sequenciamento de dna de nova geração e suas
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7/25/2019 Sequenciamento de DNA de Nova Gerao e Suas
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Sequenciamento de DNA de gerao e sua aplicao n
desenvolvimento de marcadmicrossatlite
Maria Rafaela de Andrade Reis
Ilhus-2013
UNIVERSIDADE ESTADUA DE SANTA !RU"#R$%RA&A DE #'S %RADUA()$ E& %EN*TI!A E
+I$$%IA &$E!UAR
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Microssatlites Denio
Microssatlites (di-, tri-, tetranucleotide repeats)
SSR (sinle nucleotide re!eats"
1 reio a cada #0$000 !ares de %ase
Multi-allico
Alta hetero&iose ' inforati)o
*+cilente utili&+)el !elo uso de ,R e is de !oliacrila
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Des)antaens
,rocesso e9!erientalente lono$ tra%alhoso econoicaente:
;eralente !rodu&indo u !e4ueno n5ero de arcador
aracteri&ao !r)ia de se4u
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SSR )s: ?utras tcnicas
Schl@
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,ers!ecti)as futuras
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Se4uenciaento de DA de noerao
Se4uenciaento de DA e !lataforas ca!a&es de eraso%re ilh=es de !ares de %ases e ua 5nica corrida:
Maior custo %enecio co!arado ao todo de Saner:
,ossi%ilitou si!licar o se4uenciaento de randes !or=enoa a u custo uito acess7)el:
,eritindo assi u r+!ida e %arato desen)ol)iento de oleculares$ incluindo icrossatlites:
As duas !rinci!ais tecnoloias de se4uenciaento utili&addesco%erta de SSR so # da Roche e Sole9a da Illuina:
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,latafora #
,rieira !latafora de se4uenciaento de no)a era
Reali&a o se4uenciaento %aseado e s7ntese$ o !irose4
a!acidade de se4uenciar at #00 ilh=es!%$ e fraentos entre 00 e #0 !% de co!riento:
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,latafora #
,a- $ DNA .ragmentado ,/- adaptadores A e + em suase0tremidades
,c- ligados
,d- #!R ememulsoocorre
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,irose4uenciaento #
o sinal de lu& eitido identicado a cada %aseincor!orada$ e cada
!oo de se4uenciaento:
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,latafora Sole9a
Reali&ado !or s7ntese usando DA !olierase e nucleco diferentes Euor6foros:
Ino)ao consiste na clonae in vitro dos fraen
,ode reali&ar a leitura de 0 ilh=es de fraentos
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,latafora Sole9a
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,latafora Sole9a
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# )s: Sole9a
5ero total de %ases de nucleot7deos erados !or corrida
draaticaente:
#lata.orma p/ Valor por &/,EUA-
# 3#0-F20M%
GS H /$00 ' GSH1$00
iluina 2$#-20 ;% GSH 0$12 - GSH0$3
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