Progetto Alleanza contro il Cancro 2007-2009Programma 3

Sviluppo di nuove terapie nei sarcomi muscolo scheletrici:

immunoterapia e target terapia a confronto

Coordinatore: Dott. Piero Picci

Progetto Alleanza contro il Cancro 2007-2009Programma 3

Sviluppo di nuove terapie nei sarcomi muscolo scheletrici:

immunoterapia e target terapia a confronto

Coordinatore: Dott. Piero Picci

LA RETE NAZIONALE SOLIDALE E COLLABORAZIONI INTERNAZIONALI DEL PROGRAMMA STRAORDINARIO ONCOLOGIA 2006 (ISS PER ACC)

CONVEGNO DI PRESENTAZIONE DELLE ATTIVITA’ INIZIATE NELL’AMBITO DEI PROGRAMMI 1, 2, 3, 4

21 Aprile 2008 Istituto Superiore di Sanità - Roma

DatiGenerali

DatiGenerali

Unità operativeUnità operativeUnità 1

Katia Scotlandi (IOR BO)Massimo Serra (IOR BO)Mario Colombo (INT MI)Luciano Zardi (CBA GE)Laura Borsi (IST GE)Maurizio Cianfriglia (ISS Roma)Anna Maria Caccuri (Univ. Tor Vergata Roma)

Unità 2Roberto Perris (CRO Aviano - Univ. Parma)Maria Serena Benassi (IOR BO)

Unità 1Katia Scotlandi (IOR BO)Massimo Serra (IOR BO)Mario Colombo (INT MI)Luciano Zardi (CBA GE)Laura Borsi (IST GE)Maurizio Cianfriglia (ISS Roma)Anna Maria Caccuri (Univ. Tor Vergata Roma)

Unità 2Roberto Perris (CRO Aviano - Univ. Parma)Maria Serena Benassi (IOR BO)

Progetto focalizzato su 4 diversi approcci terapeutici

Progetto focalizzato su 4 diversi approcci terapeutici

1. Definizione del significato prognostico e terapeutico del proteoglicano NG2Verifica del significato prognostico e predittivo della sovraespressione di NG2 nei sarcomi delle parti molli e convalida funzionale della sua capacità di indurre un fenotipo cellulare altamente maligno.Utilizzo di anticorpi primari e anti-idiotipo in approcci immunoterapeutici bersaglio specifici (targeted) e personalizzati nei suddetti tumori.

2. Definizione dell’efficacia di anticorpi umani ricombinanti contro il dominio EDB della FibronectinaIl dominio EDB della fibronectina è espresso in molti sarcomi umani: deve essere verificata la sua espressione nei sarcomi muscoloscheletriciL’analisi dell’efficacia preclinica di schemi terapeutici basati sull’utilizzazione di anticorpi anti-EDB coniugati a TNF-alpha potrà portare alla definizione di nuovi approcci immunoterapici

1. Definizione del significato prognostico e terapeutico del proteoglicano NG2Verifica del significato prognostico e predittivo della sovraespressione di NG2 nei sarcomi delle parti molli e convalida funzionale della sua capacità di indurre un fenotipo cellulare altamente maligno.Utilizzo di anticorpi primari e anti-idiotipo in approcci immunoterapeutici bersaglio specifici (targeted) e personalizzati nei suddetti tumori.

2. Definizione dell’efficacia di anticorpi umani ricombinanti contro il dominio EDB della FibronectinaIl dominio EDB della fibronectina è espresso in molti sarcomi umani: deve essere verificata la sua espressione nei sarcomi muscoloscheletriciL’analisi dell’efficacia preclinica di schemi terapeutici basati sull’utilizzazione di anticorpi anti-EDB coniugati a TNF-alpha potrà portare alla definizione di nuovi approcci immunoterapici

3. Generazione di un anticorpo umano specifico per CD99 utilizzabile clinicamenteCD99 molecola di membrana particolarmente espressa nel sarcoma di EwingPotenziale bersaglio immunoterapico, soprattutto per il sarcoma di Ewingma anche per altre neoplasie con elevata espressione di questo antigene

4. Valutazione pre-clinica dell’efficacia di NBDHEXGli enzimi glutatione transferasi (GST) sono deputati alla detossificazioneintracellulare dei farmaci chemioterapici ed una loro sovraespressione e/o aumentata attività è stata rilevata come essere associata a scarsa risposta al trattamento e ad un prognosi avversa in diversi sarcomi muscoloscheltrici e altri tumori umani NBDHEX è un nuovo agente antitumorale sintetizzato presso l’UniversitàTor Vergata di Roma diretto contro le GST e il suo impiego potrebbe far superare o attenuare la farmacoresistenza GST-mediata

