streptococcus y enterococcus

Laboratorio de Bacteriología

FLUJOGRAMA PARA LA IDENTIFICACION DE Streptococcus y Enterococcus

MUESTRAS

AISLAMIENTO

PRIMARIO

IDENTIFICACION

PRESUNTIVA

PRUEBAS

DIFERENCIALES

RESULTADOS

Facultad de Ciencias Biológicas Página 1

Prueba de Gram Agar sangre

Incubación 24 hrs. A 37° C en 10% de CO2 (microaerofilia)

0,5 ml Caldo Azida de Sodio Incubar 37°C x 24hrs.

Agar sangre Azida de Sodio Incubación a 37°C X 24 hrs .

Hisopado Faringeo

Esputo Agua residual

Prueba de Gram Reconocimiento de colonias

Prueba de catalasa Determinación del tipo de Hemólisis

Caldo BHI 6,5 % NaCl

BHI 9,6 PH

T ° 45°C

Bilis 40% TK (Teluro de potasio)


RESULTADOS

IDENTIFICACION PRESUNTIVA

Coloración Gram:

Observamos cocos Gram (+) dispuestos en pares encapsulados ( Streptococcus pneumoniae) y no encapsulados ,algunas formando cadenas unas mas largas que otras (Streptococcus y Enterococcus)

Dispuestos en pares Dispuestos en cadenas

Comportamiento cultural

En el caso de Streptococcus se presentaron colonias blanco cremosas, superficie brillante tipo rocío, puntiformes dispuestas en cadena, pares o aisladas. La hemólisis fue de tipo alfa (halo verdoso) en caso de St. pneumoniae y hemólisis beta (halo transparente) en el caso de St.pyogenes

En Enterococcus se observaron colonias pequeñas de color blanco con hemólisis gamma (no hemólisis).



PRUEBAS DIFERENCIALES

Prueba de crecimiento (tolerancia) en 6.5% de NaCl:

El microorganismo en estudio se inocula en un caldo tripticasa soya TSA o BHI conteniendo 6.5% de NaCl. Luego de un periodo de 18-24 horas a 35-37°C se observa la presencia o ausencia de crecimiento en el medio de cultivo

Prueba de bilis esculina

Esta prueba se realiza utilizando un medio llamado agar bilis esculina, el cual contiene 4% de sales biliares y 1% de esculina. Las bacterias que crecen en presencia de las sales biliares e hidrolizan esculina tornan el medio de color negro.



Prueba de bacitracina

Sirve para la determinar la resistencia de Streptococcus ante el antibiótico bacitracina. La sensibilidad ante este fármaco se evidencia por la formación de un halo alrededor del disco de bacitracina (sensible) colocado en una colonia sospechosa de Streptococcus pyogenes.

No hay formación de halo. Formación de halo

RESISTENTE SENSIBLE

RESULTADOS:

GENEROS

BHI6,5

NaCl

BHI9,6 PH

T°45°C

Bilis 40%

TKTelurito

de potasio

Bacitracina (*)Bilis esculina

Streptococcuspyogenes

- + - - - + -

Steptococcuspneumoniae

- + - - - - +

Enterococcus + + + + + - +

(*) Esta prueba solo se realizó en Enterococcus


Disco de Bacitricina


DISCUSION DE RESULTADOS

El aislamiento primario de las muestras se hizo en Agar sangre. Nosotros usamos el Caldo Azida de Sodio específicamente para la muestra de agua residual pues sabemos que en ella hay una alta carga y variedad de microorganismos, por lo tanto nos permite solo el crecimiento de la flora Gram (+) inhibiendo a su vez a los Gram (-), para luego obtener colonias aisladas de Enterococcus en la placa de Agar sangre.

Es importante saber que la prueba de la catalasa puede realizarse en placa, sin embargo sería incorrecto hacerlo en Agar sangre pues sabemos que los hematíes son catalasa (+), lo que nos arrojaría un resultado falso positivo. Al utilizar una lámina para esta prueba obtuvimos catalasa (-), resultado que caracteriza a este grupo y que lo diferencia de otros cocos Gram (+) como Staphylococcus.

El tipo de hemólisis también es importante para el reconocimiento de la especie y sabemos que tipo se presenta en cada una. Pero en el caso de los Enterococcus se puede observar los tres tipos: α, β, γ, por ello se necesita precisar su comportamiento cultural.

Luego de la identificación presuntiva realizamos las pruebas diferenciales para estos dos géneros, como se observa en la tabla de resultados hubo crecimiento en los tubos esperados que confirman el aislamiento de Enterococcus.

Esta prueba permite diferenciar las especies de Enterococcus (crecimiento positivo en presencia de 6.5% de NaCl) de los Streptococcus del grupo D (crecimiento negativo en presencia de 6.5% de NaCl).

La presencia de la bilis no inhibe el crecimiento de los enterococos, pero sí el del resto de las bacterias Gram positivas. Esta característica junto con la capacidad de hidrolizar la esculina son propiedades constantes de esta familia. El producto resultante de la hidrólisis de la esculina es la esculetina y la glucosa, la primera forma un complejo con el Hierro (III) Citrato de un color pardo oscuro. Esta prueba también se utiliza para la identificación presuntiva de Streptococcus del grupo D, como S.bovis y S.equinus, los cuales son positivos.

Sin embargo debemos resaltar que en la prueba de pH en nuestros dos tubos hubo crecimiento, el cual se manifestó no solo por la turbidez si no también en la precipitación. Uno de los motivos se le puede atribuir a una equivocación en el momento de la siembra y en otro caso se debería a la alta temperatura, pues normalmente se regula el pH antes de autoclavar los medios y en este caso las reacciones causadas por el calor (121ºC) harían inestable el pH.

Finalmente se observó unas placas que nos muestran la sensibilidad a un antibiótico específico, en este caso bacitracina para la cual S. pyogenes es sensible. La bacitracina interfiere con una molécula que transporta los elementos estructurales del peptidoglicano en la membrana celular bacteriana[.



Cuestionario

1. Como se agrupan las bacterias según Lancefield2. Qué hemolisinas producen las Streptococaceas


streptococcus y enterococcus

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