Coordinación Ecoforestal, Pronatura Veracruz Yusef Elip Chamlaty Fayad

José Sabas Espinoza Chávez

PROTOCOLO PARA CONOCER LA VIABILIDAD DE OREOMUNNEA MEXICANA

CON FINES DE CONSERVACIÓN Y RESTAURACIÓN ECOLÓGICA

Fuste de Oreomunnea mexicana

CARACTERÍSTICAS ECOLÓGICAS

Distribución en México:

En las regiones montañosas de Veracruz, Oaxaca y Chiapas.

Ecosistema: Bosque mesófilo de montaña

Altitud: 1100 – 2500 msnm

Hábitat: Cañadas

Historia de vida:

Árbol perennifolio de hasta de 40 m de altura y diámetro hasta de 105 cm; monoico, rectos y con la copa redondeada, alargada y densa. Hojas paripinnadas y opuestas, hasta de 25 cm; frutos globosos a ovoides de 8 a 11 mm de largo por 6 a 8 mm de diámetro, rodeadas por una bráctea trilobada, coriácea y amarillenta de 2.4 a 5.7 cm de largo.

Dispersión: Viento

Viabilidad natural: No disponible

Usos: Maderable, restauración ecológica.

NOM-059-SEMARANT-2010:

Protección especial (Pr)

CARACTERÍSTICAS GENERALES DEL LOTE RECOLECTADO

Fecha de recolecta: 01-02-2016

Código: VQH010216OREMEXVN01

Cantidad de fruto recolectado:

1.5 Kilogramos

Beneficiado: Secado el fruto se remuele con la mano y se tamiza para obtener semilla limpia.

Número de semillas por Kg.:

930

Almacenado en: Bolsa al vacío en refrigeración a 3°C

Kilogramos almacenados:

.58

Semillas almacenadas:

2, 554

Almacenado: 11-02-2016

CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA

Reino: Plantae

División: Magnoliophyta

Clase: Magnoliopsida

Orden: Fagales

Familia: Junglandaceae

Nombre científico: Oreomunnea mexicana

Nombre común: Palo Zopilote

VIABILIDAD La viabilidad representa la cantidad de semillas de un lote capaces de germinar y llegar a un estado de reproductivo en condiciones de campo. El porcentaje de viabilidad permite saber la cantidad de semillas que deben ser sembradas para obtener un número específico de plántulas (De los santos-Rodríguez, 2015). Las técnicas más usadas para conocer la viabilidad de las semillas son: 1) flotación en agua por 24 horas; 2) corte examen; 3) tinción con Tetrazolio y 4) germinación. Para realizar estas pruebas se toman muestras del lote, con el método de cuarteo. El tamaño de la muestra depende del tamaño del lote. Obtención de muestras por el método de cuarteo:

1. Extender el lote en una mesa y homogeneizarlo 2. Dividirlo en 4 partes 3. Extraer dos partes contrarias y homogeneizarlas 4. Repetir el cuarteo hasta obtener una muestra representativa. 5. El cálculo del número de semillas a tomar para la prueba de viabilidad se realiza con

el programa estadístico en línea Raosoft Inc. Disponible en: http://www.raosoft.com/samplesize.html

6. En caso de no contar con semillas disponibles, las muestras se reducen a 100 unidades realizando una repetición.

Pruebas de viabilidad: 1). Flotación Se pone una muestra del total de semillas en un contenedor con agua por 24 horas, transcurrido el tiempo las semillas vanas flotarán y las viables caerán al fondo del contenedor (De los Santos-Rodríguez).

Figura 1. Obtención de muestras por el método de cuarteo. A) homogenización del lote; B) cuarteo del lote; C) muestra de Oreomunnea mexicana para pruebas de viabilidad..

A) B) C)

Procedimiento:

1. Extraer muestra de 200 semillas con una o tres repeticiones. Si son tres repeticiones se realizan tres veces los pasos siguientes.

