pruebas de cinetica enzimatica
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SEP DGETI SEMS
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107TUXTEPEC OAXACA.
NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE
CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA
SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS
PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA ENZIMATICA
DE TRIGLICERIDOS EN SUERO
SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”
FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_
CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION
La determinación de los niveles de triglicéridos, cuando se lleva a cabo en conjunto con otros ensayos de lípidos, proporciona una ayuda en el diagnóstico de hiperlipoproteinemia primaria y secundaria. También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos.
1. El glicerol y los ácidos grasos se forman en una primera etapa por la acción de la lipasa sobre los triglicéridos.
2. El glicerol se fosforila por l adenosin-5’-trifosfato (ATP) para producir glicerol-3 fosfato (G-3-P) y adenosión-5’-difosfato (ADP) n una reacción catalizada por el glicerol-cinasa (GK).
3. La G-3-P es oxidada por la glicerolfosfato oxidasa, (GPO) produciendo dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrogeno.
4. Los peróxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la influencia catalítica de las peroxidasas (POD) para formar una quinoneimina de color rojo.
OBJETIVO
Determinar la concentración de los triglicéridos en el suero
PROCEDIMIENTO
1. extraer 5ml de sangre sin anticoagulante2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a
centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos.4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro
tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
5. Continuamos agregando 2.0ml a un tubo rotulado con la letra “M” de muestra.
6. Al tubo “M” le agregamos 200µl de suero problema, mezclar y llevar a incubar a 37°C por 5 min.
7. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm8. Realizar cálculos.
Blanco “B” Estándar “St” Muestra “M”
Glicerol + ATP GK G-3-P + ADP
G-3-P + O2 GPO DAP + H2O2
2H2O2 + 4-aminoantipirina + POD quinoneimina + HCl + 4H2O 4-clorofenol
Reactivo 2,0ml 2.0ml 2.0mlestándar - 200µl -muestra - - 200 µl
INTERPRETACION
Reactivo 1: es incoloro Al adicionar el suero al reactivo 1 se
torna un color crema
CALCULOS
Resultados.Los valores se derivan de la siguiente ecuación:1. Triglicéridos en suero (mg/dL) = A M x 200
AE
Donde AM y AE son los valores de absorbancia de la muestra y del estándar respectivamente, 200 es la concentración del estándar (mg/dL).
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Tuxtepec, OAX.
APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS
PRÁCTICA
DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA ENZIMATICA DE TRIGLICERIDOS EN SUERO
NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍSEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM
REPORTE
RESULTADOS:
______________________
OBSERVACIONES: __________________________________________________________________________________________________________________________
ANALISTA:
AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”FIRMA
SEP DGETI SEMS
VALORES DE
En suero/plasma:30 – 150 mg/dL
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107TUXTEPEC OAXACA.
NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE
CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA
SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS
PRACTICA: DETERMINACION DE LIPOPROTEÍNAS DE ALTA DENSIDAD (HDL) EN SUERO
SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”
FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_
CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCIONEl colesterol HDL constituye la parte de las lipoproteínas de alta densidad (High Density Lipoproteins), formadas por el 50.0% de proteínas (de las cuales el 90.0% apoA); el 18.0%, colesterol; el 2.0%, triglicéridos; y el 30.0%, fosfolípidos.El colesterol HDL es producido en el hígado. El colesterol que se encuentra en las células está inmerso en las secreciones biliares y, a través de la bilis, es eliminado en el intestino.Las fracciones de lipoproteínas de baja densidad (LD) y las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) son precipitadas del suero o plasma, por medio del reactivo de cloruro de magnesio/dextran sulfato, de acuerdo a Finely et al.
Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) son determinadas en el fluido sobrenadante, utilizando el factor de dilución derivado en el cálculo.
OBJETIVOLa determinación de este parámetro es un procedimiento analítico básico para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias o secundarias.