3. Generazione di un anticorpo umano specifico per CD99 utilizzabile clinicamenteCD99 molecola di membrana particolarmente espressa nel sarcoma di EwingPotenziale bersaglio immunoterapico, soprattutto per il sarcoma di Ewingma anche per altre neoplasie con elevata espressione di questo antigene

4. Valutazione pre-clinica dell’efficacia di NBDHEXGli enzimi glutatione transferasi (GST) sono deputati alla detossificazioneintracellulare dei farmaci chemioterapici ed una loro sovraespressione e/o aumentata attività è stata rilevata come essere associata a scarsa risposta al trattamento e ad un prognosi avversa in diversi sarcomi muscoloscheltrici e altri tumori umani NBDHEX è un nuovo agente antitumorale sintetizzato presso l’UniversitàTor Vergata di Roma diretto contro le GST e il suo impiego potrebbe far superare o attenuare la farmacoresistenza GST-mediata

EWINGCD99CD99

SPMNG2NG2

OS

NBDHEXfibronectina

NBDHEXfibronectina

FINANZIAMENTOFINANZIAMENTOFASI PROGETTUALIFASI PROGETTUALI

60% per i primi 24 mesi,ugualmente distribuito tra le varie U.O. e Gruppi di Ricerca

60% per i primi 24 mesi,ugualmente distribuito tra le varie U.O. e Gruppi di Ricerca

Prima Fase (mesi 0- 24)Validazione pre-clinica, in vitro ed in vivo, dei 4 diversi approcci terapeutici

Prima Fase (mesi 0- 24)Validazione pre-clinica, in vitro ed in vivo, dei 4 diversi approcci terapeutici

40% per gli ultimi 12 mesi,riservato all’approccio terapeutico che sara’risultato piu’ promettente in base ai dati ottenuti nella prima fase del progetto

40% per gli ultimi 12 mesi,riservato all’approccio terapeutico che sara’risultato piu’ promettente in base ai dati ottenuti nella prima fase del progetto

Seconda Fase (mesi 24-36)Selezione dell’approccio terapeutico con maggiori possibilita’ di trasferimento “rapido” nella pratica clinica

Seconda Fase (mesi 24-36)Selezione dell’approccio terapeutico con maggiori possibilita’ di trasferimento “rapido” nella pratica clinica

Metodologia e OrganizzazioneMetodologia e Organizzazione

Maurizio Cianfriglia:CD99 e fibronectina

Roberto Perris:NG2

Massimo Serra:NBDHEX

Maurizio Cianfriglia:CD99 e fibronectina

Roberto Perris:NG2

Massimo Serra:NBDHEX

9

Scheme of the different strategies utilized for the development of anti-

CD99 antibodies for immunotherapy of EWs

0662 hybridoma( murine)

mAb

Functional assay (apoptosis on Ews cells) of the purified 0662 mAb (IgG3) and itsFab’ and Fab’’ fragments

Epitope mapping for the identificationof the CD99 peptide/epitope

Isolation of rodent VH and VL genes andtheir expression with human Fc (IgG1) forproduction of chimeirc human/mouse mAb

Isolation and expression ofthe extracellular CD99 domain

Target antigens forin in vitro selection ofhuman scFv fromphage display antibody libraries

Anti CD99 human antibodies

IgG; scFv::IL2; scFv::TNFa+

Doxo; NHBDEX

10

Genetic engineering and transient expression of the chimerichuman/ mouse anti CD99 mAb

chimeric

Chimerization1. mRNA extraction from the hybridoma clone 0662 secreting an anti CD99 mAb2. cDNA synthesis3. VH and VL amplification with degeneratedprimers4. agarose purification of VH and VL5. VH and VL sequencing6. VH / VL murine amplification with specificprimers7. VH / VL cloning into expression vector (pVH-Express/ pVkExpress) with respective humanconstant chains (gamma-1 Heavy/kappa Light )8. transient cotransfection of vectors into recipientcells

Control

ChimericMouse

Flow-cytometry analysis of CD99 recognition on EWs sarcomacells by the transiently expressedhuman/mouse chimeric mAb.

