resultados y discusion darly
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I. RESULTADOS Y DISCUSION
4.1 Formación de biofilms bajo condiciones in vitro.
En la figura 3, se muestra la formación de biofilms bajo condiciones in vitro, donde
se observa una tendencia creciente a medida que pasan las horas de incubación,
induciendo la mayor formación de biofilms bajo condiciones in vitro M1E1
(Salmonela spp. y el envase de polietileno tereftalato) y M2E1 (Escherichia coli
ATCC 35218 y el envase de polietileno tereftalato)?? mientras las demás bacterias
con los otros tipo de envase inducen menos formación de biofilms.MODIFICAR
contrastar con referencias bibliográficas
ARREGLAR
FIG 3? XXXXXXX MOSTRAR LEYENDA EN FIG
Densidad óptica (620 nm)
Tiempo (horas)
En la mayoría de los estudios, la formación de biofilms por diferentes especies de
microorganismos es estimada por las densidades ópticas (DOs) obtenidas
después de la tinción de las bacterias adheridas con cristal violeta (CV) u otros
colorantes que indican la biomasa total. El CV es un colorante básico que se une a
moléculas superficiales cargadas negativamente y a polisacáridos en la matriz
celular (Peeters y otros 2008)
Al-Shuneigat y otros (2005), determinaron la formación de biofilms mediante un
ensayo en microplacas de poliestireno (90 pozos), utilizando coliformes totales y
coliformes termotolerantes incubadas a 35ºC y 44,5ºC respectivamente por 18 hr.
Para cuantificar la densidad óptica como una estimación de la capacidad de
formación de biofilms, la medición se realizó a 490nm. Un porcentaje significativo
en ambos grupos, demostró la capacidad de formación de biofilms, los coliformes
totales el 50,0 %, y los coliformes termotolerantes un 65,5 % formaron biofilms.
Danese y otros (2000), evaluaron la formación de biofilms por cuatro cepas (Ec1,
Ec2, Ec3 y Ec ATCC), el estudio se realizó en cuatro caldos de cultivo distintos
M63 (US Biological, Swampscott, EEUU), M9 (Sigma), LB (Luria Bertani) y MH-II
(Mueller-Hinton II) respectivamente, se incubaron a 30ºC durante 24 hr. Se
utilizaron pocillos con los distintos caldos no inoculados como controles negativos.
Los biofilms adheridas en los pocillos de poliestireno fueron teñidas con 130 µL de
cristal violeta al 1% durante 5 minutos, luego los pocillos lavados 4 veces con 150
µL de agua destilada, se obtuvieron las DO630 nm del crecimiento de la formación
de biofilms en lector de placas. RESULTADOS DE LA TESIS O DEL
AUTOR???? MODIFICAR REDACCION
Hernández y otros (2009), investigaron la formación de biofilms, para lo cual
utilizaron en este estudio 15 cepas de Salmonella. Se emplearon dos placas de
poliestireno con 24 pozos cada una, las placas inoculadas se incubaron a 37ºC
por 24, 48 y 72 horas. Los valores de densidad óptica (D.O) registrados en cada
ensayo se promediaron y se clasificaron en las categorías de: productora de
biofilms moderada o biofilms fuerte.RESULTADOS DE LA TESIS O DEL AUTOR
¿????? MODIFICAR REDACCION
4.2 Efecto del tipo envase y tiempo de incubación sobre la formación de
biofilms bajo condiciones in vitro
En el cuadro 4. Se tiene la prueba de Levene modificada donde no se observó
homogeneidad de varianza (p<0.05), por lo que se procedió a realizar una
transformación de datos (raíz cuadrada), se volvió a realizar la prueba de Levene
modificada (cuadro 5) con los datos transformados la cual presento homogeneidad
de varianza (p>0.05), por lo que se procedió a realizar un análisis de varianza y
posteriormente la prueba de Duncan para observar la tendencia al mejor
tratamiento.
Cuadro 4. Prueba de Levene modificada DE QUE?? INDICAR VARIABLES DE
ESTUDIO
Cuadro 5. Prueba de Levenne modificada con los datos transformados (raíz
cuadrada) DE QUE?? INDICAR VARIABLES DE ESTUDIO
El cuadro 6, presenta el análisis de varianza, donde se observó efecto significativo
para cada bacteria, tipo de envase, tiempo de incubación y su interacción sobre la
formación de biofilms bajo condiciones in vitroa un nivel de confianza del 95%.
MODIFICAR REDACCION
Estadístico de Levene gl1 gl2 p
1.690 23 96 0.042
Estadístico de Levenne gl1 gl2 p
1.000 23 96 0.476
Cuadro 6. Análisis de varianza para formación de biofilms bajo condiciones
in vitro.