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a
centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro
tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
5. Continuamos agregando 50µl de reactivo 1 a un tubo rotulado con la letra “M” de muestra.
6. Al tubo “M” le agregamos 500µl de suero problema, mezclar y llevar a …7. Centrifugar a 7000r.pm. durante 10 minutos.8. Medimos 2.0ml de reactivo de trabajo al tubo “MF”9. Tomar 50µl de precipitado al tubo “MF”10. Incubar a 37°C por 5 minutos.11. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm12. Realizar cálculos.
INTERPRETACIONReactivos: IncoloroReactivo y suero: se torna color rosáceo/crema.
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APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS
PRÁCTICA
DETERMINACION DE LIPOPROTEÍNAS
CALCULOSResultados
HDL-colesterol (mg/dL) = Abs M x 55
Abs St
DE ALTA DENSIDAD (HDL) EN SUERO
NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍSEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM
REPORTE
RESULTADOS:
______________________
OBSERVACIONES: __________________________________________________________________________________________________________________________
ANALISTA:
AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP DGETI SEMS
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107TUXTEPEC OAXACA.
VALORES DE
Edad Hombre Mujer0-14 30-65 30-65
15-19 30-65 30-7020-29 30-70 30-7530-39 30-70 30-80>40 30-70 30-85
Media 45 55
Raza Negra: Aproximadamente 10 mg/dL más altos.
NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE
CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA
SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS
PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA-ENZIMATICO-COLORIMETRICA
DE COLESTROL TOTAL EN SUERO
SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”
FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_
CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION
El método enzimático para colesterol fue introducido en 1973 por Flegg1 y Richmond2, utilizando colesterol oxidasa de origen bacteriano seguida de saponificación química de los ésteres del colesterol. Roeschlau3 modificó ésta técnica y Allain y Col4 publicó los primeros ensayos enzimáticos completos combinando el colesterol oxidasa y el colesterol estearasa. Este método se basa en el de Allain y utiliza estas enzimas en combinación con el reactivo peroxidasa/fenol-4-antipirina, de Trinder5.La colesterol estearasa (CE) hidroliza a los ésteres del colesterol para dar colesterol libre y ácidos grasos. El colesterol libre así producido más el colesterol preformado se oxida en presencia del colesterol oxidasa (COx) para dar colesten-4-3-cetona y peróxido de hidrógeno. Un cromógeno quinonaimina, con absorción máxima a 500 nm, se produce cuando el fenol se acopla oxidativamente con 4-aminofenazona en presencia de peroxidasa (POD) con peróxido de hidrógeno. La intensidad final del color rojo es
proporcional a la concentración total del colesterol. El Factor Aclarador Lipemico (LCF) es una mezcla de aditivos especialmente diseñados por Stanbio integrados dentro del reactivo de colesterol para ayudar a minimizarlas interferencias debidas a la Lipemia.
Esteres del colesterol CE Colesterol + Ácidos Grasos
Colesterol + O2 COx Colesten-4-3-cetona + H2O2
H2O2 + 4-Aminofenazona + fenol POD H2O + O-Quinonaimina colorante
OBJETIVO
En el laboratorio clínico, la aplicación más importante de la electroforesis es la separación de proteínas presentes en el suero, orina y otros fluidos biológicos como el líquido cefalorraquídeo y el líquido sinovial. El objetivo principal de la práctica estará dirigido a la comprensión e identificación de conceptos físicos teóricos relacionados con este tipo de técnicas, así como la descripción de las mismas y su uso.
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a
centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro
tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
5. Continuamos agregando 2.0ml de reactivo a un tubo rotulado con la letra “M” de muestra.
6. Al tubo “M” le agregamos 20µl de suero problema, mezclar y llevar a …7. Incubar a 37°C por 5 minutos.8. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm9. Realizar cálculos.
Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U)
Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0mlEstándar 20µlMuestra 20µl
INTERPRETACION
Reactivos: IncoloroReactivo y suero: se torna color rosáceo/crema.