2. Agregar 500 ml de agua a un contenedor. 3. Agregar la muestra de semillas al contenedor con agua. 4. Dejar remojar por 24 horas. 5. Contar las semillas que floten y anotarlas en el formato del anexo 1. 6. Calcular el porcentaje de viabilidad con la siguiente formula:

Para el caso de tres repeticiones se suman los resultados obtenidos y se dividen entre tres. Las semillas viables se utilizan en las siguientes pruebas. 2). Corte examen Se corta la semilla por la mitad o en más partes para observar las condiciones sanitarias de la testa, endospermo y embrión. Se clasifican en semillas sanas, infestadas y vanas (De los Santos-Rodríguez, 2015).

Material para realizar la prueba de viabilidad por corte examen.

Bisturí

Pinzas sencillas

Caja Petri

Lupa

Figura 2. Prueba de flotación.

Microscopio estereoscópico trinocular Amscope SM-1TSZ-144-5M

Procedimiento: 1. Tomar las semillas de la prueba de flotación y colocarlas en cajas Petri. 2. Sujetar con pinzas de laboratorio y cortar longitudinalmente con bisturí las semillas

para que las partes internas de la semilla puedan verse bien. 3. Observar las semillas con un microscopio o lupa para poder clasificarlas. 4. Registrar la clasificación en el formato que se muestra en el anexo 1. 5. Contar semillas sanas 6. Calcular el porcentaje de viabilidad con la siguiente:

s

3). Tinción con Tetrazolio El Cloruro de 2, 3, 5-trifeniltetrazolio es un reactivo químico utilizado para diferenciar

tejidos metabólicamente activos de aquellos metabólicamente inactivos de las semillas,

mediante la tinción de color rojo en los tejidos vivos de la semilla.

Testa

Endospermo

Embrión

Figura 4. Corte de semilla para observar el estado fitosanitario del embrión.

Figura 5. Observación de los cortes de semillas en microscopio.

Figura 6. Cortes de semilla de Oreomunnea mexicana, la semilla ésta viable.

Figura 3. Material listo para realizar la prueba de corte.

Material para realizar la prueba de Tetrazolio.

Bisturí

Pinzas sencillas

Vaso de precipitado

Cajas Petri

Cloruro de Tetrazolio

Frasco color ámbar con

tapa

Microscopio estereoscópico

trinocular.

Amscope SM-1TSZ-144-5M

Papel aluminio

Procedimiento: 1. Se prepara el compuesto: Cloruro de Tetrazolio al 0.3, 0.5 o 1 %.

1.1. Pesar 3, 5 o 10 gramo de cloruro de 2, 3, 5 trifenil-tetrazolio en un vaso de

precipitado. La cantidad depende de la concentración con que se va a preparar.

1.2. Añadir 1 L de agua destilada y disolver. 1.3. Colocar la solución en frasco ámbar, etiquetarlo, sellarlo, envolver con papel aluminio

y volver a etiquetar 1.4. Guardar en refrigeración de 3 a 5 °C y evitar contacto con la luz.

2. Tomar una muestra de 30 semillas de la prueba de flotación. 3. Hacer los cortes a modo de que el embrión quede expuesto. 4. Colocar la mitad de cada semilla de la muestra en cajas Petri. 5. Agregar la solución de Cloruro de Tetrazolio a la muestra de semillas con el embrión

expuesto 6. Dejar las semillas en la solución por 24 horas a 24°c en un lugar oscuro o envolver la caja

Petri con papel aluminio. 7. Transcurrido el tiempo, enjuagarlas con agua y colocarlas en cajas Petri 8. Observar la tinción de cada semilla en microscopio 9. Contabilizar las semillas teñidas y anotarlas en el formato del anexo 2. 10. Calcular el porcentaje de viabilidad aplicando la siguiente formula:

4). Germinación Es la manera más confiable de evaluar la viabilidad de las semillas. Consiste en poner a germinar semillas sobre un contenedor con sustrato esterilizado (arena, tierra de monte, papel filtro o agar). Las semillas que germinan se cuentan como viables (De los Santos Rodríguez, 2015). Procedimiento de la prueba de germinación:

1. Esterilizar el contenedor del sustrato (cajas Petri, charola de unicel o plástico). 2. Agregar sustrato (arena, papel filtro, composta o agar) al contenedor. 3. Tomar una muestra de 100 semillas de la prueba de flotación. 4. Sembrar las semillas 5. El rango de temperatura es de 23 a 26 °C y de 73 a 76 % de humedad. 6. Monitorear la germinación cada tercer día y anotar las observaciones en el formato

del anexo 3. 7. Calcular el porcentaje de Viabilidad con la siguiente formula:

Figura 7. Izquierda: 2,3,5 trifenil-tetrazolio; Centro: equipo para preparar la solución; Derecha: frasco con la solución.

Figura 9. Izquierda: semillas hidratadas de Oreomunnea mexicana; Derecha: siembra

RESULTADOS El porcentaje de viabilidad promedio del lote de Oreomunnea mexicana es de 73.5 % (cuadro 5). Lo que representa una viabilidad baja que debemos tener en cuenta al momento de recolectar semilla de esta especie para garantizar el cumplimiento de nuestra meta de producción o almacenamiento.

Resultados de las pruebas de viabilidad

PRUEBA Viabilidad (%)

Flotación: 90

Corte examen: 80

Tinción de tetrazolio: 54

Germinación: 70

Viabilidad promedio: 73.5

REFERENCIAS De los Santos Rodríguez, Clara I. (2015). Propuesta metodológica para el manejo de germoplasma. Reporte Técnico Interno. Pronatura Veracruz A.C. Galindo Gamundi, Ana C. (2016). Procedimiento de pruebas de viabilidad de semillas en la reserva comunitaria de semillas de biodiversidad del golfo de México. Reporte técnico. Pronatura Veracruz A.C. Chamlaty Fayad, Yusef E. (2016). Propuesta metodológica para el manejo de germoplasma de Oreomunnea mexicana con fines de conservación y restauración ecológica. Reporte Técnico Interno. Pronatura Veracruz A.C. http://www.naturalista.mx/taxa/185280-Oreomunnea-mexicana

Figura 10. Izquierda: emergencia de cotiledón; Centro: proceso de germinación; Derecha: plántula de Oreomunnea mexicana.

Anexo 1. Formato para la evaluación de la viabilidad con la prueba de corte examen y flotación

Especie: ______________________________________________ Código: ________________________________

Repetición: ____ N: _____ Fecha: _________________ Tiempo: ___________________________________

Responsable: _______________ Proyecto: _______________________________________________________

Número de semillas flotantes: ___________ Número de semillas viables: __________________

N Testa sana Endospermo

sano Embrión sano Semilla viable

Total de semillas viables *la semillas es viable cuando tiene sus tres componentes sanos.

Anexo 2. Formato para la evaluación de la viabilidad con la prueba de Tetrazolio

Especie: __________________________________________Código: _____________________________________

Repetición:___ N:_______ Fecha:_______________________ Temperatura:________________________

Responsable:___________ Proyecto:____________________________________________________________

N Patrón de tinción (1, 2 o 3) Semilla viable (si/no) Total de semillas viables: 1= semillas totalmente teñida que son viables. 2= semillas sin tinción que no son viables. 3= semillas parcialmente teñidas que producirán plantas normales o anormales.

Anexo 3. Formato para evaluación de viabilidad por germinación.

Especie:____________________________________________ Código:__________________________________________ Repetición:____ N:______ Tratamiento pre-germinativo:____________________________________________ Sustrato:____________________ Fecha :_________________ Tiempo: ____ Responsable:__________________ Proyecto:______________________________________________________________________________________________

N Germinaron Sin germinar

Semillas viables sanas infestadas Sanas infestadas

Total de semillas viables