VariableFuente de variación
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Cuadrados medios
F p
Formación de
biofilms
Bacteria: A 1.033 2.000 0.517 202.651 0.000Envase: B 1.285 1.000 1.285 503.925 0.000Tiempo: C 0.681 3.000 0.227 89.051 0.000A*B 0.496 2.000 0.248 97.218 0.000A*C 0.593 6.000 0.099 38.728 0.000B*C 0.246 3.000 0.082 32.138 0.000A*B*C 0.811 6.000 0.135 52.987 0.000Error 0.245 96.000 0.003 Total 5.389 119.000
Resultado similar fue reportado por Montgomery (2006), donde estudio la
formación de biofilms en placas de polietileno, se evaluó el tiempo de incubación,
la proporción de inóculo, con el fin de validar las diferencias entre estos
parámetros y determinar la combinación de variables que favorecen la formación
de biofilm. Se realizó un análisis de varianza que justifica que los tratamientos
tienen una influencia significativa en la formación de biofilm, con un error p < 0.05
y un nivel de significancia del 95%.SE MODIFICO LA COMA POR PUNTO
En el cuadro 7, se presenta la prueba de Duncan para la formación de biofilms
bajo condiciones in vitro, donde se aprecia: el subconjunto 9 se tiene al
tratamiento M1E1 y el subconjunto 7 al tratamiento M2E1, el cual presentan mayor
formación de biofilms bajo condiciones in vitro a las 48 y 24 horas
respectivamente.
Cuadro 7. Prueba de Duncan para la formación de biofilms bajo condiciones
in vitro.
Variables Subconjunto
Bacteria Envase Tiempo (horas)
1 2 3 4 5 6 7 8 9
M3 E2 12 0.134
M3 E1 6 0.150 0.150
M3 E2 6 0.193 0.193
M2 E2 6 0.195 0.195 0.195
M3 E2 24 0.198 0.198 0.198
M1 E2 12 0.229 0.229 0.229
M1 E2 6 0.231 0.231 0.231
M3 E1 12 0.239 0.239 0.239 0.239
M3 E2 48 0.242 0.242 0.242 0.242
M1 E2 24 0.248 0.248 0.248 0.248
M3 E1 24 0.248 0.248 0.248 0.248
M2 E2 12 0.250 0.250 0.250 0.250
M3 E1 48 0.253 0.253 0.253 0.253
M2 E2 24 0.261 0.261 0.261 0.261
M1 E2 48 0.267 0.267 0.267
M1 E1 6 0.279 0.279 0.279
M1 E1 12 0.282 0.282 0.282
M2 E2 48 0.518
M2 E1 48 0.518
M2 E1 6 0.543
M2 E1 12 0.549
M2 E1 24 0.574
M1 E1 24 0.979
M1 E1 48 1.723
M2E1 (Escherichia coli ATCC 35218 y el envase de polietileno tereftalato)
Para cuantificar mejor los tratamientos con respecto a la formación de biofilms, se
podría explicar teniendo en cuenta la mayor concentración de bacterias; pero si
bien hay una mayor concentración de bacterias, no necesariamente se dará una
mayor formación de biofilm, esto se debe a todos los factores que pueden influir
en su mecanismo de formación, desde la adhesión hasta la maduración del mismo
(Donlan, 2002; Wimpenny y otros, 2000).
Sin embargo, los resultados muestras que, quienes registraron una mayor
formación de biofilms sobre el tipo de envase de polietileno tereftalato fue dada
por la Salmonella spp. a las 48 horas con una D.O.= 1.723 y la Escherichia coli
ATCC 35218 a las 24 horas con una D: O.= 0.574.????
II. CONCLUSIONES
1. El efecto del tipo de envase y tiempo de incubación fue significativo sobre la
formación de biofilms bajo condiciones in vitro de bacterias de interés
alimentario. ¿a que nivel de significación??
2. Se determinó que el tipo de envase de polietileno tereftalato y tiempo de
incubación de 48 y 24 horas permiten cuantificar mejor la formación de
biofilms bajo condiciones in vitro de bacterias de interés alimentario.
3. La formación de biofilms se logró por espectrofotometría (λ=620 nm) al
termino de las 6, 12, 24 y 48 horas de crecimiento previa coloración de los
biofilms, lo cual permitieron cuantificar mejor la mayor formación de biofilms
sobre el envase de polietileno tereftalato la Salmonella spp. a las 48 horas.
con una D.O. = 1.723 y la Escherichia coli ATCC 35218 a las 24 horas con
una D: O.= 0.574.?????
4. El período de incubación también es un factor que afecta la formación de
biofilms, tal y como lo demuestran los resultados obtenidos en este trabajo,
donde se pone de manifiesto que mayores tiempos permiten una expresión
diferenciada de la capacidad de formación de biofilms.
5. Se pudo comprobar que cada una de las cepas aún bajo las mismas
condiciones que se tuvo, como era de esperarse dadas las diferencias
biologías o biológicas??’ naturales de cada una, un nivel de formación de
biofilm particular.