CALCULOSRESULTADOS
Los valores se derivan de los siguientes cálculos:
Colesterol total en suero (mg/dL) = AM x 200 AE
Donde AM y AE son los valores de absorbancias de la muestra y del estándar respectivamente y 20 es la concentración del estándar (mg/dL).
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Tuxtepec, OAX.
APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS
PRÁCTICA
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-ENZIMATICO-COLORIMETRICA DE COLESTEROL TOTAL
NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍSEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM
REPORTE
RESULTADOS:
______________________
OBSERVACIONES: __________________________________________________________________________________________________________________________
ANALISTA:
AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP DGETI SEMS
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107TUXTEPEC OAXACA.
NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE
CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA
VALORES DE
Colesterol Total mg/dLCordón 45-100Recién Nacido 53-135Infante 70-175Niños 120-200Adolescentes 120-210Adultos 140-310Ideal p/adultos 140-200
Raza Negra: Aproximadamente 10 mg/dL más altos.
SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS
PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA DE LIPIDOS TOTALES
SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”
FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_
CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION
Los lípidos insaturados reaccionan con el ácido sulfúrico en caliente con formación de iones carbonio. En una segunda etapa, éstos, en presencia de fosfovainillina dan una coloración rosada. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de lípidos totales presente en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLINICO
Los lípidos son compuestos orgánicos cuya función más importante es la de actuar como combustible. Poseen un extraordinario rendimiento, favorecido por la posibilidad de almacenarse en notables cantidades como tejido adiposo. Otras funciones: son constituyentes de las membranas biológicas, forman estructuras adiposas protectoras de los órganos internos, y proveen compuestos importantes en la formación de diversas hormonas. Gran parte del interés en el estudio del aumento de estos compuestos se debe a la conexión entre hiperlipemia y arteriosclerosis, diabetes y enfermedad cardiaca. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a
centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro
tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
5. Pipetear en tubos.
(Preparación del Hidrolizado)
Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U)
H2SO4 2.5ml 2.5ml 2.5mlPatrón 100µl
Muestra 100µl
6. Mezclar energéticamente en ayuda de un agitador mecánico7. Incubar 10 minutos en un baño hirviendo (100°C)8. Enfriar en baño de agua fría, dosificar en cubetas y pipetear en tubos.
(Preparación Prueba)
Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U)
Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0mlHidrolizado de la
Muestra100µl
Hidrolizado del Calibrador
100µl
9. Mezclar energéticamente con ayuda de un agitador mecánico10. Incubar a 37°C durante 15 minutos.11. Llevar a leer a 520nm
INTERPRETACION
Reactivo con suero: se torna color crema El Hidrolizado: es de color café pardo Reactivo de Lípidos con Hidrolizado: Color
crema/rosáceo
CALCULOS
Ab Muestra__ x 750 (Conc. Cal.) =mg/dL de lípidos totales en la muestraAb Calibrador
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APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS
PRÁCTICA
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LIPIDOS TOTALES
NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍSEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 29/03/11 HORA: 9:40AM
REPORTE
RESULTADOS: VALORES DE
Suero o plasma: 450 – 800 mg/dL
______________________
OBSERVACIONES: __________________________________________________________________________________________________________________________
ANALISTA:
AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP DGETI SEMS
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107TUXTEPEC OAXACA.
NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE
CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA
SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS
PRACTICA: DETERMINACION COLORIMETRICA CUANTITATIVA
DE ALBÚMINA EN SUERO
SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”
FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_
CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION
En 1964, el verde de bromocresol (BCG) fue reportado como útil en la determinación cuantitativa de albúmina sérica por Bartholomew y Delaney y por Rodkey. Esta técnica de unión fue publicada nuevamente un año más tarde por Rodkey quien describió un procedimiento colorimétrico inverso de BCG específico para la albúmina a un pH de 7.05 y 615 nm.Al mismo tiempo Watson reporto que el BCG era más sensible para la albúmina que el anaranjado de metilo o el HABA (ácido 2-(4'-hidroxiazo benceno) benzoico), dos compuestos también utilizados en la cuantificación de albúmina sérica por unión coloreada (teñida).Posteriormente Dow-Pinto y Miyada et al reportaron la linealidad del método de BCG en 5 g/dL, con interferencias mínimas por lípidos, hemoglobina y bilirrubina, además de evidencias de una gran especificidad y sensibilidad así como una excelente correlación para los valores de albúmina entre la técnica de BCG y la de electroforesis.El método presentado es esencialmente el de Dumas, Watson y Biggs modificado por el uso de citrato en lugar del amortiguador de succinato, un amortiguador de baja concentración y una lectura colorimétrica final a 550 nm en lugar de 630 nm.
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a
centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro
tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
5. Pipetear en tubos los siguientes volúmenes.
Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U)
Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0mlEstándar 20µlMuestra 20µl
6. Mezclar el contenido e incubar a 37°C por 15 segundos o 30 segundos a temperatura ambiente.
7. Inmediatamente lea las muestras y el estándar contra el reactivo Blanco a 550nm
INTERPRETACION
Reactivo: color verde pantano Reactivo con suero: Color verde bandera
CALCULOS
Calcule los resultados usando la siguiente ecuación:
Albúmina en suero o plasma (g/dL) = AM x 6.0 AE
Donde AM y AE son los valores de absorbancia de la muestra y del estándar respectivamente y 6.0 es la concentración del estándar (g/dL).
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APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS
PRÁCTICA
DETERMINACIÓN COLORIMETRICA-CUANTITATIVA DE ALBÚMINA EN SUERO
NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍSEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 29/03/11 HORA: 9:40AM
REPORTE
RESULTADOS:
______________________
VALORES DE
Suero o plasma: 3.8 a 5.1 g/dL
OBSERVACIONES: __________________________________________________________________________________________________________________________
ANALISTA:
AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107TUXTEPEC OAXACA.
NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE
CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA
SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS
PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA COLORIMETRICA
DE PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO
SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”
FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_
CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION
Las moléculas de Proteínas contienen un gran número de péptidos unidos. Cuando se tratan con iones de cobre (Cu2+) en solución alcalina, se forma un complejo coloreado entre el cobre y los grupos amino/carbonil de estos péptidos. Una reacción igual ocurre con el Biuret (compuestos más simples formados por el calentamiento de la urea). Así fue adoptado el término de “Reacción de Biuret”El método descrito está basado en los reportes de Weischselbaum y Gornal et al. El color violeta desarrollado es directamente proporcional al número de enlaces peptidicos de las proteínas e independiente de la concentración relativa de albúmina y globulina.
OBJETIVO
Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser transformado a través de un factor en proteína.
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a
centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro
tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
5. Pipetear en tubos.
Reactivo Blanco (RB)
Estándar (S) Muestra(U)
Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0mlEstándar 20µlMuestra 20µl
6. Dejar los tubos incubando por lo menos 5 minutos a 37°C o a temperatura ambiente por 10 minutos.
7. Leer el estándar y muestra contra RB a 500-505nm en el transcurso de una hora.
INTERPRETACION
Reactivo proteínas: Color Azul Claro Reactivo con suero e incubación: color azul un poco más
denso
CALCULOS
Los valores se derivan de la siguiente ecuación:
Proteínas Totales séricas (g/dL) = AM x (10) AE
Donde AM y AE son los valores de las absorbancias de la muestra y el estándar respectivamente y 10 g/dL es la concentración del estándar.
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APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS
PRÁCTICA
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-COLORIMETRICA DE PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO
NOMBRE DEL PACIENTE: GARDOZO VARGAS EMMANUELSEXO: M EDAD: 18 AÑOS FECHA: 01/04/11 HORA: 9:40AM
REPORTE
RESULTADOS:
______________________
OBSERVACIONES: __________________________________________________________________________________________________________________________
VALORES DE
Suero o plasma: 6.6 a 8.3 g/dL.
