RESULTADOS DE LA RESULTADOS DE LA PURIFICACIÓN DE LA PURIFICACIÓN DE LA LDHLDH

Geles de poliacrilamida-SDS1 Marzo, 2013

1.Datos de peso molecular del std2.Como calcular el peso molecular de una proteína en un gel3.Comentarios4.Geles equipos 1 a 7

Std de peso molecular de Std de peso molecular de proteínasproteínas

Hicimos un gel de Tris

Std preteñido como curva Std preteñido como curva patrónpatrónPara encontrar en donde

está la banda de interés hace lo siguiente:

A: Construir la curva estándar de proteína como se ilustra en la Fig., para ello hay que graficar el log del peso molecular de cada uno de los estándares contra el Rf de su corrimiento.

recuerden que el Rf es:Rf =distancia recorrida por

la banda distancia migrada por

el colorante

B: Al tener la curva interpolar en la gráfica el log del peso molecular del monómero de LDH y obtener el Rf, de este obtener la distancia recorrida por la LDH

ComentariosComentarios Calculen con los datos que se les dieron del

estándar el lugar en el gel en donde estaría la LDH.

Jueguen con los contrastes del gel, el tamaño, si lo quieren poner en escala de grises, todo para que puedan encontrar sus bandas.

Recuerden no importa que impriman en chiquito o grande, como el Rf es un índice no importa como lo impriman se mantiene la relación entre la distancia recorrida y el tamaño del gel.

Etiqueten el gel: Números o que fracción tienen, flecha en donde debe estar la LDH, el peso molecular junto al carril

Del reporteDel reporteSe entregará el 7 de MarzoIncluirá todo lo de la purificación de la

lactato deshidrogenasaSolo 1 hoja¿Qué resultados poner? A) volúmenes de fracciones,

concentración de fracciones y mg totales de proteína por fracción

B) Gel de poliacrilamida-SDS (perfectamente etiquetado)

C) Cálculos de proteína y de la distancia a la que la LDH se encontraría en el gel

Equipos 1 y 2Equipos 1 y 2

Equipos 3 y 4Equipos 3 y 4

Equipos 5 y 6Equipos 5 y 6

Equipo 7 Equipo 7

Perdón chicas pero a la hora de teñir y desteñir se nos rompió el gel, pero aún así se ve bastante bien. El gel de al lado se los puse para que ven su estándar de peso molecular y la banda de proteína que purificaron sus compañeros del equipo 6, por cromatografía de afinidad