stanovenie intracelulárnych cytokínov u pacientiek s ... · problematika semialogénneho plodu v...
TRANSCRIPT
Stanovenie intracelulárnych cytokínov u pacientiek s poruchami reprodukcie
Elena Tibenská, Mária Ondrejíčková, Simona Duranková, Barbora Onderová
Neplodnosť- definícia, incidencia
• Definícia - WHO – neschopnosť počať dieťa
po 1 roku pravidelného nechráneného
sexuálneho styku
• Incidencia - celosvetovo cca 10-15% párov vo fertilnom veku
- vyspelé krajiny až 20-25% (u nás asi každý 5. pár)
Z toho cca 30% - mužský faktor, 30- 40% ženský a v 15-30% -
porucha u oboch partnerov
• Trend narastania počtu neplodných párov - genotoxické faktory
prostredia, stres, pohlavné choroby, infekcie a zápaly v uro-gyn.
oblasti a ich následky, tehotenstvo v neskoršom veku
• Diagnostika má zásadný význam- liečba býva úspešná až v 50-60%
Imunológia gravidity
• „imunologický paradox“ = tolerancia IS tehotnej ženy voči „semialogénnemu“ plodu s Ag cudzieho pôvodu
• 1953- dr. Peter Medawar –
problematika semialogénneho
plodu v maternici matky – koncepcia
funkčnej supresie maternálnych lymfocytov
„The immunological problem of pregnancy may be formulated thus: How does the pregnant mother contrive to nourish within itself, for many weeks or months, a fetus that is an antigenically foreign body?... By the immunological indolence or inertness of the mother“
Paradigma Th1/Th2 v tehotenstve – Wegmann a kol. (1993) – popísali posun k Th2 ako – indukcia tolerancie plodu
Úloha cytokínov v tehotenstve
Th1 cytokíny - IL-2, IFN-γ, TNF-α - hrá úlohu pri
implantácii (cez produkciu VEGF) (Chung et al. 2000)
embryotoxické, môžu spôsobovať deštrukciu buniek trofoblastu a aktivovať cytotoxické bunky, čo negatívne vplýva na rast a vývoj embrya, ich vysoké zastúpenie môže preto viesť k potratom
hodnoty Th1 cytokínov v deciduu spôsobujú potraty u myší (podanie IL-10 môže zabrániť) (Chaouat et al. 1995, Clark et al. 1998)
TNF-α – stimuluje apoptózu buniek trofoblastu, IFN-γ túto vlastnosť ešte zvyšuje - môže zvyšovať aktivitu NK buniek (Yui et al. 1994)
hodnoty u žien s opak. potratmi (Ragupathy et al. 2000, Makhseed et al. 2001,...)
dôkazy na zvieracích modeloch aj klinických pozorovaniach
Th1/Th2 koncepcia
Th2 cytokíny - IL-4, IL-10, TGF- - protizápalové - ochrana plodu (allograftu)
ochranný vplyv na placentu a pozitívny vplyv na graviditu najmä supresívnym pôsobením na Th1 lymfocyty
úloha hormónov – progesteron - produkcie LIF (leukemia inhitor factor) a IL-12 (chýbanie LIF u myší problém s implantáciou) a
IFN-γ, TNF-α (Piccini et al. 1998, NG et al. 2001)
normálne tehotenstvo – znižujú sa Th1 aj Th2 cytokíny, hlavne v 3.trimestri význam – pomer Th1/Th2 cytokínov (NG et al. 2001)
návrat k pôvodným hodnotám – skoro po pôrode – vplyv hormónov
Th1/Th2 koncepcia
Fyziologické tehotenstvo (predominancia Th2/supresia Th1 - maternofetálna tolerancia)
Patologické tehotenstvo (embryotoxické pôsobenie Th1 - zlyhanie implantácie)