11

-PNHPSSSGSFSDADLAD-COOHBiotine

-PNHPSSSGSFSDADLAD-COOHBSA

NH2-PNHPSSSGSFSDADLAD-COOH

Lys-βAla-Resin

Lys

LysNH2-PNHPSSSGSFSDADLADGVS-

NH2-PNHPSSSGSFSDADLADGVS-

NH2-PNHPSSSGSFSDADLADGVS-

NH2-PNHPSSSGSFSDADLADGVS-

Free

Pe

ptid

e B

iotin

ylat

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ptid

e Pe

ptid

e -

BSA

Pept

ide

in M

AP

form

at

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

0

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1

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1

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0

0,2

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0,6

0,8

1

1,2

mAb 0662 (Super)

control m

Ab (Super)

mAb 0662 (purif)

.

Control m

Ab ( purif

).

O.D

.Different formulations of the CD99 peptide epitope ELISA

12

rCD99 extracellular domain ( 6xHis-tag fused ) was purified using metalaffinity cromatography

45 KDa -

30 KDa -

E1-4

14.3 KDa -

20.1 KDa -

niM i3h

supe

r

afte

r bin

ding

pelle

t

was

h

ELISA

0662 antiCD99 mAb

IrrelevantmAb

Recombinant CD99 + -

GO - -BSA-CD99 peptide + -CD99 free-peptide + -

MALDI-TOF confirmed protein aminoacidicsequence of CD99 extracellular domain

13

ETH-2

(semi-synthetic)

GOLD

(semi-synthetic)

Naive MIX

(immune)

Phage antibody libraries

Methods of panning

SELECTION OF RECOMBINANT ANTIBODIES ANTI CD99 FROM ANTIBODY LIBRARIES

Biotynilated antigen Immunotubes alive cells

Streptavidinated beads

Biotynilated antigen

AntigenCell

14

Eluition

Amplification

Antibody phageSCREENINGWashes

NextPANNING

Antibody phagelibrary

Selection of a binding specificity from a phage display library

scFv

rCD99

scFv monoclonal

PANNING

15

00,10,20,30,40,50,60,70,80,9

11,11,2

4a sel

no. selezione

OD

BSAGSTGOCD99 E1CD99-GST

O.D.

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

O.D.

Selection of human specific antibody in scFv format from ETH-2 antibody phagelibrary by four cycles of panning on immunotubes - coated rCD99 protein (A) and screening of the cloned scFvs (B)

A

B

Selection

ScFvs ELISA screening

16

Antibody libraries

antigen method results FACS on ES cells

ETH-2

Peptide CD99

Recombinant CD99

Immunotube

Immunotube

Negative

Positive: scFvs specific for

recombinant CD99

_

(in progress)

ETH-2GOLD

Peptide CD99

6647 cells

Immunotube

In suspension

Negative

Negative

_

−

Naive

Peptide CD99

Peptide CD99

Streptavydinatedbeads

Immunotube

clones cross-reactive withantigens non related to CD99

−

(in progress)

Immune (mix lymphocyresfrom cancerpatients)

Peptide CD99

Peptide CD99

Streptavydinatedbeads

Immunotube

clones cross-reactive withantigens non related to CD99

(in progress)

−

Summary of the phage antibody library selection

17

Selective delivery of TNFa in tumor blood vessel by scFv anti fibronectin (EDB domain) and preclinical results of combined

immuno-chemotherapy (L. Zardi).

Genetic construction of immunoprotein Selective delivery to tumor vessel

18

WEHI-164 SCID beige mice

0

20

40

60

80

100

5 10 15 20 25

survival (%)

time (d)

PBS

L19mTNFα/melph.

survival (%)

time(d)

WEHI-164 (osteosarcoma) BALB/c mice

0

20

40

60

80

100

0 10 20 30 40 50 60 70 80

PBSL19mTNFα/melph.L19mTNFαmelphalan

References:• Borsi et al. Blood,

102:13, 4384-92, 2003.• Balza et al. Clin Cancer

Res, 12:8, 2575-82, 2006.• Mortara et al. Eur. J.

Immunol, 37:12, 3381-92, 2007.