ANALISTA:
AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP DGETI SEMS
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107TUXTEPEC OAXACA.
NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE
CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA
SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS
PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA DE LA GLICOHEMOGLOBINA EN SANGRE TOTAL
SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”
FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_
CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________INTRODUCCION
La Glicohemoglobina es formada progresivamente e irreversiblemente en los eritrocitos durante sus 120 días de vida. La concentración de Glicohemoglobina en los glóbulos rojos depende del promedio de concentración de glucosa durante un cierto periodo de semanas y es estable durante la vida de la célula. Por lo tanto la medición de la Glicohemoglobina, como por ciento de la hemoglobina total, brinda un método de ayuda para el control del paciente diabético, ya que los niveles de glycohemoglobina se acercan a los valores normales dependiendo de cómo el diabético responda al tratamiento.Abraham et. al reportó una excelente correlación entre la concentración de Glicohemoglobina y el control diabético. En el método presentado, se mezcla un hemolizado de sangre total con una resina de intercambio catiónico. La hemoglobina no glicosilada (HbA0) se une a la resina, dejando la (HbA1) libre para que se pueda remover mediante un separador de resina en el sobrenadante. El porcentaje de HbA1, se determina midiendo los valores de absorbancia a 415 nm de la fracción HbA1 y de la fracción de Hb total, calculando la proporción de absorbancias (R) y comparando esta proporción con un estándar de glicohemoglobina al que se le practicó el mismo procedimiento. Los resultados son expresados como HbA1 también se puede convertir o reportar como HbA1c
OBJETIVO
Cuando se determina la Glicohemoglobina en el control del diabético, se está evaluando el comportamiento de su glicemia durante un período previo mínimo de cuatro semanas, lo cual da una imagen global del manejo del paciente que no se ve afectada por fluctuaciones de la glicemia de corto término.
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a
centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro
tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
5. Pipetear en tubos.(Preparación del Hemolizado)
Estándar (S)
Muestra(U)
Reactivo de lisis 500µl 500µlEstándar de 100µl
GlicohemoglobinaMuestra (sangre Total) 500µl
6. Medir 500µl del reactivo de lisis, pasarlo a la sangre 100µl - hemolizado7. Medir 100µl de lisado y vaciar resina, mezclar metiéndoles al tubo el manguillo y8. Se mezcla por 5 minutos. Se deja reposar por 60 minutos
aproximadamente.
9. Pasados los 5 minutos, se introduce un poco más el manguillo10. Esperar 60 minutos.
CALCULOS
Para cada Estándar y Muestra calcule el Rango (R) de absorbancia de la Glicohemoglobina y de la absorbancia de la hemoglobina total como sigue:
R = A gly___ A tot
Glicohemoglobina (%) = R (Muestra) x R (Estándar)
Resina + 100µl de sangre
Mezclar: destapar y mezclar
Manguillo
Mezclar 5 minutos.
Concentración del x Estándar de la Glicohemoglobina (%)
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Tuxtepec, OAX.
APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS
PRÁCTICA
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-COLORIMETRICA DE GLICOHEMOGLOBINA EN SANGRE TOTAL
NOMBRE DEL PACIENTE: GARDOZO VARGAS EMMANUELSEXO: M EDAD: 18 AÑOS FECHA: 01/04/11 HORA: 9:40AM
REPORTE
RESULTADOS
______________________
OBSERVACIONES: __________________________________________________________________________________________________________________________
ANALISTA:
VALORES DE
Glicohemoglobina A1
Valores Glicohemoglobina A1C
valores
Rango normal 6.0 – 8.0 %
Rango normal 4.2 – 6.2 %
Diabético DiabéticoBuen control 7.5 – 8.9
%Buen control 5.5 – 6.8 %
Control medio 9.0 – 10.0 %
Control medio 6.8 – 7.6 %
Control pobre Arriba de 10.0 %
Control pobre Arriba de 7.6 %
AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”