,
adyacentes al centrómero y la parte
distal de Yq. La heterocromatina es
el tipo de cromatina que permanece
en el estado condensado y que se
tiñe de oscuro en las células en
metafase.
BANDAS TIdentifican un subgrupo de bandas
concentradas sobre todo en lostelómeros. se tiñen de modo más
intenso y se observan mediante
tratamiento de calor intenso al
cromosoma, antes de teñirlo con
Giemsa o con una combinación de
colorante y fluorocromos.
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SITIOS FRÁGILESSon zonas que no se tiñen y que
ocasionalmente se observan endeterminadas localizaciones de
varios cromosomas. Para visualizar
estos sitios suelen ser necesarios
exponer las células a condiciones
de crecimiento o químicos que
alteran o inhiben la síntesis de
DNA. La detección del sitio frágil en
el cromosoma X es un método
diagnóstico específico para el
síndrome del cromosoma X frágil.
Bandas de cariotipoconvencional
La obtención de este tipo de
bandas se realiza en cromosomas
metafásicos, aunque también se
puede realizar en cromosomas
prometafásicos, incluso en
profásicos. El cromosoma
metafásico está condensado y el
cariotipo humano en haploide
presenta unas 400 bandas,
mientras que en prometafase
podemos ver hasta 2000 bandas
porque es un cromosoma más
largo.
Bandas que tiñen solodeterminados puntos del
cromosoma
Bandas C: solo tiñen la
heterocromatina:
Centrómeros. Zonas heterocromatínicas de
los cromosomas 1, 9, 16, de
los brazos cortos de los
cromosomas acrocéntricos
(13, 14, 15, 21 y 22) así
como de gonosoma Y.
Bandas NOR, que tiñen los satélites
de los cromosomas acrocéntricos.
Bandas T, que marcan los
telómeros para ver si falta alguno.
Bandeo d e al ta resolución.
Técnica basada en la tinción de los
cromosomas en profase oprometafase, incrementando así el
número de bandas visibles al
microscopio. El bandeo típico suele
oscilar entre 400 – 500 bases por
cariotipo, aunque pueden ser desde
1 par de bases a miles de bases.
Las células se pueden obtener de
un cultivo de linfocitos sincronizado
mediante el agregado de los
reactivos 5'-fluoro-2'-desoxiuridina y
5'-bromo-2'-desoxiuridina con lo
que se obtiene una elongación de
los cromosomas y así detectar
alteraciones estructurales como
microdeleciones y translocaciones.
Importante: pueden existir falsos
negativos debido a deleciones muypequeñas.
Cualquier deleción que se
sospeche citogenéticamente debe
ser confirmada por FISH u otra
técnica citogenética.