19

Ongoing studies to verify the feasibility of CD99 and EDB domain of fibronectin as target antigens for immunotherapy

of EWs

• Isolation of clones stably expressing chimeric human/mouse anti CD99 mAb

• Isolation of anti CD99 human scFvs and construction of fully humanmAb and immunproteins (scFv::IL2; scFv::TNFa)

• Functional assay of the isolated mAbs and scFvs (induction of apoptosis in EWs cells)

• Pre-clinical efficacy of the human scFv anti EDB domain in combination with antitumor agents

20

Contributors of the work presented by Prof. M. Cianfriglia

• Dr. Silvia Zamboni,ISS: Genetic engineering and chimerization of the rodent anti-Cd99 mAb

• Dr. Alessandra Mallano, ISS: Expression of rCD99 (extracellulardomain) and selection of scFv from the antibody phage libraryETH-2

• Dr. Mara Gellini,ISS: Selection of scFvs specific for CD99 peptidesand protein from different antibody phage libraries

• Dr. Alessandro Ascione, ISS: purification and functional assay of anti CD99 mAb

• Prof. L. Zardi and Dr. L. Borsi (Genova): scFv anti EDB -basedimmuno.chemotherapy of human osteosarcoma

S-S

S-S

PDGF, FGFs

Integrins, galectin-3

Chondroitin sulfate

NG2[HMW-MAA, MCSP, CSPG4 - 8 kb, 2322 aa, 550-680 kDa, 15q]

VitronectinCollagen type IVCollagen type VI

ECM

Growth factors

Cell adhesion molecules

PKCαERK1/2

FAK/cdc42/p130casSIGNALLING

GSK3α/βmTOR

MUPP1

Cofilin

Cytoskeleton

Synthenin-1

Actin filaments

PROTEOMIC SCREENING OF MOLECULAR INTERACTORSOF THE ECTODOMAIN

Overexpression of NG2 is an independent prognostic factor and stronglypredicts short-term post-surgical metastatic disease

Up to 7yrs Up to 7yrs

MULTICENTER INTERNATIONAL STUDY(US institutions)

NG2 confers a more malignant phenotype independently of other pro-oncogenicor pro-metastatic molecular traits

UNVEIL THE MOLECULAR MECHANISMSI) Tumour cell-host microenvironment interactionsII) Intracellular signalling cascades

THERAPEUTIC IMMUNOTARGETING OF NG2 – STRATEGY I

63 mAbs againstrecombinantNG2 ectodomain

Intravital microscopy

NG2+Diaphragm (2hr)

Inoculation site

Lymphatic invasion (4hr) Lymphatic invasion (4hr) Lung infiltration (12hr)

Diaphragm (0hr) NG2- NG2+

NG2+NG2+NG2-

Diaphragm (2hr)

Proliferation

Migration

IN VITRO

IN VIVO

ANTI-IDIOTYPIC ANT-NG2 VACCINATION – STRATEGY II

763.74 IgG2a

NG2 Ab-1 against NG2

Target antigen Tumour NG2

Ab-3 endogenous(against NG2)

ANTI-IDIOTYPIC VACCINE

MK2-23 IgG1

Ab-2 against A1(mimics NG2)

MK2-23-L1 MK2-23-H3

Progetto Alleanza contro il Cancro Programma 3 (2007-2009)

Valutazione pre-clinica dell’efficacia di NBDHEX

Gruppi di Ricerca:

Laboratorio di Ricerca Oncologica, Modulo di Farmacoresistenza, Istituto Ortopedico Rizzoli, Bologna (Resp. Dott. Massimo Serra)

Dipartimento di Scienze e Tecnologie Chimiche, Università Tor Vergata, Roma (Resp. Prof.ssa Anna Maria Caccuri)

Obiettivi generali

Valutazione pre-clinica dell’efficacia di NBDHEX:

• analisi dell’efficacia in vitro di NBDHEX e delle interazioni con i chemioterapici convenzionali

• analisi del meccanismo di morte cellulare indotto dal trattamento con NBDHEX

• analisi dell’efficacia in vivo (nell’animale da esperimento) di NBDHEX, usato sia come farmaco singolo che in associazione ai chemioterapiciconvenzionali

• definizione del profilo farmacocinetico e degli effetti di tossicità collaterale di NBDHEX per una eventuale pianificazione di studi di fase I/II

Progetto Alleanza contro il Cancro Programma 3 (2007-2009)

Obiettivi per i primi 6 mesi di progetto

Valutazione pre-clinica dell’efficacia di NBDHEX:

•analisi dell’efficacia in vitro di NBDHEX e delle interazioni con i chemioterapici convenzionali

•analisi del meccanismo di morte cellulare indotto dal trattamento con NBDHEX

• analisi dell’efficacia in vivo (nell’animale da esperimento) di NBDHEX, usato sia come farmaco singolo che in associazione ai chemioterapiciconvenzionali

• definizione del profilo farmacocinetico e degli effetti di tossicità collaterale di NBDHEX per una eventuale pianificazione di studi di fase I/II

Progetto Alleanza contro il Cancro Programma 3 (2007-2009)

PerchPerchéé NBDHEX ?NBDHEX ?