KONCEPCIA TH1/TH2/TH17/Treg
Saito S., Am J Reprod Immunol. 2010
TNF-α & IFN-γ
TNF-α IFN-γ
indukuje apoptózu trofoblastových
buniek inhibuje embryonálny a fetálny vývoj
podporuje TNF-α mediovanú „smrť“
trofoblastu
inhibuje rast TH2 buniek
inhibujú rast ľudských trofoblastových buniek in vitro
spôsobujú trombotické a zápalové procesy v maternálnych
uteroplacentárnych krvných cievach
spočiatku potrebný pre
embryonálnu implantáciu do
maternice
nevyhnutný pre remodeláciu
spirálnych artérií
Th1/Th2 cytokíny v tehotenstve – klinické aspekty
hodnotiť vždy komplexne
klinický význam – Th1
- Th2
kľúčový cytokín – TNF-α:
- aj mierne zvýšenie môže byť prejavom infekcie (často chronickej a bezpríznakovej) vylúčiť a preliečiť prípadné infekčné fokusy, dôkladné vyšetrenie a preliečenie oboch partnerov na prítomnosť urogenitálnych (aj atypických) infektov
- pri pretrvávajúcich vysokých hodnotách (60%) – zváženie imunomodulačnej terapie (kortikosteroidy, inhibítory fosfodiesterázy, IVIG)
Detekcia intracelulárnych cytokínov princíp metódy
Princíp metódy
POK
NK
PK
CD3+CD4
CD3+CD4
CD3+CD4
CD3+CD4+
CD69
CD3+CD4
ʘ A
ʘ A
Lyse
ʘ B
ʘ B
PBS meranie
CD69
IFNγ+IL4
IL2+TNFα
IL2+TNFα
IFNγ+IL4
PBS
PBS
meranie
meranie
IC: IFN-γ, TNF-α, Il-, IL-4 v CD3+T-ly
IC: IFN-γ, TNF-α, Il-, IL-4 v CD3+CD4+Th-ly
Súbor pacientiek
474 pacientiek ( júl 2013 – marec 2015)
42
283
149
2013
2015
2014
19
67
19
68
19
69
19
70
19
71
19
72
19
73
19
74
19
75
19
76
19
77
19
78
19
79
19
80
19
81
19
82
19
83
19
84
19
85
19
86
19
87
19
88
19
89
19
90
19
91
19
92
1 0 1 2 2 3
12 14
22
30
42 43
58
41 40 39 38
32
14 14 12
4
7
0 2 1
Cytokín CD3/CD4 Ly CD3/CD4 Ly
IFN-γ 11-31% 2,3-55,6 / 0,7-51,5
IL-4 2-8% 1,2-40,9 / 0,2-54
TNF-α 12-44% 3,7-73,4 / 2,5-81,7
IL-2 8-28% 0,5-42,5 / 1-56,4
28,21
14,01
43,2
18,3
20,79
9,47
43,91
23,61
IFN-γ IL-4 TNF-α IL-2
CD3 CD4
Pacientky Kontrola
p-value n = 46 n = 13
Priemer SD Priemer SD
CD3+ IFN-γ (%) 23,01 ± 9,61 21,42 ± 6,16 0,479
CD3+ IL-4 (%) 10,96 ± 8,18 8,25 ± 6,28 0,212
CD3+ TNF (%) 42,98 ± 12,40 35,79 ± 9,70 0,037
CD3+ IL-2 (%) 19,13 ± 8,30 17,36 ± 8,01 0,493
CD4+ IFN-γ (%) 15,18 ± 9,04 13,02 ± 5,53 0,297
CD4+ IL-4 (%) 7,73 ± 5,80 5,75 ± 3,91 0,161
CD4+ TNF (%) 45,94 ± 15,36 37,54 ± 10,43 0,03
CD4+ IL-2 (%) 26,43 ± 11,29 20,41 ± 9,74 0,071
výsledky
intracelulárne cytokíny IFN-γ, IL-4, TNF a IL-2 (CD3+ a CD4+) u pacientiek
s poruchami plodnosti a fertilných žien
Pacientky Kontrola
p-value n = 46 n = 13
Priemer SD Priemer SD.
CD3+
IFN-γ/IL-4 4,01 ± 4,65 4,69 ± 4,87 0,659
TNF/IL-4 7,43 ± 8,69 7,62 ± 6,95 0,936
IL-2/IL-4 3,57 ± 6,13 3,77 ± 4,08 0,895
CD4+
IFN-γ/IL-4 3,83 ± 4,33 3,26 ± 3,15 0,605
TNF/IL-4 12,94 ± 15,35 9,92 ± 8,68 0,366
IL-2/IL-4 7,85 ± 15,63 5,05 ± 4,40 0,286
výsledky
Pomer TH1-/TH2 cytokínov u pacientiek s poruchami plodnosti a fertilných žien
Porovnávané
parametre
Sterilita Rekurentné tehotenské
straty p-value
n = 21 n = 17
Priemer Smer. odch. Priemer Smer. odch.