Progetto Alleanza contro il Cancro Programma 3 (2007-2009)

Meccanismi di resistenza al Meccanismi di resistenza al CisplatinoCisplatinonellnell’’OsteosarcomaOsteosarcoma

PerchPerchéé NBDHEX ?NBDHEX ?

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Progetto Alleanza contro il Cancro Programma 3 (2007-2009)

Principali meccanismi Principali meccanismi intracellulariintracellulari delldell’’attivitattivitààdel CDDPdel CDDP

MeccanismoMeccanismo dd’’azioneazione del CDDPdel CDDP

CDDP produce CDDP produce dannidanni al DNA al DNA formandoformando legamilegamiintercatenaintercatena e e intracatenaintracatena con con conseguenteconseguente induzioneinduzionedelldell’’apoptosiapoptosi

Meccanismi di resistenza al CDDPMeccanismi di resistenza al CDDP

• Diminuito accumulo del farmaco• Aumento dell’efflusso del farmaco• Diminuzione dell’apoptosi CDDP-indotta• Aumento della detossificazione da parte del sistemaGSH/GSTpi

• Diminuizione della “platinazione” del DNA• Diminuita frammentazione del DNA CDDP-indotta

AumentoAumento delladella detossificazionedetossificazione mediatamediata daldalsistemasistema GSH/GSTGSH/GST

Cumulative event-freesurvival

Time (months)

Low GSTP1 expression

High GSTP1 expression

P = 0.0251,0

0,8

0,6

0,4

0,2

0

80706050403020100

RealReal--timetime PCR: 34 PCR: 34 primaryprimary OS (cutOS (cut--off = off = medianmedian valuevalue))

Il GSTP1 si propone come un promettente bersaglio Il GSTP1 si propone come un promettente bersaglio terapeutico per aggirare la terapeutico per aggirare la farmacoresistenzafarmacoresistenzanellnell’’osteosarcomaosteosarcoma

NellNell’’osteosarcomaosteosarcoma, GSTP1 , GSTP1 èè implicato anche implicato anche nellnell’’insorgenza di insorgenza di farmacoresistenzafarmacoresistenza a DX e, in a DX e, in misura minore, al MTXmisura minore, al MTX

Interesse per NBDHEX

77--nitronitro--2,1,32,1,3--benzoxadiazole (NBD)benzoxadiazole (NBD) derivativesderivatives

Compounds

6-(NBD-4-ylthio)hexanolNBDHEX

4-(NBD-4-ylthio)butanol

2-(NBD-4-ylthio)imidazole

3-(NBD-4-ylthio)propionic acid

6-(NBD-4-ylamino)hexanol

ON

N

S

NO2

OH

1

ON

N

S

NO2

OH

2

ON

N

S

NO2

N

N

3

ON

N

S

NO2

COOH

4

ON

N

N

NO2

OH

5

H

ON

N

S

NO2

OH

NBDHEX6-(NBD-4-ylthio)hexanol(EP 1 615 638 B1)MS: 297Abs. 432 nm (ε = 15,000 M-1cm-1)Em. 525 nm

NBDHEX [6NBDHEX [6--(7(7--NitroNitro--2,1,32,1,3--benzoxadiazolbenzoxadiazol--44--ylthio)ylthio)hexanolhexanol]]synthetizedsynthetized byby the the DepartmentDepartment of of ChemicalChemical SciencesSciences and Technologies, and Technologies,

TorTor Vergata University, Vergata University, RomeRome ((Pr.Pr. A.M. A.M. CaccuriCaccuri))

•• Nuovo farmaco antitumorale che ha come principale bersaglio il GNuovo farmaco antitumorale che ha come principale bersaglio il GSTP1STP1--1 1 •• Estremamente attivo in alcune linee cellulari tumorali umaneEstremamente attivo in alcune linee cellulari tumorali umane•• Non Non èè substrato delle pompe proteiche che sono causa della substrato delle pompe proteiche che sono causa della multifarmacoresistenzamultifarmacoresistenza ((PP--glicoproteinaglicoproteina) )