CD3+ IFN-γ (%) 25,15 ± 7,93 22,4 ± 8,36 0,310
CD3+ IL-4 (%) 8,26 ± 9,02 9,84 ± 7,05 0,549
CD3+ TNF (%) 41,58 ± 14,28 40,312 ± 14,89 0,793
CD3+ IL-2 (%) 19,36 ± 9,65 17,66 ± 9,21 0,585
CD4+ IFN-γ (%) 15,48 ± 7,70 14,26 ± 10,18 0,687
CD4+ IL-4 (%) 5,54 ± 6,40 7,82 ± 5,84 0,260
CD4+ TNF (%) 42,51 ± 18,47 43,08 ± 17,53 0,923
CD4+ IL-2 (%) 25,89 ± 13,15 23,62 ± 12,96 0,598
výsledky
intracelulárne cytokíny IFN-γ, IL-4, TNF a IL-2 (CD3+ a CD4+) u pacientiek s primárnou
sterilitou a rekurentnými tehotenskými stratami
Sterilita Rekurentné tehotenské straty
p-value n = 21 n = 17
Priemer Smer. odch. Priemer Smer. odch.
CD3+
IFN-γ/IL-4 6,77 ± 5,94 3,47 ± 2,47 0,028
TNF/IL-4 11,25 ± 11,61 5,86 ± 3,41 0,055
IL-2/IL-4 5,53 ± 8,61 2,56 ± 1,79 0,137
CD4+
IFN-γ/IL-4 6,69 ± 5,42 2,78 ± 2,31 0,006
TNF/IL-4 21,04 ± 20,06 9,59 ± 7,31 0,023
IL-2/IL-4 12,96 ± 22,15 5,11 ± 3,91 0,125
výsledky
Pomer TH1-/TH2 cytokínov u u pacientiek s primárnou sterilitou a rekurentnými
tehotenskými stratami
Kontrola
n = 13
Priemer SD.
4,69 ± 4,87
7,62 ± 6,95
3,77 ± 4,08
3,26 ± 3,15
9,92 ± 8,68
5,05 ± 4,40
IC Výsledky
pac. J.P. (1976)
- ANA, APLA, CE, anti-sp., ovaria, ZP –
negat.
- bunková im.: CD8+ - 13,7%
CD56+ 21,1-13,6-9,6-34,4%
– Medrol 8mg – IVF momentálne
neodporúčané
začala so stimuláciou – IVF neúspešné
pac.K.CH (1977):
- ANA, APLA, CE, anti-sp., ovaria, ZP –
negat.
- bunková im.: CD56+ - 21,5%
Medrol 4mg
intralipidy
IC výsledky
0
10
20
30
40
50
60
1 2 3
IC - pac. M.M.
CD4+ IFN CD4+ IL4 CD4+ TNF CD4+ IL2
24.1.2013
17.7.2013
21.t.gravidity
1.12.2012
pac.M.M. (1977) - opak. slabá
pozit.ANA
prekoncepčne nízke dávky
Prednisonu
na pac.žiadosť vysadené po
skončení I.trimestra
predčasný pôrod – zdravé dievčatko
pac.J.V (1981)
ANA – opakovane slabá pozit.
Medrol prekoncepčne
tehotná – termín pôrodu február
2015?
Záver- zhrnutie
• medzi reprodukčným a imunitným systémom – veľké množstvo
zložitých interakcií
• k zaisteniu tolerancie antigénov reprodukčných orgánov,
pohlavných buniek i semialogénneho embrya -
nevyhnutné množstvo imunoregulačných mechanizmov
• možnosť veľkého množstva porúch na rôznych stupňoch
- imbalancia Th1/Th2 len jednou z možných porúch
- infertilít nejasnej etiológie asi 20%
• rozširujúce sa možnosti diagnostiky a často aj úspešnej liečby (50-60%)
Ďakujem za pozornosť