•• Effetti Effetti citotossicicitotossici in linee cellulari tumorali umane si hanno giin linee cellulari tumorali umane si hanno giàà a basse a basse concentrazioni concentrazioni

•• Bassa tossicitBassa tossicitàà in modelli animali in modelli animali murinimurini

1.1. Ricci Ricci etet al.al. MechanismMechanism of action of of action of potentialpotential anticanceranticancer drugsdrugs. . J J BiolBiol ChemChem 2005; 280:263972005; 280:26397--405405

2.2. TurellaTurella etet al.al. ProapoptoticProapoptotic ActivityActivity of New of New GlutathioneGlutathione SS--TransferaseTransferase InhibitorsInhibitors. . CancerCancer ResRes 2005;65, 37512005;65, 3751––61 61

3.3. TurellaTurella etet al.al. A strong A strong glutathioneglutathione SS--transferasetransferase inhibitorinhibitor overcomesovercomes the the PP--glycoproteinglycoprotein--mediatedmediated resistanceresistance in in tumortumor cellscells. 6. 6--(7(7--NitroNitro--2,1,32,1,3--benzoxadiazolbenzoxadiazol--44--ylthio)ylthio)hexanolhexanol (NBDHEX) (NBDHEX) triggerstriggers a a caspasecaspase--dependentdependent apoptosisapoptosis in in MDR1MDR1--expressing expressing leukemialeukemia cellscells. . J J BiolBiol ChemChem 2006;281: 237252006;281: 23725--3232

IC50 NBDHEX

mean IC50 0.49µM(range 0.08-1.98µM)

mean IC50 2.20µM(range 1.02-3.88µM)

mean IC50 1.13µM(range 0.35-3.16µM)

mean IC50 0.55µM(range 0.27-1.05µM)

}}}}

ApoptosiApoptosi NBDHEXNBDHEX--indottaindotta (dosi (dosi equitossicheequitossiche))

0

5

10

15

20

25

30

U-2

OS

U-2

OS/

CD

DP3

00

U-2

OS/

CD

DP1

µg

U-2

OS/

CD

DP4

µg

Saos

-2

Saos

-2/C

DD

P300

Saos

-2/C

DD

P1µg

Saos

-2/C

DD

P6µg

Perc

enta

ge o

f apo

ptot

ic c

ells

NBDHEX-IC502-fold NBDHEX-IC505-fold NBDHEX-IC50

Analisi delle interazioni NBDHEXAnalisi delle interazioni NBDHEX--CDDPCDDP

LowLow GSTP1 GSTP1 activityactivity

High GSTP1 High GSTP1 activityactivity

CDDPCDDP

Interazione NBDHEXInterazione NBDHEX--CDDPCDDP

Bassa attivitBassa attivitààGSTP1GSTP1--11

ALTA attivitALTA attivitààGSTP1GSTP1--11

CDDPCDDP

NBDHEXNBDHEX

Interazione NBDHEXInterazione NBDHEX--CDDPCDDP

in corso di completamento...in corso di completamento...

••Interazioni NBDHEX Interazioni NBDHEX –– DXDX

••Interazioni NBDHEX Interazioni NBDHEX -- MTXMTX

analisi analisi in vitroin vitro del meccanismo di morte cellulare indotto dal del meccanismo di morte cellulare indotto dal trattamento con NBDHEX in linee cellulari di sarcomi trattamento con NBDHEX in linee cellulari di sarcomi muscoloscheletricimuscoloscheletrici umaniumani (IOR + (IOR + UniRomaUniRoma))

analisi analisi proteomicaproteomica delldell’’effetto di NBDHEX sulle linee effetto di NBDHEX sulle linee cellulari picellulari piùù responsiveresponsive e analisi cristallografica e analisi cristallografica delldell’’interazione tra NBDHEX e le interazione tra NBDHEX e le glutationeglutatione trasferasitrasferasi umaneumane((UniRomaUniRoma))

analisi analisi in vivoin vivo delldell’’efficacia di NBDHEX, anche in efficacia di NBDHEX, anche in associazione ai chemioterapici convenzionali, e definizione del associazione ai chemioterapici convenzionali, e definizione del profilo farmacocinetico e degli effetti di tossicitprofilo farmacocinetico e degli effetti di tossicitàà collateralecollaterale(IOR + (IOR + UniRomaUniRoma + + NervianoNerviano MedicalMedical SciencesSciences, Milano), Milano)

Proseguimento dello studioProseguimento dello studio